miR-21在弥漫大B细胞淋巴瘤肿瘤组织中的表达及临床意义

本研究旨在检测弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者肿瘤石蜡组织中miR-21的差异性表达与PTEN相关性及其临床意义。采用Real-time-PCR方法检测26例DLBCL患者及10名正常对照的miR-21表达,应用聚合物免疫组化检测系统检测PTEN蛋白水平。结果表明,26例DLBCL石蜡组织中miR-21的表达量为6．586（1．10,38．22）,显著高于正常对照[0．791（0．35,2．87）]（P〈0．05）,在26例DLBCL中有6例PTEN蛋白（23％）阳性,而在20例（77％）中为阴性。DLBCL中miR-2l表达水平与PTEN蛋白水平呈负相关,其高表达与DLBCL血清LDH水平呈正相关、Ⅲ／Ⅳ期患者miR-21表达水平明显高于Ⅰ／Ⅱ期患者（P〈0．05）,与临床亚型无关（P〉0．05）。结论：在DLBCL中miR-21表达升高可能提示肿瘤恶性程度高,预后不良,PTEN可能是miR-21的靶基因。     

microRNA-21调节宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4的表达研究

目的探讨microRNA(miR)-21-反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4基因表达、细胞增殖与凋亡的影响。方法宫颈鳞癌SiHa细胞分3组,采用LipofectamineTM2000转染试剂,miR-21调控组转染miR-21抑制剂的ASODN,miR-21抑制剂阴性对照的ASODN,空白对照组不转染。Cell Titer和荧光TUNEL分别检测转染前后SiHa细胞增殖和凋亡的变化,流式细胞仪分析细胞周期,实时RT-PCR检测miR-21和PDCD4mRNA水平表达,Western blot检测靶蛋白PDCD4表达。结果 AS-miR-21组与阴性、空白对照组相比,SiHa细胞生长明显抑制,而阴性和空白对照组比较无明显差异;细胞凋亡率分别为(9.7±0.52)%、(3.6±0.17)%和(3.4±0.36)%;细胞周期结果显示AS-miR-21组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,与对照组间差异显著(P<0.05);实时RT-PCR结果显示,miR-21表达下降而PDCD4表达升高。Western blot检测结果显示,PDCD4表达AS-miR-21组明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论 AS-miR-21可有效抑制miR-21在宫颈鳞癌SiHa细胞中的表达并上调PDCD4基因表达,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

miR-224通过调控同源异型盒基因B3表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-224通过调控同源异型盒基因B3(HoxB3)表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用RT-PCR法检测miR-224在大肠癌细胞株及人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC中的表达,大肠癌细胞转染miR-224 inhibitor,并通过双荧光素酶实验、Western blot及RT-PCR证实HoxB3是miR-224的靶基因。MTT及Annexin V-PI法检测miR-224及HoxB3表达量下调后分别对大肠癌细胞活力的影响。流式细胞术检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞周期的影响;Western blot检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD 1)、p21及p27表达的影响。结果大肠癌细胞中miR-224表达量高于人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC,且HCT 116中的表达量最高,因此选为后续细胞株。双荧光素酶报告基因证实HoxB3是miR-224下游靶基因,Western blot及RT-PCR结果证实下调miR-244的表达水平后HoxB3蛋白及mRNA表达量均显著下降(P0.01)。下调miR-224及干扰HoxB3表达都能显著降低HCT_116细胞活力(P0.01),促进细胞凋亡(P0.01)。下调miR-224还能使HCT_116细胞周期阻滞在G_1期,抑制CDCA3及CyclinD1表达(P0.01),促进p21及p27表达(P0.01)。结论 miR-224在大肠癌细胞中高表达,并能通过调控靶基因HoxB3的表达及调节细胞周期相关蛋白的表达而参与大肠癌细胞的增殖与凋亡。     

miR-421靶向PDCD4促进前列腺癌DU145细胞增殖的实验研究

目的研究MicroRNA-421(miR-421)促进前列腺癌DU145细胞增殖的作用及潜在的分子机制。方法培养前列腺癌DU145细胞,分为对照组、miR-阴性对照(NC)组、miR-421组、miR-421+pcDNA组、miR-421+pcDNA-细胞程序性死亡基因4(PDCD4),miR-NC组转染miR-NC、miR-421组转染miR-421、miR-421+pcDNA组转染miR-421及pcDNA质粒、miR-421+pcDNA-PDCD4组转染miR-421及pcDNA-PDCD4质粒,MTS法测定细胞增殖活力,荧光定量PCR测定PDCD4的mRNA表达水平,western blot测定PDCD4的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-421与PDCD4的靶向结合。结果与对照组及miR-NC组比较,miR-421组的增殖活力增加,PDCD4的表达水平及野生型PDCD4双荧光素酶报告基因的荧光活力均降低(P<0.05);与miR-421+pcDNA组比较,miR-421+pcDNAPDCD4组的增殖活力降低,PDCD4的表达水平增加(P<0.05)。结论 miR-421对前列腺癌DU145细胞的增殖具有促进作用,靶向抑制PDCD4是miR-421发挥这一作用的潜在分子机制。     

miR-224靶向抑制ECRG4表达对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究微小RNA-224(miR-224)及其靶基因食管癌相关基因4(ECRG4)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达和对A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法利用原位杂交、荧光定量PCR、免疫组织化学和Western blot检测NSCLC临床标本和细胞系中miR-224和ECRG4的表达水平;通过microRNA.org网站预测miR-224与ECRG4的靶向关系,并行双荧光素酶报告基因实验和Western blot进行验证;分析抑制miR-224及联合抑制ECRG4对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 NSCLC癌组织中miR-224表达水平明显高于癌旁组织,ECRG4mRNA和ECRG4蛋白表达水平均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。与健康人肺支气管上皮细胞系HBE相比,NSCLC细胞系L78、A549、H460中miR-224表达水平明显升高,ECRG4mRNA和ECRG4蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。经microRNA.org网站预测、双荧光素酶报告基因实验和Western blot证实,ECRG4是miR-224的靶基因。抑制miR-224可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭(P0.05),而联合抑制ECRG4则可逆转抑制miR-224对A549细胞的抑制作用(P0.05)。结论 miR-224可通过靶向ECRG4促进NSCLC细胞A549增殖、迁移和侵袭,提示miR-224和ECRG4可能成为诊断和治疗NSCLC的靶点。     

miR-224靶向PIK3CD影响DLBCL细胞增殖和侵袭的机制研究

目的:探讨miR-224对弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)细胞增殖和侵袭影响的潜在机制。方法:收集2011年6月至2017年12月在昆明医科大学第一附属医院血液科确诊的76例DLBCL初诊患者血液标本(DLBCL组)、41例健康体检者血液标本(正常对照组),以及人淋巴内皮细胞HLEC和DLBCL细胞系HBL1、OCI-LY10、OCI-LY8、OCI-LY19。使用RT-qPCR法检测miR-224和PIK3CD mRNA的表达水平。CCK-8法和克隆形成实验检测HBL1细胞增殖能力,Transwell实验检测HBL1细胞侵袭能力。双荧光素酶报告基因验证miR-224与PIK3CD的靶向关系。Western blot检测PIK3CD蛋白的表达水平。结果:miR-224在DLBCL患者血液中表达显著低于正常对照组(P 0.01);过表达miR-224,HBL1细胞增殖和侵袭能力均显著降低(P 0.01)。PIK3CD是miR-224的靶基因,敲减PIK3CD能显著抑制HBL1细胞的增殖和侵袭能力(P 0.01)。结论:miR-224在DLBCL进展中起着关键的作用,miR-224靶向抑制PIK3CD可降低DLBCL细胞系HBL1细胞的增殖和侵袭能力。     

miRNA-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制研究

目的探讨miR-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制。方法选取骨髓瘤细胞株U266作为研究对象,利用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5p的表达水平;使用生物信息学网站预测miR-192-5p潜在靶基因USP1并利用双荧光素酶报告实验验证其靶向关系;利用细胞转染实验对多发性骨髓瘤细胞株进行miR-192-5p mimics、miR-192-5p inhibitor及相关对照组的细胞转染,采用CCK-8法和流式细胞仪分别检测转染后细胞的增殖和凋亡情况;利用Western blot检测转染后细胞中USP1蛋白表达水平。结果qRT-PCR结果显示,转染后多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5p表达水平低于正常骨髓细胞(P<0.01);CCK-8细胞增殖实验、细胞划痕实验、Transwell体外侵袭转移实验和流式细胞仪检测实验结果显示,过表达miR-192-5p抑制骨髓瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,促进骨髓瘤细胞的凋亡;靶基因预测及验证实验结果显示USP1是miR-192-5p的靶基因,miR-192-5p的表达可以显著降低骨髓瘤细胞中USP1蛋白的表达。结论miR-192-5p在多发性骨髓瘤中可能作为抑癌基因发挥作用,通过靶向作用于USP1抑制多发性骨髓瘤的发展。     

miR-29a在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘要：目的：检测miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平并探讨其对人乳腺癌细胞增殖和迁移的影响。 方法：用荧光定量RT-PCR检测乳腺癌组织及癌旁组织中miR-29a的表达水平;用脂质体法将miR-29a mimic及miR-29a inhibitor分别转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过MTT实验和 Transwell实验观察miR-29a对MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响;miRanda软件预测miR-29a的靶基因,western blot验证其表达结果。 结果：荧光定量RT-PCR检测结果表明,与癌旁组织（2.17±0.89）比较,miR-29a在乳腺癌组织（5.65±1.45）中的表达水平上调（t=3.94,P＜0.01）;MTT实验和Transwell实验结果显示,与mimics阴性对照组［（106.36±5.15)%,(216.70±7.20）个］相比,miR-29a mimics组［（133.32±6.31）%,(294.30±8.60)个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力增加（t分别为3.36和6.85,P均＜0.01）;与inhibitor阴性对照组［（105.35±3.42）%,(240.30±9.50）个］相比,miR-29a inhibitor组［（66.63±3.82）%,(156.30±7.80）个］乳腺癌细胞的增殖和迁移能力降低（t分别为8.18和6.81,P均＜0.01）。miRanda软件预测人第10号染色体缺失的同源性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）可能为miR-29a的靶基因。western blot结果显示,与mimics阴性对照组（0.55±0.01）相比,乳腺癌细胞转染miR-29a mimic后,其PTEN蛋白质的表达水平（0.22±0.01）下调（t=14.29,P＜0.01）;与inhibitor阴性对照组（0.49±0.02）相比,转染miR-29a inhibitor后,PTEN蛋白质的表达水平（1.25±0.02）上调（t=19.39,P＜0.01）。 结论：miR-29a在乳腺癌组织中的表达水平增高,并可能通过下调PTEN蛋白的表达促进乳腺癌细胞的增殖和转移。     

MicroRNA-21调控口腔鳞癌细胞顺铂耐药及其作用机制

目的:探讨micro RNA-21(mi RNA-21)在人口腔鳞癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法 :采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测mi RNA-21在口腔鳞癌细胞株Tca8113及顺铂耐药细胞株Tca8113/DDP的表达;采用体外转染法将mi RNA-21模拟物(mimics)或抑制物(inhibitor)分别转染Tca8113和Tca8113/DDP细胞,采用RT-PCR检测转染前后细胞中mi RNA-21的表达情况;采用CCK8实验检测转染前后细胞对顺铂敏感性的变化;并用Western blot检测转染前后细胞中PTEN的表达变化。采用双荧光素酶报告基因验证mi RNA-21是否作用于PTEN基因的3’-UTR区预测靶位。结果:mi RNA-21在Tca8113/DDP细胞中的表达水平是Tca8113细胞的(8.26±1.37)倍(P<0.01)。Tca8113细胞转染mi RNA-21 mimics后,细胞中mi RNA-21表达水平是转染前的(10.51±2.18)倍(P<0.01),顺铂对Tca8113细胞增殖的抑制率较转染前明显下降(P<0.05),细胞内PTEN表达水平较转染前明显下降(P<0.05)。Tca8113/DDP细胞在转染mi RNA-21 inhibitor后,细胞中mi RNA-21表达水平是转染前的(0.32±0.14)倍(P<0.01),顺铂对Tca8113/DDP细胞增殖的抑制率与转染前比较明显增加(P<0.05),细胞内PTEN表达水平较转染前明显增高(P<0.05)。经双荧光素酶报告基因验证PTEN是mi RNA-21的靶基因。结论:mi RNA-21在口腔鳞癌顺铂耐药细胞Tca8113/DDP中异常高表达,下调其表达可部分逆转细胞耐药性,mi RNA-21可能通过作用于PTEN参与口腔鳞癌细胞顺铂耐药的发生和发展。     

miR-21在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞中表达变化及作用机制

目的 探讨微RNA-21（miR-21）在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞（HNEpC）中表达变化及可能的作用机制。方法 应用脂多糖诱导建立HNEpC炎症反应细胞模型,分别应用荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法检测炎症细胞模型建立前后miR-21和磷酸酶及张力蛋白同源物 （PTEN）蛋白的表达水平变化。取脂多糖诱导的HNEpC细胞,分为miR-21抑制物组和阴性对照组,应用脂质体转染法分别将miR-21抑制物和阴性对照物转染入2组HNEpC细胞,比较转染后2组细胞中miR-21和PTEN蛋白的表达、细胞增殖活性和凋亡率以及细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平。结果 脂多糖诱导的HNEpC细胞中miR-21表达水平增高（P < 0.05）,PTEN蛋白的表达水平降低（P < 0.05）。miR-21抑制物组细胞中miR-21表达水平低于阴性对照组（P < 0.05）,转染后24、48、72 h后的吸光度值均低于阴性对照组（P均 < 0.05）,凋亡率高于阴性对照组（P < 0.05）,并且细胞上清液中TNF-α、IL-1β及IL-6水平均低于阴性对照组（P均 < 0.05）,IL-10水平高于阴性对照组（P < 0.05）,细胞中PTEN蛋白的表达水平高于阴性对照组（P < 0.05）。结论 miR-21在脂多糖诱导的HNEpC炎症反应细胞模型中表达升高,抑制miR-21可显著抑制脂多糖诱导的HNEpC细胞的增殖活性和炎症反应,同时促进其凋亡,其机制可能与其对PTEN基因的调控有关。     

microRNA-21参与调控膀胱癌细胞增殖及多柔比星敏感性的研究

目的膀胱移行细胞癌是一种常见的恶性肿瘤,且复发率很高。由于microRNA-21(miR-21)在多种类型肿瘤中参与肿瘤发生及耐药,故通过此次研究探索其在膀胱移行细胞癌中的功能。方法肿瘤组织及癌旁正常组织中的miR-21及目的蛋白PTEN表达水平分别采用实时qRT-PCR及Western blot方法进行测量。采用MTT法评估miR-21对于癌细胞增殖以及多柔比星敏感性的影响。采用流式细胞术探究T24细胞系中多柔比星引起的细胞凋亡。结果与癌旁正常膀胱组织相比,miR-21在膀胱肿瘤组织中的表达水平显著上调,而PTEN蛋白表达低水平。活体内研究发现miR-21与PTEN表达呈负相关。miR-21过表达可显著促进T24细胞系的细胞增殖与多柔比星敏感性。结论 miR-21可能是膀胱移行细胞癌的致癌因素,有望成为膀胱移行细胞癌的治疗新靶点。     

急性B淋巴细胞白血病病儿miR-21表达及意义

目的了解microRNA-21（miR-21）在急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）骨髓单个核细胞（BMMCs）中的表达水平及其意义。方法收集36例B-ALL病儿（其中高危型13例,标危型23例）化疗前后及12例骨髓常规正常非造血系统疾病病儿（对照组）的骨髓标本,采用实时荧光定量PCR方法检测BMMCs中miR-21表达。结果化疗前B-ALL组miR-21表达水平明显高于对照组,高危型组miR-21表达水平明显高于标危型组,差异有统计学意义（t=20.75、23.23,P〈0.05）。化疗后B-ALL病儿miR-21表达水平较化疗前明显减低（t′=10.56,P〈0.05）,其中以化疗敏感组减低最为明显（t=13.57,P〈0.05）;化疗耐药组miR-21表达水平化疗前后无明显变化（P〉0.05）。结论 miR-21过表达在B-ALL发病中发挥着重要作用,可作为判断儿童B-ALL预后指标之一。     

MicroRNA-21 activates hepatic stellate cells via PTEN/Akt signaling

Activation of hepatic stellate cells is the key event in the liver fibrosis. miRs have been shown to play fundamental role in diverse biological and pathological processes. In the present study, we investigated the fibrogenic role of miR-21 in human hepatic stellate LX-2 cells and explored underlying mechanisms. The results showed that treatment of LX-2 cells with platelet-derived growth factor (PDGF)-BB significantly stimulated α1(I) collagen mRNA synthesis and the protein expression of α-SMA, which are characteristics of activation of hepatic stellate cells and simultaneously increased miR-21 expression. Downregulation of miR-21 expression by transfection of anti-miR-21 into LX-2 cells prevented PDGF-BB-induced LX-2 cell activation. Overexpression of miR-21 expression alone also stimulated LX-2 cell activation, while downregulation of miR-21 expression suppressed LX-2 cell activation. miR-21 also played a role in mRNA expression and activity of matrix metalloproteinase 2 (MMP2) in LX-2 cells. Moreover, overexpression of miR-21 decreased protein expression of PTEN in LX-2 cells, resulting in activation of the Akt. Inhibition of Akt signaling by specific inhibitor LY 294002 blocked miR-21-induced fibrogenic effects in LX-2 cells. In summary, miR-21 is an important mediator in LX-2 cell activation. The fibrogenic effects of miR-21 on LX-2 cell activation are mediated through PTEN/Akt pathway. miR-21 may be a potential novel molecular target for the liver fibrosis.     

多发性骨髓瘤中miR-21与SPRY2基因表达的相关性研究

目的：检测多发性骨髓瘤（MM）患者外周血miR-21的表达水平,研究MM中miR-21与SPRY2基因表达的相关性。方法选择30例MM患者、15例意义未明单克隆丙种球蛋白病（MGUS）患者及20例正常对照（NC）的门诊患者,用实时荧光PCR定量检测miR-21和SPRY2表达水平;Western blot检测miR-21和SPRY2在MM细胞系中表达;在荧光显微镜下观察：U266用脂质体转染荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor后miR-21的表达。结果 MM组血清循环miR-21的表达水平较MGUS组和NC组显著增高,差异有统计学意义（P＜0.01）;在miR-21内源性高表达的MM细胞株中,SPRY2明显低表达;反之,明显高表达;荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor,转染效率90%以上,转染mimics细胞miR-21表达量（98.6±14.2）较未处理的U266细胞miR-21表达量（0.82±0.13）升高了120.2倍（差异有显著的统计学意义,P＜0.001）,转染inhibitor细胞miR-21表达量（0.37±0.06）较未处理细胞降低了61.9%（差异有明显的统计学意义,P＜0.05）。结论 miR-21可能是导致SPRY2在MM中表达下调的一个负性调控因子。miR-21与MM 的发生发展和疾病预后有密切关系,可作为判断MM 患者预后不良指标之一。     

急性心肌梗死患者血浆外泌体miR-21-3p/PTEN/AKT 表达水平及诊断价值研究

目的　探讨急性心肌梗死（acute myocardial infarction,AMI）患者血浆外泌体miR-21-3p/PTEN/AKT 表达水平及诊断价值。方法　选取2019 年2 月~ 2021 年8 月于陕西省汉中市三二〇一医院内分泌与风湿免疫科住院并诊断为急性心肌梗死的120 例患者作为AMI 组,另选同期在该科住院,经冠脉造影发现冠脉无明显狭窄患者120 例为对照组。提取所有研究对象的血浆外泌体,并采用透射电镜和Western blot 鉴定。qRT-PCR 法检测外泌体中miR-21-3p 表达水平,Western blot 检测外泌体中蛋白酪氨酸酶基因（PTEN）和丝苏氨酸激酶（AKT）蛋白的表达水平。Pearson 相关分析明确AMI 患者血浆外泌体中miR-21-3p,PTEN 与AKT 表达水平之间的相关性。绘制受试者工作特征（receiver operatorcharacteristic curve,ROC）曲线,根据曲线下面积（area under curve, AUC）分析血浆外泌体miR-21-3p,PTEN 及AKT对AMI 的联合诊断价值。结果　透射电镜观察到,血浆外泌体呈双层膜的泡状结构,且外泌体特征蛋白CD9,CD63和CD81 在外泌体中表达明显升高。与对照组相比,AMI 患者的miR-21-3p（1.45±0.31 vs 1.05±0. 17）和AKT（1.23±0.27 vs 1.03±0.15）表达显著上升,而PTEN（0.68±0.10 vs 1.01±0. 23 ）表达水平显著下降,差异有统计学意义（t=125.735,112.628,72.309,均P ＜ 0.001）。Pearson 相关性分析显示,AMI 患者血浆外泌体中miR-21-3p 和PTEN 呈明显负相关（r=-0.440,P=0.000）,PTEN 和AKT 呈明显负相关（r=-0.674,P =0.000）,而miR-21-3p 和AKT 之间无明显相关性（r=-0.072,P=0.438）。ROC 曲线结果显示,血浆外泌体miR-21-3p,PTEN 及AKT 单独检测时,其对应曲线下面积（AUC）分别为0.805,0.782 及0.720,联合检测时AUC 为0.885,比单独检测更具有诊断价值,差异有统计学意义（P<0.001）。结论　AMI 患者血浆外泌体中miR-21-3p 表达上升,其与PTEN 呈负相关,PTEN 又负向调控AKT 表达。三项指标均可作为辅助诊断AMI 的潜在标志物,且联合检测对AMI 有较高的诊断价值。     

弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系中bcl-6、lpp和miR-28基因表达的研究

本研究从基因和蛋白水平探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系中Bcl-6、LPP和miR-28表达,及其之间的相互关系。应用Northern blot检测8个DLBCL细胞系（CTB-1、MD901、OC1-LY8、BEVA、RCK8、MD903、HRC57和K231）bcl-6和lpp的mRNA水平,液相杂交法检测miR-28表达,Westem blot检测BCL-6和LPP的蛋白水平。结果显示,bcl-6基因易位类型涉及Ig基因细胞系（Oc1-ly8、MD903、CTB-1和MD901）,其bcl-6 mRNA的表达较强,而在未涉及Ig基因易位的细胞系（HRC57和K231）中未见表达。lpp mRNA在CTB-1细胞系中表达阴性。miR-28在各细胞系中均有表达,表达强度高到低依次为：K231、CTB-1、MD903、HRC57、MD901、RCK8、OC1-LY8和BEVA。BCL-6蛋白在各细胞系表达由强到弱依次为：RCK8、BEVA、MD901、CTB-1、MD903、OC1-LY8、HRC57和K231;而LPP蛋白在K231细胞系中未见表达,余各细胞系表达由强到弱依次为：HRC57、OC1-LY8、BEVA、RCK8、CTB-1、MD901和MD903。各细胞系中bcl-6和lpp mRNA水平与蛋白的表达并不一致,即高mRNA水平并不一定导致蛋白的表达增加。结论：不同DLBCL细胞系具有不同的BCL-6、LPP和miR-8蛋白表达水平,各细胞系中bcl-6和lpp mRNA表达水平与它们表达的蛋白量不平行,有关bcl-6、lpp和miR-28基因在DLBCL发生、发展中的作用机制有待进一步探讨。     

下调miR-572抑制人胃癌细胞株凋亡、迁移和侵袭机制的实验研究

目的　探讨下调微小核糖核酸（ miRNA, miR）-572对人胃癌细胞凋亡和迁移能力的影响及机制。方法　实时荧光定量 PCR（quantitative real-time PCR, qPCR）法检测 miR-572,第 10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源物基因 (phosphatase and tensin hmmlogydeleted on ten, PTEN)和蛋白激酶 2 (protein kinase 2,AKT2)在不同胃癌细胞株（ HGC-27, AGS和 SGC-7901）和正常胃黏膜上皮细胞 GES-1中的表达情况。在胃癌细胞株 AGS细胞中加入 miR-572 inhibitor后, CCK8检测细胞活力; Tranwell实验检测细胞侵袭和迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡比例; qPCR检测 miR-572, PTEN和 AKT2的表达量。结果　miR-572和 AKT2在胃癌细胞系 HGC-27（6.97±1.62,4.98±1.34）,AGS（7.21±1.32, 5.39±1.14）和 SGC-7901（5.97±1.44,4.02±1.02）中较正常胃黏膜上皮细胞 GES-1表达升高（ 1.00±0.24,1.00±0.21）, PTEN表达降低（ 0.49±0.16,0.39±0.11,0.54±0.33 vs 1.00±0.13）,差异均有统计学意义 (t=2.727~3.197,均 P＜ 0.05);与对照组比较,转染 miR-572 inhibitor后,miR-572和 AKT2在 AGS中表达下调 (P＜ 0.05),PTEN表达上调 (P＜ 0.05); CCK8实验结果显示转染 miR-572 inhibitor后,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞活力降低 (P＜ 0.05);Transwell实验发现,与对照组比较 miR-572抑制剂组细胞的侵袭和迁移能力降低 (P＜ 0.05);流式细胞实验结果表明,与对照组相比 miR-572抑制剂组细胞的凋亡比例降低 (P＜ 0.05)。结论　下调 miR-572可抑制胃癌细胞的凋亡、侵袭和迁移,其机制可能是通过 PTEN/AKT2信号通路。