眼局部免疫复合物沉积与晶体过敏性色素膜炎

成功地制作出晶体过敏性色素膜炎的动物模型,采用免疫胶体金银法检测了免疫复合物在眼组织的沉积,观察了晶体过敏性色素膜炎的组织病理改变。结果表明,发生晶体过敏性色素膜炎的兔眼全部显示免疫复合物在眼睫状体(尤其是睫状突部)沉积。而非炎症组兔眼无一例阳性,提示晶体过敏性色素膜炎的发病与免疫复合物在睫状体沉积有密切关系。     

糖尿病小鼠玻璃体视网膜中Opticin的表达

目的:观察opticin在1型、2型糖尿病小鼠及正常小鼠玻璃体视网膜mRNA和蛋白表达的变化。方法:50只雄性小鼠随机分为柠檬酸钠缓冲液对照组(A)10只,链脲佐菌素诱导1型糖尿病组(B)10只,2型糖尿病组30只,并将其随机分为1,2,3月组(C、D、E),各10只。于1,2,3月后处死2型糖尿病组小鼠,3月后处死1型糖尿病组小鼠和柠檬酸钠缓冲液对照组,取玻璃体视网膜组织,保存于液氮中。实时聚合酶链反应检测玻璃体视网膜中opticin mRNA表达,Western-blot检测opticin蛋白表达。结果:1型糖尿病组玻璃体视网膜的opticinmRNA表达量是正常组玻璃体视网的68%,P<0.01;2型糖尿病1,2,3月组玻璃体视网膜的opticin mRNA表达量分别是正常组玻璃体视网的37%,36%,27%,P<0.01;但1,2,3月组之间的差异无统计学意义,P>0.05;1型、2型糖尿病组玻璃体视网膜的opticin蛋白表达量较正常小鼠玻璃体视网膜显著下降,P<0.01。2型糖尿病的2月、3月组小鼠玻璃体视网膜mRNA和蛋白表达均低于1月组小鼠。结论:1型、2型糖尿病小鼠玻璃体视网膜中opticin的mRNA和蛋白表达量较正常小鼠显著减少,2型糖尿病组小鼠玻璃体视网膜mRNA和opticin蛋白表达随时间延长逐渐降低。说明opticin在糖尿病视网膜病变的发生机制中可能起着重要作用。     

AQP4与Kir4.1在大鼠眼内组织的共表达

目的:探讨AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的定位分布及二者的共表达.方法:用免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微技术检测AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的分布.结果:免疫荧光显示,AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜和睫状体内的分布形式相似;免疫荧光双标显示,AQP4与Kir4.1在视网膜Müller细胞及睫状突无色素上皮细胞的顶膜面及基底膜面呈重叠分布.结论:AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜Müller细胞及睫状突无色素上皮细胞共表达,提示二者可能具有协同作用,参与房水的产生以及视网膜内水、K 运输平衡的调节.     

大鼠眼组织中水通道蛋白-4的表达

目的:观察水通道蛋白-4(AQP4)在大鼠眼虹膜睫状体及视网膜组织中的分布.方法:取6只正常 Wist-ar大鼠眼组织切片,行免疫组织化学染色,光镜下观察AQP4的分布.结果:睫状体上皮细胞AQP4呈阳性表达,睫状体及虹膜内血管内皮细胞均有AQP4阳性表达.视网膜内核层及神经节细胞层也可见AQP4阳性表达.结论:AQP4在大鼠睫状体上皮细胞及视网膜内核层、神经节细胞层分布,可能参与房水调节及神经节水代谢功能调节.     

一氧化氮合酶和鸟苷酸环化酶在人眼睫状体和小梁网中的表达

目的：研究神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase , nNOS）,诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase , iNOS）,内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase , eNOS）及鸟苷酸环化酶（guanylyl cyclase , GC）在正常人眼睫状体小梁网和Schlemm’s管上的表达及其分布。 方法：收集12例角膜移植后残余的眼球组织（排除其它眼部异常）,10例眼球组织常规石蜡包埋切片,2例眼球取睫状体组织行Western blot分析。切片脱色素后以免疫组织化学EnVision/HRP二步法检测nNOS﹑iNOS﹑eNOS及GC在睫状体上皮细胞中的表达,以磷酸缓冲液代替上述各种一抗作为阴性对照。睫状体组织提取蛋白质后Western blot法检测nNOS﹑iNOS﹑eNOS及GC的表达。 结果：三种一氧化氮合酶及GC在睫状体上皮细胞、睫状肌、小梁网以及Schlemm’s管内皮细胞中均有表达。在睫状体上皮细胞中,nNOS主要表达在色素上皮和非色素上皮细胞胞浆的交界处。Western blot法证实nNOS﹑iNOS﹑eNOS及GC蛋白在睫状体中的表达。 结论：正常人眼睫状突上皮细胞、小梁网和Schlemm’s管内皮细胞中,三种NOS及GC均有表达,提示一氧化氮/环鸟苷酸（NO/cGMP）信号通路可能参与人眼房水生成和排出过程。     

玻璃体切除眼内注硅油术治疗复杂性视网膜脱离

目的　探讨玻璃体切除眼内注硅油术治疗复杂性视网膜脱离的临床效果。方法　对 11例 (11眼 )伴有玻璃体积血、巩膜破裂、严重增殖牵引等的视网膜脱离患者进行玻璃体切除术 ,采用三通道睫状体平坦部切口切除玻璃体、剪断牵引、剥膜、眼内光凝等 ,最后眼内注入硅油。术后随访观察。结果　 11眼中 9眼获得解剖复位 ,占80 %。 2眼出现并发症 ,取出硅油 ,视力及网膜无明显变化。结论　玻璃体切除眼内注硅油术治疗复杂性视网膜脱离安全可靠 ,预后较好。     

经睫状体平坦部玻璃体切割术并腔内激光治疗Eales病

目的观察经睫状体平坦部玻璃体切割术联合激光光凝治疗Eales病的临床疗效。方法回顾性分析36例42眼经睫状体平坦部玻璃体切割术联合眼内激光治疗Eales病患者的临床资料。结果术后视力明显提高28眼（67％）,术后视力提高37眼（88％）,无提高5眼（12％）。结论经睫状体平坦部玻璃体切割联合激光光凝是治疗Eales病的有效方法。     

睫状体平部玻璃体切除术联合内界膜剥离术治疗慢性黄斑水肿

背景:评估睫状体平部玻璃体切除术联合内界膜剥离术治疗慢性黄斑水肿的疗效。方法:在33只眼中实施睫状体平部玻璃体切除术(PPB)联合吲哚青绿染色辅助下的内界膜(ILM)剥离术,其中糖尿病性黄斑水肿2只眼和非糖尿病性黄斑水肿12只眼。术后,黄斑水肿吸收,视力(VA)提高,并记录并发症。剥离的膜用光学显微镜和透射电子显微镜观察。结果:平均随访12.2个月。在糖尿病组的17只眼中黄斑水肿减少或者被吸收(81%),在非糖尿病组为11只眼(92%);糖尿病组1只眼(52%)VA提高至少2行,非糖尿病组为7只眼(58%),两组V A提高没有统计学显著差异(P>0.05)。但是…     

青光眼术后继发恶性青光眼的手术治疗

目的探讨引起青光眼的可能机制及恶性青光眼的治疗方案。方法对我院11例12眼青光眼术后恶性青光眼患者行睫状体平部中央玻璃体切除-超声乳化-人工晶状体置入-前段玻璃体切除联合手术,对其资料进行回顾性分析。结果 11例12眼术后其视功能均得到不同程度的改善,术后眼压稳定在21mmHg以下。术后患者前房形成,术后早期炎症反应较重,术后4d减轻。结论恶性青光眼发病机理可能与玻璃体前界面、睫状体和虹膜后面之间膜状物形成有关,经睫状体平部中央玻璃体切除-超声乳化-人工晶状体植入-前段玻璃体切除联合手术是治疗有晶状体眼恶性青光眼的有效手段。     

异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞的分布

目的:观察异基因骨髓移植后小鼠虹膜睫状体内抗原递呈细胞(APC)的分布情况。方法:绿色荧光蛋白(GFP)转基因C57BL/6J(H-2b)小鼠作为供体,经5.5Gy×2剂量照射24h的BALB/c(H-2d)小鼠作为宿主,于骨髓移植后21d和35d取出宿主小鼠眼球,分离得到虹膜睫状体,荧光显微镜下观察供体骨髓来源的细胞分布。同时采用免疫组织化学染色方法观察普通和移植后小鼠F4/80阳性细胞在虹膜中的分布规律。结果:异基因骨髓移植后21d和35d,宿主虹膜睫状体内可观察到大量呈树突状形态的绿色荧光细胞,呈“满天星”样散在分布于小鼠虹膜睫状体中,这些细胞F4/80抗体免疫组织化学荧光染色多为阳性。结论:虹膜睫状体中的APC细胞来源于骨髓,且大部分为F4/80阳性细胞;异基因骨髓移植后宿主虹膜睫状体中的APC细胞全部被供体来源的APC细胞取代。     

实验性兔眼aPVR睫状体组织病理及超微结构观察

目的　探讨前部增生性玻璃体视网膜病变 (anteriorproliferativevitreoretinopathy ,aPVR)睫状体组织病理及超微结构改变 ,为探讨aPVR引起慢性低眼压的机理提供依据。方法　利用培养的同种兔皮肤成纤维细胞制作aPVR引起慢性低眼压的动物模型 ,于术前及术后不同时间点分别观测眼压 ,做组织病理及电镜观察。结果　术后 7、14、2 8、5 6d实验组平均眼压明显低于对照组 (P <0 .0 1)。光镜检查发现实验组术后 14、2 8、5 6d睫状体水肿 ,术后 2 8d及 5 6d睫状体无色素上皮萎缩、缺失。电镜检查发现实验组术后 2 8d和 5 6d睫状体无色素上皮线粒体明显减少 ,细胞内空泡。结论　在aPVR病理状态下 ,睫状膜的增生和收缩引起对睫状上皮的牵拉 ,造成睫状体无色素上皮萎缩和睫状体水肿 ,可能是引起慢性低眼压的主要原因。     

利用培养的同种异体皮肤成纤维细胞制作aPVR动物模型

目的：利用培养的同种兔皮肤成纤维细胞制作前部增生性玻璃体视网膜病变(aPVR)动物模型，为防治aPVR引起的慢性低眼压症提供实验基础。方法：利用培养的同种兔皮肤成纤维细胞制作aPVR动物模型，于术后不同时间点分别进行大体标本、组织病理观察。结果：大体标本显示，术后28和56天实验组周边视网膜牵拉性脱离。光镜检查发现，实验组28天和56天睫状体无色素上皮萎缩、缺失。结论：在aPVR病理状态下，睫状膜的增生和收缩引起对睫状上皮的牵拉，造成睫状体无色素上皮萎缩，可能是引起慢性低眼压症的主要原因。     

Expression of nitric oxide synthase and guanylate cyclase in the human ciliary body and trabecular meshwork

Background  The role played by the nitric oxide (NO) signaling pathway in the aqueous humor dynamics is still unclear. This study was designed to investigate the expression and distribution of NO synthase (NOS) isoforms and guanylate cyclase (GC) in human ciliary body, trabecular meshwork and the Schlemm’s canal.

Methods  Twelve eyes after corneal transplantation were used. Expression of three NOS isoforms (i.e. neuronal NOS (nNOS), inducible NOS (iNOS) and endothelial NOS (eNOS)) and GC were assessed in 10 eyes by immunohistochemical staining using monoclonal or polyclonal antibody of NOS and GC. Ciliary bodies were dissected free and the total proteins were extracted. Western blotting was performed to confirm the protein expression of 3 NOS isoforms and GC.

Results  Expression of 3 NOS isoforms and GC were observed in the ciliary epithelium, ciliary muscle, trabecular meshwork and the endothelium of the Schlemm’s canal. Immunoreactivity of nNOS was detected mainly along the apical cytoplasmic junction of the non-pigmented epithelium (NPE) and pigmented epithelial (PE) cells. Protein expressions of 3 NOS isoforms and GC were confirmed in isolated human ciliary body by Western blotting.

Conclusions  The expression of NOS isoforms and GC in human ciliary body suggest the possible involvement of NO and cyclic guanosine monophosphate (cyclic GMP, cGMP) signaling pathway in the ciliary body, and may play a role in both processes of aqueous humor formation and drainage.

     

不同基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响

目的比较几种不同培养基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响,探讨兔气管纤毛上皮细胞体外培养最佳生长基质。方法用组织块法比较兔气管纤毛上皮细胞分别在新鲜配制鼠尾胶原、市售鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶4种基质上的贴壁和生长状况。结果兔气管黏膜上皮组织在4种基质上的贴壁率分别为:新鲜配制胶原89.1%,市售胶原43.5%,多聚赖氨酸36.9%,明胶21.7%;贴壁组织的单细胞层最大生长半径分别为:新鲜配制胶原(1 432.2±383.2)μm,市售胶原(928.9±390.3)μm,多聚赖氨酸(889±229.2)μm,明胶(651±221.2)μm;纤毛摆动最大频率及持续时间分别为:新鲜配制胶原(10.0±1.5)Hz 11 d,市售胶原(8.5±0.6)Hz 5 d,多聚赖氨酸(8.9±0.5)Hz 3 d,明胶(5.9±0.3)Hz 2 d。扫描电镜下新鲜配制鼠尾胶原纤维成条索状,相互交织成网,利于组织贴壁和细胞生长。结论在常用的4种培养基质中,新鲜配制的鼠尾胶原是兔气管纤毛上皮细胞体外培养的最佳生长基质,是纤毛功能研究的可靠保证。     

Voltage-gated potassium channel Kvl.3 in rabbit ciliary epithelium regulates the membrane potential via coupling intracellular calcium

Background The cell layer of the ciliary epithelium is responsible for aqueous humor secretion and maintenance.Ion channels play an important role in these processes.The main aim of this study was to determine whether the well-characterized members of the Kvl family (Kv1.3) contribute to the Kv currents in ciliary epithelium.Methods New Zealand White rabbits were maintained in a 12 hours light/dark cycle.Ciliary epithelium samples were isolated from the rabbits.We used Western blotting and immunocytochemistry to identify the expression and location of a voltage-gated potassium channel Kvl.3 in ciliary body epithelium.Membrane potential change after adding of Kv1.3 inhibitor margatoxin (MgTX) was observed with a fluorescence method.Results Western blotting and immunocytochemical studies showed that the Kv1.3 protein expressed in pigment ciliary epithelium and nonpigment ciliary epithelium,however it seemed to express more in the apical membrane of the nonpigmented epithelial cells.One nmol/L margatoxin,a specific inhibitor of Kv1.3 channels caused depolarization of the cultured nonpigmented epithelium (NPE) membrane potential.The cytosotic calcium increased after NPE cell depolarization,this increase of cytosolic calcium was partially blocked by 12.5 μmol/L dantrolene and 10 μmol/L nifedipine.These observations suggest that Kv1.3 channels modulate ciliary epithelium potential and effect calcium dependent mechanisms.Conclusion Kv1.3 channels contribute to K+ efflux at the membrane of rabbit ciliary epithelium.     

兔气管纤毛蛋白磷酸化的初步研究

目的建立分离提取呼吸道纤毛的方法,为进一步研究纤毛蛋白磷酸化在纤毛运动调控机制中的作用提供方法学基础。方法用Triton X-100分离缓冲液孵育兔气管黏膜上皮,使纤毛上皮细胞的纤毛与细胞体分离,通过离心提取分离的纤毛,将提取的标本行透射电镜观察、Western blotting小鼠检测β微管蛋白(β-tubulin)和纤毛蛋白磷酸化情况。结果透射电镜观察可见提取的标本为浓集的纤毛,纤毛的横断面可见典型的"9+2"结构;②Western blotting检测可见高信号强度的β-tubulin条带;③Western blotting检测可见5条酪氨酸磷酸化的蛋白条带。结论经含有Triton X-100的缓冲液孵育的兔气管黏膜上皮离心后可提取到分离的纤毛标本,适于进行进一步的纤毛蛋白磷酸化研究。     

Voltage-gated potassium channel Kv1.3 in rabbit ciliary epithelium regulates the membrane potential via coupling intracellular calcium

Background The cell layer of the ciliary epithelium is responsible for aqueous humor secretion and maintenance. Ion channels play an important role in these processes. The main aim of this study was to determine whether the well-characterized members of the Kvl family （Kv1.3） contribute to the Kv currents in ciliary epithelium. Methods New Zealand White rabbits were maintained in a 12 hours light/dark cycle. Ciliary epithelium samples were isolated from the rabbits. We used Western blotting and immunocytochemistry to identify the expression and location of a voltage-gated potassium channel Kvl.3 in ciliary body epithelium. Membrane potential change after adding of Kvl.3 inhibitor margatoxin （MgTX） was observed with a fluorescence method. Results Western blotting and immunocytochemical studies showed that the Kv1.3 protein expressed in pigment ciliary epithelium and nonpigment ciliary epithelium, however it seemed to express more in the apical membrane of the nonpigmented epithelial cells. One nmol/L margatoxin, a specific inhibitor of Kv1.3 channels caused depolarization of the cultured nonpigmented epithelium （NPE） membrane potential. The cytosolic calcium increased after NPE cell depolarization, this increase of cytosolic calcium was partially blocked by 12.5 μmol/L dantrolene and 10 μmol/L nifedipine. These observations suggest that Kv1.3 channels modulate ciliary epithelium potential and effect calcium dependent mechanisms. Conclusion Kv1.3 channels contribute to K＋ efflux at the membrane of rabbit ciliary epithelium.     

小鼠鼻腔及气管黏膜上皮细胞的构成和纤毛反应性比较研究

目的比较小鼠鼻腔及气管黏膜上皮细胞的构成以及纤毛摆动频率对外源性刺激的反应性。方法 采用酶消化法获取小鼠鼻腔及气管黏膜纤毛细胞,观察纤毛细胞的得率以及ATP和苯扎溴铵对纤毛摆动频率的影响;采用免疫组化染色及扫描电镜观察鼻腔及气管黏膜上皮的细胞构成。结果 ①培养细胞中小鼠鼻甲的纤毛细胞得率可达(45±5)%,气管组织仅有(15±5)%;②免疫组化染色鼻腔及气管黏膜上皮细胞均有乙酰化α-tubulin阳性表达,鼻腔的纤毛细胞层更连续,细胞更密集;③100μmol/LATP均能引起鼻甲及气管的纤毛摆动频率增加,增加率分别为235.06%和118.49%;0.005%苯扎溴铵均能使2个部位的纤毛摆动频率下降,降至原有频率的50.31%和8.27%。2组频率比较差异均有统计学意义,P值分别为0.013和0.004;④扫描电镜观察,鼻腔黏膜上皮中纤毛细胞的比例(90%)明显高于气管上皮纤毛细胞比例(30%～40%)。结论 小鼠鼻腔和气管黏膜上皮中纤毛细胞的比例存在明显差异;2个部位的纤毛摆动频率对外源性刺激的反应程度存在明显差异;从纤毛细胞的数量上看,鼻腔远远高于气管,其中鼻甲是个不容忽视的丰富资源。     

牛心包脱细胞基质的研制

目的为组织工程学方法研制生物瓣提供适合的基质材料。方法用去污剂-酶联合四步法脱除牛心包组织中的细胞,并对处理后组织的理化性质进行分析、测试。结果脱细胞效果良好,且能较好地保持胶原纤维和弹性纤维的排列分布。脱细胞后的牛心包组织的厚度、抗拉负荷、抗拉强度、断裂伸长率和热皱缩温度无明显变化。组织中可溶性蛋白含量无显著变化,而作为结构成分的胶原蛋白和蛋白聚糖得到了较好的保存。结论去污剂-酶联合四步法能有效地制造牛心包脱细胞基质材料。