尿系列蛋白的免疫学检测及其临床意义

尿系列蛋白的免疫学检测及其临床意义上海第二医科大学医学检验实验室（２０００２３）李稻尿系列蛋白是指存在于尿液中一组各类蛋白质。目前，临床常规的定性或定量检测方法难以区分尿中各类微量蛋白。随着免疫化学技术的不断发展，高敏感、高特异的免疫检测技术广泛应用...     

铁代谢与细胞分化

铁是多种生命形式必需的营养元素之一，存在于铁卟啉化合物、铁硫蛋白、运铁蛋白等含铁化合物中。铁参与细胞内许多重要信号分子的调控，在细胞周期、分化、凋亡等生物过程中发挥重要作用。细胞内铁的代谢状态与细胞分化相关信号调控分子之间有着密切的关系，从而决定了细胞的分化方向。由于正常细胞与肿瘤细胞的铁代谢存在着差异，使得铁剥夺疗法也成为肿瘤治疗中的新途径。     

遗传性凝血因子V缺陷症的诊断

目的对遗传性凝血因子V（FV）缺陷症进行诊断。方法通过检测先证者及家系成员的活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、FV促凝活性（FV：C）和FV抗原（FV：Ag）等进行临床表型诊断，应用聚合酶链反应（PCR）方法对先证者F5基因的25个外显子及其侧翼序列进行扩增，PCR产物进行直接测序以发现其基因突变，进行家系调查以期发现遗传规律。结果先证者APTT和PT显著延长，FV：C为3．5％，FV：Ag为1．47％。F5基因测序发现，先证者F5基因外显子区共有7处与GenBank AY364535序列不同的位点，其中外显子10区的C38591T杂合突变导致产生1个终止密码（R506Term），外显子13区的C47504T纯合变异导致编码氨基酸L1369F替换，该变异被证实为基因多态性。家系分析表明，前者遗传于先证者母亲，后者遗传于其父母双亲。结论通过表型检测、家系调查和基因诊断，明确该先症者为遗传性凝血因子V缺陷症，C38591T杂合突变产生终止密码是导致先证者FV缺陷的原因之一。     

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物检测方法的建立和初步临床应用

目的　建立纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的检测方法。方法　从血浆中纯化PAP作为免疫原制备单克隆抗体 (单抗 ) ,建立双抗体夹心法酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,并对该法进行评价。结果　获取了特异针对PAP新抗原的单抗LW 3C10 ,和针对PAP及纤溶酶原 (Plg)的单抗LW 2B9。对PAP的亲和常数分别为 4 6 9× 10 10 mol/L、5 6 2× 10 9mol/L。以它们建立的夹心ELISA检测PAP在 0～ 15 0 μg/L范围内线性良好 ,批内、批间CV分别为 4 0 %～ 5 2 %、11 2 %～ 13 6 % ,回收率为 85%～ 10 5 % ,加入α2 抗纤溶酶 (α2 AP)及纤溶酶 α2 巨球蛋白复合物 (P α2 M)不干扰测定 ,与美国ADI公司PAP试剂盒相关良好 (r=0 96 2 9)。急性髓细胞白血病组、急性心肌梗死组、肝病组、健康老年人组的血浆PAP水平显著高于正常对照组 (P <0 0 0 1)。结论　该法可用于评估纤溶系统激活。     

纤溶酶-α2-抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及其应用

目的:制备纤溶酶-α2-抗纤溶酶复合物(plasmin-α2-antiplasmin complex, PAP)的单克隆抗体并建立其酶免疫检测方法.方法:从人血浆中提纯的PAP作为免疫原制备特异性单克隆抗体,通过双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)对该单克隆抗体应用价值进行评估.结果:获得特异针对PAP新抗原的单抗3C10和针对PAP及纤溶酶原(Plg)的单抗2B9,效价均为1.25×10-6,其对PAP的亲和常数分别为4.69×10-10M和5.62×10-9M.以此建立的双抗体夹心ELISA检测PAP在0～160ng/ml范围内呈良好的线性关系,批内CV＜7%,检测敏感度为5ng/ml,与ADI公司的PAP试剂盒相关性良好(r=0.9629).结论:本法可应用于临床评估纤溶系统的激活状态.     

NB4细胞株分化中NDRG1表达的研究

目的:应用多种分化诱导剂处理急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞株,探讨NDRG1表达在白血病细胞诱导分化中的作用.方法:采用1×10-7mol/L全反式维甲酸(ATRA)、1%二甲基亚砜(DMSO)和20nmol/L佛波酯(TPA)分别处理NB4细胞48h,并通过细胞染色、流式细胞检测、蛋白印迹(Western blot)和实时PCR分别检测分化细胞的核型、CDllb、CDllc、CDl4表达,观察ndrgl mRNA与蛋白的变化.结果:3种分化诱导剂分别处理细胞株后,细胞核缩小且呈分叶状改变,细胞内NDRG1蛋白表达均呈时间依赖性上调;经ATRA和DMSO处理的细胞,其ndrgl mRNA发生上调,而经TPA处理的细胞却未发生ndrgl mRNA表达上调.结论:细胞信号调控分子NDRG1与细胞分化密切相关.     

医学功能学网络虚拟实验室构建与使用探索

为克服传统功能学实验教学中存在的实验室资源、课时限制等不足．尝试构建与初步应用医学功能学网络虚拟实验室教学平台。相应虚拟教学软件采用c#语言、PhotoShop,3DSMAX、Flash等编写制作,并通过TCP／IP建立的Web服务器实现网络教学平台功能。网络实验室平台架构中,包含学生实验操作前台系统和实验教学管理后台系统。通过3届医学生的使用表明,网络虚拟实验室教学平台已初步实现其教学功能,其应用有利于提升学生自主学习能力和创新能力,解决了课时缩减和资源短缺等实验教学发展的瓶颈问题。     

液相杂交技术在聚合酶链反应酶联免疫检测的应用

目的采用液相杂交技术,简化核酸杂交过程,建立乙肝病毒（HBV）的液相杂交的聚合酶链反应-酶联免疫检测（PCR-ELISA）方法。方法将5′端标记生物素的PCR扩增产物与5′端标记地高辛的探针呈液相混合,90℃2min,55℃1min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定,经酶标记抗地高辛标记抗体结合、显色。结果液相杂交酶联免疫检测条件优化探针浓度3pmol/次,酶标记抗体稀释度1∶1000。液相杂交时间3min,固相杂交时间120min,但其检测结果无明显差别。检测灵敏度1×10     

纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ,并对杂交瘤细胞分泌的mAb的特异性和亲和力进行鉴定。结果 :共获得 2 4株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞。其中 ,针对PAP分子中纤溶酶结构的mAb 16株 ,针对α2 AP结构的mAb 1株 ,针对新抗原 (PAP分子中新出现的不同于前体分子纤溶酶原及α2 AP的抗原决定簇 )结构的mAb 7株。这些腹水中抗PAPmAb的滴度为 2× 10 -4～ 1× 10 -8,其中 4株mAb的亲和常数为 5 .6 2× 10 -9～ 3.5 8× 10 -11mol/L之间。结论 :成功地制备针对PAP新抗原的具有高亲和力的mAb ,为建立不受其前体分子干扰的PAP特异性检测方法 ,研究纤溶系统的激活状态提供了工具。     

基础医学实验教学中心的组织架构及实验教学改革的探索

上海交通大学医学院基础医学实验教学中心形成了由基础医学院领导,中心独立运行、人员归属实验教学中心的管理体制.同时,优化配置,共享实验教学资源,为多学科实验教学的交叉、融合提供技术平台;并以教研室为支撑,理论教学与实验教学相结合,打破学科界限,改变以课程为单位的实验课程,构建整合式实验教学课程体系:基础性实验、综合性实验和设计性实验(含探究性实验).实验教学与科研、临床相结合,经典实验与现代技术相结合,实验教学手段多样化,提升实验教学在培养学生实践能力和创新能力中的作用,提高实验教学质量.