LPS和雨蛙肽诱导大鼠离体胰腺组织损伤并抑制HSP60蛋白的变化

目的：观察脂多糖（LPS）、雨蛙肽（cerulein）刺激对大鼠离体胰腺组织热休克蛋白60（HSP60）表达的影响。方法: 分离培养大鼠离体胰腺组织,用低、高浓度cerulein (Cer;10-11mol/L,10-5mol/L)或LPS（10 mg/L,20 mg/L）刺激,以生理盐水（NS）作为对照,在刺激前和刺激后1、4h测定胰腺组织的活力（MTT法）、胰蛋白酶原活性肽（TAP）水平（ELISA测定）,培养上清液中白介素6（IL-6）水平（ELISA测定）;并用 real-time PCR和Western blotting分别测定胰腺组织HSP60 mRNA和蛋白的表达。结果: 低、高浓度的cerulein和LPS刺激胰腺组织后1 h,组织的活力与NS对照组比较稍有下降（P>0.05）,刺激4h后,组织活力明显降低（P<0.05）;组织中TAP水平在高浓度cerulein和低、高浓度的LPS刺激下明显升高;其培养上清液中IL-6水平在刺激后1 h变化不明显,4 h时升高,尤其以高浓度的cerulein或LPS作用显著（P<0.05）。胰腺组织HSP60 mRNA和蛋白的表达量随LPS刺激时间的延长和浓度的升高而降低;而低、高浓度的cerulein刺激HSP60 mRNA的表达增加,但蛋白的表达降低,以高浓度、长时间刺激的作用为明显(P<0.05)。结论: LPS及cerulein对离体胰腺组织具有损伤作用,并呈一定时间及浓度依赖性;同时,胰腺组织HSP60蛋白表达降低,提示HSP60细胞保护作用的减弱可能参与该损伤过程。     

p38 MAPK在机械牵张致大鼠心脏TREK-1通道表达改变中的作用

目的：研究p38 MAPK信号途径在急性机械牵张致大鼠离体灌流心脏TREK-1通道表达改变中的作用。方法:30只雄性 Wistar大鼠随机分成3组,即对照组、机械牵张组和SB202190（p38 MAPK特异性抑制剂）组，每组10只。利用Langendorff灌流装置等建立离体灌流急性机械牵张的心脏模型；通过Western blotting方法检测各组大鼠左室的p38 MAPK、p-p38 MAPK及TREK-1通道的蛋白表达。结果:各组大鼠左室的p38 MAPK表达无明显差异（P>0.05）；机械牵张组左室p-p38 MAPK 及TREK-1通道的蛋白表达均明显高于对照组（P<0.01），而SB202190组的p-p38 MAPK及TREK-1蛋白表达与对照组比较无明显差异（P>0.05）且低于机械牵张组。结论:离体灌流心脏受机械刺激时p38 MAPK信号途径的激活可能介导了TREK-1通道的表达上调。心脏可能通过这种方式来改变自身电活动，从而减少心律失常发生，起到自身保护作用。     

p38MAPK信号通路在雨蛙素诱导的胰腺AR42J细胞炎症反应中的作用

目的: 探讨p38 MAPK信号通路在急性胰腺炎体外模型中的作用。方法: AR42J细胞随机分为3组:正常对照组、雨蛙素组(10^-8mol/L雨蛙素)和SB203580组(10 μmol/L SB203580+10^-8mol/L雨蛙素)。于3 h收集细胞,检测淀粉酶分泌率;免疫荧光染色观察p-p38 MAPK核移位;Western blotting印迹检测p-p38 MAPK和TNF-α蛋白表达;EMSA检测NF-κB活性。结果: 与正常对照组比较,雨蛙素组淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白水平增高(P<0.01),p-p38 MAPK表达及NF-κB活性表达增加(P<0.01);免疫荧光示雨蛙素组p-p38 MAPK发生了核移位。而与雨蛙素组相比,SB203580组明显降低淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白表达(P<0.01),p-p38 MAPK和NF-κB的活性表达也下降(P<0.05);SB203580还抑制了p-p38 MAPK核移位。结论: p38 MAPK通路参与了胰腺细胞内的炎症反应,其机制可能涉及NF-κB通路的活化。     

人乳腺癌中p-P38信号分子与nPA表达增强

目的 研究磷酸化p38（p-p38）信号分子和uPA在乳腺癌组织及细胞中表达及意义。方法 免疫组化检测60例乳腺癌组织及其邻近正常乳腺组织中p-p38和uPA蛋白,Western blot检测人乳腺癌细胞中p-p38及uPA蛋白表达及用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路后uPA蛋白水平的变化。结果 免疫组化显示,p-p38,uPA蛋白在乳腺癌组织中表达阳性率分别为56.7%和60.0%。,显著高于正常乳腺组织中的表达（P<0.05）,并与乳腺癌的TNM分期及淋巴结转移相关（P<0.05）,而与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性,且两者表达存在正相关（r=0.316, P<0.05）。乳腺癌高转移性的MDA-MB-231细胞株p-p38及uPA蛋白表达水平高于低转移的MCF-7细胞株。 用SB203580阻断p38MAPK通路可降低uPA蛋白表达。结论 p-p38和uPA表达在乳腺癌恶性进展中起重要作用,可为乳腺癌转移机制研究提供有效线索。     

ROS/PKC/p38 MAPK途径在山茱萸多糖抑制心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用

 目的:观察山茱萸多糖（polysaccharide from Fructus corni,PFC）对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）损伤心肌细胞的保护作用,并探讨其对ROS/PKC/p38 MAPK途径的影响。方法: 分离原代乳鼠心肌细胞,建立H/R模型,细胞分为7组：正常对照组（N组）、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧/复氧+PFC（终浓度20 mg/L、100 mg/L和200 mg/L）预处理组、缺氧/复氧+PFC（100 mg/L）预处理+蛋白激酶C特异性阻断剂chelerythrine（1 μmol/L）组及缺氧/复氧+PFC（100 mg/L）预处理+p38 MAPK特异性阻断剂SB203580（10 μmol/L）组。倒置显微镜下观察细胞形态和自发搏动频率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡率,酶标仪测定ROS含量、SOD活性及LDH漏出量,免疫印迹法检测PKC、p-p38 MAPK和HSP70的蛋白水平。结果: H/R组细胞活力下降,搏动频率减慢,细胞ROS含量、LDH漏出量、细胞凋亡率及p-p38 MAPK的水平均较N组显著增加（P<0.01）。经PFC预处理后,细胞搏动频率、SOD活性及PKC、HSP70的水平较H/R 组显著增加（P<0.05,）,p-p38 MAPK的水平和细胞凋亡率均减少（P<0.05）,而PFC的保护作用能被chelerythrine或SB203580抑制。结论: 山茱萸多糖可抑制心肌细胞缺氧/复氧损伤,其作用可能与增加SOD活性、抑制ROS产生、激活PKC并抑制p38MAPK的过度激活有关。     

p38 MAPK-HSP27信号通路在内毒素致大鼠肺损伤中的作用

 目的：观察p38丝裂原激活蛋白激酶（p38 MAPK)-热休克蛋白27（HSP27）信号通路在急性肺损伤病理过程中的变化规律。方法：健康雄性Wistar大鼠（300~320 g）随机分成正常对照组（A组）、急性肺损伤组（B组）及急性肺损伤+SB203580组（C组）。通过腹腔注射内毒素建立急性肺损伤大鼠模型,分别于实验开始后的0、2、4、6、8 h处死各组大鼠。检测支气管肺泡灌洗液（BALF）白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及BALF中蛋白含量。苏木素-伊红（HE）染色检查肺组织病理变化及免疫荧光方法检测内皮细胞内F-actin和G-actin,计算肺湿干重比值（W/D）。检测肺组织中磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）及磷酸化HSP27（p-HSP27）的含量。 结果：B组在实验后2 h BALF中蛋白水平和肺W/D开始明显增加,给予内毒素后8 h肺泡上皮肿胀,肺泡壁增宽,肺泡间质和肺泡腔水肿明显,肺泡内炎症细胞、红细胞和蛋白渗出明显增多,表现出急性肺损伤的病理改变。在给予了p38 MAPK抑制剂SB203580后的C组BALF中蛋白水平及肺W/D分别比B组明显减少,肺泡内炎症细胞、红细胞和蛋白渗出、间质与肺泡水肿均较B组减轻。B组均在实验后2 h血清及BALF中TNF-α和IL-6的浓度开始增加,p-p38 MAPK及p-HSP27的肺内表达开始增加,与A组相比有显著差异。B组实验后8 h的F-actin的表达明显比A组实验后0 h及8 h的增加,给予p38 MAPK抑制剂SB203580的C组肺p-HSP27 和F-actin的表达分别比B组明显减少。结论：内毒素可以通过激活p38 MAPK-HSP27信号通路引起急性肺损伤;阻断该信号通路可以减轻肺损伤。     

p38MAPK信号通路与应力介导成肌细胞的凋亡

背景：在体内条件下,细胞力学的功能研究因其所处生理环境的复杂性、实验条件的不易控制而很难得到满意结果。 目的：在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究p38MAPK信号通路在成肌细胞凋亡中的作用及其机制。 方法：将体外培养的C2C12细胞分为对照组和SB203580组,SB203580组中加入  20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。应用细胞应力加载装置Flecell Strain Unit-5000T给细胞提供15%的力值,分别施加0,6,12,24 h的周期性张应力。每分钟10个循环,每循环包括3 s牵张,3 s松弛。Hoechst 33258染色观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测促凋亡基因bax mRNA的表达;Western blot检测信号通路中p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达。 结果与结论：随着加力时间的延长,细胞逐渐出现核固缩及凋亡小体,凋亡率增加(P < 0.05),bax mRNA表达增多(P < 0.05);细胞p38MAPK和p-p38MAPK蛋白均在加力6 h达到最低,此后逐渐升高。p38MAPK抑制剂SB203580可抑制加力引起的细胞凋亡,减少bax mRNA及p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达(P < 0.05)。说明p38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中起到重要的作用。     

p38MAPK信号通路在钙调磷酸酶促心肌凋亡中的作用

目的：探讨钙调磷酸酶（CaN）在缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌凋亡中的作用及p38 MAPK在CaN调节心肌凋亡中的作用。方法:采用体外培养新生Wistar大鼠心肌缺氧/复氧（H/R）模型，模拟在体缺血再灌注损伤，将心肌细胞随机分为3组：正常对照组（N组）、H/R+异丙基肾上腺素组（Ao组）、H/R+异丙基肾上腺素+环孢菌素A组（A1组）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡，RT-PCR 检测CaN mRNA的表达， Western 免疫印迹法检测CaN及p38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果:H/R和异丙基肾上腺素（Iso）共同作用心肌后，心肌细胞凋亡率明显增加，给予CaN抑制剂环孢菌素（CsA）后，细胞凋亡率显著少于干预前(P<0.05)。H/R和Iso共同作用下，心肌CaN mRNA及蛋白表达水平均明显上调，同时p38 MAPK的活化状态p-p38 MAPK蛋白表达也显著增加，CsA干预后，CaN表达并无明显变化，但p-p38 MAPK蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论:CaN 促进缺氧/复氧和肾上腺素能刺激诱导心肌细胞凋亡，可通过活化p38 MAPK而发挥促凋亡的作用。     

高糖诱导大鼠系膜细胞CTGFmRNA的表达及机制探讨

目的： 观察高糖状态对肾小球系膜细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）及其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1（CREB1）的表达以及对系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）和细胞外基质蛋白表达的影响。方法: 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和p38 MAPK抑制剂SB203580干预,采用Western印迹检测p38 MAPK和CREB1及其磷酸化蛋白(p-p38 MAPK、p-CREB1)的表达,半定量RT-PCR检测CTGF和纤维黏连蛋白（FN） mRNA的表达。放免法测定细胞上清液中层黏连接蛋白(LN)和IV型胶原的分泌含量。结果: 与低糖组和低糖加甘露醇组相比,高糖组系膜细胞p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,CTGF和FN mRNA的表达增加,细胞上清液中FN和IV型胶原含量增加。SB203580能够明显抑制高糖培养系膜细胞p38 MAPK和CREB1的磷酸化,下调CTGF和FN mRNA表达,抑制细胞上清LN和Ⅳ型胶原的分泌。结论: p38 MAPK信号途径可能参与高糖诱导的肾小球系膜细胞CTGF的表达和细胞外基质的分泌。     

不可分型流感嗜血杆菌通过p38 MAPK和NF-κB依赖的方式上调IL-8的表达

目的：探讨不可分型流感嗜血杆菌（NTHi）致肺泡上皮细胞炎症反应的分子机制。方法：A549肺泡上皮细胞株与NTHi（感染复数：10）共孵育15 min、30 min后收集细胞,用Western blotting检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）的磷酸化;4 h后用流式细胞仪检测胞内NF-κB p65亚单位的表达。预先用p38 MAPK抑制剂（SB203580）和NF-κB抑制剂（PDTC）与A549细胞共孵育1 h,然后加入NTHi,24 h后收集上清,以酶联免疫吸附法检测白介素8（IL-8）的水平。结果： NTHi能迅速地诱导p38 MAPK通路的磷酸化。 NTHi刺激4 h后A549细胞胞内NF-κB p65的表达较与未加细菌组明显增加（P<0.05）。NTHi刺激A549细胞24 h后上清中的IL-8较未加细菌组显著增加,差异显著（P<0.05）。与细菌攻击组比较,阻断p38 MAPK或NF-κB通路,能显著地降低A549细胞生成IL-8（P<0.05）。结论：NTHi 以p38 MAPK和NF-κB依赖的方式诱导肺泡上皮细胞的炎症反应。     

新型大麻制剂O-1602和大麻二酚对DSS诱导的小鼠结肠炎的抗炎作用及其机制

目的:研究新型大麻类制剂O-1602和大麻二酚(CBD)对硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导的小鼠实验性结肠炎的抗炎作用,并通过测定p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化程度,探讨其可能的作用机制。方法:对C57BL/6小鼠给予含4%DSS的饮用水连续饮用7d,建立实验性结肠炎模型。造模期间分别给小鼠腹腔注射O-1602(5mg/kg)、CBD(1mg/kg)或p38MAPK抑制剂SB203580(5μmol/kg)。造模结束后用结肠炎评分系统对各组结肠炎局部情况进行评估;同时检测血浆中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1(CINC-1)的水平(ELISA法),以及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性,以评价各处理组结肠炎的炎症反应情况;采用Westernblotting法检测结肠组织p38及p-p38蛋白表达水平;免疫组化方法检测结肠G蛋白偶联受体55(GPR55)的表达。结果:O-1602和CBD能够改善小鼠实验性结肠炎的病理损害,降低血浆TNF-α、IL-6和CINC-1的水平以及肺组织MPO的活性(P<0.05);O-1602、CBD以及SB203580处理组结肠组织,p38磷酸化程度较结肠炎组显著降低(P<0.05);免疫组化提示小鼠结肠GPR55受体表达较少,主要分布在黏膜下层,结肠炎时GPR55表达变化不明显。结论:GPR55在小鼠结肠有较少表达,揭示O-1602和CBD能够减轻DSS诱导的小鼠结肠炎炎症反应,其作用机制可能与抑制p38MAPK信号通路有关。     

p38MAPK抑制剂对神经病理性疼痛大鼠脊髓TNF-α合成的影响

 摘要：目的：通过建立坐骨神经慢性压迫损伤模型,研究p38丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK,p38）与TNF-α在神经病理性疼痛发生与发展中的相互作用。方法：SD大鼠分5组：1）空白对照组,2）假手术组,3）CCI手术未治疗组,4）CCI手术生理盐水治疗组,5）CCI手术SB203580（p38抑制剂）治疗组。上述治疗组中,生理盐水或SB203580分别于术前1天、术后第1天,和术后第7天鞘内注射。各组大鼠分别于术后3、7、14天测定机械痛阈。采用Western blot和免疫组化方法测定脊髓中TNF-α含量及p38活化水平。结果：与假手术组相比,CCI手术后3、7、14天磷酸化p38（p-p38）水平明显增加（p<0.05）。外周神经损伤后引起机械性触诱发痛,并且使脊髓中TNF-α浓度增加（p<0.05）。预先或术后立即给予SB203580抑制p38活化可以减少脊髓TNF-α合成,从而有效缓解病理性疼痛(p<0.05)。结论：外周神经损伤后,作为信号转导通路之一的p38可能通过促进脊髓TNF-α合成,引发神经病理性疼痛。     

p38 MAPK在顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的:探讨p38 MAPK在顺铂诱导大鼠近端肾小管上皮细胞(RPTC)凋亡中的作用。方法:首先采用Western blot实验检测0、5、10和20μmol/L顺铂处理24 h对细胞凋亡的影响,确定最佳处理剂量;而后采用20μmol/L顺铂联合50 mg/L p38 MAPK抑制剂SB203580刺激RPTC,实验分为对照组、顺铂组及顺铂+SB203580(加入SB203580处理RPTC 1 h后再给予顺铂处理24 h)。采用相差荧光显微镜观察和流式细胞术分析顺铂处理后RPTC的凋亡情况;采用Ac-DEVD-AFC试剂盒检测RPTC裂解液中的caspase活性;Western blot实验检测p38、磷酸化p38、cleaved PARP和cleaved caspase-3等的蛋白水平;pH计检测顺铂处理后RPTC外环境pH值改变。结果:20μmol/L顺铂处理RPTC 24 h,可以明显诱导细胞凋亡;顺铂处理15 min后RPTC中p38 MAPK开始磷酸化并达到高峰。顺铂处理后12.08%的RPTC呈凋亡形态,具有增强的caspase活性,并且cleaved PARP和cleaved caspase-3水平明显升高(P0.05);p38 MAPK抑制剂SB203580可抑制p38的磷酸化,降低RPTC的凋亡率和caspase活性,并减少cleaved PARP和cleaved caspase-3的蛋白水平。同时,SB203580可逆转顺铂诱导的RPTC培养基pH值的改变。结论:p38 MAPK的磷酸化在顺铂诱导的RPTC凋亡中发挥作用。顺铂诱导RPTC凋亡后,可改变细胞外酸性环境,并可被p38 MAPK抑制剂SB203580所抑制。     

姜黄素降低Ⅲ型CP/CPPS模型鼠炎性反应因子的表达

目的研究姜黄素对Ⅲ型慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征(CP/CPPS)模型鼠炎性反应因子表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、CP/CPPS模型组(model)、姜黄素50及100 mg治疗组(cur-50 mg,cur-100 mg)和p38抑制剂组(SB203580),连续腹腔给药12 d后,real-time PCR检测前列腺组织中TNF-α、p38、COX-2的mRNA表达;免疫组化检测TNF-α,COX-2的蛋白表达;Western blot检测p38、p-p38和NF-κB蛋白的表达。结果 CP/CPPS模型组的NF-κB、p-p38、TNF-α和COX-2蛋白,TNF-α、COX-2和p38的mRNA表达较假手术组升高(P0.01);cur-100 mg组和SB203580组可显著缓解模型组的变化(P0.01);cur-100 mg组中的COX-2蛋白和mRNA均比SB203580组明显下降(P0.05);相较模型组,姜黄素2个组、SB203580组p-p38与NF-κB的表达呈正相关(P0.01)。结论姜黄素能够降低CP/CPPS模型鼠NF-κB、TNF-α和COX-2及p-p38等炎性反应因子的表达。     

mmLDL通过p38 MAPK通路上调小鼠肠系膜动脉ET受体

目的:探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(mm LDL)是否通过激活p38 MAPK炎症通路上调小鼠肠系膜动脉内皮素(ET)A型(ETA)和B型(ETB)受体。方法:将昆明小鼠分为正常对照组(尾静脉注射生理盐水)、mm LDL组(尾静脉注射mm LDL)、LDL组(尾静脉注射LDL)、mm LDL+SB 203580组(尾静脉注射mm LDL及腹腔注射p38 MAPK抑制剂SB 203580)和mm LDL+DMSO组(尾静脉注射mm LDL及腹腔注射DMSO)。微血管张力描记仪记录ETB受体激动剂角蝰毒素6c和ET-1引起肠系膜动脉收缩的量效曲线;RT-q PCR检测ETB受体、ETA受体和白细胞介素(IL-6)的m RNA表达;ELISA检测血清IL-6的水平;Western blot检测ETB受体、ETA受体、IL-6、p38 MAPK、p-p38MAPK、NF-κB和p-NF-κB的蛋白水平。结果:mm LDL引起ETB受体和ETA受体介导的血管收缩反应显著增强(P<0.01),ETB受体、ETA受体和IL-6的m RNA和蛋白表达显著增加(P<0.01),p-p38 MAPK和p-NF-κB蛋白水平显著升高(P<0.01),血清中IL-6水平显著升高(P<0.01);腹腔注射SB 203580抑制了mm LDL的作用。mm LDL引起的IL-6血清浓度升高分别与ETB受体和ETA受体介导的最大收缩率呈正相关。结论:mm LDL通过激活p38 MAPK通路及下游NF-κB转录因子,提高炎症因子IL-6血清水平,增加小鼠肠系膜动脉IL-6、ETA受体和ETB受体表达,增强ETA受体和ETB受体介导的血管收缩功能。     

Tumor Necrosis Factor-Like Weak Inducer of Apoptosis (TWEAK) Mediates p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Activation and Signal Transduction in Peripheral Blood Mononuclear Cells from Patients with Lupus Nephritis

Forty-two patients with systemic lupus erythematosus (SLE), including 26 patients with renal damage and 16 without, and 20 healthy controls were included in the study. The isolated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were treated with a p38 inhibitor (SB203580) or anti-tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis (TWEAK) mAb, with or without phytohemagglutinin/phorbol myristate acetate (PHA/PMA) stimulation. Western blot experiments were used to evaluate the protein expression of TWEAK and p38 MAPK in PBMCs .Next, the contents of interleukin-10 (IL-10) and monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) in the supernatant were measured by ELISA. The results showed that expression of TWEAK protein in PBMCs from lupus nephritis patients was significantly higher than that from SLE patients without renal damage and healthy controls. PHA/PMA simulation could upregulate the productions of TWEAK and p-p38MAPK in PBMCs from patients with SLE. Anti-TWEAK mAb treatment downregulated both TWEAK and p-p38 MAPK expression in PBMCs, as well as IL-10 and MCP-1 in the supernatant; SB203580 had the same effect on cytokine production in PBMC, but had no effect on the expression of TWEAK. Our results suggested that TWEAK–p38 MAPK–IL-10, MCP-1 signaling pathway in PBMC played an important pathogenic role in lupus nephritis.