水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的影响

目的探讨水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,将2～3代生长良好的细胞分为空白对照组、凝血酶刺激组和水蛭提取液低、中、高剂量组。将生药浓度分别为150、300、600 mg/L的水蛭提取液加入到10 kU/L凝血酶刺激的细胞中培养12 h,空白对照组加入等量RPMI 1640培养液。取上清液,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TXB2和6-keto-PGF1α的含量。结果与空白对照组比较,凝血酶刺激组TXB2含量（ng/L）明显升高（206.53±18.60比115.21±12.31,P＜0.01）,6-keto-PGF1α含量（ng/L）明显降低（21.31±1.12比30.54±1.11,P＜0.01）;与凝血酶刺激组比较,水蛭提取液各剂量组TXB2（ng/L）含量均明显降低,6-keto-PGF1α（ng/L）含量均明显升高,且以高剂量组变化更显著（TXB2：109.18±9.72比206.53±18.60;6-keto-PGF1α：58.67±3.24比21.31±1.12,均P＜0.01）。结论水蛭提取液能明显减弱凝血酶诱导HUVEC释放6-keto-PGF1α的抑制作用,并能对抗凝血酶诱导HUVEC释放TXB2,其作用机制可能与其调节血栓素/前列环素平衡有关。     

全蝎纯化液对凝血酶所致血液凝固的影响

目的 探讨全蝎纯化液对凝血酶所致凝血/纤溶系统变化的影响.方法 实验1:将18只SD大鼠随机分为对照组、凝血酶组和全蝎纯化液组,每组6只.凝血酶组颈外静脉注射凝血酶70 U/kg,15 min内注完;全蝎纯化液组于注射凝血酶前腹腔注射全蝎纯化液20 mg/kg;对照组给予16 ml/kg生理盐水.于注射凝血酶后10 min取颈总动脉血,测定血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT).实验2:将15只家兔随机分为对照组、凝血酶组和全蝎纯化液组,每组5只.实验方法同实验1,凝血酶剂量为50 U/kg,药物均经耳缘静脉注射.于注射凝血酶后3 h经颈总动脉取血,测定血浆血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)及其抑制物(PAI)含量.结果 全蝎纯化液可明显延长APTT[(43.6±1.3) s比(28.2±0.9) s]、PT[(13.1±0.7) s比(9.8±0.3) s]、TT[(19.9±1.1) s比(13.9±0.9) s],明显降低血浆TXB2[(56.8±23.2) ng/L比(133.4±21.3) ng/L]、PAI含量[(4.9±0.5) kAU/L比(8.5±1.1) kAU/L],增加血浆6-keto-PGF1α[(35.3±2.5) ng/L比(21.4±2.8) ng/L]、tPA含量[(4.6±0.9) kU/L比(2.3±0.5) kU/L],与凝血酶组比较差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 全蝎纯化液可降低内、外源性凝血系统因子的活性,增加纤溶系统活性,进而抑制凝血酶的作用.     

水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放凝血因子的影响

目的 观察水蛭提取液对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放血管性血友病因子(vWF)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的影响,探讨水蛭抗凝的作用机制.方法 体外培养 HUVECs,将生长良好的2～3代细胞分为对照组、凝血酶刺激组及水蛭提取液高、中、低剂量组5组.将生药浓度600、300、150 mg/L的水蛭提取液加入到10 kU/L凝血酶刺激的HUVECs培养12 h,对照组加等量RPMI 1640培养液.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中vWF、PAI-1、t-PA的含量.结果 与对照组比较,凝血酶刺激组细胞培养上清液中vWF、PAI-1(μg/L)含量显著升高[vWF:(11.01±0.54)%比(7.05±0.49)%;PAI-1:72.26±0.85比55.89±1.26,均P<0.01],t-PA(μg/L)含量显著降低(15.15±1.41比34.29±1.22,P<0.01).与凝血酶刺激组比较,水蛭提取液高、中、低剂量组vWF、PAI-1含量[vWF:(9.48±0.64)%、 (8.57±0.50)%、 (7.97±0.44)%;PAI-1:58.30±0.90、 62.69±1.01、 67.47±1.28]显著降低,t-PA含量(32.59±1.46、 26.40±0.82、 21.06±1.13)显著升高(均P<0.01).说明水蛭提取液能显著减弱凝血酶诱导HUVECs释放vWF、PAI-1,增强凝血酶促进HUVECs表达t-PA.结论 水蛭具有明显的抗凝作用,其作用机制可能为参与调节内皮细胞释放vWF,调节纤溶平衡及保护受损的血管内皮细胞.     

中老年人脑梗死患者血栓素B2和6-酮-前列环素1α水平对血栓前状态的评估作用

目的通过测定中年和老年脑梗死患者血栓素B2(TXB2),6-酮-前列环素1α(6-keto-PGF1α)的水平了解脑梗死患者血小板功能变化及其意义.方法2002-09/2004-07在北京大学第一医院神经科采用ELISA法测定了313例中年人和764例老年人急性脑梗死者血浆TXB2,6-keto-PGF1α及TXB2/6-keto-PGF1α的水平并与80例健康人对照.结果中年组和老年组TXB2[(126.26±61.53),(108.26±45.56)ng/L],6-keto-PCF1α[(64.43±21.36), (62.99±25.36) ng/L],TXB2/6-keto-PGF1α(3.90±2.63,3.64±2 90)增高,与对照组[(21.60±28.49),(12.11±12.45)ng/L,1.34±1.05]相比差别有显著性有意义(P＜0.05),两组TXB2,6-keto-PGF1α,TXB2/6-keto-PGF1α比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论TXB2,6-keto-PGF1α及TXB2/6-keto-PGF1α的测定对于了解急性脑梗死患者中血小板功能变化,对于预防和诊治脑梗死具有重要参考价值,并建议作为血栓前状态的指标.     

卡托普利诱发咳嗽的高血压病患者血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α的变化

目的探讨卡托普利诱发咳嗽的高血压病患者血浆和尿中血栓素B2 (TXB2)、6酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平的变化.方法采用放射免疫法测定38例咳嗽组及34例对照组高血压病患者服用卡托普利前后血浆及尿中TXB2 、6-keto-PGF1α的水平.结果服用卡托普利后咳嗽组患者血浆TXB2 的水平明显高于对照组[(99.75±27.56) ng/L vs (84.87±15.08) ng/L],两者比较差异有统计学意义(P=0.016);咳嗽组患者服用卡托普利前[(192.92±47.78) ng/L]、服用卡托普利后[(153.80±25.35) ng/L]及停用卡托普利后[(169.73±38.07) ng/L]尿中6-keto-PGF1α水平差异有统计学意义(P=0.000).结论卡托普利诱发咳嗽时患者血浆TXB2水平明显升高而尿中6-keto-PGF1α水平降低.     

通心络和α-硫辛酸对高糖诱导的乳鼠心肌细胞保护作用研究及机制探讨

目的:探讨通心络和α-硫辛酸对高糖诱导的乳鼠心肌细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)影响.方法:选用新生SD大鼠心肌细胞为培养对象,采用高糖培养基诱导,在此基础上分别用通心络超细干粉水提物和α-硫辛酸进行干预,检测培养细胞四唑盐比色实验、细胞上清液SOD浓度和细胞SOD2mRNA表达.结果:高糖刺激的心肌细胞活力明显下降,高糖组SOD值较正常对照组明显下降[(34.13±9.25)kU/Lvs(89.23±11.76)kU/L,P<0.01)].α-硫辛酸和通心络组SOD值均较高糖组明显升高[(64.32±8.56)kU/Lvs(34.13±9.25)kU/L)],P<0.01;(51.02±12.36)kU/Lvs(34.13±9.25)kU/L,P<0.05).高糖组SOD2 mRNA/β-actin mRNA比值较正常对照组明显下降(0.37±0.024vs0.69±0.014,P<0.01),α-硫辛酸和通心络组该比值较高糖组明显升高(0.56±0.039,0.49±0.039vs0.37±0.024,P<0.01).结论:通心络和α-硫辛酸通过抑制氧化应激反应抑制高糖对心肌细胞的毒性.     

脓毒症患者高迁移率族蛋白-1的变化及应用卡巴胆碱进行体外干预的研究

目的 观察烧伤后脓毒症患者高迁移率族蛋白-1(HMGB-1)的变化,探讨卡巴胆碱对脂多糖刺激后单核细胞释放HMGB-1的影响及其作用机制.方法 取烧伤后脓毒症患者及正常献血员外周血,ELISA法检测HMGB-1含量.观察烧伤后脓毒症对HMGB-1的影响.取正常献血员外周血,分离获得单核细胞.实验分为6组:空白对照组的单核细胞仅加1640培养液;脂多糖组单核细胞仅加脂多糖刺激;烟碱预处理组和卡巴胆碱预处理组先用卡巴胆碱或烟碱预处理单核细胞5 min,再加入脂多糖刺激;阿托品+卡巴胆碱预处理组和α-银环蛇毒素+卡巴胆碱预处理组先在单核细胞悬液中加入阿托品或α-银环蛇毒素,5 min后给予卡巴胆碱.再5 min后给予脂多糖刺激.孵育48 h后取细胞培养上清液,ELISA法检测HMGB-1浓度.结果 烧伤后脓毒症患者HMGB-1的含量[(12.94±6.54)μg/L]明显增加,与正常献血员[(2.01±0.03)μg/L]比较差异有统计学意义(P<0.01).脂多糖单独刺激单核细胞时,HMGB-1含量[(9.39±1.37)μg/L]较对照组[(1.48±0.69)μg/L]明显升高(P<0.01).用卡巴胆碱或烟碱预处理细胞后,HMGB-l含量明显下降[(3.52±1.64)μg/L与(4.01±1.56)μg/L],与脂多糖单独刺激组比较差异有统计学意义(P<0.01).阿托品预处理细胞后,卡巴胆碱对脂多糖刺激下单核细胞释放HMGB-1的抑制作用无明显变化[(3.87±2.01)μg/L],而α-银环蛇毒素预处理细胞后,卡巴胆碱对HMGB-1的抑制作用明显减弱[(8.97±1.97)μg/L].结论 烧伤后脓毒症患者HMGB-1释放明显增加,卡巴胆碱能够减少单核细胞释放HMGB-1,其作用机制可能是通过N样胆碱能受体α-7亚基实现的.     

B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α和一氧化氮的影响

目的 探讨B16F10黑素瘤细胞培养上清液对脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α (TNF-α)和一氧化氮(NO)的影响.方法 体外培养同基因小鼠腹腔巨噬细胞,分为实验组和空白对照组.实验组加入B16F10黑素瘤细胞培养上清液,空白对照组加入RPMI 1640完全培养基,分别用LPS刺激后继续培养24 h,采用免疫细胞化学染色法及L929细胞抑制实验[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]检测巨噬细胞TNF-α的表达及活性,Griess法检测NO的含量.结果 实验组TNF-α阳性表达较空白对照组明显减少,TNF-α活性较空白对照组明显降低[吸光度(A值):0.746±0.049比0.387±0.030,P＜0.01];巨噬细胞释放NO的水平明显低于空白对照组(μmol/L:4.830± 1.384比11.455±0.175,P＜0.01).结论 B16F10黑素瘤细胞培养上清液对LPS诱导的同基因小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、NO具有抑制作用.     

益气活血中药对急性肺损伤大鼠血浆血管活性物质的影响

目的 观察益气活血中药黄芪与丹参对急性肺损伤(ALI)大鼠血浆血管活性物质的影响,探讨中药的肺保护作用机制.方法 将30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、中药组,每组10只.采用脂多糖(LPS,1 mg/kg)200 μl经气管滴入法制备大鼠ALI模型;对照组滴人等量生理盐水.中药组于制模前连续1周每日灌胃含黄芪和丹参的中药液2 ml;对照组和模型组灌胃等量生理盐水.制模后3 h取静脉血,采用放射免疫法检测血浆降钙素基因相关肽(CGRP)、内皮素-1(ET-1)、血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)含量.结果 与对照组比较,模型组血浆CGRP、6-keto-PGF1a含量明显降低[CGRP(ng/L):29.04±5.27比45.05±8.11,6-keto-PGF1a(ng/L):121.64±17.72比236.05±35.18],ET-1、TXB2含量明显升高[ET-1(ng/L):83.66±7.36比49.23±4.71,TXB2(ng/L):1 259.09±32.72比882.81±44.95,均P<0.01];与模型组比较,中药组血浆CGRP[(38.19±4.79)ng/L]、6-keto-PGF1a((222.58±30.06)ng/L]含量明显升高,ET-1[(53.78±5.10)ng/L]、TXB2[(902.35±40.07)ng/L]含量明显降低(P<0.05或P<0.01),且与对照组无明显差异(均P>0.05).结论 益气活血中药黄芪与丹参可能是通过促进CGRP合成与释放、抑制ET-1的生成及释放,维持TXA2/PGI2相对平衡,从而起到对ALI大鼠的防治作用.     

脐带间充质干细胞移植对胶原诱导型关节炎大鼠免疫相关易栓状态的干预作用

目的 初步探讨脐带间充质干细胞(UC-MSC)移植对胶原诱导型关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis,CIA)大鼠炎症因子和血浆凝血蛋白等水平的影响以及UC-MSC移植对CIA大鼠免疫炎性易栓症的治疗作用.方法 取45只清洁级、5周龄、平均体重( 170±10)g、雌性SD大鼠,随机分为空白对照组、模型组及UC-MSC治疗组.将鸡Ⅱ型胶原与等体积完全弗氏佐剂充分混匀后于大鼠足跖皮下注射建立CIA大鼠模型.治疗组经尾静脉注射UC-MSC悬液、另两组同法注射等量生理盐水.于治疗后第1、3、5、9周以酶联免疫吸附实验( ELISA)检测大鼠血清IL-6、TNF-α及血浆D-二聚体(D-D)、血栓调节蛋白(TM)、抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)水平.结果 模型组CIA大鼠IL-6、TNF-α、D-D及TM水平[分别为(200.48±15.04) ng/L、(450.25±45.39) ng/L、( 274.26±67.93) ng/L、(9.18±0.84) μg/L]均明显高于同期空白对照组[(167.62±0.97) ng/L、(371.44±21.26) ng/L、(193.95±8.22) ng/L、(6.30±0.32) μg/L],AT-Ⅲ水平[(89.57±6.40) ng/L]明显低于同期空白对照组[( 112.82±1.74) ng/L](P ＜0.05);UC-MSC治疗组CIA大鼠IL-6、TNF-α、D-D及TM水平自第5周开始逐渐降低、AT-Ⅲ则回升,至治疗后第9周上述指标与空白对照组接近(P＞0.05).结论 CIA大鼠存在免疫炎性损伤导致的易栓状态,UC-MSC可抑制炎症因子的释放,调节和修复CIA大鼠免疫相关性易栓症.     

牙周基础治疗对慢性肾脏病伴牙周炎患者牙周指数及龈沟液炎性因子和肾功能指标的影响

目的探讨慢性肾脏病伴牙周炎患者规律血液透析治疗同时行牙周基础治疗对牙周袋探诊深度(probing depth,PD)、牙龈探诊出血(bleeding on probing,BOP)、牙周临床附着丧失(clinical attachment loss,CAL),龈沟液白细胞介素(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),血清肌酐、三酰甘油、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的影响。方法慢性肾脏病伴牙周炎患者98例,随机分为观察组52例和对照组46例,对照组仅给予规律血液透析治疗,观察组在规律血液透析治疗的同时行牙周基础治疗。分别于治疗前及治疗6周后测量PD、BOP、CAL,检测龈沟液IL-6、TNF-α,血清肌酐、CRP及24h尿蛋白定量,并进行比较。结果观察组治疗6周后PD[(1.46±0.24)mm]、BOP[(23.17±10.72)%]低于治疗前[(3.12±0.77)mm、(42.47±11.20)%](P0.05),CAL[(4.37±0.72)mm]与治疗前[(5.17±0.89)mm]比较差异无统计学意义(P0.05);对照组治疗6周后龈沟液IL-6[(22.78±5.38)ng/L]和TNF-α[(17.23±6.08)ng/L],血清CRP[(7.11±0.32)mg/L]和肌酐[(179.67±32.48)μmol/L]及24h尿蛋白定量[(1.23±0.73)g]与治疗前[(34.12±5.29)ng/L、(20.65±4.37)ng/L、(8.12±0.37)mg/L、(210.67±33.65)μmol/L、(1.64±0.35)g]比较差异均无统计学意义(P0.05);治疗6周后,观察组龈沟液IL-6[(19.23±3.34)ng/L]及TNF-α[(9.89±4.08)ng/L],血清CRP[(5.89±0.48)mg/L]、24h尿蛋白定量[(0.97±0.43)g]均低于治疗前[(32.31±4.34)ng/L、(16.42±3.24)ng/L、(7.37±0.67)mg/L、(1.78±0.65)g](P0.05),血肌酐[(189.67±27.88)μmol/L]与治疗前[(223.43±33.70)μmol/L]比较差异无统计学意义(P0.05);治疗6周后,观察组龈沟液IL-6及TNF-α,血清CRP及24h尿蛋白定量均低于对照组(P0.05)。结论慢性肾脏病伴牙周炎患者规律透析治疗同时行牙周基础治疗,可改善微炎症状态,有助于减轻肾功能损害。     

解毒活血方含药血清对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞及细胞间黏附分子1的影响

目的通过观察解毒活血方含药血清(SPR)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤内皮细胞及细胞间黏附因子1(ICAM-1)的影响,探讨该方防治冠心病的作用机制。方法用10只Wistar大鼠,分成两组,每组5只,分别制备空白血清和解毒活血方含药血清,然后依据细胞培养条件对提取的血清进行分组。①空白对照组:20%空白血清+5%新生牛血清(FCS)培养液;②病理模型组:20%空白血清+100mg/L ox-LDL+5%FCS培养液;③SPR低剂量组:10%SPR+10%空白血清+100mg/L ox-LDL+5%FCS培养液;④SPR高剂量组:20%SPR+100mg/L ox-LDL+5%FCS培养液,每组各6个标本,共获得24个标本,分别检测各组超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、ICAM-1等指标的变化。结果病理模型组SOD比空白对照组明显降低,加入SPR后有明显提高,SPR高剂量组比SPR低剂量组提高更多(P<0.05或<0.01),分别为(58.26±1.34)kU/L vs(65.10±1.35)kU/L,(63.57±1.63)kU/L,(67.63±2.95)kU/L。病理模型组MDA水平和ICAM-1表达与空白对照组比较明显增加,加入SPR后有明显降低,SPR高剂量组比SPR低剂量组降低更多,分别为MDA(10.02±1.66)μmol/L vs(6.68±0.82)μmol/L,(6.87±1.26)mg/L,(6.83±0.46)mg/L;ICAM-1(0.51±0.06)mg/L vs(0.37±0.05)mg/L,(0.45±0.02)mg/L,(0.40±0.04)mg/L。结论 SPR防治冠心病的机制与抗脂质过氧化、抑制或减少炎症因子ICAM-1的释放有关。     

肠淋巴途径在大鼠重症急性胰腺炎致全身炎症反应中的作用

目的 通过肠系膜淋巴管结扎(MLDL)阻断肠淋巴液回流,观察肠淋巴途径在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)致全身炎症反应中的作用.方法 将24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为模型组、结扎组和假手术组,每组8只.采用胰胆管逆行注入牛黄胆酸钠溶液制备SAP合并多器官损伤模型;MLDL于制模前进行.术后24 h测定血中二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和内毒素水平及胰腺、肺脏、肝脏组织髓过氧化物酶(MPO)活性.处死大鼠取材,光镜下观察小肠组织形态学变化;培养肠系膜淋巴结细菌并计算细菌移位率.结果 与假手术组比较,模型组血中DA0、D-乳酸、TNF-α、IL-6和内毒素水平均显著升高[DAO:(0.64±0.17)kU/L比(0.37±0.07)kU/L,D-乳酸:(8.16±1.79)ng/L比(3.24±1.00)ng/L,TNF-α:(65.21±13.38)ng/L比(22.16±5.04)ng/L,IL-6:(7.95±1.83)ng/L比(4.26±1.23)ng/L,内毒素:(0.068±0.019)kEU/L比(0.033±0.009)kEU/L],肠系膜淋巴结细菌移位率显著提高(75.0%比0),胰腺、肺脏、肝脏MPO活性显著升高[胰腺:(5.14±1.24)U/g比(2.88±0.75)U/g,肺脏:(9.07±2.52)U/g比(4.38±1.29)U/g,肝脏:(6.36±1.63)U/g比(3.19±0.96)U/g,均P<0.01];与模型组比较,结扎组血中DA0((0.50±0.13)kU/L3、D-乳酸[(6.23±1.25)ng/L]、TNF-α[(48.50±13.23)ng/L3、IL-6((6.06±1.64)ng/L]和内毒素[(0.048±0.014)kEU/L]均显著降低,肠系膜淋巴结细菌移位率(12.5%)显著减少,胰腺、肺脏、肝脏MPO活性(胰腺:(4.01±1.05)U/g,肺脏:(6.58±1.96)U/g,肝脏:(4.64±1.34)U/g]显著下降(P<0.05或P<0.01).结论 MLDL可以降低SAP大鼠肠道细菌和内毒素移位,减轻胰腺、肺脏、肝脏组织炎症损伤,保护肠屏障功能.     

羟氯喹对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的探讨羟氯喹(hydroxychloroquine, HCQ)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-1表达的调控作用及分子机制。方法对数生长期MH7A细胞分为空白组(细胞正常培养)、TNF-α组(细胞培养基中加入10μg/L TNF-α)、HCQ联合A组(细胞培养基中加入2.5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合B组(细胞培养基中加入5μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)、HCQ联合C组(细胞培养基中加入10μmol/L HCQ+10μg/L TNF-α)。5组细胞培养24 h,采用ELISA法检测细胞培养上清液MMP-1水平,采用实时荧光定量PCR法检测细胞MMP-1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞c-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase, JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白相对表达量。将MH7A细胞分为对照组和茴香霉素组,对照组细胞按HCQ联合C组培养方法培养24 h;茴香霉素组细胞培养基中先加入10μg/L茴香霉素培养2 h后,再按HCQ联合C组的培养方法继续培养至24 h;采用实时荧光定量PCR法检测2组MMP-1 mRNA相对表达量。结果 TNF-α组[(791.32±175.40)ng/L、6.89±1.20]、HCQ联合A组[(366.71±224.44)ng/L、4.12±0.71]、HCQ联合B组[(283.22±154.86)ng/L、2.99±0.18]、HCQ联合C组[(173.44±36.25)ng/L、2.01±0.80]、空白组[(133.13±62.19)ng/L、1.00±0.00]细胞MMP-1水平和MMP-1 mRNA相对表达量均依次降低(P0.05);TNF-α组(2.02±0.07)、HCQ联合A组(1.31±0.09)、HCQ联合B组(0.86±0.09)、HCQ联合C组(0.56±0.05)、空白组(0.43±0.03)细胞p-JNK蛋白相对表达量依次降低(P0.05),而TNF-α组(2.30±0.16)、HCQ联合A组(2.16±0.13)、HCQ联合B组(2.03±0.05)、HCQ联合C组(2.16±0.16)、空白组(2.23±0.11)JNK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0.05);茴香霉素组细胞MMP-1 mRNA相对表达量(5.13±1.43)高于对照组(2.01±0.80)(P0.05)。结论 HCQ能通过JNK信号通路调控MH7A细胞MMP-1的表达。     

脓毒症患者血管性假血友病因子、血栓调节蛋白变化及乌司他丁的干预作用

目的观察脓毒症患者血管内皮细胞(VEC)分泌血管性假血友病因子(vWF)、血栓调节蛋白(TM)的变化及乌司他丁的干预作用。方法选择脓毒症患者56例,分为治疗组(n=27)及乌司他丁组(n=29),两组均给予常规治疗,乌司他丁组加用乌司他丁静脉注射每12小时1次,连续10天;选取健康体检者作为对照组(n=20)。检测研究对象治疗前后外周血血清vWF、TM的水平;利用脓毒症患者血清作用于体外培养的VEC株(CRL-1730),检测培养上清液中可溶性vWF、TM的水平,并观察乌司他丁对培养上清液中vWF、TM水平的影响。结果治疗前,治疗组vWF、TM水平分别为(126.6±19.3)%,(29.8±5.6)μg/L;乌司他丁组vWF、TM水平分别为(128.3±6.3)%,(31.7±2.1)μg/L,两组患者vWF、TM水平与对照组比较均升高(均P0.05);治疗后,两组患者vWF、TM水平均下降,治疗组vWF、TM水平分别为(102.6±31.3)%,(18.9±3.6)μg/L;乌司他丁组vWF、TM水平分别为(80.6±26.3)%,(15.1±4.3)μg/L,治疗后乌司他丁组与治疗组比较差异有统计学意义(均P0.05);体外实验中,经乌司他丁干预后,细胞培养上清液中vWF、TM水平明显下降,分别为(67.1±21.6)%,(13.3±2.5)μg/L,与治疗组比较差异有统计学意义(均P0.01)。结论脓毒症患者存在VEC的损伤,乌司他丁对脓毒症患者的VEC损伤有保护作用。     

氯沙坦对类风湿性关节炎合并高血压患者白细胞介素-22的抑制作用及机制

目的探讨氯沙坦对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)合并高血压患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中细胞因子白细胞介素(interleukin, IL)-22的抑制作用及机制。方法 RA合并高血压患者20例为RA组,体检健康者20例为健康对照组,单纯高血压患者20例为高血压组。采用ELISA法测定健康对照组及高血压组、RA组治疗前、后血清IL-22水平。采用密度梯度离心法提取RA患者外周血PBMCs,分为空白对照组(正常培养)、刺激组(加CD3和CD28抗体)、阳性对照组(加CD3和CD28抗体+100 mmol/L甲基强的松龙)和实验组(加CD3和CD28抗体+100 mmol/L氯沙坦),采用ELISA法检测各组PBMCs培养上清液中IL-22表达水平;采用Western blot法测定各组PBMCs信号传导相关分子核因子-κB p65、p-p38、p-STAT-3和p-ERK蛋白表达水平。结果 RA组治疗前血清IL-22水平[(52.426±7.673)ng/L]高于健康对照组[(32.285±5.732)ng/L]和高血压组[(34.472±5.045)ng/L](P0.05),高血压组与健康对照组比较差异无统计学意义(P0.05);治疗后RA组血清IL-22水平[(41.269±6.824)ng/L]低于治疗前(P0.05),高血压组[(32.794±5.624)ng/L]与治疗前比较差异无统计学意义(P0.05);刺激组PBMCs培养上清液中IL-22水平[(118.722±16.700)ng/L]高于阳性对照组[(64.624±9.120)ng/L]、实验组[(71.120±12.053) ng/L]和空白对照组[(24.032±6.786)ng/L](P0.05),阳性对照组与实验组比较差异无统计学意义(P0.05);实验组PBMCs内p-STAT-3蛋白表达(2.46±0.82)低于刺激组(3.78±0.94)(P0.05)。结论氯沙坦能抑制RA患者PBMCs促炎性细胞因子IL-22的表达,可能是通过抑制JAK/STAT-3通路而实现。     

羟乙基淀粉对兔缺血-再灌注心肌的保护作用

目的 观察羟乙基淀粉(HES130/0.4)对兔心肌缺血一再灌注损伤的白细胞介素-8(IL-8)、内皮素-1(ET-1)和髓过氧化物酶(MPO)活性的影响,探讨其可能的保护机制.方法 36只大白兔随机分为乳酸林格氏液组(A组,n=12);白蛋白组(B组,n:12);羟乙基淀粉组(C组,n=12).A,B,C三组再灌注前15 min分别静脉注入6 mL/kg乳酸林格氏液、5%人体白蛋白或6%羟乙基淀粉,于缺血前(I_0)、缺血30 min(I_1)、再灌注60 min(R_1)、180 min(R_2)四个时点采血,检测血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)、白细胞介素-8(IL-8)和内皮素-1(ET-1)的浓度.再灌注180 min处死大白兔测定心肌水含量、心肌梗死面积及髓过氧化物酶(MPO)活性.组间比较采用单因素方差分析(SNK-q检验),采用SPSS 12.0统计软件处理,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 三组血清LDH,CPK,IL-8和ET-1随再灌注时间延长而逐渐升高,在R2时点,C组增高的程度明显低于A组[(181±17)U/L vs.(334±39)U/L;(1927±205)U/L v8.(2987±326)U/L;(5.03±1.16)ng/L vs.(6.96±1.21)ng/L;(380.9±78.4)ng/L vs.(667.2±82.1)ng/L,P＜0.05]和B组[(181±17)u/Lvs.(320±38)U/L;(1927±205)U/L vs.(2218±290)U/L;(5.03±1.16)ng/L vs.(5.90±1.03)ng/L;(380.9±78.4)ng/L vs.(615.6±80.2)ng/L,P＜0.05];C组缺血区MPO活性(0.20±0.09)ng/L明显低于A组(0.48±0.15)ng/L和B组(0.37±0.12)ng/L(P＜0.05);C组的心肌含水量(76±8.23)%和心肌梗死面积(11.53±1.02)%分别显著低于A组[(86±5.66)%,(26.48±2.33)%]和B组[(82±6.42)%,(19.76±4.32)%](P＜0.05).结论 羟乙基淀粉对通过抑制IL-8及ET-1的生成和释放,降低缺血区MPO活性和毛细血管通透性,对缺血-再灌注损伤的心肌具有保护作用.     

血尿酸在不同类型冠心病发生中的作用机制

目的 探讨血尿酸在不同类型冠心病发生中的作用机制.方法 88例住院患者分为对照组、稳定型心绞痛(SA)组和急性冠状动脉综合征(ACS)组,分别测定其血尿酸、血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、血管性假性血友病因子(vWF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血栓素B_2(TXB_2)、C-反应蛋白(CRP).结果 (1)①UA、CRP:ACS组[(392.10±68.57)μmol/L、(42.2±39.4)mg/L]和SA组[(370.50±58.80)μmoL/L、(18.9±17.1)mg/L]均高于对照组[(286.00±65.31)μmol/L、(2.5±0.7)mg/L,P均＜0.05];UA在ACS组、SA组差异无统计学意义(P＞0.05),ACS组CRP高于SA组(P＜0.05);②vWF、TXB_2:ACS组[(1.65±0.48)%、(19.73±18.66)ng/L]和SA组[(1.35±0.49)%、(11.18±10.71)ng/L]均高于对照组[(1.07±0.26)%、(6.46±5.41)ng/L,P均＜0.05],ACS组高于SA组(P均＜0.05);③GMP-140、PAI-1:ACS组[(13.04±0.99)μg/,L、(65.65±14.76)μg/L]和SA组[(12.55±0.74)μg/L、(62.69±12.24)μg/L]均高于对照组[(12.32±0.29)μg/L、(50.78±13.88)μg/L,P均＜0.05],ACS组与SA组间差异无统计学意义(P均＞0.05).④ACS组血尿酸升高者与血尿酸正常者CRP[(71.3±18.9)、(20.70±17.9)mg/L]、vWF[(1.08±0.52)%、(0.84±0.54)%]、GMP-140[(13.57±1.11)、(13.23±1.07)μg/L]、TXB_2[(57.26±47.84)、(26.70±23.83)ng/L]、PAI-1[(72.12±9.23)、(61.30±12.07)μg/L]差异均有统计学意义(t值分别为7.394、0.008、0.227、7.605、0.421,P均＜0.05),SA组血尿酸升高者与血尿酸正常者CRP[(31.1±18.9)、(10.9±10.1)mg/L]、TXB_2[(21.54±3.90)、(5.02±4.93)ng/L]差异均有统计学意义(t值分别为0.494、8.669,P均＜0.05).(2)Logistic逐步回归分析:与急性冠状动脉综合征相关的因素有UA、CRP、PAI-1、PT、TG(OR值分别为1.046、7.615、1.301、0.300和2.243,P均＜0.05).结论 血尿酸升高是影响冠心病发生、发展的重要危险因素.血尿酸升高可能通过损害血管内皮功能、激活血小板、影响凝血和纤溶功能、引发炎症反应参与不同类型冠心病的发生与发展.     

缺氧诱导因子-1α对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其信号转导

目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(IRI)的保护作用及蛋白激酶C(PKC)信号转导作用.方法 采用结扎冠状动脉左前降支30 min、再灌注180 min的方法建立IRI动物模型.将32只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、IRI组、缺血预处理(IPC)组、IPC加PKC抑制剂组(IPC+Ⅰ组,IPC前静脉注射PKC抑制剂白屈菜季铵碱5 mg/kg),每组8只.再灌注180 min后取出心脏,测定HIF-1α、血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA和蛋白以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达;心内取血测定白细胞介素-8(IL-8)和髓过氧化物酶(MPO)水平.结果 与假手术组比较,IRI组心肌HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白及caspase-3蛋白表达均明显增多(HIF-1α mRNA:0.849±0.032比0.356±0.022,HIF-1α蛋白:0.762±0.042比0.324±0.016,HO-1 mRNA:0.862±0.045比0.332±0.012,HO-1蛋白:0.792±0.044比0.335±0.031,caspase-3蛋白:0.371±0.015比0.061±0.012,均P＜0.01),血IL-8、MPO显著升高[IL-8:(812±26)ng/L比(72±13)ng/L,MPO:(78.7±2.9)kU/L比(13.3±1.5)kU/L,均P＜0.01].与IRI组比较,IPC组HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白表达(HIF-1α mRNA,1.412±0.039,HIF-1α蛋白:1.362±0.045,HO-1 mRNA:1.523±0.038,HO-1蛋白:1.420±0.041)明显增多,caspase-3蛋白表达(0.129±0.019)明显降低(均P＜0.01),血IL-8[(432±59)ng/L]和MPO水平[(43.2±5.9)kU/L)明显降低(均P＜0.01).IPC+Ⅰ组各指标与IRI组无明显差异.结论 HIF-1α对心肌IRI具有重要保护作用,HIF-1α的表达是依赖PKC激活的,PKC是HIF-1α表达的重要信号转导通路.     

富含血小板血浆通过抑制基质细胞衍生因子-1/CxC趋化因子受体4通路治疗距骨软骨损伤的作用机制

目的观察富含血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对距骨软骨内基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CxC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)信号通路及糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP13)表达的影响,探讨PRP治疗距骨软骨损伤的作用机制。方法选择2017年9月至2018年11月首都医科大学附属北京同仁医院收治的距骨软骨损伤患者16例,先做踝关节镜检查并做病灶清理骨髓刺激术(微骨折)治疗,然后分别于术后第1d、术后第1、2个月抽取自体静脉血制备PRP后,每次于踝关节腔内注射PRP 3ml。比较关节镜术前及第3次注射PRP前抽取关节液样本中SDF-1及GAG水平;在关节镜术中取距骨病灶区软骨样本,经SDF-1预处理后,将距骨软骨细胞接种于培养板中,融合率达80%~90%时,将软骨细胞随机分为PRP治疗组及空白对照组,每组8个,分别经PRP及不含PRP的人血清处理3天后,比较两组细胞培养液中SDF-1、CXCR4、MMP13及GAG水平。结果患者第3次PRP注射前患者踝关节液中SDF-1蛋白浓度[(1250.07±376.72)ng/L]较术前[(1707.88±180.32)ng/L]明显降低,差异有显著性(t=4.385,P=0.000);第3次PRP注射前患者踝关节液中GAG浓度[(20.93±3.88)μg/L]较术前[(14.39±3.95)μg/L]明显增高,差异有显著性(t=-4.736,P=0.000)。PRP治疗组SDF-1蛋白浓度[(1412.39±38.15)ng/L]较空白对照组[(1003.37±109.45)ng/L]显著增高,差异有显著性(t=9.981,P=0.000);PRP治疗组CXCR4蛋白浓度[(5.22±1.51)μg/L]较空白对照组[0.65±0.18)μg/L]显著增高,差异有显著性(t=2.285,P=0.013);PRP治疗组MMP13蛋白浓度[(2.42±0.36)μg/L]较空白对照组[(5.53±0.63)μg/L]显著降低,差异有显著性(P=0.000);PRP治疗组GAG浓度[(5.75±2.75)μg/L]较空白对照组[(17.99±3.96)μg/L]显著降低,差异有显著性(t=7.181,P=0.000)。PRP处理后的距骨软骨细胞生长曲线及生长趋势平稳,空白对照组的软骨细胞存活率不佳,PRP治疗组与空白对照组软骨细胞生长差异有显著性(t=12.837,P=0.000)。结论距骨软骨损伤时,软骨细胞内SDF-1/CXCR4通路可能参与了软骨细胞蜕变及降解过程;PRP可能通过抑制该通路,抑制软骨细胞蜕变及降解,从而促进距骨软骨损伤的修复。