HBx在HCC发病机制中的作用

乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)，在原发性肝癌(HCC)的发生发展过程中起关键作用。本文就其通过与P53、生长因子等之间的蛋白一蛋白相互作用，调节细胞生长增殖与凋亡等方面阐述HBx与HCC形成中的可能机制。     

乙型肝炎病毒X基因原核表达载体的构建及蛋白表达

[目的] 构建和表达乙型肝炎病毒x基因原核表达载体，获得重组HBx蛋白。[方法] 用PCR方法扩增含有EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的X基因序列，分别以pMD18-T载体和pET32a（＋）载体构建pMD18-T-HBX克隆载体和pET32a-HBX原核表达载体，随后把pET32a-HBX转化大肠杆菌BL-2l进行诱导表达和纯化，Western blot检测原核表达的HBx蛋白的免疫活性。[结果] 经IFFG诱导后可见分子量约38KD的融合蛋白表达；表达的蛋白主要以包涵体形式存在；Western blot结果表明HBx融合蛋白具有较好的免疫活性。[结论] HBVX基因的克隆表达及其融合蛋白的纯化。为研究HCC患者血清中HBx蛋白和抗-HBx抗体滴度水平奠定了坚实的基础。     

肝癌患者外周血单个核细胞HLA-G表达研究

目的了解肝细胞癌（HCC）患者外周血单个核细胞（PBMC）人类白细胞抗原G（HLA—G）的表达水平。方法收集38例HCC患者、25例肝硬化患者和40名健康查体者的PBMC,分别用逆转录一聚合酶链反应（PCR）和流式细胞术（FCM）检测其HLA—GmRNA和HLA—G蛋白表达水平。结果HCC组、肝硬化组和健康对照组PBMCHLA—GmRNA表达率分别为94．7％、84．0％和87．5％,差异无统计学意义（P=0．359）;HCC组HLA—G蛋白表达率高于肝硬化组和健康对照组,差异有统计学意义（P=0．002）。HCC组PBMCHLA—G蛋白主要表达于CD4^＋细胞上。结论HCC患者PBMCHLA—G蛋白表达率升高,其机制与临床意义尚待进一步研究。     

多节族蛋白家族成员Bmi1和EZH2的过表达与肝癌细胞增殖和侵袭的生物学行为相关(英)

多节族蛋白家族成员Bmil和EZH2涉及到某些人类癌症的恶性转化和生物侵袭性。本文作者探讨了Bmil和EZH2表达在肝细胞癌（HCC）及其癌前病变不典型增生结节中的意义。用免疫组化方法检测27例HCC、14例不典型增生结节和14例混合性肝细胞癌和胆管癌（HC—CC）中Bmil和EZH2的表达。利用小分子干扰RNA（siRNA）观察培养HCC细胞（HuH7和HepG2）中Bmil和FZH2消减后的效应。结果发现，Bmil在胆管细胞中恒定表达，而在肝细胞中不表达；     

赖氨酰氧化酶在肝细胞癌中的表达及其与血管内皮生长因子的关系

目的探讨赖氨酰氧化酶（lysyl oxidase,LOX）在肝细胞癌（HCC）的表达及其与侵袭转移的关系。方法采用免疫组织化学法检测LOX在HCC组织、癌旁肝组织和正常肝组织中的表达,分析其与HCC临床病理特征和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白之间的关系。结果 LOX在HCC、癌旁组织和正常肝组织中的阳性表达率分别为59.0%、88.9%和94.7%,LOX在HCC中的表达显著低于癌旁和正常肝组织（P〈0.01）;LOX蛋白阳性表达率随肿瘤分化程度的降低、数目增多、周围组织器官受侵、远处器官转移而显著降低（P〈0.05）;在HCC中,LOX的表达与VEGF表达呈显著负相关（rs=-0.313,P〈0.05）。结论 LOX蛋白表达下调或缺失与HCC发生、发展密切相关,LOX蛋白表达下调或缺失伴随VEGF表达升高可以联合促进HCC的生长、转移。     

P21waf1/cip1基因在原发性肝细胞肝癌中的表达

目的：研究原发性肝细胞肝癌（HCC）中p21^wafl/cipl(简称p21)基因的表达。方法：利用组织芯片技术和免疫组织化学技术（SP法）检测40例HCC及其癌旁,远癌正常组织中p21蛋白的表达情况。结果：40例原发性HCC肿瘤组织中11例有p21蛋白表达缺失,而癌旁组织中有2例p^21蛋白表达缺失,远癌正常组织仅1例p^21分级有密切联系。结论：p21蛋白的缺失与HCC的发生,发展有关。     

癌症高表达蛋白在原发性肝癌中的表达及意义

【目的】研究癌症高表达蛋白（Hec 1）在原发性肝细胞肝癌（HCC）中的表达和意义。【方法】采用免疫组化sABc的方法检测15例正常肝组织、20例癌旁组织及30例HCC组织中Hec1蛋白的表达水平并进行比较。【结果】在正常肝、癌旁组织及HCC组织中,Hec1蛋白的阳性表达率分别为0％、25％、66．7％,各组织中Hec1蛋白的表达相比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。Hec1蛋白的表达与HCC的Ed—mondson分级、侵袭转移显著相关。差异有统计学意义（P〈0．05）。【结论】Hec1的表达与HCC的Ed—mondson分级、侵袭转移显著相关,Hec1蛋白的过度表达可能在HCC的发生和发展中起重要作用,且对HCC的诊断及预后有重要的参考价值。     

肝炎病毒相关原发肝细胞癌中信号通路和基因的变化

原发性肝细胞癌（HCC）是全世界10大常发肿瘤之一，5年平均生存率〈3％。由于缺乏可靠的标志物，HCC无法早期检测，确诊时已无法成功地治疗。在HBV感染中，HBV编码的X抗原（HBxAg）是HCC的主要遗传致病因子。HBxAg是反式激活蛋白，在体外可促进肝细胞生长、存活转化以及转基因鼠中HCC的发展。其作用机制主要是通过激活细胞质信号转导通路，激活促肝细胞生长和存活的细胞因子，直接与核转录因子结合等引起HCC的发生。HCV感染与HCC的发生紧密相关，HCV核心抗原在转基因小鼠的肝癌中表达过多，非结构蛋白NS5A有反式激活性，     

凋亡相关蛋白bax在肝细胞癌的表达及其意义

目的：探讨原发性肝细胞癌（简称肝癌）细胞凋亡相关蛋白bax的表达情况及其意义。方法：采用免疫组化ABC法检测bax蛋白在66例肝癌组织和24例正常肝组织,以及3种人肝癌细胞系HCC－9204、SMMC－7721、HHCC和1种人正常肝细胞系QZG的表达情况,并分析肝癌组织的bax蛋白表达阳性率与其病理分级间的关系。结果：bax蛋白在正常肝组织中表达阳性率为70．8％（17／24）,在肝癌组织中表达阳性率为43．9％（29／66）,二者差异显著（P＜0．05）。肝癌组织的bax蛋白表达阳性率与其病理分级间未见明显相关性（P＞0．05）。肝细胞系HCC－9204、SMMC－7721、HHCC的阳性细胞计数率分别为43．2％、58．3％和47．1％。正常肝细胞系QZG的阳性细胞计数率为61．0％。结论：与正常肝组织相比,肝癌组织可出现bax蛋白表达下降。肝癌细胞系和正常肝细胞系均可见中等程度的bax蛋白表达。     

HBV准种的研究进展

HBV感染引起的急或慢性病毒性肝炎、肝硬化（liver cirrhosis,LC）、肝细胞癌（hepatic cellular cancer,HCC）的治疗仍十分困难,其原因包括HBV分子生物学特性及其相关疾病发病机制研究方面的问题及误区。     

慢性乙型和丙型肝炎治疗的策略和实施

乙型肝炎（乙肝）和丙型肝炎（丙肝）分别由两种不同的嗜肝病毒：HBV和HCV引起。两者的传播途径、流行病学和临床过程有其相同点，也有所不同，因而治疗措施也不同。相同之处为慢性感染最终可导致肝硬化和肝细胞肝癌（HCC）。     

介入治疗对肝细胞癌层粘连蛋白表达的影响

目的：研究介入治疗对肝细胞癌（HCC）层粘连蛋白（LN）表达的影响。方法：手术病理证实的HCC98例,单纯手术组57例,介入治疗后Ⅱ期切除（介入治疗组）41例,采用免疫化方法检测各标本LN。结果：LN表达阳性率和表达强度,介入治疗组较单纯手术组显著降低。结论：介入治疗可拮抗LN的作用而抑制 HCC浸润转移潜能。     

血清CRP与AFP联合检测对肝细胞癌诊断的临床意义

目的探讨测定血清C反应蛋白（CRP）和甲胎蛋白（AFP）联合检测在肝细胞癌（HCC）诊断中的临床意义。方法采用散射比浊法测定67例肝细胞癌、58例良性肝病、21例健康对照者的血清CRP水平;同时采用酶联免疫法（ELISA）检测各组血清甲胎蛋白（AFP）含量。结果CRP、AFP联合检测可显著提高肝细胞癌的诊断率,显著高于其他组（P〈0．05）。结论联合检测血清CRP、AFP可提高诊断肝细胞癌的敏感性。     

肝细胞癌患者血清 GP73检测的临床价值

目的：探讨血清 GP73检测在肝细胞癌（HCC）诊断中的临床应用价值。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）定量测定52例健康者、45例非肝性疾病患者、43例乙型病毒性肝炎患者、20例肝硬化患者和30例 HCC 患者血清标本中 GP73蛋白的表达水平;采用电化学发光法（ECL）检测 HCC 患者血清 AFP 水平,计算 ROC 曲线下面积及 GP73和 AFP 对 HCC 诊断的敏感度和特异性。结果非肝性疾病组（58．57±35．64）ng/mL、乙型肝炎组（70．36±49．88）ng/mL 和肝硬化组（114．47±51．27）ng/mL 以及 HCC 组（251．37±95．6）ng/mL 患者血清中的 GP73水平显著高于健康对照组（34．03±15．20）ng/mL,差异均有统计学意义（P ＜0．05）;HCC 组血清 GP73水平非常显著高于其他各组,差异均有统计学意义（P ＜0．01）;HCC 组血清 GP73的阳性检测率（76．7％）显著高于非 HCC 组（3．12％）,差异有统计学意义（χ2＝108,P ＜0．05）;GP73诊断 HCC 敏感度（75．1％）和特异性（94．9％）均高于 AFP 的敏感度（52．3％）和特异性（86．6％）。结论 GP73可能成为 HCC 诊断的一个更好的血清标志物。     

基于iTRAQ多重化学标记串联质谱技术筛选肝细胞癌的生物标记物

目的：利用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术筛选并鉴定合并乙肝病毒（HBV）感染的肝细胞癌（HCC）患者和慢性乙肝患者的血清差异表达的蛋白质。方法：收集HBV感染的HCC患者血清16例（HCC组）,慢性乙肝患者血清13例（慢性乙肝组）,组内等量混合后利用高效液相色谱柱去除高丰度蛋白,样本经iTRAQ试剂标记后利用二维色谱分离,经串联质谱鉴定并相对定量。结果：质谱共得到49784个多肽片段,经谱库搜索的鉴定的蛋白共279个,其中差异表达的蛋白有28种,HCC组较慢性乙肝组上调的蛋白有20种,下调的有8种。其中上调的蛋白包括α1-抗胰蛋白酶、α1-酸性糖蛋白1、血清淀粉样蛋白A、C反应蛋白,结合珠蛋白等5个急性相反应蛋白,提示炎性反应和肿瘤间存在一定的联系。结论：筛选出多种与肝癌相关的差异蛋白,提示iTRAQ技术对于血清蛋白质组学肿瘤标记物的研究有很好的应用前景。     

乙肝病毒X蛋白对CCL13细胞Period1基因启动子甲基化及其表达的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)表达与肝细胞Period1基因低表达的关系及其机制。方法 采用脂质体法将pcDNA3.1-HBx质粒转入CCL13细胞,采用甲基化聚合酶链式反应(PCR)、反转录PCR(RT-PCR)、蛋白质印迹法(western blot)检测CCL13细胞转染HBx质粒前后Period1基因启动子甲基化水平、mRNA及蛋白表达水平。结果 pcDNA3.1-HBx质粒转染CCL13细胞后在该细胞中稳定表达,转染HBx质粒后,Period 1在CCL13细胞启动子甲基化水平较转染空质粒CCL13细胞明显增高,其mRNA及蛋白质的表达水平均较后者明显下降。结论 HBx蛋白可通过上调肝细胞Period1启动子甲基化水平,促使其表达下调。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

肝硬化结节癌变影像学诊断及介入治疗进展

近年来，肝细胞癌（HCC）的发病率在全世界呈上升趋势，并以其高病死率严重地威胁着人类的健康，我国是病毒性肝炎、肝硬化和肝细胞性肝癌（HCC）的高发国家，在我国每年有11万人左右死于肝癌^[1]，病死率已由第3位上升为第2位^[1]。近年来，随着影像学科的发展，人们对小肝癌的诊治水平得到了长足的进步和提高。越来越多的实验和临床研究结果显示，发育不良的肝硬化结节是癌前病变的最初阶段^[2]，     

Glypican-3的血清检测与原发性肝癌诊断的研究进展

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（glypican-3, GPC3）是继AFP之后发现的一个新的肝细胞癌标志物.随着对GPC3研究的不断深入,发现它不但在肝细胞癌组织中有表达而且在血清中同样有表达.GPC3对HCC诊断的敏感性和特异性较高,尤其在肿瘤发生的早期,具有极大的临床应用价值,为早期HCC的诊断带来了希望.