丙泊酚通过靶向调控PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞生长

探讨丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法 在体外,丙泊酚10 mg/mL分别与乳腺癌MCF-7和BT474细胞系共孵育分为对照组和丙泊酚组。PI3K过表达质粒经丙泊酚处理后转染MCF-7细胞分为对照组、丙泊酚+PI3K组、PI3K组,分别检测细胞的生存、侵袭及凋亡情况。Western blot检测PI3K/AKT/ mTOR信号通路相关蛋白表达水平。在体内构建MCF-7小鼠模型,免疫组化和TUNEL实验用于检测乳腺癌细胞的生长和凋亡情况。结果 丙泊酚显著抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭能力（P＜0.05）。Western blot和细胞凋亡实验结果显示,丙泊酚通过降低Bcl-2和Bcl-w在乳腺癌细胞中的表达水平来诱导细胞凋亡（P＜0.05）。丙泊酚降低了乳腺癌细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)和mTOR蛋白表达水平（P＜0.05）。对P13K进行过表达处理后显示,PI3K过表达逆转了丙泊酚对MCF-7细胞的生长和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。体内实验表明,丙泊酚治疗明显抑制MCF-7小鼠模型中的肿瘤生长,促进了细胞凋亡（P＜0.05）。结论 丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭,促进细胞凋亡     

沉默转导重排基因对抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨转导重排基因(rearranged during transfection,RET)在乳腺癌中的作用机制.方法 选取2015年6月至2016年6月在北京大学深圳医院确诊的乳腺癌女性患者,采用实时荧光定量PCR对60例乳腺癌组织和20例癌旁组织中RET mRNA的相对表达量进行检测;经RET-siRNA转染乳腺癌细胞株MCF-7和乳腺癌内分泌耐药细胞株 MCF-7/Aro 后,MTT 检测细胞增殖作用,Transwell 细胞迁移实验评价细胞迁移能力, Western-blot和RT-PCR检测RET及磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、重组人丝裂原活化激酶(MEK)1和MEK2的相对表达情况.结果 乳腺癌组织中RET mRNA的相对表达量高于癌旁组织(2.70 ± 1.37 vs.1.29 ± 0.51),差异有统计学意义(P<0.05).沉默 RET 后,MCF-7和MCF-7/Aro增殖、迁移能力受抑制,PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达量下调.结论 RET-siRNA能有效抑制RET基因的表达,抑制乳腺癌细胞增殖侵袭,其作用机制可能是通过下调PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白,进而抑制乳腺癌细胞增殖.     

干扰CXCR4基因抑制胰腺癌经典Wnt通路活化的体外实验研究

目的观察CXCR4 shRNA转染胰腺癌细胞后经典Wnt通路的活性变化.方法构建CXCR4 shRNA表达载体转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,通过Realtime-PCR、WesternBlot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;通过PGL3-OT/OF荧光素酶检测方法观察CXCR4基因沉默后对胰腺癌Wnt/β-catenin经典通路活性的影响,并通过Realtime-PCR、Western Blot实验观察CXCR4 shRNA对Wnt/β-catenin通路下游靶基因的影响.结果特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70%以上,同时,特异性CXCR4干扰后能够显著抑制PGL3-OT转染后的荧光素活性（P〈0.05）以及Wnt/β-catenin下游靶基因的mRNA及蛋白的表达.结论CXCR4基因沉默能抑制Wnt/β-catenin经典通路在胰腺癌中的活性,阻遏Wnt/β-catenin通路下游靶基因表达,为CXCR4作为胰腺癌治疗的分子靶点提供依据.     

RNA干扰沉默CXCR4基因对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨RNA干扰质粒靶向沉默CXCR4基因表达,对人肝癌细胞增殖和侵袭作用的影响及其机制。方法检测不同分化程度的肝癌细胞株CXCR4表达程度。将CXCR4干扰质粒转染肝癌细胞HepG2,经G418筛选出稳定抑制细胞,使用Western blotting和Real time RT-PCR验证干扰质粒对CXCR4基因的靶向沉默效率。MTT法和Transwell小室试验检测CXCR4基因沉默后肝癌细胞的增殖能力和侵袭能力。Western blotting检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,免疫荧光检测MMP-2在细胞内表达。结果不同分化程度的肝癌细胞均有CXCR4表达,其中HepG2细胞表达最强。通过RNA干扰技术靶向沉默CXCR4基因,可高效、稳定地抑制CXCR4表达。CXCR4基因靶向沉默后明显抑制肝癌细胞增殖和侵袭。Western blotting提示CXCR4基因靶向沉默导致MMP-2蛋白表达明显下调。结论 CXCR4基因沉默可以抑制肝癌细胞增殖和侵袭,可能与其抑制侵袭相关分子MMP-2有关,提示CXCR4可能是肝癌治疗的一个有效靶点。     

靶向沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响

目的利用miRNA靶向沉默p65基因,观察其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。方法以脂质体LipofectamineTM2000为载体,将针对特异靶点p65基因的miRNA转染入MDA-MB-231细胞。RT-PCR和Western blot法检测p65 mRNA和蛋白表达的变化;MTT法检测细胞增殖;流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关因子表达的变化。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示,p65miRNA转染组p65 mRNA及蛋白表达量较对照组显著下降(P<0.05);MTT检测结果显示,沉默p65基因后,细胞出现了生长抑制现象;FCM检测结果发现,p65miRNA转染组细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。Western blot进一步检测发现,转染组细胞中caspase-3的前体蛋白条带变细,裂解片段条带加深;PARP蛋白出现裂解片段。结论 miRNA靶向沉默p65基因可抑制人乳腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,推测p65基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。     

siRNA抑制人乳腺癌KLK6基因表达的实验研究

目的探讨siRNA沉默KLK6基因表达对乳腺癌细胞生长的抑制作用及其机制,为乳腺癌的基因诊断和治疗提供理论依据。方法针对KLK6 mRNA序列设计合成siRNA,构建2个重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6和PGCsilen-cerTMH1/GFP/Neo/Non;将重组质粒导入乳腺癌MCF-7细胞株,G418筛选获得稳定转染的细胞株;实验分为脂质体对照、阴性质粒转染对照及KLK6 siRNA重组质粒转染组,实时荧光定量PCR法检测KLK6 mRNA的表达的变化,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测量细胞生长情况。结果测序证实表达载体构建成功,在稳定转染重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6的乳腺癌MCF-7细胞株中,KLK6 mRNA抑制率(76%)明显高于阴性质粒对照组(2.7%),MCF-7细胞增殖活性显著低于阴性对照组和脂质体对照组。结论重组质粒PGCsilencerTMH1/GFP/Neo/KLK6可抑制乳腺癌细胞中KLK6基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的生长。     

miR⁃1301对肝细胞肝癌增殖的影响及机制研究

目的：明确miR?1301在肝细胞肝癌组织以及细胞系中的表达情况,并探讨miR?1301对肝癌细胞增殖的影响及可能机制。方法：实时定量PCR检测肝癌、癌旁组织及肝癌细胞系中miR?1301的表达水平,并在肝癌细胞中转染miR?1301模拟物或抑制物,用CCK?8法和平板克隆法检测其对肝癌细胞增殖活性的影响;通过蛋白质印迹（Western blot）检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（p?AKT、AKT）蛋白的表达情况。结果：miR?1301在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达水平明显低于对应的癌旁组织和正常肝细胞。实时定量PCR证实转染了miR?1301模拟物或抑制物后,miR?1301的表达量明显升高或降低（P＜0.01）。 与对照组相比,降低miR?1301的表达能明显促进肝癌细胞Hep3B的增殖活性,差异有统计学意义（P＜0.05）;而过表达miR?1301则显著抑制Huh7细胞的生长,差异有统计学意义（P＜0.05）。 此外,miR?1301可显著抑制PI3K/AKT信号通路的活性。结论：miR?1301在肝细胞肝癌中低表达,并抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与miR?1301抑制PI3K/AKT通路的活性有关。     

shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对乳腺癌血管生成潜力的影响

目的 研究shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因对人乳腺癌细胞株诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响.方法 通过质粒shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR、Western-blot检测3株人乳腺癌细胞的CXCR4 mRNA及其蛋白的表达;应用人乳腺癌细胞株与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察人乳腺癌细胞株通过shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响.结果 质粒shRNA-CXCR4作用于3株人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435S、MCF-7后能明显抑制其CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平:对乳腺癌细胞诱导的人脐静脉血管内皮细胞HUVEC形成管腔样结构的能力有显著的抑制作用(P<0.05).结论 shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后能明显抑制人乳腺癌细胞诱导管腔形成能力.     

RNA干扰用于柯萨奇病毒B3感染治疗作用研究

目的研究观察自行构建的siRNA表达载体对柯萨奇病毒B3（CVB3）感染的潜在治疗作用。方法以CVB3聚合酶编码区基因序列为靶点,构建发夹型siRNA真核表达载体pGCsi—U6／GFP／P及与CVB基因组序列无关的阴性对照pGCsi—U6／GFP／N。利用脂质体转染进入Hela细胞后,用CVB3毒株进行攻击,观察感染后Hela细胞病变情况,并用RT—PCR法检测细胞培养上清中的CVB3负链RNA水平。结果构建的表达质粒pGCsi—U6／GFP／P在Hela细胞能够正确表达,其表达产物能够使CVB3基因沉默,并间接抑制了CVB3的复制。结论本实验成功构建了能够抑制CVB3的发夹状siRNA表达质粒,该质粒具有增强细胞抗CVB3感染的能力。     

miR-1275通过靶向〖STBX〗IGF 1R〖STBZ〗基因对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

【摘要】目的 探讨miR 1275靶向胰岛素样生长因子1受体（IGF 1R）对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 通过在线生物信息学软件预测miR 1275和IGF 1R的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。Western blot检测转染miR 1275 模拟物（mimics）或抑制物（inhitior）后的鼻咽癌HONE 1细胞IGF 1R表达。MTT法、流式细胞术及Western blot检测miR 1275/IGF 1R分子轴对HONE 1细胞增殖、凋亡及蛋白激酶B（AKT）、磷酸化的蛋白激酶B（p AKT）、细胞增殖核抗原( PCNA)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase 3）表达的影响。结果 HONE 1细胞转染miR 1275 mimics后,miR 1275表达明显升高,细胞增殖活力明显降低,凋亡率明显升高,p AKT和PCNA表达明显降低,cleaved caspase3表达明显升高（P＜005）。miR 1275可靶向作用于IGF 1R并下调其表达。抑制IGF 1R表达可明显降低HONE 1细胞增殖活力,促进细胞凋亡,下调p AKT和PCNA,上调cleaved caspase3表达（P＜005）。抑制miR 1275和IGF 1R表达可逆转IGF 1R对细胞增殖、凋亡及p AKT、PCNA和cleaved caspase3表达的影响。结论 过表达miR 1275可抑制鼻咽癌HONE 1细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制AKT信号途径。IGF 1R是miR 1275的靶基因,miR 1275可靶向IGF 1R并调控AKT信号途径影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡,miR 1275/IGF 1R分子轴可能成为鼻咽癌治疗的重要靶点。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

头孢他啶用于胸外科感染的疗效分析

目的 观察和评价头孢他啶（泰得欣）应用于普通胸外手术的临床疗效和安全性。方法 采用对比试验，观察2005年8-10月96例普胸手术预防和治疗的疗效和不良反应。结果 泰得欣在预防和治疗术后感染中总有效率95．9％，不良反应发生率为5．2％。结论 泰得欣临床效果满意，使用安全，值得在普胸手术中选用。     

骨淋巴管瘤病1例报告

患者女,19岁,体检发现全身多处固执破坏4个月。影像学检查：平片及CT平扫检查：双侧髂骨、耻骨、股骨颈及股骨上段均可见多发大小不等的低密度影,略呈膨胀性,边界清楚,部分可见硬化边。双侧肱骨上段、肩胛骨近关节盂处骨质及股骨下段、右胫骨近端、左腓骨中上段可见多个囊性骨及右侧锁骨亦可见多发局限性低密度减低区、略呈膨胀性（图1、5）。MRI平扫：脊柱可见多个囊状长T1长T2信号,部分略呈膨胀性。（图2～4）     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

胃镜诊断胃癌107例分析

1986年1月至1991年6月经内窥镜检查发现胃癌107例,其中100例经内窥镜活检病理证实,阳性率93.5％,7例阴性者均经手术证实。本文分析了胃癌的内镜特征(中、晚期胃癌、一点癌)和病理特点,并就临床意义进行分析、讨论。认为在胃角、胃窦部的溃疡、糜烂、结节状及粘膜粗糙不平应仔细观察并进行活检。