胞间黏附分子1在妊娠合并烧伤大鼠血清及胎盘中的表达

妊娠合并烧伤可引起流产、死产,也可引发早产且新生儿病死率较高[1].烧伤引起的炎症反应可使胎盘功能发生一系列改变,其中胞间黏附分子1( ICAM-1)在炎症与胎盘功能改变中起重要介导作用.本研究探讨ICAM-1在妊娠合并烧伤大鼠病理生理变化过程中的作用,通过监测血清与胎盘组织中ICAM-1表达水平,分析其与胎盘功能的关系.1 材料与方法1.1主要试剂与仪器总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒购自美国Promega公司,血清ICAM-1检测试剂盒购自美国R&D Systems Inc公司.5804R型冷冻台式离心机购自德国Eppendorf公司,PTC-200型PCR仪购自美国MJ Research公司,DU-600型紫外分光光度计购自美国贝克曼库尔特公司,UVP凝胶图像分析系统购自英国EEC公司,Image J图像分析软件购自美国国立卫生研究院.     

下肢溃疡，不妨看看烧伤科

下肢慢性溃疡已经成为常见的感染性疾病,患者由于错误使用药膏或用偏方处理创面,严重者将导致截肢。对于此病,内科不敢医,外科不愿治,是患者常常面临的尴尬局面。     

荷负电气溶胶治疗对大鼠烫伤创面白细胞介素-8、10表达的影响及意义

目的 观察荷负电气溶胶治疗对大鼠烫伤创面愈合过程中白细胞介素(IL)-8、IL-10表达的影响,探讨荷负电气溶胶治疗促进创面愈合的作用机制.方法 制作SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型,采用分组对照方法,将40只鼠随机分为治疗组(n1=20)和对照组(n2=20).治疗组应用荷负电气溶胶治疗,每次1.5 h,每天2次,直至创面愈合;对照组不作荷负电气溶胶治疗.伤后第1～11天分别取创面标本制作切片,采用免疫组织化学和图像分析方法,检测创面愈合过程中IL-8和IL-10表达水平.结果 创面平均愈合时间治疗组为(7.00±1.15)d,对照组为(9.00±1.34)d,治疗组创面愈合时间明显提前(P＜0.01).免疫组织化学显示,两组IL-8均在伤后第1天开始表达.主要位于多核粒细胞和单核细胞;第3天表达明显增多达高峰,并见大量成纤维细胞表达,治疗组的峰值明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),第5～11天表达水平迅速下降.两组IL-10伤后第1天在淋巴细胞和单核细胞均有表达;第3天开始有角质细胞表达并达高峰,第5～11天表达水平缓慢下降,但治疗组要明显高于对照组,第3～11天差异有统计学意义(P＜0.01).结论 荷负电气溶胶治疗能有效抑制创面IL-8的表达及促进IL-10的表达,缩短炎症进程,从而加速创面愈合.

Abstract：

Objective To discuss the influence of aerosol bioelectricity on the expression of interleukin (IL) -8 and IL-10 in wound healing of burned rats. Methods The deep Ⅱ degree scalding models were established in Sprague Dawley (SD) rats. Rats were randomly divided into experimental group (n1 =20) and control group (n2 =20). The rats in experimental group were treated with aerosol bioelectricity.Samples were collected at the first to eleventh day post-scalding. Immunohistochemistry and image analysis methods were conducted to examine the expression of IL-8 and IL-10 in both experimental and control groups. Results The average wound healing time in experimental group was 7. 00 ± 1. 15 days, and that in control group was 9. 00 ± 1. 34 days. IL-8 and IL-10 were observed mainly in polylmorphonuclear and mononuclear cells in both experimental and control groups on the 1 st day. On the third day, fibroblasts abounded, IL-8 expression was increased evidently and reached a peak. The peak value (6. 73 ± 1. 36) in experimental group was lower significantly than that in control group ( 2. 85 ± 0. 72, P ＜ 0. 01). From the 5th to 11th day, IL-8 expression was declined rapidly. IL-10 was expressed in keratode cells and had the peak value in experimental group (1. 24 ±0. 15) and control group (5. 69 ± 1. 32) on the 3rd day. IL-10 expression was declined gradually from the 5th to 11th days. The expression level of IL-10 in experimental group was significantly higher than in control group from the 3rd day to 11th days post-scalding (P＜0. 01). On the 3rd day, both IL-8 and IL-10 in experimental and control groups were expressed abundantly , and there was negative relationship between them (r = - 0. 862, P ＜ 0. 01). Conclusion Aerosol bioelectricity can indicate active cells proliferation through down-regulating the expression of IL-8 and up-regulating the expression of IL-10, accelerating burned wound healing.     

皮肤源祖细胞促进创面神经的修复

目的 体内实验研究皮肤源祖细胞对皮肤创面神经修复的影响.方法 分离、培养昆明鼠皮肤源祖细胞,并用CM-DiI进行标记.将30只昆明鼠随机分为细胞移植组,单纯培养基组和空白组,通过尾静脉注射观察细胞在体内的迁移,检测创面的愈合率和PGP9.5的表达.结果 皮肤源祖细胞表达Fibronectin和Nestin;伤后第1、2周,皮肤源祖细胞逐渐迁移至皮肤全层,并在皮肤毛囊处亦可见;细胞移植组的创面愈合率分别为31.08% ± 1.74%,64.20% ± 1.45%明显高于单纯培养基组和空白组(23.85% ± 1.59%,49.81% ± 2.10%;22.63% ± 1.02%,49.51% ± 1.10%);细胞移植组PGP9.5荧光密度(11.60 ± 1.67,16.60 ± 1.14)明显高于单纯培养基组和空白组(P ＜ 0.05).结论 皮肤源祖细胞参与了创面愈合,同时促进了创面处的神经再生,有利于创面神经修复,可能成为修复神经损伤的种子细胞.     

碱性成纤维细胞生长因子对兔耳创面愈合过程中瘢痕形成的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔耳瘢痕模型的影响作用.方法 建立48个兔耳增生性瘢痕模型,将其随机分为bFGF治疗组与磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,观察bFGF对创面愈合过程中瘢痕形成的影响.结果 形态学分析结果显示治疗组3个月后瘢痕外观、厚度及质地均优于对照组,表现出良好的愈合质量;对照组羟脯氨酸(HPr)表达较高,且随时间表现为增高趋势,伤后3个月达到高峰;而bFGF治疗组HPr表达均有不同程度的下降;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示bFGF可以抑制CO Ⅰ mRNA的表达,但对COⅢmRNA表达无明显影响;Western blot结果显示bFGF可以促进MMP-1的合成,且随着时间延长表现为增高趋势,具有一定的时间相关性.结论 bFGF可以通过增加MMP-1合成、促进胶原蛋白降解而减少瘢痕的形成.     

组织工程皮肤的种子细胞—表皮干细胞的生物学行为研究进展

近年来，组织工程皮肤的研究已成为当前研究的热点之一。但直到现在还没有任何一种组织工程皮肤能作为理想的合适的皮肤覆盖物，以满足临床严重烧伤病人的需求，其中原因之一是未找到合适的种子细胞，通过对皮肤发育生物学研究发现，表皮干细胞在皮肤形成过程中起重要作用。皮肤的多层表皮结构通常是由表皮干细胞再生而来，因此，表皮干细胞可能成为构建组织工程皮肤的种子细胞，但目前，我们对它还了解甚少，现就表皮干细胞的有关生物学行为包括一般特性、分布位置、表面标志物、可能的应用前景等方面的研究进展作一综述。     

人增生性瘢痕成纤维细胞最佳转染条件:α_1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的实验

目的:选择α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法:实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体Oligofectamine转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应用荧光显微镜记录荧光素在细胞内的空间分布,用流式细胞术作荧光细胞计数和观察细胞凋亡,通过不同细胞接种数量、反义寡核苷酸浓度和脂质体量转染条件的比较,逐步获得各转染过程中的最佳条件。结果:①在6孔板上转染反义寡核苷酸,所用各转染条件未引起细胞凋亡。②其最佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104/皿,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体量3μL/孔;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。结论:获得α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件,可为下一步试验提供基础。     

人表皮干细胞体外分选和培养对构建组织工程皮肤种子细胞的可能性

目的:探讨人表皮干细胞在体外分选和培养的可能性,为构建组织工程皮肤寻找理想的种子细胞。方法:实验于2002-01/12在中山大学基础医学院动物中心完成。根据表皮干细胞与Ⅳ型胶原蛋白的高黏附的特性,运用黏附实验将干细胞从培养在鼠Ⅳ型胶原包被的培养瓶的表皮细胞中分选出来,并从形态学、超微结构及免疫组化等方面进行了鉴定。结果:分选出来培养的细胞符合表皮干细胞的特征,说明分选培养的细胞是表皮干细胞。结论:预先在体外对表皮干细胞进行分选和培养是可行的,该细胞群有望成为构建组织工程皮肤的种子细胞,为下一步应用表皮干细胞构建组织工程皮肤奠定了牢固的基础。     

脂质体载体法转染成纤维细胞的最佳条件

目前基因转染的方法有多种,其中磷酸钙ＤＮＡ沉淀法应用较为广泛,但其转化效率不高,且不太适用于悬浮细胞和原代细胞培养的上皮细胞的转化〔１〕。本文介绍的Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ是一种新的多阴离子转染脂质体,其独特的精胺基团强负电子头部可自发地与ＤＮＡ...     

两种不同消化方法对表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体表达的干预

目的采用单纯胰酶和中性蛋白酶联合胰酶两种不同的消化方式,观察表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体CD71表达的变化,为荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞选择合适的消化方法.方法选取中山大学附属第一医院外科门诊包皮环切手术患者的皮肤标本10份,患者均知情同意,年龄14～22岁.每份标本均分为2份,分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化,共20份,分为胰酶组、中性蛋白酶联合胰酶组,10份/组.胰酶组将皮条放入质量浓度为2.5g/L的胰酶中,4℃消化过夜.次日撕除表皮角质层,以弯镊轻刮皮肤上皮面,获得表皮基底层细胞;中性蛋白酶联合胰酶组将皮条放入质量浓度为2.5g/L的中性蛋白酶中,4℃消化过夜.次日轻撕下皮肤表皮层,将其剪成1 mm×1 mm大小的碎块,以质量浓度为2.5g/L的胰酶消化5 min,获得表皮基底层细胞.分别取两组细胞悬液300 μL,加入碘化丙啶标记死亡细胞,流式细胞仪检测死亡细胞百分率,计算细胞活力.以荧光标记的α6整合素和CD71抗体标记细胞表面抗原,通过流式细胞术检测抗原表达.剩余细胞以表皮细胞培养液重悬,移入预先铺有100 mg/LⅣ型胶原的培养瓶中,接种密度为5×104/cm2,3 d换液1次,观察两组细胞的生长情况.结果实验纳入包皮环切手术患者的皮肤标本10份,每份标本分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化,共20份,全部进入结果分析.①不同酶消化后两组细胞活力的比较中性蛋白酶联合胰酶组细胞活力明显高于胰酶组[(86±1.81)%,(82±1.48)%,P＜0.01].②不同酶消化后两组细胞抗原的表达胰酶组α6briCD71dim细胞占(8.00±1.69)%,α6briCD71bri细胞占(36.00±18.03)%,α6dim细胞占(40.00±10.08)%;中性蛋白酶联合胰酶组3种细胞所占比例依次为(30.00±8.59),(8.00±1.63),(38.00±8.72)%,两组各抗原的表达基本相似(P＞0.05).③不同酶消化后两组细胞形态学观察结果胰酶组细胞贴壁及伸展较中性蛋白酶联合胰酶组稍迟0.5～1.0 h,此后培养过程中生长增殖情况无明显差异,一般7 d左右接近融合,传代.培养第7天,表皮细胞体积小,核浆比例大,可见夹杂有成纤维细胞.中性蛋白酶联合胰酶组细胞30 min内基本贴壁,并有少量细胞伸展,60 min后大部分细胞伸出短小伪足,胞质展开,折光率减低.培养第7天,表皮细胞体积小,核浆比例大,未见夹杂有成纤维细胞.结论从对表面抗原表达影响的角度来看,单纯胰酶消化与中性蛋白酶联合胰酶消化后α6briCD71 dim,α6briCD71bri,α6dim这3种表皮细胞的检出率基本相似,两种消化方法可根据习惯选用.但中性蛋白酶联合胰酶消化对细胞活力影响小,消化时机容易掌握,对细胞损伤相对小,适用于荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞.