p38 MAPK抑制剂SB203580对雨蛙肽诱导的小鼠胰腺组织损伤的影响

 目的：探讨p38 MAPK抑制剂SB203580（SB）对雨蛙肽（caerulein,CAE）诱导的小鼠离体胰腺组织损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法：分离小鼠离体胰腺组织后培养4 h,用CAE(10-5mol/L)刺激,加用或不加用SB (10-5mol/L)进行干预,以生理盐水（NS）作为对照。在刺激1 h和4 h后测定胰腺组织活力（MTT）、培养上清液中淀粉酶和脂肪酶活性（生化法）以及白细胞介素6（IL-6）和细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1（CINC-1）的水平（ELISA法）;同时测定胰腺组织中热休克蛋白60（HSP60)和HSP70蛋白水平（ELISA法）,并用Western blotting测定胰腺组织p38及磷酸化p38 （p-p38）MAPK蛋白的表达。结果：CAE刺激后胰腺组织活力与NS组比较有所下降,尤其在刺激后4 h明显降低（P<0.05）;CAE刺激后1 h,离体胰腺组织培养上清液中淀粉酶、脂肪酶、IL-6和CINC-1水平较NS组均明显升高（P<0.05）;胰腺组织中HSP60、HSP70、p38及p-p38 MAPK蛋白的表达较NS组有所升高（P<0.05）,而SB可不同程度干预CAE引起的这些指标的改变。结论：CAE对离体胰腺组织具有损伤作用,SB可减轻CAE造成的胰腺组织的损伤,其机制可能与其对p38 MAPK抑制进而使炎症反应受到抑制有关;HSP60和HSP70的变化是因为炎症反应减轻而使细胞应激程度降低所致,还是失去了p38 MAPK的调控作用所致,还有待进一步研究。     

LPS对鼠肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1表达及其功能的影响

目的：通过观察脂多糖（LPS）刺激对肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1 mRNA表达和功能的影响，以探讨急性肺损伤肺水异常代谢的机制。方法： 在体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞（RLMEC），分别使用浓度为100 μg/L、1 mg/L、10 mg/L的LPS与之孵育4 h、12 h、24 h后, 应用氚水掺入法测定RLMEC内氚水的信号强度，并用RT-PCR法测定AQP-1 mRNA的表达。结果： LPS刺激组氚水的信号强度显著低于对照组（P<0.01）；同时LPS刺激组AQP-1 mRNA的表达显著低于对照组。结论： LPS刺激RLMEC AQP-1 mRNA表达和摄水功能下降，提示AQP-1在急性肺损伤时可能与肺水代谢异常有关。     

新型大麻制剂O-1602和CBD减轻小鼠 实验性急性胰腺炎的机制研究

目的: 观察2种新型大麻类制剂O-1602和大麻二酚(CBD)对雨蛙肽(CAE)诱导的小鼠急性胰腺炎(AP)的抗炎作用,并通过其对热休克蛋白60(HSP60)表达的影响,探讨其可能的机制。方法: 以CAE腹腔注射(50 μg·kg^-1·h^-1,共6次)复制小鼠AP模型,对照组用生理盐水(NS)替代CAE;给AP小鼠腹腔注射O-1602或CBD作为治疗组。组织学检查评估不同处理组胰腺组织形态学改变;测定血浆淀粉酶及脂肪酶活性(生化法)、血浆细胞因子如肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)的水平(ELISA法),以及肺脏中髓过氧化物酶(MPO)活性的变化(生化法);同时,用 real-time PCR和Western blotting测定胰腺组织热休克蛋白(HSP60) mRNA和蛋白的表达特点。结果: AP组小鼠胰腺组织出现明显损伤及炎症表现;此类表现在AP+O-1602及AP+CBD治疗组得到明显改善。AP组血浆淀粉酶及脂肪酶活性、TNF-α及IL-6水平、肺脏MPO水平较NS组均有显著升高(P<0.05);而在AP+O-1602及AP+CBD组,这些指标均较AP组明显降低(P<0.05)。同时,胰腺组织HSP60 mRNA和蛋白的表达量在AP组均降低(P<0.05), O-1602或CBD处理可一定程度提高HSP60的表达(P<0.05)。结论: CAE可成功诱导小鼠AP的发生,并伴有一定程度的全身炎症反应,O-1602和CBD可改善胰腺局部损伤程度及全身炎症程度,其机制可能与大麻类物质对炎症介质、细胞因子的抑制以及提高细胞保护因子HSP60的表达有关。     

P38MAPK在脂多糖引起的腹膜间皮细胞损伤中的作用

目的探讨脂多糖(LPS)引起人腹膜间皮细胞(HPMC)损伤中分泌MCP-1以及LPS、P38MAPK、MCP-1三者之间可能存在的关系。方法体外培养永生化人腹膜间皮细胞(HPMC),随机分为正常对照组、LPS作用24 h组、LPS作用48 h组、特异性P38MAPK阻断剂SB203580+LPS作用24 h组、SB203580+LPS作用48 h组;Western blot法检测各组MCP-1和磷酸化P38MAPK蛋白表达水平;Real-time PCR法检测各组MCP-1 mRNA表达水平。结果 1.10 mg/L LPS刺激使HPMC的MCP-1 mRNA和蛋白质表达均较正常对照组增加(P0.05)。10 mg/L LPS作用48 h后MCP-1 mRNA和蛋白质表达水平均高于24 h组(P0.05);Western blot结果显示,与正常组对比,10 mg/L LPS作用使磷酸化P38MAPK蛋白水平明显升高(P0.05)。10 mg/L LPS作用48 h与作用24 h对比升高不明显(P0.05);经5μmol/L SB203580预处理30 min后再予以LPS刺激与单纯LPS刺激相比较,MCP-1蛋白质和mRNA均明显降低(P0.05);SB203580预处理后再予以LPS分别刺激24 h和48 h 2组相比较,MCP-1蛋白及mRNA水平差异不明显(P0.05)。结论 LPS通过磷酸化P38MAPK,导致MCP-1表达水平升高,诱发腹膜间皮细胞的损伤。     

热休克蛋白在结肠炎和胰腺炎时的表达特点及大麻类物质WIN和O-1602的影响

目的: 观察几种热休克蛋白(heat-shock proteins, HSPs)在实验性结肠炎和实验性急性胰腺炎炎症组织中表达的变化,同时研究大麻经典受体1和受体2激动剂WIN55和212-2(WIN),以及新型受体GPR55激动剂O-1602对HSPs表达的影响及可能的意义。方法: 用C57/BL小鼠,通过连续饮用7 d 4%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)复制结肠炎模型;通过腹腔注射雨蛙肽(cerulein,50 μg/kg,每小时1次,连续 6次)复制急性胰腺炎模型。同时设各模型组及WIN、O-1602治疗组,检测不同处理组小鼠结肠和胰腺组织形态学改变、血浆促炎细胞因子包括白细胞介素-6(IL-6)及细胞因子诱导的中性粒细胞化学趋化因子-1(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-1,CINC-1) 的水平和淀粉酶活性,同时用免疫组化方法检测结肠和胰腺组织HSPs(HSP27、HSP60、和HSP70)的表达特点。结果: 在DSS诱导的小鼠结肠炎及 cerulein 诱导的小鼠胰腺炎模型,其结肠和胰腺组织分别出现典型的炎症及损伤,血浆促炎因子水平升高(P<0.05),在胰腺炎小鼠还有血浆胰淀粉酶活性的升高。在结肠炎症组织,HSP27表达明显升高,HSP60和HSP70表达降低;WIN具有一定的抗炎作用,并能显著提高结肠炎结肠组织HSP27和HSP70的表达(P<0.05)。在急性胰腺炎的胰腺组织,HSP27和HSP70表达升高,HSP60表达有所降低; O-1602有一定的抗炎作用,也能提高HSP70的表达,但总体来看,对这3种HSPs的影响均不太明显(P>0.05)。结论: DSS和cerulein分别诱导小鼠结肠炎和急性胰腺炎的发生;在这2种模型的炎症组织中HSPs的表达变化不一。大麻类物质WIN和O-1602均有一定的抗炎作用,也在一定程度上提高部分HSPs的表达。HSPs的高表达是否与大麻类物质的抗炎作用有关值得进一步的研究。     

α-MSH对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA 表达的影响

目的：观察α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达的影响，探讨α-MSH拮抗LPS的作用机制。方法：用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）的方法检测LPS诱导体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞CD14和TLR4 mRNA表达水平和给予α-MSH后对CD14和TLR4 mRNA表达的影响。结果：正常静息小鼠腹腔巨噬细胞只表达少量的CD14和TLR4 mRNA,给予LPS刺激后6 h，两者表达明显强于正常对照（P<0.01），并且其表达量随着LPS刺激时间的增加维持在高水平，24 h达到峰值，在48 h CD14 mRNA的表达降到正常水平，而TLR4 mRNA的表达仍然维持在高水平。在LPS刺激的同时给予α-MSH，CD14和TLR4 mRNA的表达则明显低于LPS组（P<0.05），而且α-MSH这种效应与其使用浓度有关，0.1 nmol/L α-MSH不影响LPS诱导的CD14和TLR4 mRNA的表达，而当α-MSH的浓度达到1、10、100 nmol/L则能显著影响CD14和TLR4 mRNA的表达（P<0.05），但各个浓度组之间的作用没有明显差别（P>0.05）。结论：α-MSH抗LPS的效应可能与其下调LPS信号转导通路关键受体CD14和TLR4 mRNA的表达有关，从而干扰LPS跨膜信号转导，阻碍巨噬细胞活化。     

催乳素刺激Jurkat细胞热休克蛋白90的表达及地塞米松的干预作用

目的：探讨催乳素刺激下Jurkat细胞的热休克蛋白（HSP90）的表达状况以及地塞米松对这种表达的影响。方法：以四组不同浓度催乳素（25、50、100、200ng/ml）刺激Jurkat细胞,采用RT-PCR和Western blot检测刺激前后HSP90的表达水平;另将四种不同浓度的地塞米松（10^-9-10^-6mol/L）和高浓度催乳素（100ng/ml）与Jurkat细胞共同孵育,同法检测地塞米松干预后HSP90的表达水平。结果：所有浓度催乳素刺激Jurkat细胞在mRNA和蛋白质水平表达的HSP90均显著高于空白对照组（P〈0.05）,且表达水平随刺激浓度增加而升高,但当浓度高于100ng/ml以上时升高不明显。加入不同浓度地塞米松和高浓度催乳素孵育的Jurkat细胞表达HSP90水平与对照组比较有显著下降（P〈0.05）,且随地塞米松浓度升高而降低。结论：催乳素可刺激Jurkat细胞HSP90的表达,而地塞米松可抑制此效应且有剂量依赖关系。     

急性胰腺炎大鼠胰、肝组织IκBα的表达及中药新清胰汤的影响

目的:研究核因子κB抑制蛋白（IκBα）在急性胰腺炎（AP）大鼠胰腺和肝脏组织中的表达及中药新清胰汤Ⅱ号［Qing Yi Tang Ⅱ(QYT)］的影响。 方法:70只SD大鼠随机被分为正常对照组（n=10）、AP＋QYT组（n=30）、AP＋生理盐水（NS）组（n=30）。经胰胆管逆行注射4%去氧胆酸钠复制AP模型；给予QYT（AP+QYT组）或NS（AP+NS组）灌胃，每5 h重复1次。造模后1 h、4 h和10 h分批处死动物。荧光定量RT-PCR、Western blotting分别检测胰腺和肝脏组织IκBα在mRNA水平和蛋白水平的表达，后者包括磷酸化形式和非磷酸化形式；ELISA法检测血清白三烯C4（LTC4）浓度；HE染色观察胰腺和肺组织病理学变化。 结果:AP大鼠肝脏组织中IκBα mRNA 表达在各个时点均显著高于正常对照组（P<0.01，P<0.05）;AP+QYT组显著低于AP+NS组(P<0.05)。与IκBα的mRNA表达相一致，肝脏和胰腺组织中IκBα蛋白表达（无论其磷酸化形式和非磷酸化形式）在AP大鼠均高于正常对照组（P<0.05）；AP+NS组IκBα蛋白磷酸化形式表达在观测时间内增高；QYT可抑制该形式的表达（P<0.05）。AP大鼠血清LTC4浓度明显高于正常对照组，呈时间依赖性;AP+QYT组血清LTC4浓度明显低于AP组（P<0.05）。 病理学检查见AP大鼠胰腺组织水肿、出血、肺间质水肿、出血，炎症细胞大量浸润，随AP的病程而加重；QYT治疗组的病理变化较轻。 结论: QYT可通过抑制 IκBα的磷酸化等机制减轻AP时局部和全身的炎症反应。     

HO-1在CCK-8减轻脂多糖所致的急性肺损伤中的作用

目的： 探讨血红素氧合酶（HO）-1在八肽胆囊收缩素（CCK-8）减轻脂多糖（LPS）所致急性肺损伤（ALI）中的作用。方法: 将大鼠随机分为5组：正常对照组、LPS组、CCK-8+LPS组、LPS+Hm（氯血红素，CO供体）组、LPS+ZnPP（锌原卟啉，HO-1特异性阻断剂）组。各组给药后2 h、6 h、12 h行支气管肺泡灌洗、检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中中性粒细胞（PMN）数目；进行肺组织的形态学观察；测定肺组织中丙二醛（MDA）含量和HO-1蛋白活性；应用RT-PCR和Western blotting技术检测给药后6h肺组织中HO-1 mRNA和蛋白的表达情况。结果: LPS组肺组织出现损伤性变化，同时BALF中PMN数目、肺组织中MDA含量、HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达均高于相应对照组（均P<0.05）；CCK-8+LPS和LPS+Hm组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量低于相应LPS组，而肺组织中HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达均高于相应LPS组（均P<0.05）；LPS+ZnPP组肺组织损伤程度、BALF中PMN数目和肺组织中MDA含量分别高于相应LPS组，而肺组织中HO-1蛋白活性、HO-1 mRNA和蛋白的表达分别低于相应LPS组（均P<0.05）。结论: CCK-8可部分通过HO-1介导的抗氧化、抑制PMN聚集等效应来发挥减轻LPS所致的肺损伤作用。     

环境内分泌干扰物双酚A对小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖和凋亡的影响

 目的：探讨环境内分泌干扰物双酚A（BPA）对小鼠甲状腺原代培养细胞增殖和凋亡的影响。方法：取雌性BALB/c nu/nu小鼠甲状腺组织,采用胶原酶I/中性蛋白酶联合消化并进行滤泡上皮细胞培养,Western blotting检测甲状腺球蛋白表达对细胞进行鉴定。采用不同浓度的BPA干预稳定培养48 h的小鼠甲状腺原代培养的滤泡上皮细胞,作用24 h后,光学显微镜观测干预前后细胞生长状态的变化,流式细胞术分析细胞增殖和凋亡,real-time PCR法和免疫细胞化学染色法测定干预前后肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1（TRAIL-R1） mRNA和蛋白的表达变化。结果：原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞随BPA刺激浓度的增加,生长状态呈现先促进后抑制的趋势;0.01～0.1 μmol/L BPA作用24 h后,细胞增殖呈剂量依赖性增长,0.1 μmol/L BPA可显著刺激细胞增殖（P<0.05）,而1 μmol/L BPA刺激后则表现为细胞增殖水平显著下降（P<0.05）;0.1 μmol/L BPA刺激后凋亡指数减低（P<0.05）;0.1 μmol/L和1 μmol/L BPA刺激后TRAIL-R1 mRNA表达均显著下调（均P<0.05）,蛋白表达与mRNA表达结果趋势一致。结论：低、中浓度BPA可刺激原代培养的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡,而高浓度BPA对细胞主要表现为毒性损害作用。BPA对细胞凋亡的影响可能与TRAIL-R1相关途径有关。     

地塞米松预处理减轻大鼠再灌注性心律失常的实验研究

目的： 探讨地塞米松预处理对大鼠再灌注性心律失常的作用及机制。方法: SD大鼠随机分成地塞米松组、对照组，分别予地塞米松和生理盐水预处理。预处理后构建缺血再灌注损伤动物模型，观察再灌注期间心律失常的发生；Western blotting法和免疫组化法观察心肌HSP72表达变化；测定心肌MDA、SOD、CAT、GSH-Px水平及心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果: 与对照组相比，地塞米松组室性心律失常的积分减少（P<0.01）、持续时间缩短（P<0.05）；HSP72的表达增加（P<0.05）；MDA降低（P<0.01），SOD、CAT、GSH-Px均升高（P<0.05）；Na+-K+-ATP酶增加（P<0.01），Ca2+-Mg2+-ATP酶无明显变化（P>0.05）。结论: 地塞米松预处理减少再灌注室性心律失常，其机制可能与其上调HSP72、Na+-K+-ATP酶、抗氧化酶的表达及抑制脂质过氧化反应有关。     

RNAi沉默NF-κB p65对小鼠巨噬细胞细胞因子表达的影响

目的: 探讨RNA干扰(RNAi)技术在抑制NF-κB p65表达、调控LPS活化后巨噬细胞细胞因子表达中的应用。方法: 利用阳离子脂质体将NF-κB p65小干扰RNA(siRNA)瞬时转染入Ana-1细胞,RT-PCR及Western blotting法检测其沉默效率,ELISA法检测LPS(1 mg/L)刺激下0 h、4 h、12 h和24 h Ana-1细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10浓度。结果: NF-κB p65 siRNA转染24 h后,NF-κB p65在基因水平及蛋白水平表达均被明显抑制(P<0.05)。RNA干扰组Ana-1细胞培养上清中细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达在相应时点内均较对照组明显降低(P<0.05),IL-10表达显著升高,在12 h和24 h差异显著(P<0.05)。结论: 体外实验初步证实RNAi技术能有效沉默小鼠巨噬细胞NF-κB p65 基因的表达,下调其下游调控的促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及上调抑炎症细胞因子IL-10的表达,从而抑制过度的炎症反应。     

敲减TLR4表达减少LPS诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子

目的:研究Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)诱导的胰腺腺泡AR42J细胞分泌炎症因子的影响。方法:用LPS处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,real-time PCR和Western blot测定细胞中TLR4表达的变化。将携带TLR4 siRNA的慢病毒感染AR42J细胞,给予LPS处理,real-time PCR和Western blot检测干扰效率,MTT法检测细胞活力,二硝基苯肼法测定乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率,ELISA法检测细胞分泌白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,硫代巴比妥酸法测定上清中丙二醛(MDA)的含量,用黄嘌呤氧化法测定上清中超氧化物歧化酶(SOD)活力,比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性。结果:LPS处理后的AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平明显升高(P0.01)。携带TLR4 siRNA的慢病毒可以明显下调LPS刺激下AR42J细胞中TLR4的mRNA和蛋白水平(P0.01)。LPS处理后的AR42J细胞活力降低,LDH漏出率升高,细胞分泌的IL-1β和TNF-α增多,培养上清中MDA含量升高,SOD、GSH-Px和CAT活性降低(P0.01)。敲减TLR4表达可以提高LPS刺激下AR42J细胞的活力,降低细胞的LDH漏出率及分泌IL-1β和TNF-α的水平,减少细胞培养液中MDA的含量,提高SOD、GSH-Px和CAT的水平(P0.01)。结论:LPS诱导胰腺腺泡AR42J细胞TLR4表达,敲减其表达可以减少LPS诱导的AR42J细胞分泌IL-1β、TNF-α等炎症因子,减轻氧化损伤。     

谷氨酰胺诱导热休克蛋白70表达对LPS休克大鼠血管反应性的影响

目的： 观察注射谷氨酰胺（Gln）诱导热休克蛋白（HSP）表达对LPS休克大鼠血管反应性的影响。方法： 健康雄性SD大鼠，随机分成对照组(n=8);LPS休克组（LPS 10 mg·kg-1 iv,n=8）;Gln 治疗组(LPS注射前1 h Gln 0.75 g·kg-1 iv,n=8)。注射LPS 6 h后静注去氧肾上腺素（PE,0.5-2.5 μg·kg-1）,观察各组大鼠平均动脉压的增加百分比。注射LPS后90 min、360 min测定血清TNF-α、IL-6和血浆MDA含量。体内实验结束后，取大鼠胸主动脉环做离体张力实验，建立PE的剂量-反应曲线并计算Emax、EC50值。检测心脏、主动脉HSP70的表达。结果： LPS休克组动物平均动脉压的平均增长率较对照组降低51.4%（P<0.05），Gln组平均动脉压对PE的反应较LPS休克组提高17.5%(P<0.05)。LPS休克组胸主动脉环对PE收缩反应的Emax和EC50显著低于对照组（P<0.05），而在Gln组的血管反应性显著高于LPS休克组(P<0.05)。Gln组心脏、主动脉HSP70的表达量显著高于LPS休克组（P<0.05），而TNF-α、IL-6及MDA水平均显著低于LPS休克组（P<0.05）。结论: 谷氨酰胺通过诱导HSP70的表达，减少炎性介质生成和抑制体内过氧化物产生，提高LPS休克血管低反应性，可能有助于休克病人的治疗。     

小檗碱对人高转移肺癌细胞与脐静脉内皮细胞黏附的影响

目的： 探讨小檗碱对人高转移肺癌细胞株PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVECs）黏附的影响及其机制。方法：用MTT法检测不同浓度（2.5-40 mg/L）的小檗碱对HUVECs增殖的影响,用2.5、5和10 mg/L小檗碱分别处理人高转移肺癌细胞株PG细胞6、12和24 h, 用虎红染色法测定小檗碱对PG细胞与HUVECs黏附能力的影响, 用荧光抗体染色法测定小檗碱对PG细胞表面黏附分子CD44s表达的影响, 用双光子各向异性度成像系统观察小檗碱对PG细胞膜流动性的影响。结果：（1）2.5、5和10 mg/L小檗碱作用HUVECs 6、12和24 h后对其生长无影响。（2）用不同浓度小檗碱处理PG细胞6、12和24 h后,与TNF-α刺激后的HUVECs相互作用后,能够显著抑制其黏附率,且呈浓度依赖性(P<0.05, P<0.01)。（3）各剂量组的小檗碱均能使PG细胞表面的CD44s分子表达增高（P<0.05或P<0.01）。（4）小檗碱作用PG细胞24 h后能够抑制PG细胞膜的流动性,且随药物浓度的升高这种抑制作用增强。结论：小檗碱对PG细胞与HUVECs的黏附具有抑制作用,可能与小檗碱增加PG细胞表面黏附分子表达、降低其细胞膜流动性有关。     

人硫氧还蛋白对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax的影响

目的:探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及人硫氧还蛋白对凋亡及其相关基因的影响。方法:健康清洁级Wistar大鼠84只,随机分为对照组、肺缺血再灌注1h、3h、5h组和人硫氧还蛋白干预1h、3h和5h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用电子显微镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡的变化和凋亡指数,免疫组化技术检测肺组织细胞Bcl-2、Bax及凋亡信号调节激酶1(ASK1)蛋白表达的变化。结果:肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数、ASK1、Bcl-2和Bax蛋白表达均显著高于对照组(均P0.01),超微结构呈严重损伤性改变。人硫氧还蛋白干预组ASK1、Bax的表达显著下降(均P0.01),Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比值显著上调(P0.05或P0.01),肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组(P0.01)。肺组织细胞凋亡指数分别与ASK1、Bax蛋白之间均呈显著正相关(分别r=0.775、r=0.814;均P0.01);与Bcl-2/Bax蛋白呈显著负相关关系(r=-0.275,P0.05)。结论:Bcl-2/Bax比值下调启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。人硫氧还蛋白可能通过下调ASK1的表达,提高Bcl-2/Bax的比值减少肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

纤维蛋白对大鼠脑血管内皮细胞白细胞介素6表达的影响

目的：观察纤维蛋白对离体培养的大鼠脑血管内皮细胞白细胞介素6（IL-6）转录及蛋白水平表达的影响。方法：大鼠脑血管内皮细胞分离后培养，加入不同浓度的纤维蛋白，通过real-time PCR检测脑血管内皮细胞中IL-6转录水平，应用酶联免疫方法(ELISA)定量检测培养基和细胞裂解液中的IL-6水平。结果：加入不同浓度（0.03 g/L、0.1 g/L、0.3 g/L和1.0 g/L）的纤维蛋白24 h后，1.0 g/L纤维蛋白组的培养基中IL-6水平显著增高（P<0.01）；然后加入1.0 g/L纤维蛋白2、4、8、24 h，培养基中的IL-6水平均显著升高（P<0.05）；而加入不同浓度的胶原蛋白不引起IL-6水平的明显变化；real-time PCR结果显示，脑血管内皮细胞IL-6 mRNA的上调呈现出剂量和时间依赖性增加。结论：纤维蛋白是血管内皮细胞活化剂，可以上调大鼠脑血管内皮细胞中IL-6的表达，在蛋白和mRNA均呈现出剂量和时间依赖性增加。