两种不同消化方法对表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体表达的干预

目的：采用单纯胰酶和中性蛋白酶联合胰酶两种不同的消化方式，观察表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体CD71表达的变化，为荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞选择合适的消化方法。 方法：选取中山大学附属第一医院外科门诊包皮环切手术患者的皮肤标本10份，患者均知情同意，年龄14～22岁。每份标本均分为2份，分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化，共20份，分为胰酶组、中性蛋白酶联合胰酶组，10份／组。胰酶组将皮条放入质量浓度为2．5g／L的胰酶中，4℃消化过夜。次日撕除表皮角质层，以弯镊轻刮皮肤上皮面，获得表皮基底层细胞；电性蛋白酶联合胰酶组将皮条放入质量浓度为2．5g／L的中性蛋白酶中,4℃消化过夜。次日轻撕下皮肤表皮层，将其剪成1mm&;#215;1mm大小的碎块，以质量浓度为2．5g／L的胰酶消化5min，获得表皮基底层细胞。分别取两组细胞悬液300μL，加入碘化丙啶标记死亡细胞，流式细胞仪检测死亡细胞百分率，计算细胞活力。以荧光标记的毗整合素和CD71抗体标记细胞表面抗原，通过流式细胞术检测抗原表达。剩余细胞以表皮细胞培养液重悬，移入预先铺有100mg／L Ⅳ型胶原的培养瓶中，接种密度为5&;#215;10^4／cm^2，3d换液1次，观察两组细胞的生长情况。 结果：实验纳入包皮环切手术患者的皮肤标本10份，每份标本分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化，共20份，全部进入结果分析。①不同酶消化后两组细胞活力的比较：中性蛋白酶联合胰酶组细胞活力明显高于胰酶组[（86&;#177;1．81）％，（82&;#177;1．48）％，P〈0．01]。②不同酶消化后两组细胞抗原的表达：胰酶组时α6^bimCD71^bim细胞占（8．00&;#177;1．69）％，α6^bimCD71^bim细胞占（36．00&;#177;18．03）％，α6^bim细胞占（40．00&;#177;10．08）％；中性蛋白酶联合胰酶组3种细胞所占比例依次为（30．00&;#177;8．59），（8．00&;#177;1．63），（38．00&;#177;8．72）％，两组各抗原的表达基本相似（P〉0．05）。③不同酶消化后两组细胞形态学观察结果：胰酶组细胞贴壁及伸展较中性蛋白酶联合胰酶组稍迟0．5-1．0h，此后培养过程中生长增殖情况无明显差异，一般7d左右接近融合，传代。培养第7天，表皮细胞体积小，核浆比例大，可见夹杂有成纤维细胞。中性蛋白酶联合胰酶组细胞30min内基本贴壁，并有少量细胞伸展，60min后大部分细胞伸出短小伪足，胞质展开，折光率减低。培养第7天，表皮细胞体积小，核浆比例大，未见夹杂有成纤维细胞。 结论：从对表面抗原表达影响的角度来看，单纯胰酶消化与中性蛋白酶联合胰酶消化后α6^bimCD71^bim，α6^bimCD71^bim，α6^bim这3种表皮细胞的检出率基本相似，两种消化方法可根据习惯选用。但中性蛋白酶联合胰酶消化对细胞活力影响小，消化时机容易掌握，对细胞损伤相对小，适用于荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞。     

Ⅳ型胶原黏附法分选表皮干细胞

目的:评估Ⅳ型胶原黏附法分选表皮干细胞的分选效果及对细胞生物学特性的影响。方法:实验于2004-11/2005-05在中山大学附属第一医院外科实验室完成。选取中山大学附属第一医院外科门诊包皮环切手术患者的皮肤标本5份(患者知情同意),进行表皮细胞的分离培养。取培养的二三代表皮细胞,消化后加入铺有100mg/LⅣ型胶原的培养瓶中分选。取分选细胞悬液于培养箱中过夜培养,第2天取出爬片,磷酸缓冲液冲洗3min×2次,去除残留培养液,4%多聚甲醛室温下固定10min,磷酸缓冲液冲洗3min×2次,以含0.1%Triton-100的3%山羊血清封闭、透膜20min,滴加稀释好的角蛋白K19/β1整合素抗体进行双标,4℃过夜孵育,磷酸缓冲液冲洗3min×2次,加入配置好的双标用二抗,37℃下孵育20min,磷酸缓冲液冲洗3min×2次,加入5mg/L的Hochest33258,标记细胞核,37℃下孵育5min,磷酸缓冲液冲洗3min×2次,滴加含40%甘油的碳酸氢钠缓冲液,盖玻片封片,以上步骤均在暗室中操作,同时以磷酸缓冲液代替一抗作为阴性对照。激光共聚焦显微镜下观察,拍照。同时表达角蛋白K19、β1整合素认为是表皮干细胞。分别取分选前及筛选后细胞各4×106个,检测表皮干细胞(α6briCD71dim细胞)、短暂扩增细胞(α6briCD71bri细胞)及终末分化细胞(α6dim细胞)的百分率及分选前后的细胞周期。结果:①分选后细胞体积小,均匀一致,核浆比例大,免疫荧光检测同时表达K19、β1整合素。②与分选前细胞比较,分选后细胞中表皮干细胞α6briCD71dim细胞、短暂扩增细胞α6briCD71bri细胞的百分率明显增高,差异显著[(9.41±0.31)%,(38.74±1.09)%;(43.66±1.12)%,(48.92±2.49)%,P<0.01]。③与分选前细胞比较,分选后细胞G0/G1期所占比例明显增高,差异显著[(80.80±1.69)%,(94.37±1.32)%,P<0.01]。提示分选后细胞处于相对静止状态的表皮干细胞所占比例高。结论:Ⅳ型胶原黏附分选出的细胞含有高纯度的表皮干细胞,此分选方法对细胞活力无明显影响。能够为组织工程皮肤构建提供理想的种子细胞。     

应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点

目的:探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞,为组织工程学的进一步研究奠定基础。方法:实验于2005-07/12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成。健康3个月龄恒河猴2只,分离与培养猴表皮细胞,获取第2～4代的细胞,消化后,将细胞重新放回原瓶中,培养箱中静置20min,获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞。①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞。②对20min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测,以未经吸附分选的细胞作为对照。③20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片,进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色。④20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1(K10对应角蛋白)的mRNA反转录聚合酶链反应的检测。结果:①分选后的细胞体积较小,核浆比例较大。②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主(α6briCD71dim为82.5±1.641),也含有少量的短暂扩增细胞(α6briCD71bri为4.9±2.125),有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到(α6dim)。③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性,K10阴性;分选后未黏附细胞K10为阳性,而K15和整合素β1均为阴性。④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素,K10没有表达;而分选后剩余的细胞只表达K10。结论:原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法。     

自制血清替代物行无血清条件培养人表皮干细胞

目的:建立一种人表皮干细胞的无血清培养方法,并与目前表皮干细胞常用的有血清培养方法进行比较,探讨该条件是否更适合表皮干细胞的生长和有利于实施表皮干细胞的调控,提高实验的准确性。方法:实验于2002-05/2004-07在江西医学院第二附属医院医学分子中心完成。①从幼儿包皮中分离表皮细胞、用胶原Ⅳ分别黏附表皮细胞10～15min,收集黏附细胞,即为纯化的表皮干细胞。②分3组进行培养,3组培养条件均有无钙低糖Dulbecco改良的Eagle培养基,0.05mmol/LCaCl2,10μg/L表皮细胞生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松;有血清培养组还含有100g/L螯合钙的干细胞专用血清;无血清培养组1还含有100g/L无血清培养基血清替代物。无血清培养组2还含有100g/L无血清培养基血清替代物和50μg/L牛垂体提取物。③培养20d后,在倒置显微镜下对所培养细胞进行形态学观察;同时计数细胞数(大于100个细胞团为1个集落称克隆),计数各组克隆数;采用胰酶消化传代,计数传代数及多次传代后所得细胞总数;流式细胞术分析α6,CD71(人表皮干细胞表面标记)的表达情况,计算人表皮干细胞α6briCD71dim细胞百分率;采用流式细胞术进行细胞周期分析处于静止期/DNA合成前期人表皮干细胞百分率,采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白19及5/8(均表明人表皮干细胞生长情况,且以角蛋白19更能明确表明人表皮干细胞生成情况)和角蛋白10表达情况。结果:①人表皮干细胞细胞形态学观察结果:应用倒置显微镜下观察检测,无血清培养组1与有血清培养组人表皮干细胞细胞形态学基本相同,无血清培养组1集落形成时间稍晚于有血清培养组。②形成的克隆数及经胰酶消化可传代数、细胞总得数:胰酶消化传代后,形成的克隆数、细胞总得数及细胞传代数无血清培养组1与有血清培养组相近(P>0.05),两组形成的克隆数、细胞总得数明显低于无血清培养组2(P<0.05)而细胞传代数组明显高于无血清培养组2(P<0.05)。③细胞周期分析及α6,CD71鉴定结果:采用流式细胞术检测,有血清培养组与无血清培养组1中人表皮生长干细胞α6briCD71dim细胞百分率及处于静止期/DNA合成前期细胞(即人表皮干细胞)百分率相近(P>0.05),且均高于无血清培养组2(P<0.05)。④细胞角蛋白19和5/8及10表达情况:免疫细胞化学鉴定结果,有血清培养组与无血清培养组1角蛋白19和5/8及10阳性细胞百分率相近(P>0.05),而两组角蛋白19阳性细胞百分率明显高于无血清培养组2(P<0.05),角蛋白5/8和10阳性细胞百分率明显低于无血清培养组2(P<0.05)。结论:①利用自制的无血清培养基血清替代物,添加一些辅助因子(0.05mmol/LCaCl2,10μg/L表皮细胞生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松)能较好的培养表皮干细胞,传代次数多,培养时间长,形成克隆数较多,说明此类细胞具有较强的自我复制能力,结合所培养细胞中人表皮干细胞α6briCD71dim细胞及角蛋白19和5/8阳性细胞比例较高等特点,表明该无血清培养条件适合表皮干细胞的生长。②自制的无血清培养基血清替代物添加一些辅助因子(0.05mmol/LCaCl2,10μg/L表皮细胞生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松,50μg/L牛垂体提取物)的无血清培养组2能较快获得大量人表皮细胞,当组织工程需要大量细胞时可用此种培养扩增方法。     

大鼠气管上皮细胞培养：3种方法的比较

背景:目前常用分离气管上皮细胞的方法有蛋白酶法和胰酶法,但各有不足,控制不好会影响细胞的增殖和活力.目的:改进气管上皮细胞培养技术,比较链酶蛋白酶、胰酶和联合消化3种不同酶消化法在培养气管上皮细胞中的区别.设计、时间及地点:对比观察,实验于2007-09/2008-07在同济大学分子生物开放实验室和解放军第二军医大学动物实验室完成.材料: SD雄性大鼠12只,体质量200～250 g.链酶蛋白酶、胰酶为Gibco公司产品.方法:将SD大鼠分3组,每组4只.链酶蛋白酶组使用1 g/L链酶蛋白酶在4℃消化18 h;胰酶冷消化组使用2.5 g/L胰酶4℃消化18 h;联合消化组使用链酶蛋白酶4℃消化18 h后用2.5 g/L胰酶37 ℃消化5 min,用以上3种方法分离、培养SD大鼠气管上皮细胞.主要观察指标:用细胞计数板,激光共聚焦显微镜测定细胞分离的数量以及纯度、成活率.结果:链酶蛋白酶、胰酶冷消化和联合消化法所得细胞数量分别为(1.21±0.17)×106;(1.35±0.13)×106和(1.36±0.16)×106.联合消化法所得细胞状态最好,贴壁能力和增殖能力最好,其次为链酶蛋白酶法,胰酶冷消化法较差.结论:链酶蛋白酶与胰酶的联合法是一种有效的培养气管上皮细胞的方法.     

自制血清替代物行无血清条件培养人表皮干细胞

目的：建立一种人表皮干细胞的无血清培养方法，并与目前表皮干细胞常用的有血清培养方法进行比较，探讨该条件是否更适合表皮干细胞的生长和有利于实施表皮干细胞的调控，提高实验的准确性。方法：实验于2002-05／2004-07在江西医学院第二附属医院医学分子中心完成。①从幼儿包皮中分离表皮细胞、用胶原Ⅳ分别黏附表皮细胞10～15min，收集黏附细胞，即为纯化的表皮干细胞。②分3组进行培养，3组培养条件均有无钙低糖Dulbecco改良的Eagle培养基，0．05mmol／LCaCl2，10μg／L表皮细胞生长因子，1&;#215;10^-6mol／L氢化可的松；有血清培养组还含有100g／L螯合钙的干细胞专用血清；无血清培养组1还含有100g／L无血清培养基血清替代物。无血清培养组2还含有100g／L无血清培养基血清替代物和50μg／L牛垂体提取物。③培养20d后。在倒置显微镜下对所培养细胞进行形态学观察；同时计数细胞数(大于100个细胞团为1个集落称克隆)，计数各组克隆数；采用胰酶消化传代，计数传代数及多次传代后所得细胞总数；流式细胞术分析α6，CD71(人表皮干细胞表面标记)的表达情况，计算人表皮干细胞α6bri CD71dim细胞百分率；采用流式细胞术进行细胞周期分析处于静止期／DNA合成前期人表皮干细胞百分率，采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白19及5／8(均表明人表皮干细胞生长情况，且以角蛋白19更能明确表明人表皮干细胞生成情况)和角蛋白10表达情况。结果：①人表皮干细胞细胞形态学观察结果：应用倒置显微镜下观察检测，无血清培养组1与有血清培养组人表皮干细胞细胞形态学基本相同，无血清培养组1集落形成时间稍晚于有血清培养组。②形成的克隆数及经胰酶消化可传代数、细胞总得数：胰酶消化传代后，形成的克隆数、细胞总得数及细胞传代数无血清培养组1与有血清培养组相近(P&;gt;0．05)，两组形成的克隆数、细胞总得数明显低于无血清培养组2(P&;lt;0．05)而细胞传代数组明显高于无血清培养组2(P&;lt;0．05)。③细胞周期分析及α6，CD71鉴定结果：采用流式细胞术检测，有血清培养组与无血清培养组1中人表皮生长干细胞α6^briCD71^dim细胞百分率及处于静止期／DNA合成前期细胞(即人表皮干细胞)百分率相近(P&;gt;0．05)，且均高于无血清培养组2(P&;lt;0．05)。④细胞角蛋白19和5／8及10表达情况：免疫细胞化学鉴定结果，有血清培养组与无血清培养组1角蛋白19和5／8及10阳性细胞百分率相近(P&;gt;0．05)，而两组角蛋白19阳性细胞百分率明显高于无血清培养组2(P&;lt;0．05)，角蛋白5／8和10阳性细胞百分率明显低于无血清培养组2(P&;lt;0．05)。结论：①利用自制的无血清培养基血清替代物．添加一些辅助因子(0．05mmol／L CaCl2，10μg／L表皮细胞生长因子，1&;#215;10^-6mol／L氢化可的松)能较好的培养表皮干细胞，传代次数多，培养时间长，形成克隆数较多，说明此类细胞具有较强的自我复制能力，结合所培养细胞中人表皮干细胞α6^briCD71^dim细胞及角蛋白19和5／8阳性细胞比例较高等特点，表明该无血清培养条件适合表皮干细胞的生长。②自制的无血清培养基血清替代物添加一些辅助因子(0．05mmol／LCaCl2，10μg／L表皮细胞生长因子，1&;#215;10^-6mol／L氢化可的松，50μg／L牛垂体提取物)的无血清培养组2能较快获得大量人表皮细胞，当组织工程需要大量细胞时可用此种培养扩增方法。     

体外分离、纯化人表皮干细胞促进皮肤的功能生理性修复

目的表皮干细胞是皮肤发生、修复、重建的关键“种子细胞”,因而研究建立人表皮干细胞体外分离、培养及鉴定的方法非常重要。方法通过酶消化法,分离小儿包皮的表皮与真皮层,表皮制成单细胞悬液,以高糖低钙的DMEM培养基,补充100ml/L的干细胞培养专用胎牛血清(FBS),0.05mmol/L氯化钙,10ng/ml表皮生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松进行培养。在实验之前用胶原IV包被直径35mm的培养皿,其中有些放置消毒盖玻片以制“细胞玻片,置4℃冰箱中放置30min以上,吸干胶原IV,再将培养皿置室温下自然干燥半小时以上,备用。调整细胞含量为2×106/ml,接种于包被好胶原IV的培养皿中快速黏附10～15min(37℃),弃去未黏附细胞,保留快速黏附细胞继续培养。培养至21d对所培养细胞进行流式细胞仪α6、CD71表型鉴定,角蛋白19(K19)、角蛋白5(K5)免疫细胞化学染色鉴定以及形态学观察、克隆计数。结果在胶原IV包被的培养皿中快速贴壁细胞经继续培养,可见细胞克隆数增多,细胞传代次数达8～10次,培养时间达2个月。K19,K5免疫化学染色阳性,α6briCD71dim细胞占细胞总数的40%左右。结论研究表明用胶原IV快速黏附法可从包皮分离和富集表皮干细胞,用此体外培养体系,可较好地扩增表皮干细胞。     

辛伐他汀对大鼠肺成纤维细胞功能及其抑制通路的影响

背景他汀类药物可以通过阻断甲羟戊酸的合成,抑制某些膜联结蛋白的翻译后修饰,从而阻断某些细胞内信号传导通路,抑制多种细胞的增殖.目的探讨辛伐他汀对肺成纤维细胞的增殖、胶原合成及基质金属蛋白酶2分泌的影响.设计完全随机设计,对照实验.单位中国协和医科大学阜外心血管病医院器官移植研究室.材料实验于2004-06/2004-10在中国协和医科大学北京协和医院心内科实验室完成.培养的新生SD大鼠的肺盛纤维细胞,根据培养液中加入的干预药物浓度不同而分为辛伐他汀0,1,5,10,50μmol/L及辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组.方法用消化法培养新生SD大鼠的肺成纤维细胞,给予不同浓度的辛伐他汀干预.四氮唑蓝比色法检测细胞增殖,细胞免疫组化法测定细胞胶原的合成,酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液基质金属蛋白酶2的含量.主要观察指标不同浓度辛伐他汀及辛伐他汀加甲羟戊酸干预后肺成纤维细胞增殖和胶原合成能力,以及基质金属蛋白酶2分泌量.结果①辛伐他汀5,10,50 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显低于辛伐他汀0 μmol/L组(0.520±0.010,0.334±0.011,0.260±0.012,0.111±0.011;0.508±0.011,0.324±0.014,0.232±0.015,0.083±0.015;0.445±0.017,0.305±0.015,0.216±0.015,0.068±0.012;0.561±0.013,0.361±0.012,0.289±0.012,0.140±0.013,t=3.359～8.111,P＜0.05～0.01).②辛伐他汀50 μmol/L+甲羟戊酸200 μmol/L组四氮唑蓝比色A490值,肺成纤维细胞表达Ⅰ,Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显高于辛伐他汀50 μmol/L组(0.567±0.015,0.354±0.014,0.283±0.012,0.138±0.011,t=4.715～10.950,P＜0.01).结论辛伐他汀能抑制肺成纤维细胞增殖和胶原合成,并可减少基质金属蛋白酶2的分泌,抑制肺成纤维细胞黏附迁移功能,并可通过影响甲羟戊酸通路而具有抗细胞增殖作用.     

应用原瓶黏附分选表皮干细胞的方法学特点

目的：探索一种简单易行的方法分离表皮干细胞，为组织工程学的进一步研究奠定基础。方法：实验于2005—07／12在中山大学眼科中心国家眼科学重点实验室完成。健康3个月龄恒河猴2只，分离与培养猴表皮细胞，获取第2-4代的细胞，消化后，将细胞重新放回原瓶中，培养箱中静置20min，获得的贴壁细胞即为快吸附的表皮细胞。①于光学显微镜下观察分选前细胞和快吸附细胞。②对20min快吸附的表皮细胞进行整合素α6和CD71流式细胞仪检测，以未经吸附分选的细胞作为对照。③20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞分别制作3组细胞爬片，进行整合素β1、K15、和K10的免疫组织化学染色。④20min快吸附的表皮细胞和分选后未黏附细胞进行K15、整合素β1和K1（K10对应角蛋白）的mRNA反转录聚合酶链反应的检测。结果：①分选后的细胞体积较小，核浆比例较大。②流式细胞仪的结果显示快吸附细胞以干细胞为主（α6^briCD71^dim为82．5&;#177;1．641），也含有少量的短暂扩增细胞（α6^briCD71^bri为4．9&;#177;2．125），有丝分裂后细胞及终末细胞则检测不到（α6^dim）。③免疫组化可见快吸附细胞呈K15和整合素β1阳性，K10阴性；分选后未黏附细胞K10为阳性，而K15和整合素β1均为阴性。④反转录聚合酶链反应示吸附分选后的快吸附细胞高表达K15和β1整合素，K10没有表达；而分选后剩余的细胞只表达K10。结论：原瓶黏附分选方法是一种简单可行的分选表皮干细胞的方法。     

简便快捷获取角朊细胞和真皮成纤维细胞:组织工程皮肤种子细胞培养的3种方法比较

目的探讨如何以简便快捷的方法获得大量最佳生长状态的角朊细胞和真皮成纤维细胞以作为皮肤组织工程的种子细胞.方法用2.5 g/L胰酶、35 g/L热溶素和9.0×103U/L Dispase分别在A,B,C不同条件下处理皮肤标本,观察表皮与真皮的分离情况,并分别培养角朊细胞和真皮成纤维细胞,观察比较细胞的贴壁率和克隆形成率,通过MTT和BrdU检测观察细胞的生长状态,并分别用不同方法获得的细胞构建组织工程皮肤.结果A,B,C 3种方法角朊细胞的贴壁率(%)分别为8.7±0.2,12.1±0.2,15.9±0.4;成纤维细胞的贴壁率(%)分别为20.2±2.4,30.5±1.8,38.3±1.9.组间比较差异有统计学意义(t=3.3506,t0.05/2.18=2.101,P＜0.05).角朊细胞克隆形成率(%)分别为0.110±0.025,0.260±0.026,0.370±0.021.组间比较差异有统计学意义(t=2.2875,t0.05/2.18=2.101,P＜0.05).在各种条件下,Dispase处理组获得的细胞数量、细胞贴壁率和克隆形成率均优于其他消化液处理组,细胞纯度高,生长状态良好;用其他方法获得的细胞生长状态相似,都可成功构建组织工程皮肤.结论使用9.0×103U/L Dispase可以简便快捷的获得大量生长状态良好的角朊细胞和真皮成纤维细胞以作为皮肤组织工程的种子细胞,合适的消化方法、时间和温度可以最大限度保持原代细胞的活力.     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

肇庆市居民颈椎病流行病学调查

目的 :调查肇庆市居民颈椎病发病情况及相关问题。方法 :通过分层随机抽样选择该市区18～70岁居民5000人为研究对象 ,入户或至单位询问调查。结果 :该市居民颈椎病发病率为8.11% ,男女差异无显著性 ,随着年龄的增长 ,发病率逐渐增加。经多因素分析 :体位姿势不正确、情绪紧张、潮湿、疲劳是发病的主要诱因。结论 :该病严重影响肇庆市居民的健康 ,做好防治应从早做起 ,综合防治。     

中国人四肢瘫日常生活能力评定量表的信度研究

目的研究四肢瘫日常生活能力评定量表评测四肢瘫患者的重测信度及观察者间信度。方法由1位评定者应用四肢瘫日常生活能力评定量表对20例四肢瘫患者进行评定,评定后1周内再次对该患者进行评定;另1位评定者在第1位评定者初次评定后2 d内对该患者进行评定。结果第1位评定者两次评定总分的组内相关系数为0.994(P<0.01);第1位评定者与第2位评定者评定总分的组内相关系数为0.971(P<0.01)。结论四肢瘫日常生活能力评定量表具有良好的重测信度及观察者间信度。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

护理干预对提高中风患者生活质量的效果观察

目的探讨提高中风患者生活质量的护理方法。方法将50例中风患者随机分为对照组23例和实验组27例,对照组给予针灸内科常规护理,实验组在此基础上给予心理护理和康复训练。结果两组患者治疗护理后日常生活活动(ADL)能力和贝克抑郁量表(BDI)评分均有好转,但实验组疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论实施针对性心理护理和康复训练可明显提高中风患者的治疗效果。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据

目的评价胰腺癌治疗的Cochrane系统评价证据,以及纳入系统评价的临床随机对照试验（RCT）的方法学质量。方法检索Cochrane Library数据库（2009年第4期）中有关胰腺癌治疗的系统评价,并运用RewMan5.0.21对所纳入研究的偏倚进行评估。结果共检索到胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的系统评价、放化疗治疗不能手术的进展期胰腺癌的系统评价共2篇系统评价,共纳入79个RCT。依照Cochrane协作网推荐的质量评价方法,对所纳入RCT的偏倚进行评估,表明均存在不同程度的偏倚,方法学质量普遍较低。结论 Cochrane系统评价是公认的最高质量的研究证据,但目前缺少足够强度的证据来支持胆道支架置入术姑息治疗梗阻型胰腺癌的疗效。其他治疗手段的疗效如胰腺癌围手术期的营养支持治疗等还需要通过进一步的完成系统评价来评估。建议推行临床试验透明化,实施临床试验注册制度以及按照CONSORT声明严格规范RCT的报告,以便于总结胰腺癌治疗的临床证据。