STAT3蛋白激活与乳腺浸润性导管癌上皮间质转化的相关性研究

目的探讨磷酸化信号传导与转录激活因子3（pSTAT3）与乳腺浸润性导管癌上皮间质转化的关系。方法应用免疫组化方法检测70例乳腺浸润性导管癌组织中pSTAT3、E—cadherin和Vimentin的表达,分析pSTAT3蛋白激活与E-cadherin和Vimentin表达的关系。结果pSTAT3、Vimentin及E—eadherin在乳腺浸润性导管癌组织中阳性表达率分别为44／70（62．9％）、40／70（57．1％）和70／70（100．0％）。pSTAT3表达与Vimentin表达呈正相关,与E—cadherin表达呈负相关（均P〈0．05）。Vimentin表达与浸润性导管癌组织分级、淋巴结转移有关（均P〈0．05）,而E—cadherin的表达与淋巴结转移有关（P〈0．05）。pSTAT3、E—cadherin、Vimentin的表达与年龄、肿瘤大小及ER、PR、CerbB-2的表达无关（P〉0．05）。结论STAT3的磷酸化与E—cadherin与Vimentin表达关系密切,STAT3可能通过调节E—cadherin与vimentin的表达诱导EMT的发生。     

凋亡抑制蛋白c⁃FLIP（L）调控肺纤维化过程的机制

目的：明确凋亡抑制蛋白c?FLIP（L）在肺纤维化过程中的作用,探究其异常表达参与肺纤维化发病的分子机制。方法：构建博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型,对正常鼠与模型鼠的肺组织切片进行HE和Masson染色观察病理变化,并采用免疫组化分析c?FLIP（L）及上皮?间质转化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）标志分子E?cadherin的表达。构建表达c?FLIP（L）的稳定细胞株,qRT?PCR检测EMT标志分子E?cadherin、N?cadherin及Vimentin的mRNA表达。采用转化生长因子（transforming growth factor,TGF）?β1诱导细胞发生EMT,通过Smad报告基因检测和Western blot分析c?FLIP对TGF?β1诱导EMT发生的影响。结果：c?FLIP（L）表达水平在肺纤维化组织中明显升高,与E?cadherin表达呈负相关性。C?FLIP（L）能促进肺上皮细胞的EMT表型,并促进TGF?β1诱导的Smad信号通路激活,而敲减c?FLIP（L）表达能阻滞TGF?β1诱导的EMT进程。结论：c?FLIP（L）在肺纤维化过程中高表达能促进EMT发生,是肺纤维化病程发展的促进因素之一。     

NLRP3炎症小体介导血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉血管内皮细胞炎症因子IL-1β的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）NLPR3 炎症小体激活与炎症因子白介素-1β （IL-1β）表达的影响。方法体外培养HUVECs,用AngⅡ的不同浓度和刺激时间刺激HUVECs,找到最适合的AngⅡ刺激浓度 与时间。AngⅡ刺激HUVECs前,预用AngⅡ受体阻断剂氯沙坦阻断AngⅡ作用;NAD（P）H抑制剂DPI或H2O2清除剂CAT降 低胞内活性氧（ROS）含量;用caspase-1抑制剂YVAD阻断caspase-1作用;用NLRP3 siRNA沉默胞内NLRP3表达。运用蛋白 印迹法（western blot）分别检测细胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β含量。结果（1）HUVECs在浓度10-9MAngⅡ刺激 12 h后,胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β的蛋白表达显著增加;（2）氯沙坦、DPI、CAT、YVAD和NLRP3 siRNA都可减 轻AngⅡ诱导的上述反应。结论AngⅡ通过促进HUVECs活性氧生成,激活NLRP3炎症小体,促进胞内炎症介质IL-1β P17活 性片段生成增加,诱导血管炎症的发生。     

熊果酸对肝星状细胞内AP－1、NF－κB表达的影响

目的：明确NOX对血管紧张素II（AngⅡ）诱导的HSC转录因子激活蛋白－1（AP－1）和核因子－κB（ NF－κB）的调控作用及熊果酸（ UA）干预后的影响。方法将培养激活的 HSC－T6细胞株分为： AngⅡ组,给予AngⅡ（1μmol／L）刺激细胞;空白对照组：不加任何药物;各干预组分别给予UA（50μmol／L）、NOX抑制剂DPI（20μmol／L）预处理30 min,再加入AngⅡ处理不同时间。采用活性氧检测试剂盒和荧光酶标仪检测其余各组细胞内荧光强度;用电泳迁移率（ EMSA）测定细胞内AP－1、NF－κB的活性。结果 HSC－T6经药物作用30 min后,AngⅡ组DCF荧光强度比空白对照组明显升高（ P＜0.05）,分别给予UA、DPI干预后细胞内DCF荧光强度均显著低于AngⅡ组（P＜0.05）,AngⅡ＋UA组与AngⅡ＋DPI组相比较DCF荧光强度无明显差异（P＞0.05）;用AngⅡ刺激HSC－T6细胞1 h后,AngⅡ组AP－1、NF－κB的活性明显高于空白对照组（ P＜0.05）,分别给予UA、DPI干预后,细胞内AP－1、NF－κB的活性均显著低于AngⅡ组;AngⅡ＋UA组与AngⅡ＋DPI组相比较AP－1、NF－κB的活性无明显差异（ P＞0.05）。结论 NOX产生的ROS介导AngⅡ刺激HSC转录因子AP－1和NF－κB的活化,熊果酸通过抑制HSC内ROS的生成阻断AP－1、NF－κB的活化。     

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞上皮-间质转化作用的研究

目的：研究GANT61对人肺癌细胞 H1703和 A549的上皮‐间质转化（EMT）的影响,并初步探讨其作用机制。方法以二甲基亚砜（DMSO）作为对照（DMSO组）,用GANT61处理H1703和A549细胞24 h后,采用实时荧光定量PCR法检测Gli‐1、Gli‐2、E‐cadherin和Vimentin基因变化;蛋白质印迹法（Western blotting）观察GANT61作用于 H1703和A549细胞后对E‐cadherin和Vimentin蛋白表达的影响,划痕愈合实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果与DMSO组比较,实时荧光定量PCR结果显示GANT61可下调H1703和A549细胞Gli‐1、Gli‐2及Vimentin mRNA的表达,升高E‐cadherin mRNA的表达（P＜0．01）;Western blotting显示,GANT61可以下调H1703和A549细胞Vimentin蛋白表达,升高E‐cadherin蛋白表达（P＜0．01）;划痕愈合实验显示,GANT61处理组 H1703和A549细胞的侵袭能力明显下降（P＜0．01）。结论肺癌的EMT与 Hedgehog信号转导通路中Gli‐1和Gli‐2的异常激活有关,GANT61通过下调Gli‐1和Gli‐2的表达影响肺癌细胞的EM T能力,Gli可能成为抑制肺癌细胞转移的新的分子靶点。     

Smad7对转化生长因子β1诱导的肺泡上皮细胞向间质细胞转变的影响

目的检测转化生长因子（TGF）β1能否在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变（EMT）,以及Smad7基因转染能否阻止此种转变及相关信号转导机制。方法采用脂质体法转染Smad7基因到大鼠肺泡Ⅱ型上皮（RLE-6TN）;实时荧光PCR及免疫印迹法检测转染前后上皮细胞标志物（E—cadherin,CK19）、间质细胞标志物（FN、Vimentin及α—SMA）及Smad信号通路相关蛋白表达变化;相差显微镜观察TGFβ1诱导的肺泡上皮细胞形态改变,其超微结构改变采用透射电镜观察。结果成功转染Smad7到RLE-6TN;转染前,在TGFβ1作用下,RLE-6TN间质标志物的表达在mRNA和蛋白水平上调,而上皮标志物表达下调;转染后,其间质标志物下调的同时上皮标志物上调;转染前RLE-6TN在TGFβ1作用下p-Smad2／3表达上调,转染后其表达无明显改变;形态学上,TGFβ1能诱导肺泡上皮发生EMT,Smad7转染则能阻止EMT;超微结构上,TGFβ1能诱导肺泡上皮特有板层小体变性、肿胀并随其时间延长最终完全消失。结论TGFβ1能在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮向间质细胞转变,其机制部分与Smad信号转导途径相关,Smad7转染能在一定程度上阻止该转变。     

吡非尼酮对人胆管癌HuCCT1细胞增殖、迁移及侵袭的影响

【摘要】目的 探究吡非尼酮（PFD）对人胆管癌HuCCT1细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 CCK 8法检测不同浓度PFD（0、0.25、0.5、0.75、1 g/L）对HuCCT1细胞增殖的抑制情况;平板克隆形成实验检测PFD对HuCCT1细胞克隆形成能力的影响;划痕修复实验和Transwell实验检测PFD对HuCCT1细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测PFD对HuCCT1细胞上皮间质转化（EMT）标志分子N cadherin、E cadherin及Vimentin蛋白表达水平的影响。结果 与对照组相比,PFD显著抑制HuCCT1细胞的增殖及克隆形成能力（P＜005）;划痕修复实验及Transwell 实验结果显示PFD抑制HuCTT1细胞的迁移及侵袭能力（P＜005）;Western blot实验结果显示PFD显著上调HuCCT1细胞E cadherin蛋白表达水平,同时下调N cadherin、Vimentin蛋白表达水平（P＜005）。结论 PFD抑制胆管癌HuCCT1细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT进程。     

人支气管上皮细胞表达的斯钙素⁃1在上皮间充质转化中的作用研究

目的：明确斯钙素?1（stanniocalcin?1,STC1）对支气管上皮间充质转化（epithelial?mesenchymal transition,EMT）的影响,以及香烟烟雾提取物（cigarette smoke extract,CSE）对支气管上皮细胞STC1表达调控的效应,探讨STC1在慢性阻塞性肺疾病气道EMT中的可能作用。方法：采用转化生长因子β（transforming growth factor β,TGF?β）处理人支气管上皮（16HBE）细胞72 h诱导EMT模型：外源加入STC1重组蛋白（rhSTC1）,Western blot及免疫荧光法检测EMT标志物E?钙黏蛋白（E?cadherin）和α?平滑肌动蛋白（α?SMA）表达。采用CSE刺激16HBE细胞24 h：实时定量PCR及Western blot检测STC1 mRNA和蛋白表达差异,外源加入NF?κB抑制剂JSH23,Western blot检测STC1表达差异。结果：TGF?β可诱导16HBE细胞由典型的多边铺路石样变为长梭形,上皮细胞标志物E?cadherin表达下降,间质细胞标志物α?SMA表达增加,rhSTC1可逆转上述改变。CSE可刺激16HBE细胞STC1表达增高,且呈浓度依赖性增加,外源加入NF?κB抑制剂JSH23可抑制上述效应。结论：STC1在慢性阻塞性肺疾病形成过程中,是抑制气道EMT的保护性因素。CSE局部刺激支气管上皮细胞,通过NF?κB信号导致STC1反应性增加可能是其主要来源之一。     

长期索拉菲尼暴露促进Huh7肝癌细胞上皮间质变的实验研究

目的探讨索拉菲尼耐药肝癌细胞发生上皮间质变(EMT)及侵袭、转移能力增强的机制。方法通过药物连续诱导人肝癌细胞株Huh7建立索拉菲尼耐药肝癌细胞株Huh7R,显微镜下观察细胞形态学变化;CCK-8细胞增殖试验检测Huh7R细胞增殖能力;荧光定量PCR检测ABC家族耐药基因ABCB1、ABCC1、ABCG2及EMT相关调控锌指蛋白转录因子Snail、Slug基因表达水平;Westernblot检测耐药蛋白ABCG2,EMT标记分子E-cadherin、Vimentin及N-cadherin,转录因子Snail、Slug蛋白表达水平;Transwell小室侵袭试验检测Huh7R细胞迁移、侵袭能力。结果Huh7R细胞呈细长形,伴纤维状突起,形态学上符合EMT改变;CCK-8细胞增殖试验显示在索拉菲尼作用下,Huh7R细胞生存率高于Huh7细胞;荧光定量PCR结果显示,Huh7R细胞ABCB1、ABCC1、ABCG2及Snail、Slug基因表达水平均高于Huh7细胞（均P＜0.05）;Westernblot显示,Huh7R细胞上皮标记蛋白E-cadherin表达水平低于Huh7细胞（P＜0.05）,而间质标记蛋白Vimenti、N-cadherin及Snail、Slug蛋白表达水平均高于Huh7细胞（均P＜0.05）;Transwell小室侵袭试验显示Huh7R细胞迁移、侵袭能力均较Huh7细胞增强。结论长期低剂量索拉菲尼暴露会促进肝癌细胞Snail和Slug表达,诱导肿瘤细胞发生EMT,增强其侵袭、转移能力。     

Snail与 E－cadherin在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的：研究口腔鳞癌中转录因子Snail和黏附分子E－cadherin表达,并探索二者与口腔鳞癌进展转移关系。方法应用免疫组化的方法,研究38例口腔鳞癌组织中Snail与E－cadherin的表达情况,并与各项临床病理参数进行对照分析。结果口腔鳞癌组织Snail的表达程度随组织分化程度的降低而逐渐增强,伴有淋巴结者高表达;E－cadherin的表达程度随组织分化程度的降低而逐渐降低,伴有淋巴结转移者低表达。结论（1）Snail和E－cadherin蛋白的表达与口腔鳞癌恶性程度相关。（2）Snail蛋白可能在转录水平上调控E－cadher in蛋白的表达。     

YAP和E-cadherin及Vimentin蛋白在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其意义

目的 探讨YAP蛋白和上友间质转化(EMT)相关蛋白E cadherin. Vimentin在宫颈鳞状细胞癌的表达及临床意义。方法 采用免疫组化法检测20例正常宫颈、50例鳞状上皮内病变及125例宫颈鳞状细胞癌组织中YAP 和EMT相关蛋白E cadherin、Vimentin的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果 在宫颈鳞状细胞癌组织中 YAP、E cadherin和Vimentin阳性表达率分别为71. 20%、55. 20%和48. 80% ,与鳞状上皮内病变和正常宫颈组织比较, 差异有统计学意义(P<0. 001) ; YAP蚤白的表达与组织学分级及淋巴结转移有关(P<0. 05); E cadherin及Vimentin 蛋白的表达与组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移有关(P<0. 05),与其它临床病理参数无关(P>0. 05); YAP的表达 与E cadherin的表达呈负相关关系(t= 0. 395 ,P<0. 05),而与Vimentin的表达呈正相关关系(t=0. 338,P<0. 001)弋 结论 YAP蛋白的表达可能与宫颈鳞状细胞癌的发生发展有关,可能通过调控EMT促进宫颈鳞状细胞痛的浸润 转移。     

双氢青蒿素逆转乳腺癌细胞MCF-7上皮-间质转化的分子机制

目的:探讨上皮-间质转化(EMT)参与乳腺癌细胞侵袭和转移的过程;双氢青蒿素(DHA)在逆转乳腺癌细胞上皮-间质转化(EMT)过程中的作用,并探讨NF-κB信号分子可能参与逆转EMT过程。方法:利用DHA处理脂多糖(LPS)诱导的乳腺癌细胞株MCF-7,观察细胞形态变化;Western Blot实验及RT-PCR检测DHA干预前后钙黏蛋白(E-cad以及波形蛋白Vimentin)表达水平的变化;Transwell实验检测DHA干预前后乳腺癌细胞侵袭能力的变化;通过Western Blot免疫印迹检测DHA干预前后核转录因子Snail以及P65蛋白的表达变化。结果:DHA可逆转LPS诱导的乳腺癌细胞MCF-7EMT发生,使LPS诱导的EMT相关蛋白E-cad表达上调、Vimentin表达下调;并下调Snail蛋白及NF-κB P65的表达。DHA可抑制发生EMT的乳腺癌细胞运动及侵袭。结论:1LPS可诱导乳腺癌细胞系发生EMT,并增强细胞侵袭能力;2DHA逆转乳腺癌细胞EMT,抑制NF-κB信号通路进而下调核转录因子Snail的表达。     

炎性相关刺激因子诱导乳腺癌上皮间质转分化的机制

目的乳腺癌的高转移率是威胁患者预后的主要因素。文中探讨炎性相关刺激因子肿瘤坏死因子α．（tumorneerosis factor-α,TNF—α）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）诱导乳腺癌细胞MCF-7发生上皮间质转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）的分子机制,为预防乳腺癌转移提供新思路。方法检测乳腺癌细胞MCF-7在TNF-α和过氧化氢（H2O2）作用下侵袭能力发生的改变。根据不同的处理方法将细胞分成对照组、TNF组、H2O2组、TNF＋氮-乙酰半胱氨酸（N—acety—L—cysteine,NAC）组、H2O2＋阿司匹林组和TNF＋阿司匹林组。用RT—PCR以及Westernblot方法,检测EMT相关因子Snail和上皮细胞E-钙黏蛋白（E—cadherin）在不同处理下的活性变化。结果TNF-α可促进MCF-7细胞发生EMT。在MCF-7细胞中,TNF-α可通过核因子-κB（nuclear factor—κB,NF—κB）依赖通路增加转录因子Snail的表达上调,促进细胞发生EMT。而ROS引起的E-钙黏蛋白减少以及细胞发生的EMT,仅被NF-κB抑制剂轻度抑制。结论炎性相关刺激因子TNF-α和ROS在诱导EMT时存在不同机制,TNF-α在促进肿瘤细胞发生转移中是通过NF—κB的作用上调转录因子Snail,进而降低E-钙黏蛋白的表达实现。ROS在促进细胞转移时NF—κB仅有次要作用。     

JNK-c-Jun/AP-1信号通路介导血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞增殖

目的：探讨JNK-c-Jun/AP-1信号转导通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ)诱导的肾小球系膜细胞（MC）增殖及细胞周期周控中的应用。方法：应用^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR)掺入法及流式细胞术测定MC增殖和细胞周期的变化。应用凝胶电泳迁移率（EMSA）和非放射性激酶活性检测法检测系膜细胞内活化蛋白-1（AP-1）及c-Jun氨基末端激酶（JNK）活性。结果：AngⅡ可呈时间依赖性地诱导MC内JNK活化，AngⅡ刺激30min后，JNK活性达到高峰，1h几乎恢复至正常水平；AngⅡ刺激后MC内AP-1活性显著增强，^3H-TdR掺入量明显增加，S期和G2/M期细胞数显著增多；JNK特异性抑制剂SP600125显著抑制AngⅡ诱导AP-1活化及MC增殖。结论：AngⅡ→JNK/SAPK→c-Jun/AP-1信号通路在MC增殖中发挥一定的作用。JNK特异性抑制剂SP600125的部分抑制AngⅡ诱导的AP-1活化及细胞增殖，从而可能具有一定的治疗途径。     

血管周围脂肪组织中AngⅡ介导VSMCs增殖的机制

  目的 探讨血管周围脂肪组织(PVAT)中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的相关机制。方法 培养大鼠平滑肌细胞,MTT试验检测AngⅡ处理后细胞增殖率,检测AngⅡ处理后活性氧（ROS）、H2O2及HOCL水平; 预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）、ERK1/2抑制剂（PD98059）分别作用于AngⅡ处理的细胞,观察其对细胞总蛋白、细胞周期的影响,并检测H2O2及HOCL含量的变化。结果 AngⅡ（终浓度100 nmol/L）处理24 h后细胞与未予AngⅡ处理比较可明显诱导细胞增殖（P＜0.05）,且ROS随着升高;预先给予NADPH抑制剂apocynin、H2O2水解酶catalase、ERK1/2抑制剂PD98059分别作用于AngⅡ处理的细胞与单用AngⅡ处理的细胞比较可抑制细胞增殖（P＜0.05）;预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）与单用AngⅡ处理的细胞比较可降低H2O2及HOCL含量（P＜0.05）,但ERK1/2抑制剂（PD98059）与单用AngⅡ处理组比较无此效应（P>0.05）。结论 在PVAT中ROS在介导AngⅡ诱导VSMCs增殖的通路可能为Nox/H2O2/HOCL/ERK1/2。     

miR-155在血管紧张素II诱导的肾小管上皮-间充质转化中的作用及其机制

目的：阐明miR-155在血管紧张素II（Ang II）诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化（EMT）中的作用并探究其调控机制。方法：将体外培养的NRK-52E肾小管上皮细胞分为对照组、Ang II组、NC miRNA处理组、miR-155 inhibitor处理组、溶剂对照组和蛋白激酶B（AKT）激动剂处理组,予相应处理。CCK8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测EMT相关蛋白、TGF-β蛋白表达水平以及AKT磷酸化水平,qPCR检测miR-155表达水平,免疫荧光染色检测Collagen I蛋白荧光强度。结果：随着Ang II浓度增加,细胞增殖能力、TGF-β以及EMT相关蛋白表达水平显著增加,miR-155表达水平显著上调（均P＜0.05）。与Ang II组相比,miR-155 inhibitor处理组miR-155表达水平、EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著降低（均P＜0.05）;与miR-155 inhibitor处理组和溶剂对照组相比,AKT激动剂处理组EMT相关蛋白表达水平以及AKT蛋白磷酸化水平均显著上调（均P＜0.05）。结论：miR-155可通过调控AKT信号通路促进Ang II诱导的肾小管上皮细胞EMT过程。     

TRPM7参与血管紧张素Ⅱ介导的心肌成纤维细胞胶原合成

目的 研究瞬时受体电位通道亚族M7（TRPM7）在血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）介导的心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）胶原合成中的作用。方法 将分离培养出的SD乳鼠CFs用1μmol/L的AngⅡ干预至不同时间点（0、6、12、24、48h）,分别检测CFs上TRPM7蛋白的表达水平,从而找出1μmol/L的AngⅡ诱导CFs上TRPM7蛋白表达的最佳时间点。然后,用腺病毒-TRPM7-shRNA（Ad-TRPM7-shRNA）基因沉默的方法敲低CFs上TRPM7基因的表达,1μmol/L的AngⅡ干预至最佳时间点,检测CFs在TRPM7基因沉默前后胶原合成情况的变化。结果 CFs用1μmol/L的AngⅡ干预至24h后TRPM7蛋白表达量达最高水平;CFs在1μmol/L的AngⅡ干预至24h后,与心脏纤维化相关的胶原蛋白（胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ）合成增多,而在TRPM7基因沉默后这些胶原的合成量则呈明显下降的趋势。结论 TRPM7参与AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞胶原合成,从而促进心脏纤维化的发生。     

IL⁃18诱导的单核细胞THP⁃1对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨外源性白介素18（interleukin 18,IL?18）对单核细胞THP?1的活化作用以及IL?18激活诱导的THP?1对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：通过IL?18体外诱导THP?1模拟激活体内肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophage,TAM）的作用。Transwell法检测IL?18对单核细胞THP?1的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞后流式细胞术检测M1、M2型TAM的比例;IL?18激活诱导的THP?1和肺癌细胞A549共培养,分别以克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测共培养后A549细胞增殖、迁移和侵袭的变化;扫描电镜观察共培养后A549细胞形态的变化;qRT?PCR和Western blot检测共培养后A549细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）标志蛋白E?cadherin和N?cadherin、Snail以及Slug的表达。结果：IL?18对THP?1细胞具有显著的趋化作用;外源性IL?18刺激THP?1细胞表型向M2 TAM方向分化;IL?18诱导THP?1促进了A549细胞增殖、迁移和侵袭能力;扫描电镜结果显示IL?18诱导THP?1促进A549细胞伪足生长;qRT?PCR和Western blot检测结果显示经IL?18诱导的THP?1抑制A549细胞E?cadherin的表达,促进N?cadherin、Snail以及Slug的表达,说明IL?18诱导THP?1激活A549细胞发生EMT。结论：IL?18可以诱导THP?1并促进其活化,活化后的THP?1通过激活EMT机制促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

血管紧张素Ⅱ通过上调富含半胱氨酸蛋白61表达诱导HEK293T细胞凋亡

目的探讨富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导HEK293 细胞功能中的改变及作用。方法 HEK293T细胞于体外培养,并应用CRISPR/Cas9技术敲低HEK293T细胞Cyr61基因。将细胞分为四组：（1）对照组;（2）Cyr61 敲低组;（3）AngⅡ组;（4）AngⅡ+Cyr61敲低组,以10-7 mol/L AngⅡ处理细胞,48 h收集细胞用流式细胞仪检测细胞凋亡,通过 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术及蛋白质免疫印迹技术检测细胞Cyr61及Bcl-2的mRNA及蛋白表达量。结果Cyr61敲低 组Cyr61蛋白水平较正常对照组明显下降（P<0.05）,AngⅡ干预48 h 后Cyr61蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2 蛋白和mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,敲低Cyr61 后Bcl-2 蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,与对照组凋亡率 （11.88±1.46）%相比,Cyr61敲低组凋亡率为（3.87±0. 83）%,AngⅡ干预组HEK293T细胞凋亡率为（26.94±3.73）%（P<0.05）,与 AngⅡ干预组相比,Cyr61 敲低+AngⅡ组凋亡率为（15.76±1.31）%（P<0.05）。结论Cyr61 表达量的上调与AngⅡ诱导的 HEK293T细胞损伤有关,下调Cyr61的表达可以有效地保护AngⅡ诱导的细胞损伤。     

血管紧张素Ⅱ调控bax mRNA表达诱导内皮细胞凋亡

目的　研究AngⅡ诱导凋亡细胞内机制。方法　健康胎儿脐静脉内皮细胞培养至第三代,用不同浓度AngⅡ作用不同时间,用TUNEL和ELISA检测AngⅡ能否诱导凋亡及有否剂量依赖性;用RT—PCR检测bax的mRNA表达。结果　AngⅡ同AT2 受体激动剂CGP42 1 1 2A一样可以诱导内皮细胞凋亡;并且凋亡强度与AngⅡ成典型的剂量依赖关系。在AngⅡ与CGP42 1 1A作用1 8小时后,baxmRNA显著增加。结论　AngⅡ在转录水平上诱导baxmRNA高表达,使得Bax蛋白高表达,致Bax Bcl- 2比值极显著地增加,细胞内促凋亡因素占优势地位而诱发凋亡。