8-甲氧沙林对黑素细胞内游离钙浓度及细胞骨架蛋白形成的影响

目的:观察8-甲氧沙林对体外培养黑素细胞内游离钙浓度、细胞骨架蛋白形成的影响.方法:正常人黑素细胞取自包皮环切术切取的包皮,用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙浓度,用罗丹明结合毒伞素对细胞骨架蛋白进行特异性染色.结果:8-甲氧沙林可使细胞内游离钙离子浓度升高,促进黑素细胞骨架蛋白合成.结论:8-甲氧沙林可能通过诱导黑素细胞内钙离子浓度升高和细胞骨架actin蛋白生成,从而影响黑素细胞的迁移.     

α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度的影响

目的：探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度([Ca^2 ]i)的影响。方法：从正常人包皮分离并纯培养黑素细胞，用α-MSH处理纯培养的人表皮黑素细胞，用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移，激光共聚焦扫描显微镜检测[Ca^2 ]i。结果：α-MSH可诱导黑素细胞迁移，并使[Ca^2 ]i浓度升高。结论：α-MSH可能通过诱导黑素细胞内的Ca^2 浓度升高，从而促进黑素细胞的迁移。     

他卡西醇对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子的影响

目的 研究他卡西醇对体外培养黑素细胞迁移和细胞内游离钙离子浓度的作用. 方法 由青少年的包皮中分离黑素细胞,用不同浓度他卡西醇完全培养基培养的黑素细胞,采用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移,采用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内游离钙. 结果 他卡西醇可促使黑素细胞迁移,并诱导细胞内游离钙浓度升高. 结论 他卡西醇可能通过诱导黑素细胞钙离子升高从而促进黑素细胞的迁移.     

甘草提取物对人表皮黑素细胞迁移及细胞内钙离子的影响

目的：探讨甘草提取物对体外培养人表皮黑素细胞迁移和细胞内游离钙离子浓度的影响。方法从健康人包皮组织分离、培养黑素细胞,用甘草提取物处理黑素细胞,对照组仅加入等量培养基,采用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移,采用激光共聚焦扫描显微镜检测钙离子。结果当甘草提取物在浓度>1.25 mg/L时,其黑素细胞迁移数目与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);实验浓度下的甘草提取物经处理后均能降低人黑素细胞内钙离子的水平;不同浓度甘草提取物对黑素细胞细胞内钙离子的影响与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05）。结论推测甘草提取物可能通过降低黑素细胞内游离钙离子的浓度从而抑制进黑素细胞的迁移。     

白介素-8对体外培养黑素细胞的影响

目的:建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度白介素-8对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度白介素-8对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果:白介素-8对黑素细胞活力有增强作用,能使细胞增殖能力增加,黑素合成增加,但对黑素细胞的凋亡率无显著性影响。结论:白介素-8对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有增强作用。     

α和β-熊果苷对共培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响研究

目的 比较观察熊果苷分子苯环侧链上的糖苷基团α和β-构象对共培养小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的影响.方法 体外melan-a小鼠黑素细胞(MC)与SP-1小鼠角质形成细胞(KC)共培养体系,两种细胞的初始接种比例为1:5.共培养细胞分别用含有0.04、0.2、1 mg/ml的α-熊果苷、β-熊果苷、烟酰胺及10、50、100 μmol/L的甲氧沙林(8-MOP)新鲜培养基换液,药物处理共4 d.用相差倒置显微镜观察细胞表型的改变;用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖率;用放射性核素L-[14C]-酪氨酸底物标记法测定酪氨酸羟化酶与多巴氧化酶活性;用分光光度计法测定细胞总黑素含量.结果 除8-MOP能明显促进共培养细胞(主要是MC)发生增殖外,其他3种化合物对细胞增殖率均无影响.两种熊果苷均能剂量依赖地抑制酪氨酸酶活性和黑素含量.1 ms/mlα-熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制作用比同等浓度的β-熊果苷强(酪氨酸酶活性:37%±4%vs54%±9%,P=0.034).经两种熊果苷(1 mg/ml)处理的MC树状突延长纤细,黑素产生较对照组明显减少,以α-熊果苷更为明显.相反,100 μmol/L 8-MOP处理组的MC数目较对照组显著增加,树状突增加,胞质与树状突内有大量黑褐色黑素堆积.结论 α-熊果苷能明显抑制共培养小鼠黑素细胞的黑素生成,其临床应用价值有待体内实验进一步确认.     

用荧光钙离子指示剂fura—2AM检测心肌细胞内游离钙

本实验采用游离钙离子荧光指示剂fura－2AM检测大鼠离体心室肌细胞内游离钙的浓度。其结果如下；（1）KC1可以使心肌细胞内游离钙浓度升高，去掉细胞外液中钙离子，KC1的升钙作用则消失。（2）甲氧胺和咖啡因可使心肌细胞内游离钙浓度升高。二者的作用分别被哌唑嗪和普鲁卡因所对抗。提示该法切实可行。     

小分子化合物I942对黑素细胞黑素合成的促进作用

目的 研究小分子化合物I942对黑素细胞黑素合成的作用及相关机制。方法 采用多巴染色法对正常人永生化黑素细胞系PIG1进行鉴定,用不同浓度的小分子化合物I942处理黑素细胞PIG1。用CCK-8法检测小分子化合物I942对细胞活力的影响,用氢氧化钠裂解法检测细胞中黑素含量,用多巴氧化反应法检测细胞中酪氨酸酶活性,用qRT-PCR检测细胞中黑素合成相关蛋白小眼畸形相关转录因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TRP1）、酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）mRNA的表达量,用蛋白质印迹法检测TYR、TRP2的蛋白表达情况。结果 在0～50 μmol/L的浓度范围内,小分子化合物I942对黑素细胞PIG1细胞活力的影响差异无统计学意义（P>0.05）。小分子化合物I942可增加黑素细胞PIG1中黑素含量（P<0.01）,升高细胞内酪氨酸酶活性（P<0.01）。使用小分子化合物I942处理后,黑素细胞PIG1中MITF、TYR、TRP1、TRP2 mRNA表达均上升（P<0.01,P<0.05）,TYR、TRP2蛋白表达无明显变化。结论 小分子化合物I942在对细胞活力无明显抑制作用的基础上,可通过升高酪氨酸酶活性增加黑素细胞PIG1中黑素含量,同时黑素合成相关蛋白MITF、TYR、TRP1、TRP2的mRNA表达也升高。     

PDGF-BB引起系膜细胞内游离钙浓度变化的机制探讨

目的 研究血小板衍生生长因子BB(PDGF—BB)引起的肾小球系膜细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。结果 PDGF-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高，细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂硝苯地平均可抑制PDGF—BB引起的细胞内钙浓度变化，但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同。结论 PDGF—BB引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高在初期是通过细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与，而在其后的维持升高阶段主要是通过细胞外钙内流，特别是通过电压依赖式钙通道内流引起。     

壬二酸对人黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成功能的影响

目的 建立体外培养的正常人表皮黑素细胞系，检测壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成的影响。方法 体外人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B．。细胞培养，TRP-1染色观察壬二酸作用后，细胞形态的变化；测定壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活性及黑素含量变化观察壬二酸的脱色素作用。结果 壬二酸作用于人表皮黑素细胞后，可见细胞树突明显减少；壬二酸作用于B16细胞后，细胞形态无明显改变。壬二酸抑制人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性，细胞黑素合成减少，而且具有浓度依赖性。结论 壬二酸对体外培养的人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用，可临床应用于治疗色素性疾病。     

高血压病患者胰岛素抵抗及其与细胞钙、甲状旁腺激素的关系

对20例高血压病患者,15例正常人的胰岛素抵抗、细胞内钙和甲状旁腺激素进行研究。用放免法测定血胰岛素、C肽、甲状旁腺激素;用荧光染料(Quin—2AM)法测定血小板胞浆游离钙浓度。结果显示,高血压病存在胰岛素抵抗现象。有细胞内游离钙水平升高和甲状旁腺激素水平升高,两者之间呈正相关,甲状旁腺激素水平升高是引起细胞内游离钙升高的原因之一。而细胞内游离钙与胰岛素抵抗之间的关系有待更进一步研究。     

人正常黑素细胞体外培养方法

目的：学习人正常黑素细胞的原代培养技术，为进一步研究提供实验模型。方法：分离培养人正常黑素细胞，细胞取材于包皮环切术后的包皮组织；采用左旋多巴染色法进行细胞鉴定。结果：成功培养、传代、纯化了人正常黑素细胞，并经左旋多巴染色证实。结论：动态观察了人正常黑素细胞培养的全过程，验证了细胞的特性，获得了大量纯化的黑素细胞，为进一步的细胞内干预实验提供了物质基础。     

邻苯二甲酸正丁酯净化白血病细胞的作用机制

目的：探讨邻苯二甲酸正丁酯通用诱导细胞凋亡来净化白血病细胞的机制。方法：用Fura-2AM方法检测邻苯二甲酸正丁酯（DBP）对白血病细胞内游离钙离子浓度的影响,用免疫组化方法检测DBP对白血病细胞c-myc和Bcl-2蛋白表达的影响。结果：DBP可引起白血病细胞内钙重新分布,促进细胞外钙离子内流,升高细胞内游离钙（［Ca2+］i）,并下调白血病细胞c-myc和Bcl-2蛋白的表达。 结论：DBP可能通过提升白血病细胞内钙离子水平启动凋亡且下调c-myc与Bcl-2蛋白表达、促进凋亡来发挥净化白血病细胞作用。     

α-黑素细胞刺激素对皮肤黑素合成的调控作用

皮肤色素异常是整形美容外科常见的问题，目前还无较好的解决方法，主要是对皮肤色素沉着的机制还不完全清楚。近年来，逐步认识到α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone，α-MSH)与黑素的合成有密切关系。α-MSH通其黑素细胞表面受体-黑皮素-1受体(melanocortin-1 receptor，MC-1R)结合，使黑素细胞内酪氨酸酶的表达增加、活性增强，黑素合成增加并优先刺激优黑素细胞的合成；α-MSH还可促进黑素细胞的增生和树突形成及黑素小体的转运，同时α-MSH对黑素细胞的免疫保护作用及与其他外源性刺激因素协同作用而调控皮肤的色素沉着过程。α-MSH的内源性拮抗剂刺鼠信号蛋白(ASIP)可明显减弱其黑素合成作用，降低皮肤的着色能力。随着对α-MSH调控黑素合成作用的更进一步了解，必将为解决临床上获得性色素沉着或色素脱失性疾病提供一种新的治疗方法。     

肿瘤坏死因子-α对人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响研究

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度肿瘤坏死因子α对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定不同浓度肿瘤坏死因子-α对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果肿瘤坏死因子α对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论肿瘤坏死因子-α对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用肿瘤坏死因子α治疗色素性疾病提供了实验依据。     

PDGF-BB引起系膜细胞内游离钙浓度变化的机制探讨

目的研究血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)引起的肾小球系膜细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制.方法以体外培养的系膜细胞为研究对象,激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度.结果PDGF-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高,细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂硝苯地平均可抑制PDGF-BB引起的细胞内钙浓度变化,但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同.结论PDGF-BB引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高在初期是通过细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与,而在其后的维持升高阶段主要是通过细胞外钙内流,特别是通过电压依赖式钙通道内流引起.     

妊高征患者胰岛素抵抗及其与细胞钙代谢的关系

目的　探讨妊高征患者胰岛素抵抗及其与细胞钙代谢的关系。方法　对４２例妊高征患者用口服糖耐量试验观察糖负荷前后血糖及血胰岛素变化,用荧光染料法测定血小板胞浆游离钙浓度,改良Ｖｉｎｃｅｎｚｉ法测定红细胞溶血物钙泵活性。结果　重度妊高征患者存在胰岛素抵抗现象,细胞内游离钙升高和基础钙原活性下降。结论　胰岛素抵抗与细胞内游离钙升高存在明显正相关,两者互相影响,成为重度妊高征的特征性改变。     

过氧化氢诱导条件下人黑素细胞树突变化及其胞内Ca2+浓度变化的研究

目的:通过体外过氧化氢诱导模拟体内氧化压力条件下,联合观察人黑素细胞树突变化及其细胞内Ca2+浓度变化,初步说明黑素细胞经表皮丢失病理生理学基础。方法:采用常规分离培养人黑素细胞,分别用终浓度为0.1%和0.05%的H2O2作用于黑素细胞培养基中,于30、60、90、120和150 min后观察黑素细胞的树突变化,并通过目镜标尺测定树突变化率。另用Flu-3/AM染色,流式细胞术测定黑素细胞内钙离子荧光强度值。结果:使用不同浓度的H2O2诱导黑素细胞后树突显著回缩,0.1%H2O2对树突缩短作用强于0.05%H2O2;细胞内钙离子的荧光探针检测显示黑素细胞经过H2O2诱导后细胞内钙离子浓度升高,并且钙离子出现的峰值在诱导30 min时,早于黑素细胞树突缩短变化第1高峰60 min节点。结论:黑素细胞树突缩短可能与细胞内钙离子堆积,不能发生钙内流有关。     

虎杖甙对内毒素刺激的单个巨噬细胞内游离钙动态变化的影响

用荧光染料Indo-1标记小鼠腹腔巨噬细胞内游离钙,在粘附式细胞仪检测下观察细胞内游离钙的动态变化，在大肠杆菌O55：B5内毒素刺激下细胞内游离钙迅速升高，于第400s达峰值．经虎杖甙处理的巨噬细胞加入内毒素后，胞质游离钙无明显增高．因细胞浴于无钙环境，故胞内游离钙升高不是由于细胞外的Ca2+进入细胞，而是由于内毒素影响胞内钙库调节功能．虎杖甙可能保护胞内钙库中胞质钙的某种调节机制，从而避免胞质游离钙升高．     

脂氧素A4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响

目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.