地塞米松对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中细胞因子分泌及T细胞亚群表达的影响

目的 探讨地塞米松对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素(IL)-17、干扰素(IFN)-γ分泌水平和Th17、Tc17、Th1、Tc1等T细胞亚群表达的影响.方法 SLE患者和健康对照者的PBMCs分空白孔、佛波酯(PMA)/离子霉素(Ionomycin)孔、PMA/Ionomycin+地塞米松(DEX)孔行体外培养,运用四色流式细胞术检测PBMCs表达Th17、Tc17、Th1、Tc1等T细胞亚群的百分比,采用酶联免疫吸附法测定SLE患者和健康对照者血浆及PBMCs培养上清中IL-17、IFN-γ的表达水平.结果 SLE组患者血浆IL-17[138.98(84.82～187.04)ng/L]、IFN-γ[21.92(15.95～27.09)ng/L]含量均高于正常对照组[57.21(47.78～72.12)ng/L,13.43(7.04～17.37)ng/L].无PMA刺激条件下,SLE患者PBMCs培养上清中细胞因子水平、PBMCs中各T细胞亚群的百分比与正常对照组相比差异均无统计学意义(P均＞0.05);加入PMA刺激后,SLE患者PBMCs上清中IL-17的水平[(26.43±10.04)ng/L]和外周血Th17[(2.49±1.49)%]、Tc1[(44.89±16.43)%]细胞的比例均显著高于正常对照组[(18.06±5.42)ng/L,(1.47±0.73)%,(31.41±9.05)%)(P均＜0.05),SLE患者Th1、Tc17细胞百分比与正常对照组相比,差异均无统计学意义(P均＞0.05);地塞米松能明显抑制活化状态下的PBMCs分泌IL-17的水平[(16.72±6.09)ng/L](P＜0.01),且显著下调Th17(1. 34±0.76)%、Tc1(34.62±17.25)%细胞百分比(P均＜0.05),而地塞米松对IL-17的抑制作用更强.结论 SLE患者体内T细胞亚群及其相应细胞因子的表达水平存在明显异常,地塞米松能干扰SLE患者体内细胞因子网络失衡的免疫病理过程,且对IL-17有明显的抑制作用,为临床使用糖皮质激素治疗SLE提供新的理论依据和实验室基础.     

人脐带间充质干细胞对脊柱关节炎患者外周血T细胞产生IL-17的抑制作用

本研究通过观察人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对脊柱关节炎(SpA)患者外周血T细胞产生IL-17的抑制作用,初步探索hUCMSC在SpA治疗领域的应用前景。体外分离SpA患者及健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC),PBMNC单独培养或与hUCMSC共培养,应用流式细胞仪检测T细胞中CD3+CD4+IL-17+(Th17)及CD3+γδTCR+IL-17+细胞比例;应用ELISA检测细胞培养上清中IL-17的浓度。结果表明,SpA患者外周血T细胞中Th17细胞占(3.42±0.82)%,CD3+γδTCR+IL-17+细胞占(0.30±0.10)%,分别是健康对照组(0.75±0.25)%和(0.06±0.02)%的4.5倍及5倍(P<0.01);SpA患者PBMNC与hUCMSC共培养后,T细胞中Th17细胞下降为(1.81±0.59)%,CD3+γδTCR+IL-17+细胞下降为(0.16±0.06)%(P<0.01);ELISA检测结果表明,SpA患者PBMNC培养上清IL-17的浓度显著高于健康对照组[(573.95±171.68)pg/ml vs(115.53±40.41)pg/ml(P<0.01)];SpA患者PBMNC与hUCMSC共培养后,细胞上清IL-17的浓度下降至(443.20±147.94)pg/ml(P<0.01)。结论:hUCMSC能够抑制SpA患者外周血T细胞产生IL-17,在SpA临床治疗中具有应用前景。     

复发性视神经脊髓炎患者外周血记忆T细胞与IL-7水平的变化

目的:观察复发与未复发视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)患者外周血记忆T细胞(CD4~+CD45RA~-T细胞)和IL-7水平的变化,探讨记忆T细胞在NMO复发机制中的作用。方法:利用流式细胞仪检测复发组(15例)、未复发组(17例)NMO患者及健康对照组(15例)CD4~+CD45RA~-细胞的比例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测3组血浆白细胞介素7(IL-7)的浓度。分析32例患者的CD4~+CD45RA~-细胞比例与IL-7水平的相关性。结果:复发组CD4~+CD45RA~-细胞比例(32.86±5.53)%高于未复发组(19.98±5.72)%及健康对照组(19.59±4.49)%,差异均有统计学意义(P0.01);未复发组CD4~+CD45RA~-细胞比例高于健康对照组,但差异无统计学意义。复发组IL-7水平[(418.73±78.96)pg/mL]高于未复发组[(313.33±57.65)pg/mL]及健康对照组[(303.43±40.48)pg/mL],差异均有统计学意义(P0.01);未复发组IL-7水平高于健康对照组,但差异无统计学意义。NMO患者CD4~+CD45RA~-细胞比例与IL-7的水平显著相关(r=0.817,P=0.000)。结论:记忆T细胞参与NMO的复发过程,而IL-7对记忆T细胞的生成和功能有促进作用     

脐带间充质干细胞对类风湿关节炎患者免疫系统的作用

目的探讨脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cell,UC-MSC)移植治疗类风湿关节炎的疗效及免疫相关因子变化情况。方法类风湿关节炎患者30例,15例常规药物治疗者为对照组,15例在常规药物治疗基础上加行UC-MSC移植治疗者为观察组,评定2组治疗前、后ACR20临床缓解状况评分、DAS28关节活动度评分及HAQ健康评分,检测治疗前及治疗后3个月患者血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-17、类风湿因子、C-反应蛋白水平及血清CD3~+、CD4~+、CD8~+、B细胞比例,并进行2组间比较。结果治疗前,观察组DAS28评分[(5.12±0.33)分]、HAQ评分[(3.71±0.46)分]、ACR20评分[(6.34±0.74)分]与对照组[(5.09±0.27)、(3.69±0.31)、(6.29±0.61)分]比较差异均无统计学意义(P0.05);治疗后3个月,观察组DAS28评分[(3.84±0.28)分]、HAQ评分[(2.43±0.64)分]、ACR20评分[(3.07±0.38)分]低于对照组[(4.76±0.36)、(3.31±0.52)、(4.87±0.73)分]和治疗前(P0.05),对照组DAS28评分、HAQ评分、ACR20评分与治疗前比较差异无统计学意义(P0.05);治疗前,观察组与对照组TNF-α[(2.19±0.51)、(2.21±0.54)μg/L]、IFN-γ[(9.60±1.34)%、(9.56±1.21)%]、IL-4[(6.91±0.31)、(6.85±0.29)u/mL]、IL-17[(2.51±0.52)、(2.52±0.45)u/mL]、类风湿因子[(198.54±136.32)、(194.81±125.56)u/mL]、C-反应蛋白水平[(32.84±20.25)、(33.74±25.41)mg/L]及CD3~+[(6.07±0.64)%、(6.12±0.61)%]、CD4~+[(3.65±0.34)%、(3.69±0.32)%]、CD8~+[(1.86±0.24)%、(1.87±0.21)%]和B细胞比率[(16.46±2.13)%、(16.72±2.27)%]比较差异均无统计学意义(P0.05),治疗后3个月,观察组IL-4水平[(12.40±0.46)u/mL]、CD4~+比率[(4.82±0.38)%]、CD8~+比率[(2.67±0.32)%]高于治疗前和对照组治疗后[(7.64±0.21)u/mL、(3.94±0.31)%、(2.19±0.31)%],TNF-α[(0.84±0.24)μg/L]、类风湿因子[(94.32±73.75)u/mL]、C-反应蛋白水平[(13.55±11.37)mg/L]低于治疗前和对照组治疗后[(1.67±0.37)μg/L、(167.08±89.17)u/mL、(29.48±18.56)mg/L](P0.05),IL-17水平[(3.02±0.62)u/mL]及IFN-γ[(11.74±1.47)%]、CD3~+[(6.63±0.75)%]、B细胞比率[(12.41±2.93)%]与治疗前及对照组治疗后[(2.76±0.43)u/mL、(10.34±1.04)%、(6.27±0.72)%、(15.24±1.87)%]比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论移植UC-MSC可降低类风湿关节炎患者机体炎性相关因子,提高免疫相关因子水平。     

白介素6对人Th17细胞的免疫调节作用

本研究旨在探讨白介素6(IL-6)对人Th17细胞的调节作用.应用免疫磁珠分离正常人CD4+ T细胞并培养.实验分为2组,实验组(IL-6+):CD4+ T细胞(1×106/ml)经重组人IL-6(20ng/ml)刺激4天;对照组(IL-6-):不经IL-6刺激.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-17蛋白水平,流式细胞术(FCM)检测Th17细胞数量.结果发现,与对照组相比,经IL-6刺激后的CD4+ T细胞上清中IL-17蛋白水平明显升高(337.05±189.09pg/ml vs 15.07±12.70 pg/ml)(p<0.05);进一步FCM发现,IL-6剌激组Th17细胞数量明显高于对照组[(4.05± 0.30)% vs(2.81±0.44)]%,(p<0.01).结论:IL-6促进人Th17细胞的增殖.     

脐带间充质干细胞对CD34+细胞在小鼠体内归巢的影响及其机制研究

目的 探讨脐带来源间充质干细胞(MSC)对脐血来源CD34+细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢的影响及其可能的机制.方法 将CD34+细胞与MSC细胞共移植入经放射线照射后的NOD/SCID小鼠,采用流式细胞术和RT-PCR检测移植后20 h NOD/SCID小鼠骨髓及脾脏中人CD34+细胞,计算其相应的骨髓和脾脏的归巢效率.将脐血CD34+细胞与脐带MSC体外共培养,检测MSC细胞对CD34+细胞趋化功能的影响;并于培养4、7 d检测培养后CD34+细胞表面CD49e、CD31、CD62L、CD11a等归巢相关黏附分子表达情况.结果 ①移植后20 h采用流式细胞术成功在小鼠骨髓和脾脏中检测到人CD45+细胞.共移植组CD34+细胞骨髓归巢率[(7.2±1.1)%]高于单移植组[(5.4±0.9)%](P<0.05).②RT-PCR结果 显示共移植组小鼠骨髓细胞和脾脏细胞,单移植组小鼠脾脏细胞扩增得到人GAPDH基因片段,而单移植组小鼠骨髓细胞未见明显扩增条带.③MSC存在时,CD34+细胞的体外迁移能力为(35.7±5.8)%,显著高于CD34+细胞自发迁移率[(3.5±0.6)%,P<0.05].④CD34+细胞与MSC体外共培养后细胞表面CD49e、CD31和CD62L黏附分子的表达水平高于CD34+细胞单独培养组.结论 MSC细胞与CD34+细胞共移植有利于CD34+细胞向骨髓、脾脏等造血器官归巢,这可能与MSC促进CD34+细胞迁移以及维持CD34+细胞表面归巢相关黏附分子的表达相关.     

维生素D_3对支气管哮喘患儿CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞的影响

目的探讨维生素D_3对支气管哮喘患儿CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞表达的影响及其治疗支气管哮喘的效果。方法支气管哮喘患儿160例,随机分为观察组和对照组各80例,对照组在常规对症支持治疗基础上给予硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂1揿/次,3次/d,喷吸;观察组在对照组治疗基础上给予维生素D_30.25μg/次,1次/d,口服;2组疗程均为12周。采用ELISA法检测2组治疗前、后血清1,25-二羟维生素D_3[1,25-dihydroxyvitamin D_3,1,25(OH)_2D_3]、白细胞介素(interleukin,IL)-4,IL-10,IL-17水平,采用流式细胞技术检测CD4~+CD25~+调节性T细胞和Th17细胞表达,比较2组疗效。结果观察组总有效率(96.2%)高于对照组(87.5%)(P0.05);观察组和对照组治疗后CD4~+CD25~+调节性T细胞[(7.56±1.24)%、(5.44±1.34)%]、1,25(OH)_2D_3[(36.06±5.98)、(31.44±6.32)nmol/L]水平均高于治疗前[CD4~+CD25~+调节性T细胞:(3.53±1.03)%、(3.54±1.01)%;1,25(OH)_2D_3:(25.64±5.24)、(25.72±4.65)nmol/L],Th17细胞[(1.94±0.73)%、(2.87±0.97)%],IL-17[(58.26±10.24)、(76.21±9.42)ng/L]、IL-4[(14.26±3.24)、(21.21±4.26)ng/L]及IL-10[(42.44±9.53)、(64.37±11.33)ng/L]水平均低于治疗前[Th17细胞:(4.38±1.68)%、(4.36±1.21)%;IL-17:(110.22±15.32)、(109.24±16.64)ng/L;IL-4:(41.22±9.32)、(41.24±10.64)ng/L;IL-10:(92.43±12.83)、(92.40±10.42)ng/L](P0.05),且观察组治疗后各指标改善较对照组明显(P0.05)。结论补充维生素D_3可提高支气管哮喘患儿临床疗效,其机制可能与上调CD4~+CD25~+调节性T细胞、抑制Th17细胞表达有关。     

异种双份脐血干细胞移植对胶原诱导性关节炎小鼠IL-4及TNF-α mRNA表达的影响

目的 观察异种、异基因双份人脐血间充质干细胞(MSCs)移植对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠白细胞介素(IL)-4及肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达的影响.方法 先进行脐血CD34+细胞分选,然后采用弗氏完全佐剂和Ⅱ型胶原诱导C57BL/6(H-2b)小鼠,建立CIA小鼠模型,并随机分为正常对照组、模型组、单份MSCs移植治疗组、双份MSCs移植治疗组、甲氨蝶呤阳性治疗对照组,每组10只小鼠.采用尾静脉注射,除模型组、正常对照组用生理盐水,两个MSCs移植治疗组给予的脐血所含的CD34+细胞数均为2×105.移植后第42天处死动物、取脾组织,采用反转录PCR(RT-PCR)法检测IL-4、TNF-α mRNA的表达,收集数据并做统计分析.结果 双份MSCs移植治疗组IL-4、TNF-α mRNA的表达,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 双份MSCs移植治疗CIA小鼠能显著抑制TNF-α mRNA的表达,上调IL-4 mRNA表达,具有免疫调节作用,可能有助于类风湿关节炎的治疗.     

氯沙坦对类风湿性关节炎合并高血压患者白细胞介素-22的抑制作用及机制

目的探讨氯沙坦对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)合并高血压患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中细胞因子白细胞介素(interleukin, IL)-22的抑制作用及机制。方法 RA合并高血压患者20例为RA组,体检健康者20例为健康对照组,单纯高血压患者20例为高血压组。采用ELISA法测定健康对照组及高血压组、RA组治疗前、后血清IL-22水平。采用密度梯度离心法提取RA患者外周血PBMCs,分为空白对照组(正常培养)、刺激组(加CD3和CD28抗体)、阳性对照组(加CD3和CD28抗体+100 mmol/L甲基强的松龙)和实验组(加CD3和CD28抗体+100 mmol/L氯沙坦),采用ELISA法检测各组PBMCs培养上清液中IL-22表达水平;采用Western blot法测定各组PBMCs信号传导相关分子核因子-κB p65、p-p38、p-STAT-3和p-ERK蛋白表达水平。结果 RA组治疗前血清IL-22水平[(52.426±7.673)ng/L]高于健康对照组[(32.285±5.732)ng/L]和高血压组[(34.472±5.045)ng/L](P0.05),高血压组与健康对照组比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后RA组血清IL-22水平[(41.269±6.824)ng/L]低于治疗前(P0.05),高血压组[(32.794±5.624)ng/L]与治疗前比较差异无统计学意义(P0.05);刺激组PBMCs培养上清液中IL-22水平[(118.722±16.700)ng/L]高于阳性对照组[(64.624±9.120)ng/L]、实验组[(71.120±12.053) ng/L]和空白对照组[(24.032±6.786)ng/L](P0.05),阳性对照组与实验组比较差异无统计学意义(P0.05);实验组PBMCs内p-STAT-3蛋白表达(2.46±0.82)低于刺激组(3.78±0.94)(P0.05)。结论氯沙坦能抑制RA患者PBMCs促炎性细胞因子IL-22的表达,可能是通过抑制JAK/STAT-3通路而实现。     

窄谱中波紫外线对特应性皮炎患者外周血Th17细胞比例及IL-17A、IL-23的影响

目的:评价窄谱中波紫外线(narrow-band ultraviolet B,NB-UVB)治疗特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的临床疗效及其对外周血Th17细胞比例与IL-17A、IL-23含量的影响。方法:AD患者34例(研究组)采用NB-UVB照射治疗,治疗前及治疗后应用疾病严重程度评分(scoring atopic dermatitis,SCORAD)判断疾病严重程度和视觉模拟标尺法(visual analoguescale,VAS)评价瘙痒程度;采用流式细胞术检测照射治疗前后外周血单一核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MC)中Th17细胞占CD4+T细胞的比例(Th17%),采用酶联免疫吸附试验检测血清中IL-17A、IL-23的含量;以30例健康志愿者作为对照组。结果:研究组经NB-UVB照射治疗后总有效率达79.41%,SCORAD评分[(33.75±8.91)比(17.63±5.09),t=9.156,P<0.01]及VAS评分[(8.95±2.86)比(4.46±2.08),t=7.406,P<0.01]均较治疗前显著降低。治疗前,研究组PBMC中Th17%及血清中IL-17A、IL-23含量较对照组显著升高[Th17%:(1.37%±0.41%)比(0.53%±0.11%),t=11.392;IL-17A:(40.38±8.23)pg/mL比(17.74±2.43)pg/mL,t=15.310;IL-23:(54.25±9.29)pg/mL比(23.23±3.47)pg/mL,t=18.101,均P<0.01];NB-UVB照射治疗后上述3个指标较治疗前均显著降低[Th17%:(0.72±0.15)%,t=8.556;IL-17A:(22.18±4.48)pg/mL,t=12.131;IL-23:(25.41±4.12)pg/mL,t=18.012,P均<0.01]。结论:NB-UVB照射对AD具有显著的临床疗效,NB-UVB可下调外周血Th17比例与IL-17A、IL-23含量,这可能是NB-UVB治疗AD的机制之一。     

肝素雾化吸入治疗喘息样支气管炎反复发作的免疫学机制

目的探讨在常规治疗基础上给予肝素雾化吸入治疗小儿喘息样支气管炎反复发作的疗效及免疫学机制。方法喘息性支气管炎患儿50例,随机分为观察组30例和对照组20例,对照组给予吸氧、抗感染等常规治疗,观察组在对照组基础上给予肝素100u/kg+生理盐水5mL雾化吸入,2次/d,共14d。记录2组喘息时间和肺部啰音时间;分别于治疗前及治疗14d后检测2组血清白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-8、正常T细胞表达分泌的活性调节蛋白(regulated upon activation normal T cell expressed and secreted,RANTES)、干扰素-γ(interferon-gamma,INF-γ)水平及CD4^+CD25^+CD127^-Treg细胞比率,并与18例体检健康者(阴性对照组)进行比较。结果观察组喘息时间[(4.5±1.1)d]及肺部啰音时间[(6.9±0.8)d]较对照组[(6.6±1.4)、(8.1±0.9)d]短(P<0.01);治疗前,观察组和对照组血清IL-4[(2.45±0.22)、(2.38±0.18)ng/L]、IL-8[(33.90±2.20)、(32.10±2.00)ng/L]、RANTES[(48.8±8.7)、(41.9±9.5)μg/L]水平均明显高于阴性对照组[IL-4(1.41±0.17)ng/L、IL-8(15.60±2.20)ng/L、RANTES(13.3±4.8)μg/L](P<0.01),INF-γ[(0.37±0.14)、(0.38±0.09)ng/L]及CD4^+CD25^+CD127^-Treg细胞比率[(6.4±0.9)%、(5.5±0.8)%]均低于阴性对照组[(1.44±0.20)ng/L、(7.9±1.2)%](P<0.01);观察组治疗后血清IL-4[(1.52±0.13)ng/L]、IL-8[(18.60±2.10)ng/L]及RANTES[(23.1±4.5)μg/L]水平均较对照组治疗后[(1.78±0.16)ng/L)、(22.90±1.20)ng/L、(28.0±6.1)μg/L]降低(P<0.05),观察组治疗后血清INF-γ[(1.46±0.16)ng/L)]及CD4^+CD25^+CD127^-Treg细胞比率[(7.2±0.9)%]均较对照组治疗后[(0.83±0.09)ng/L、(6.4±1.0)%]增高(P<0.05)。结论喘息样支气管炎反复发作患儿在常规治疗基础上给予肝素雾化吸入治疗,可下调血清IL-4、IL-8、RANTES水平,上调INF-γ和CD4^+CD25^+CD127^-Treg细胞比率,缩短喘息时间及肺部啰音时间。     

夏枯草提取物对MDR-MTB感染小鼠细胞免疫功能的影响

目的探讨夏枯草提取物对耐多药结核分枝杆菌(multiple drugs resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-MTB)感染小鼠免疫功能的调节作用。方法将30只健康雄性小鼠随机分为3组,每组10只。2组用MDR-MTB菌液尾静脉注射,建立小鼠MDR-MTB感染病理模型,分别为模型组和夏枯草灌胃模型组,另1组为正常对照组。用ELISA法检测小鼠血清中IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12含量的变化;用RT-PCR法检测单个核细胞中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12及颗粒裂解肽(granulysin,GLS)的mRNA变化。结果夏枯草灌胃模型组与模型组比较,小鼠血清中IFN-γ[(1.98±0.67)pg/mL vs(1.18±0.38)pg/mL,P<0.05]、IL-12[(3.02±0.86)pg/mL vs(2.19±0.57)pg/mL,P<0.05]含量明显升高;IL-10[(12.13±3.43)pg/mL vs(16.10±2.21)pg/mL,P<0.05]含量明显下降。与正常对照组比较,IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的含量变化差异无统计学意义(P>0.05)。在mRNA表达水平,夏枯草灌胃模型组IFN-γ、IL-12和GLS表达明显升高,IL-10 mRNA表达明显下降(P<0.05),IL-4变化不明显。结论夏枯草提取物可通过上调基因转录水平增强小鼠的细胞免疫功能,为临床应用夏枯草治疗耐多药结核病提供了理论依据。     

Th17细胞和白介素-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中的免疫调控分析

目的探讨Th17细胞和白介素-17(IL-17)在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)aGVHD中的免疫调控。方法采用野生型(WT)C57BL/6(H-2b)小鼠与C57BL/6(H-2b)IL-17基因敲除(IL-17-/-)小鼠作为供体,采用BALB/C(H-2b)小鼠作为受体,小鼠给予全身照射8.5 Gy进行清髓性预处理,移植野生型(WT)小鼠1×107个去除T细胞骨髓细胞(TCD-BMCs)以及WT小鼠1×106个CD4+IL-17-/-T细胞。移植之后每天对小鼠生存状况进行观察1~2次,每隔5 d对aGVHD进行临床评估。收集实验小鼠肝脏、肺、肠以及皮肤,并进行HE染色并进行病理组织学分析,并对移植后Th17细胞组、CD4+IL-17-/-T细胞组、IL-17-/-BMCs+IL-17-/-SCs组(KK组)、WT BMCs+IL-17-/-SCs组(WK组)及WT BMSCs+WTSCs组(WW组)小鼠的aGVHD积分进行评估。结果 1Th17细胞组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分均显著高于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05),且Th17细胞组小鼠平均生存时间显著小于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05);2KK组、WK组及WW组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分差异均具有统计学意义(P0.05),且三组平均生存时间方面的差异也均具有统计学意义(P0.05)。结论 Th17细胞与IL-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中具有较好的免疫调控作用。     

昆明山海棠抑制大鼠同种异体肢体移植排斥反应的研究

目的探讨昆明山海棠对大鼠同种异体肢体移植抗排斥反应的影响。方法 9只Wistar大鼠为供者,18只SD大鼠为受者,通过手术方法建立同种异体肢体移植动物模型后随机分为观察组和对照组各9只。对照组大鼠采用生理盐水10 mL/(kg·d)灌胃,1次/d;观察组大鼠给予昆明山海棠片400 mg/(kg·d)+生理盐水2 mL灌胃,1次/d。观察术后2组移植肢体发生排斥反应的时间、存活时间,并行移植肢体组织病理学检查;采用TUNEL法检测2组移植组织的凋亡情况,并计算凋亡指数;应用流式细胞仪检测2组大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+细胞及CD4~+/CD8~+比值。结果对照组移植肢体发生排斥反应时间[(4.83±1.80)d]早于观察组[(8.38±1.19)d](P0.05),移植肢体存活时间[(9.38±2.23)d]短于观察组[(13.94±1.48)d](P0.05),移植肢体细胞凋亡指数(33.83±3.38)和排斥反应分级(2.33±0.57)高于观察组(25.33±5.65、0.66±0.57)(P0.05);术后第7天,对照组外周血CD4~+细胞百分率[(49.95±7.14)%]及CD4~+/CD8~+比值(2.19±0.31)均高于观察组[(22.96±5.97)%、0.93±0.24](P0.05)。结论昆明山海棠可减轻同种异体肢体移植动物模型发生排斥反应,可作为肢体移植术后的一种新型抗排斥反应的免疫抑制剂或辅助药物。     

系统性红斑狼疮患者血清IL-10和IL-17水平检测的临床意义

目的通过系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中IL-10和IL-17的水平,探讨SLE患者炎症反应情况及Treg细胞与Th17细胞在SLE发病中的作用。方法选取2013年7月~2015年7月南京医科大学附属苏州市立医院本部临床已经确诊的SLE患者54例为研究对象,同期健康体检者19例为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测两组血清IL-10和IL-17水平,采用间接免疫荧光法及免疫印迹法测定SLE患者ANA,dsDNA及RNP,Sm,SSA,SSB,并对IL-10和IL-17水平进行比较及相关性分析,同时分析ANA,RNP,Sm,SSA和dsDNA分组IL-10和IL-17的水平差异。结果 SLE患者IL-10和IL-17水平为63.7±89.0pg/ml和87.7±123.0pg/ml,和对照组20.8±8.9pg/ml和18.5±111.6 pg/ml比较,差异有统计学意义(t_(IL-10)=3.484,t_(IL-17)=4.076,P均0.01);SLE患者中IL-10和IL-17阳性组结果为176.5±93.2 pg/ml和237.2±107.5 pg/ml,阴性组为16.2±5.7 pg/ml和12.9±8.3 pg/ml,差异有统计学意义(t_(IL-10)=6.875,t_(IL-17)=8.843,P均0.01);SLE患者IL-10与IL-17水平呈正相关关系(r=0.96,P0.05)。ANA高滴度组IL-10和IL-17水平为91.8±100.8 pg/ml和135.5±140.9 pg/ml,ANA低滴度组为44.5±76.7 pg/ml和54.4±98.5 pg/ml,差异有统计学意义(t_(IL-10)=2.215,t_(IL-17)=2.345,P均0.05)。抗ds-DNA抗体阳性组IL-10和IL-17水平为87.1±101.1pg/ml和122.4±137.1 pg/ml,抗ds-DNA抗体阴性组为27.4±50.1 pg/ml和28.6±61.6 pg/ml,差异有统计学意义(t_(IL-10)=2.904,t_(IL-17)=3.443,P均0.05)。结论系统性红斑狼疮患者的抗炎细胞因子IL-10和促炎细胞因子IL-17的高水平及高度正相关,说明SLE患者抗炎和促炎反应同时存在,SLE患者Treg细胞与Th17细胞存在失衡,可能在SLE的发生和发展中同时起重要作用。     

Graves病患者CD3~+CD56~+自然杀伤T细胞及其分泌的细胞因子表达研究

目的探讨CD3~+CD56~+自然杀伤T细胞(natural killer T cell,NKT)及其分泌的白细胞介素(interleukin,IL)-2、IL-6、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)等细胞因子和血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT_3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT_4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)和促甲状腺素受体抗体(thyrotrophin receptor antibody,TRAb)水平在Graves病患者体内表达情况。方法 Graves病患者30例为观察组,同期体检健康者30例为对照组,检测2组外周血CD3~+CD56~+NKT占淋巴细胞比率、CD3~+CD56~+NKT分泌的细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α水平及血清FT_3、FT_4、TSH、TPOAb、TGAb、TRAb水平。结果观察组CD3~+CD56~+NKT占淋巴细胞总数比率[(1.37±0.43)%]低于对照组[(2.47±0.39)%](P0.05);观察组血清FT_3[(23.76±5.51)pmol/L]、FT_4[(88.29±31.35)pmol/L]、TSH[(1.68±1.01)mu/L]、TPOAb[(293.58±141.32)u/mL]、TGAb[(380.58±215.31)u/mL]、TRAb抗体[(10.75±8.23)u/mL]水平均高于对照组[FT_3(4.79±0.59)pmol/L、FT_4(17.84±3.15)pmol/L、TSH(0.08±0.01)u/L、TPOAb(20.06±4.85)u/mL、TGAb(31.48±22.68)u/mL、TRAb抗体(1.21±0.23)u/mL](P0.05);观察组血清IL-6[(2.51±0.31)μg/L]、IL-10[(43.79±21.54)ng/L]、IL-12[(1 306.14±514.39)ng/L]、TNF-α[(4.38±0.66)ng/L]水平均高于对照组[(1.01±0.20)μg/L、(27.68±5.41)ng/L、(584.34±214.57)ng/L、(2.41±0.81)ng/L](P0.05);观察组IL-2表达水平[(1.26±0.43)ng/L]低于对照组[(4.81±0.71)ng/L](P0.05)。结论 Graves病患者存在免疫功能紊乱情况及免疫调节细胞失衡,通过CD3~+CD56~+NKT减少及其分泌的细胞因子调节Th1/Th2分化,参与Graves病的发病过程。     

IL-37对变应性鼻炎患者相关细胞因子免疫调控研究

目的探究白介素37(IL-37)在变应性鼻炎(AR)患者外周血单核细胞(PBMCs)的表达水平及对相关细胞因子的免疫调控分析。方法选取120例AR患者作为研究组,另选择同期健康志愿者120例作为对照组,检测各组血清IL-37蛋白及mRNA表达,辅助性T细胞1(Th1)、Th2、Th17、CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)和Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞百分比及相关细胞因子水平;提取2组PBMCs,并应用浓度为100、200 ng/mL的重组人IL-37蛋白(rIL-37)干预,分析干预前后相关细胞因子水平变化。结果研究组血清IL-37水平及IL-37 mRNA表达均显著低于对照组,Th1细胞、Th17细胞百分比及Th1/Th2比例显著高于对照组,Th2细胞、CD4+CD25+Treg细胞、Foxp3+CD4+CD25+Treg细胞百分比显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组IL-1β、IL-6、IL-17水平显著高于对照组,IL-4、IL-10、IL-27、IFN-γ、TGF-β1水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清IL-37与IL-1β、IL-6、IL-17存在负相关性,与IL-4、IL-10、IL-27、IFN-γ、TGF-β1存在正相关性(P<0.05)。rIL-37干预后,研究组IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IL-27、IFN-γ、TGF-β1各指标变化更加显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。200 ng/mL组干预PBMCs细胞各细胞因子变化水平相较于100 ng/mL组各指标变化更显著(P<0.05)。结论变应性鼻炎患者IL-37表达明显下降,进而影响了Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡,导致抑炎因子水平降低,促炎因子水平升高,在AR发病中具有重要作用。     

地塞米松联合IL-2对供鼠体内调节性T细胞选择性扩增作用及对急性移植物抗宿主病反应的抑制作用

目的 通过地塞米松(Dex)联合IL-2处理小鼠,建立体内扩增调节性T细胞(Treg细胞)的方法 .观察用该方法 处理的小鼠脾细胞移植后受鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生与转归.方法 使用Dex和IL-2处理雄性C57BL/6N供鼠3 d后提取脾单个核细胞(MNC),用流式细胞术(FCM)分析CD4~+ CD25~+、CD25~+ FOXP3~+细胞的变化.,以以上方法 处理的雄性C57BL/6N小鼠为供者,对雌性BALB/c受鼠进行非清髓异基因淋巴细胞移植.移植后观测受鼠的生存率、生存时间、组织病理学变化,以及用PCR和FCM分析测定受鼠嵌合体等来评价aGVHD的发生.结果 经过Dex和IL-2联合处理,供鼠脾CD4~+ CD25~+ FOXP3~+ Treg细胞数量[(24.2±7.6)%]明显高于对照组[(4.0±0.8)%](P=0.01).Dex联合IL-2组供鼠Treg细胞与效应T细胞(Teff)的比值(0.43±0.15)显著高于对照组(0.14±0.01)(P=0.01).经过Dex联合IL-2处理供鼠后进行异基因淋巴细胞移植,受鼠aGVHD明显减轻,中位生存时间＞60 d,与对照组的中位生存时间12 d相比明显延长(P=0.0045).对照组出现典型的aGVHD表现,移植后2周Dex联合IL-2组和对照组的总体死亡率分别为29.4%和71.4%(P＜0.05).结论 经IL-2和糖皮质激素处理供鼠后进行主要组织相容性抗原复合物完全不相合脾淋巴细胞移植能明显减轻aGVHD,显著延长生存时间,可能与供者体内诱导扩增的Treg细胞增加有关.     

乌司他丁对脓毒症小鼠调节性T细胞凋亡及细胞因子分泌的影响

目的观察乌司他丁对脓毒症小鼠调节性T细胞(Treg)凋亡及细胞因子分泌的影响。方法将60只小鼠分为假手术组、模型组和乌司他丁组,每组20只。采用盲肠结扎穿孔方法制备脓毒症大鼠模型,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余手术步骤相同,乌司他丁组小鼠术后30 min尾静脉给药100 000 U/kg。采用流式细胞仪检测各组小鼠CD4+CD25+Treg的凋亡率,采用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠白细胞介素2(IL-2)、IL-4、干扰素γ的水平。结果假手术组、模型组和乌司他丁组小鼠CD4+CD25+Treg细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义[(20.1±1.0)%、(10.9±0.8)%、(13.7±0.8)%,F=10.236,P=0.030],且乌司他丁组小鼠显著低于假手术组,而高于模型组(P均0.05)。同时,与假手术组比较,模型组与乌司他丁组IL-2[(352±76)、(172±59)、(249±64)ng/L]和干扰素γ[(177±25)、(56±14)、(109±18)ng/L]均显著下降,而IL-4显著升高[(46±15)、(328±81)、(242±62)ng/L],且与模型组比较,乌司他丁组IL-2和干扰素γ均明显升高,而IL-4明显降低(P均0.05)。结论乌司他丁可诱导脓毒症小鼠Treg细胞凋亡,上调IL-2和干扰素γ,降低IL-4水平。     

7项指标在牙周炎患者血清及龈沟液中的表达

目的检测牙周炎患者血清及龈沟液中基质金属蛋白酶(MMP)、高迁移率族蛋白(HMGB)、趋化因子CX3CL1、趋化因子CCL11及白细胞介素(IL)-1β的变化,为牙周炎的靶向治疗提供依据。方法随机选择2016年1-5月在该院诊治的牙周炎患者20例作为患者组,选取同期健康体检者20例作为对照组。检测血清及龈沟液中MMP-4、MMP-5、HMGB2、HMGB1、CX3CL1、CCL11及IL-1β的水平。结果患者组血清MMP-4、MMP-5、HMGB2、HMGB1、CX3CL1、CCL11及IL-1β平均水平分别为(563.64±62.27)pg/mL、(615.36±70.44)pg/mL、(564.65±57.38)pg/mL、(481.33±51.42)pg/mL、(53.47±6.14)pg/mL、(41.20±4.16)pg/mL和(47.84±10.18)pg/mL,均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);患者组龈沟液MMP-4、MMP-5、HMGB2、HMGB1、CX3CL1、CCL11及IL-1β平均水平分别为(830.58±86.31)pg/mL、(793.47±81.65)pg/mL、(766.52±68.44)pg/mL、(801.69±75.36)pg/mL、(50.89±6.02)pg/mL、(44.52±5.21)pg/mL、和(53.61±10.29)pg/mL,均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论牙周炎患者血清及龈沟液中MMP-4、MMP-5、HMGB2、HMGB1、CX3CL1、CCL11及IL-1β均显著上升,趋势呈一致性,与牙周炎的发生发展有关。