SHP-2在造血细胞发育及血液系统肿瘤中的作用研究进展

SHP-2作为1种蛋白酪氨酸磷酸酶,由PTPN11基因编码,参与多种细胞信号转导通路。在造血细胞发育过程中,功能性SHP-2是正常造血细胞生长与发育必需的。同时,在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统肿瘤的发生,病理发展过程中,SHP-2的激活突变以及磷酸化都起到了重要的调控作用。SHP-2可能是1个新的潜在的抗血液肿瘤药物靶分子。     

TGF-β/Smads信号通路在白血病中的作用

造血细胞增值与凋亡的动态平衡受到正、负两类调控因子的精确调控.其中,TGF-β是调节造血系统增殖和分化的关键因子,Smad蛋白的功能是将TGF-β与细胞膜上受体结合后产生的信号从胞浆传导到胞核内.TGF-β/Smads信号传导通路中任何一个环节的变化,都会导致信号转到通路的异常,使细胞生长分化失控,与白血病的发病密切相关.本文主要就TGF-β/Smads通路在白血病发生中的作用作一综述.     

SHP-1基因的研究进展

含有SH2结构域的酪氨酸磷酸酶SHP-1主要表达于造血细胞,作为关键的调控因子调节细胞内的磷酸化水平。SHP-1已被认为是在淋巴瘤、白血病和其他肿瘤中的抑癌基因,     

白血病患者蛋白质酪氨酸磷酸酶基因的检测及临床意义

蛋白质酪氨酸磷酸酶(Src homology protein tyrosine phosphatase-1,SHP-1)主要表达于造血细胞,因此也被称为造血细胞磷酸酶(hematopoietic cell phosphatase HCP),其含有两个酪氨酸同源体(Src homology2,SH2)结构域,SH2结构域是各种信号蛋白相互联系作用的重要组成部分。SHP-1     

骨髓增生异常综合征患者SHP-1基因启动子甲基化状态及相关机制的探讨

目的　探讨SHP-1基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)发生、发展中的作用和相关机制.方法　将63例MDS患者根据IPSS积分系统分为较低危和较高危组.采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)对MDS细胞系SKK-1细胞和MDS患者骨髓细胞进行SHP-1基因启动子甲基化状态的检测;用Western blot方法检测正常对照者和患者骨髓单个核细胞和SKK-1细胞磷酸化信号传导和转录激活因子3( p-STAT3)蛋白的表达.结果　SKK-1细胞存在SHP-1基因启动子部分甲基化,正常对照者骨髓细胞均为非甲基化,较高危组MDS患者SHP-1启动子甲基化率显著高于较低危组(63.3％对24.2％)(P＜0.05);按WHO分型中染色体核型和骨髓原始细胞比例分组,SHP-1启动子甲基化率在RAEB-Ⅱ、核型差组和骨髓原始细胞占0.11 ～0.19组显著增高(P＜ 0.05);SKK-1细胞中存在p-STAT3蛋白的表达,较高危组MDS患者p-STAT3蛋白的表达显著高于较低危组(66.7％对18.2％);相关分析显示SHP-1启动子甲基化的出现与p-STAT3蛋白的表达有相关性.结论　SHP-1基因启动子的异常甲基化在MDS的发病和疾病进展中发挥作用,其机制可能涉及STAT3信号通路的激活,检测MDS患者SHP-1启动子甲基化状态有助于对疾病预后的判断.     

蛋白酪氨酸磷酸酶-1基因与非造血系统肿瘤

蛋白酪氨酸磷酸酶-1（Src-homologydomain2-containing protein tyrosine phosphatase-1，SHP-1），也称为PTP1C、PTPN6、SHPTP1、HCP。目前研究证明其主要在各种造血细胞中表达，是信号传导的负调节因子。SHP-1在非造血组织中的表达的亦有较多报道，在非造血系统肿瘤的形成和发展中也起重要作用。     

人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

背景:各种磷酸化蛋白质表达水平对人胚胎干细胞维持未分化状态或定向分化的影响逐渐成为人胚胎干细胞的研究热点,研究发现磷酸化蛋白质表达水平可能决定着人胚胎干细胞的命运。目的:对PI3K/Akt途径下游的关键蛋白磷酸化水平进行检测,寻找PI3K/Akt途径中能够维持人胚胎干细胞未分化状态的下游蛋白。方法:用胎鼠成纤维细胞作为饲养层,二维培养的方法培养人胚胎干细胞,胶原酶消化后待测;以饲养层细胞、K562细胞株为对照。观察人胚胎干细胞生长状态;RT-PCR检测Pten基因表达;WesternBlot检测p-PTEN、p-mTOR、p-P70S6Kp-4E-BP14种蛋白的表达。结果与结论:人胚胎干细胞在未分化状态时PtenmRNA表达高于肿瘤细胞K562,而且Pten抑制的mTOR信号通路中关键蛋白表达均明显低于K562,尤其以p-4E-BP1表达最低。提示PI3K/Akt/mTOR信号通路下游磷酸化蛋白在人胚胎干细胞活性较低,如果抑制负调节蛋白PTEN或直接激活该通路正调节关键蛋白,可能会加快人胚胎干细胞增殖、减少凋亡,进而为定向分化、再生医学提供更多的细胞来源。     

蛋白激酶Cδ与细胞凋亡

蛋白激酶Cδ（PKCδ）是细胞内重要的信号转导分子,参与细胞增殖、分化和凋亡过程。在介导细胞凋亡过程中,PKCδ先通过别构效应、磷酸化和剪切等步骤进行激活。活化的PKCδ可启动下游信号通路系统,使c-Abl、P73、DNA-PK、JNK、核纤层蛋白B、NF-κB等促凋亡相关的调控因子活化,促进细胞凋亡。同时,PKCδ也具有抗凋亡的调控功能。现就PKCδ的结构、活化,以及介导细胞凋亡与抗凋亡过程中调控的相关因子作一综述。     

K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2甲基化关系的研究

目的:探讨慢性髓系白血病(CML)急变细胞系K562细胞中DNA甲基转移酶1(DNMT1)与造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因表达及其启动子2的甲基化状态的关系。方法:分析NCBI数据库中SHP-1基因启动子2启动子区序列。将携带DNMT1sh RNA的psi HIV-m U6-sh DNMT1和樱桃色荧光蛋白(mcherry FP)psi HIV-m U6-control的慢病毒干扰载体感染K562细胞系。应用甲基化特异的聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测K562细胞中SHP-1基因启动子2的甲基化状态,Western blot检测SHP-1、DNMT1蛋白的表达水平,SYBR Green荧光定量PCR检测SHP-1 m RNA的表达。结果:SHP-1基因启动子2在-353 bp-+182 bp区有22个Cp G岛,K562细胞中SHP-1基因启动子2异常高甲基化且SHP-1蛋白表达缺失。K562细胞转染psi HIV-m U6-sh DNM T1后DNM T1表达水平为0.48±0.06,较转染psi HIV-m U6-control组明显降低(1.33±0.19)(t=4.18,P=0.014)。K562细胞中SHP-1蛋白表达缺失,转染psi HIV-m U6-sh DNM T1后K562细胞SHP-1蛋白恢复表达,转染psi HIV-m U6-sh DNM T1的K562细胞中SHP-1 m RNA相对表达水平(14.23±3.83)较转染psi HIV-m U6-control组(1.031±0.156)高(P=0.004)。DNMT1基因沉默后SHP-1基因启动子2中Cp G岛去甲基化。结论:K562细胞中DNMT1与SHP-1启动子2的异常甲基化及沉默相关。     

甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine对K562细胞SHP-1基因表达及细胞增殖与凋亡的影响

本研究探讨5-氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对K562细胞中抑癌基因SHP-1的转录调控作用及对K562细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据.采用MSP方法检测SHP-1基因甲基化状态,MTT法检测不同剂量(0.5,1,2 μmol/L)5-aza-CdR作用K562细胞1,3,5天时对K562细胞存活率的影响,流式细胞术(FCM)分析5-aza-CdR作用1,3,5天时细胞周期及凋亡率的变化,实时定量PCR(FQ-PCR)和Western blot方法检测5-aza-CdR处理前后SHP-1 mRNA及蛋白表达水平、P-STAT5蛋白表达变化.结果表明,K562细胞中存在SHP-1基因的甲基化,5-aza-CdR作用使K562细胞中SHP-1 mRNA和蛋白重新表达,而p-JAK2蛋白表达随之呈下降趋势;5-aza-CdR明显抑制K562细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关.JAK2特异性抑制剂AG490明显抑制K562细胞增殖;5-aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,且作用也呈时间依赖性,用药1,3,5天细胞凋亡率分别为9.3%,24.2%,37.7%.2 μmol/L的5-aza-CAR处理24小时后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期.5-aza-CdR作用1,3,5天时G2/M期细胞比例分别为30.7%,23.4%,19.3%.结论:特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使K562细胞中沉默的SHP-1基因重新表达,并可能通过JAK/STAT路径活化抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡.     

特异性蛋白1在造血细胞分化中的作用

特异性蛋白1(specificity protein 1,Spl)是一种广泛表达的转录因子,在造血细胞中也有表达.研究发现,在造血细胞分化的过程中,Spl可以调控与分化相关基因的转录,提示Spl在造血细胞的分化中具有比较广泛的作用.造血系统恶性肿瘤往往伴有分化的异常,一些癌蛋白就是通过对Spl的异常调控而阻滞细胞分化,导致造血细胞的恶变.因此,Spl的调控异常可能在一些血液恶性肿瘤发病中发挥着作用.本文将对Spl的结构,转录调控机制及其在造血细胞分化中的作用进行综述.     

CD45~-和CD45~+成人急性淋巴细胞白血病患者的免疫表型及临床特点分析

CD45是白细胞共同抗原(LCA),由一组高分子质量蛋白组成,除红细胞、血小板和浆细胞外.这些蛋白可选择性地表达在所有造血细胞表面[1].有研究提示CD45参与造血细胞牛长、分化及B淋巴细胞的活化和凋亡,而且有报道提示原始细胞缺乏CD45的急性淋巴细胞白血病(ALL)预后较好~[2].     

p38在甲硫氨酸限制抑制胃癌细胞生长中的作用

目的:探讨甲硫氨酸限制是否会激活胃癌细胞内p38蛋白信号传导通路.方法:观察甲硫氡酸限制环境中胃癌细胞形态的变化及增殖活性的变化:检测甲硫氨酸限制环境中胃癌细胞磷酸化p38的表达.结果:甲硫氨酸限制培养液中胃癌细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05);甲硫氨酸限制培养液中培养24 h后胃癌细胞中可检测到磷酸化p38蛋白的表达.结论:甲硫氨酸限制诱导的胃癌细胞周期阻滞和凋亡与p38蛋白信号通路激活有关.     

血细胞生成中的信号传递通路及其调控

造血生长因子通过与其受体的相互作用调节血细胞的增殖与分化。造血生长因子与受体结合后激活JAK,JAK发生自我磷酸化的同时也使受体磷酸化,继而通过SH2 蛋白激活ras通路。JAK还可以使STAT磷酸化。STAT磷酸化后移到细胞核内,启动有关基因的转录。     

神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨

背景:前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。目的:进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径。方法:分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Westernblot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达结果与结论:神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率。神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5mRNA的表达上调作用。Westernblot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组。提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨

背景：前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。目的：进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径。方法：分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Westernblot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达结果与结论：神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率。神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5mRNA的表达上调作用。Westernblot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组。提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化。     

甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及诱导细胞凋亡机制研究

目的 探讨甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及甲异靛诱导K562细胞凋亡的机制.方法 应用流式细胞术检测甲异靛诱导K562细胞凋亡的情况以及线粒体膜电位稳定性.应用Western blot技术检测bcr-abl信号通路相关蛋白、caspase以及Bcl-2家族成员在甲异靛作用前后的表达情况.RT-PCR技术检测甲异靛作用前后bcr-abl mRNA表达水平,用电泳移动迁移速度分析检测STAT3、STATS的DNA结合能力.结果 20 μmol/L甲异靛町降低ber-abl融合蛋白的表达及其磷酸化水平,但并不改变其mRNA表达水平,甲异靛可降低STATS以及CRKL的磷酸化水平,抑制STAT3、STATS的DNA结合能力.5-20μmoL/L甲异靛可诱导K562细胞凋亡并且具有浓度依赖性.甲异靛诱导K562细胞凋亡中伴随caspase 3、8、9活化以及细胞线粒体膜电位降低,caspase 3、8、9特异抑制剂z-DEVD-fmk、z-IETD-cho和z-LETD-fmk可阻断甲异靛诱导的K562细胞凋亡.甲异靛诱导K562细胞凋亡前后不伴有Bcl-2、Bax、Bid蛋白表达水平的改变.结论 甲异靛通过降低bcr-abl融合蛋白的表达并抑制bcr-abl信号通路中相关蛋白活性从而抑制K562细胞的增殖.甲异靛诱导K562细胞凋亡依赖于caspase活化以及线粒体途径,但Bcl-2家族成员不参与凋亡的调控.     

木犀草素对博来霉素诱导的肺上皮细胞增殖、凋亡及Hippo/Yes相关蛋白通路的影响

目的 探究木犀草素(Lut)对博来霉素(BLM)诱导的人肺正常上皮细胞(BEAS-2B细胞)增殖、凋亡及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)通路的影响.方法 体外培养BEAS-2B细胞,使用4、8、12、24 μg/mL BLM诱导12、24、48 h,筛选BLM诱导浓度和时间.将BEAS-2B细胞分为对照组、BLM组以及Lut低、中、高浓度组.各组细胞培养24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Hippo/YAP通路相关蛋白-哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、大肿瘤抑制因子1(LAST1)和YAP磷酸化水平.结果 BLM诱导24 h后BEAS-2B细胞的半数抑制浓度(IC50)约为8μg/mL,所以本研究选取8μg/mL BLM诱导细胞24 h.与对照组相比,BLM组细胞较小,边缘不规则,细胞间隙增加,细胞增殖能力、MST1、LAST1和YAP蛋白磷酸化水平显著降低(P＜0.05),凋亡率显著升高(P＜0.05);与BLM组相比,Lut低、中、高浓度组细胞形态趋于正常,细胞增殖能力、MST1、LAST1和YAP磷酸化水平依次升高(P＜0.05),凋亡率依次降低(P＜0.05).结论 Lut可能通过激活BEAS-2B细胞中Hippo/YAP信号通路,提高BLM诱导后细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡.     

Bcl-xL在原发性血小板增多症患者巨核细胞分化过程中的表达

原发性血小板增多症（ET）是一类造血系统慢性骨髓增生性疾病，其临床特点是外周血中血小板持续增高，同时骨髓中巨核细胞过度增生。ET的发病机制目前尚未完全明确。近来有学者发现体外诱导CD34^＋细胞分化得到的巨核细胞具有明显的凋亡特征，是巨核细胞成熟晚期的表现。有研究也显示了巨核细胞的凋亡特征，显示血小板的形成是巨核细胞成熟后的晚期表现。抗凋亡蛋白Bcl-xL属于Bcl-2蛋白家族，主要在造血细胞中表达，在调节造血干细胞的分化中具有重要功能。有人研究发现抗凋亡蛋白Bcl-xL，     

SHP-2蛋白酪氨酸磷酸酶的研究进展

酪氨酸激酶的磷酸化作用与酪氨酸磷酸酶的去磷酸化作用是生物体内普遍存在的信号转导机制,它们共同调节细胞内蛋白质的酪氨酸磷酸化水平。SHP-2就是起去磷酸化作用的一种非跨膜型蛋白酪氨酸磷酸酶,它在调节细胞生物的多种信号转导过程及控制细胞活性中发挥着重要的作用,其突变体与多种恶性疾病的发生有密切关系。因此,SHP-2很可能为抗肿瘤药物的研发提供一个新的靶点。