高效液相色谱-紫外可见检测器检测大鼠肝组织中的还原型谷胱甘肽

目的 建立一种高效液相色谱-紫外可见检测器测定大鼠肝组织中还原型谷胱甘肽含量的方法.方法 肝组织在冰浴条件下匀浆后经乙腈沉淀蛋白,离心,取上清液在硼酸缓冲液中与荧光剂4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(NBD-F)进行衍生化反应.流动相为乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(23∶77,V/V),流速1.0 mL/min,检测波长470 nm,进样量10 μL;采用外标法定量.结果 还原型谷胱甘肽在0.200～125μg/mL范围内线性关系良好,相关系数为0.9999(n=5),最低检测限为0.040 0μg/mL(S/N=3);样品加标回收率为96.2%～104.5%;日内相对标准偏差为1.1%～4.6%,日间标准偏差为1.9%～7.5%.结论 本方法操作简便,快速,准确,灵敏度高,稳定性好,适合肝组织中还原型谷胱甘肽的测定.     

高效液相色谱-荧光检测法测定大鼠血小板内5-羟色胺的含量

目的：建立高效液相色谱-荧光检测测定大鼠血小板内5-羟色胺含量的方法。方法：色谱柱为Nucleosil-C18（4 mm×250 mm,10 μm）,流动相：磷酸二氢钾（10 mmol/L,内含EDTA-Na2 0.3 mmol,pH=3.5）∶甲醇∶乙腈＝85∶10∶5,流速：0.5 ml/min,荧光激发波长：254 nm,发射波长：360 nm,增益：32。血小板沉淀用300 μl纯水悬浮,加入15 μl内标溶液（30 μg/ml,α-甲基-5-HT水溶液）,100 μl蛋白沉淀液,混匀,离心,取上清液20 μl,进样。结果：5-羟色胺在0.25～4.00 μg/ml浓度范围内,线性关系良好。5-羟色胺测定的批内和批间相对标准差（RSD）分别小于4.29％和4.44％,回收率为84.3％～88.7％。正常雄性SD大鼠血小板内5-羟色胺的平均含量分别为（1.65±0.14） μg/109 plts。结论：本法简便、准确、快捷,可用于大鼠血小板内5-羟色胺的测定。     

阿奇霉素脂质体的制备及其包封率测定

目的:制备阿奇霉素脂质体并测定其包封率.方法:采用薄膜蒸发-冻融法制备阿奇霉素脂质体,以透析-高效液相色谱法测定含量和包封率.采用Lichrosphere-C18反相色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-异丙醇-0.002 mol/L磷酸氢二钾(60∶25∶15,v/v/v)为流动相,流速1.2 ml/min,检测波长215 nm,进样量20 μl.结果:阿奇霉素脂质体的平均体积粒径大于7 μm,包封率大于75%.选定的色谱条件下,阿奇霉素与空白辅料完全分离,在5.08～508 μg/ml范围内,药物浓度与峰面积呈良好的线性关系,r＝0.9999.结论:薄膜蒸发-冻融法适用于制备肺靶向阿奇霉素脂质体;透析-高效液相色谱法操作简单,准确,重复性好,可用于测定阿奇霉素脂质体的含量和包封率.     

高效液相色谱法测定去甲二氢愈创木酸的含量及其有关物质

目的 建立测定去甲二氢愈创木酸(NDGA)含量和检查有关物质的HPLC方法.方法 采用Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),检测波长为282 nm.含量测定以三氟醋酸-水-乙腈(0.05∶45∶55,pH 3.5)为流动相,有关物质检查采用梯度洗脱,以三氟醋酸-水(0.05∶100)为流动相A,三氟醋酸-乙腈(0.05∶100)为流动相B,洗脱梯度:0～15 min,流动相B的比例为40%～70%,15～30 min,流动相B的比例为70%.结果 NDGA浓度为5.0～100.0 μg/ml时,峰面积与其浓度呈良好的线性关系(r=0.999 9),检测限为1.2 ng(S/n=3),含量测定重复性试验RSD为0.54%(n=6).有关物质检查重复性试验RSD1.8% (n=6).结论 本法简便、准确、快速、灵敏,可用于NDGA的质量控制.     

高效液相色谱用于肝硬化大鼠肠道通透性的测定

目的 建立通过双糖吸收试验评价肝硬化大鼠肠道通透性的高效液相色谱法(HPLC).方法 建立四氯化碳诱导大鼠肝硬化模型.采用HPLC检测30例正常大鼠和30例肝硬化大鼠尿液标本中甘露醇和乳果糖排出率比值.以NH2柱(4.6 mm×250 mm×5 mm,Warters)为色谱柱; 柱温为室温;流动相为乙腈∶水70∶30(V/V);流速为1.0 ml/min;进样量为20 μl.示差折光检测器(RID 2000).结果 在上述色谱条件下,尿样中甘露醇和乳果糖能得到良好基线分离,甘露醇和乳果糖的出峰时间分别为6.721 min和9.242 min.该法检测甘露醇和乳果糖的线性范围分别为5～1 000 μg/ml、2.5～500 μg/ml.甘露醇的加样回收率在92.7%～98.0%,乳果糖的加样回收率在91.3%～97.4%.肝硬化大鼠肠道通透性(乳果糖/甘露醇比值:0.03578±0.01245)显著高于正常大鼠(0.02563±0.00871).结论 HPLC检测肠道通透性具有准确性高、重复性好、简便灵敏等特点,可用于肝硬化大鼠肠道通透性的测定和监测.     

HPLC法测定头孢唑肟钠氯化钠即配型输液中头孢唑肟的含量

目的 建立HPLC法测定头孢唑肟钠氯化钠即配型输液中头孢唑肟含量的方法.方法 选用C18柱,以pH 3.6缓冲液(取枸橼酸1.42 g、磷酸氢二钠2.31 g,加水溶解并稀释至1 000 ml)-乙腈(9:1)为流动相,流速1.0 ml/min,进样量20 μl,检测波长254 nm,柱温25 ℃.结果 头孢唑肟线性范围为60.04-140.09 μg/ml,回归方程为Y=20 920 X+31 143(r=0.999 9);平均回收率99.69%,RSD=0.20%.结论 该HPLC法可用于头孢唑肟钠氯化钠即配型输液中头孢唑肟的含量测定.     

反向高效液相色谱法测定大鼠血清、组织中加替沙星药物浓度

目的 :建立反向高效液相色谱法测定大鼠血清、组织 (心、肝、肾、胃、肺、大肠、脾、睾丸、大脑、骨骼肌 )匀浆中加替沙星药物浓度。方法 :采用 Sino Chrom C1 8ODS- AP色谱柱 (5 μm i.d.4 .6× 2 5 0 mm) ,流动相为 0 .0 5 mol/ L 磷酸盐缓冲溶液 -甲醇 -三乙胺 (5 5 .0∶ 4 4 .5∶ 0 .5 ) ,p H为 3.1 0 ;流速 1 .0 m l/ min,检测波长为 2 93nm,柱温为 35℃ ,以环丙沙星为内标 ,含药大鼠血清、组织匀浆经二氯甲烷提取 ,于 4 0℃水浴用氮气吹干和盐酸溶解后直接进样。结果 :本测定方法血清加替沙星浓度在 0 .1～ 1 0μg/ ml范围内线性关系良好 ;组织药物浓度在 0 .0 5～ 4 .0μg/ ml范围内线性关系良好。血清中最低检测限为 0 .0 1 μg/ m l,组织中加替沙星的最低检测限均为 0 .0 2 μg/ ml,相对回收率在 88.2 %～ 1 0 8.9%之间 ,绝对回收率在 78.5 %～ 96 .5 %之间 ,日内、日间变异均分别小于 1 0 .4 %和 7.8%。结论 :高效液相色谱法测定大鼠血清、组织中的加替沙星药物浓度精确、灵敏、可靠 ,可用于加替沙星的药代动力学研究     

HPLC法测定大鼠组织中的桂利嗪

目的:建立大鼠组织中桂利嗪的HPLC测定法,用于小剂量尾静脉注射给药后测定桂利嗪在大鼠组织中分布.方法:组织样品加NaOH碱化,以甲基叔丁基醚提取,采用Hypersil C18 柱,甲醇-水- 冰醋酸-三乙胺(70:30:0.6:0.4)为流动相,254 nm波长处检测,测定了尾静脉给药2 mg/kg桂利嗪注射液后在SD大鼠心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、脑、脂肪、睾丸等10个组织脏器中的分布情况.结果:肝组织样品最低检测限0.02 μg/ml,线性范围0.05～2 μg/ml,小肠组织样品最低检测限0.02 μg /ml,线性范围0.05～1 μg/ml,符合生物样品分析要求.桂利嗪广泛地分布于大鼠的多个组织脏器中,其中肺部浓度最高.结论:本法简便、准确、灵敏,适合桂利嗪临床前药代动力学组织分布研究.     

RPHPLC法测定人血浆中二甲双胍浓度

目的:建立测定人血浆中二甲双胍浓度的反相高效液相色谱法.方法:人血浆标本以盐酸阿替洛尔为内标,酸化后以乙腈沉淀蛋白、二氯甲烷反洗上清液后,取上清液进行色谱分析,以5 mmol/L SDS∶0.04 mol/L KH2PO4∶ CH3OH= 1∶ 1∶1.7为流动相,流速1 ml/min,经Agilent Zorbax SB C18(150×4.6 mm, 5 μm)柱分离,检测波长240 nm.结果:二甲双胍标准曲线范围10～5 000 μg/L,y=0.001 12x+0.012 671 (r =0.999 4), 最低检测限为10 μg/L ,高、中、低3种浓度的日内精密度均<7%,日间精密度均<8%,萃取回收率75.6%～86.6%.结论:该方法简便、快速、准确,可用于人体内二甲双胍药动学研究和临床血药浓度监测.     

HPLC测定豨莶片剂中奇壬醇的含量

目的:建立豨莶片剂中奇壬醇的含量测定方法.方法:采用HPLC,色谱条件为:Phenomenex C18柱,乙腈-0.05 mol/L KH2PO4(125∶75)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长215 nm.结果:奇壬醇在0.133～2.660 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.4%,RSD=2.12%;测定3批豨莶片剂中奇壬醇的含量分别为109.46,105.91,107.41 μg/片.结论:HPLC简便、准确、可控,可作为豨莶片剂的定量检测方法.     

托拉塞米产品中起始原料残留量分析方法的研究

目的：建立高效液相色谱法控制原料药托拉塞米中起始原料4-羟基吡啶与间甲苯胺的残留量的分析方法。方法：采用Agilent C18柱，以0．02m01／L磷酸二氢钾溶液-甲醇（3：2）为流动相，检测波长240nm，流速为1．5ml／min，柱温为室温。结果：两种物质4-羟基吡啶浓度为0．014～1．244μg／ml，间甲苯胺浓度为0．081～1．317μg／ml的溶液的峰面积与浓度成线性关系，相关系数r≥0．99：定量限和检测限试验中，信噪比符合规定，能够达到定量检测及检出的要求；各浓度下的4-羟基吡啶、间甲苯胺平均回收率均在90％～110％范围内，且9个回收率的RSD均小于5．0％。结论：该方法专属性好．精密度、准确度都符合要求，方法可靠，可用于原料药托拉塞米中起始原料4-羟基吡啶与间甲苯胺的残留量的控制。     

高效液相色谱法测定人血清中氨苄西林、丙磺舒的浓度研究

目的:建立测定人血清中氨苄西林、丙磺舒浓度的高效液相色谱法。方法:(1)氨苄西林,以诺氟沙星为内标,血清样品用0.6%的高氯酸沉淀蛋白后进行测定;色谱柱为HigginsTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为有机相(甲醇-乙腈-异丙醇,100∶2∶5,v/v):水相(0.01 mol/L磷酸二氢钾,pH3.5)=23∶77;检测波长210 nm;流速1.0 ml/min;柱温30℃。(2)丙磺舒,以缬沙坦为内标,血清样品用乙腈沉淀蛋白后进行测定;色谱柱为HigginsTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为有机相(甲醇-乙腈,400∶275,v/v):水相(乙酸-水,1∶60,v/v)=77∶23;检测波长280 nm;流速1.0 ml/min;柱温30℃。结果:氨苄西林在0.14~11.2μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 5),最低检测限为0.14μg/ml;丙磺舒在0.20~16.0μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 1),最低检测限为0.20μg/ml。结论:高效液相色谱法操作简便、灵敏、专一性好,适用于人体药动学研究。     

高效液相色谱法同时测定双五胶囊中4种有效成分的含量

目的建立同时测定双五胶囊中紫丁香苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素含量的方法。方法HPLC法,采用Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相为A:甲醇-乙腈(1∶1),B:水,梯度洗脱,0～5min,35%～60%A;5～10min,60%～70%A;10～50min,70%～90%A;50～90min,90%A。流速为1ml/min,柱温:35℃,检测波长220nm。结果紫丁香苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素浓度分别在1.28～20.40μg/ml(r=0.9997)、6.30～100.80μg/ml(r=0.9996)、1.20～19.20μg/ml(r=0.9998)和3.75～60.00μg/ml(r=0.9996)范围内呈良好的线性关系。4种成分精密度实验RSD<1%。24h内稳定性RSD<1.5%。紫丁香苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素的平均加样回收率分别为99.47%、102.50%、99.21%、101.86%。结论所建立的方法具有快速、简便、准确等优点,可用于双五胶囊的质量控制。     

颠茄磺苄啶片溶出度测定方法研究

目的:建立测定颠茄磺苄啶片溶出度的方法.方法:采用HPLC法测定颠茄磺苄啶片的溶出度,采用XDB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-水-三乙胺(20:80:0.2,v/v/v)用冰醋酸调节pH值到6.0为流动相,流速为1.2 ml/min,检测波长为240 nm,柱温为30℃.结果:磺胺甲噁唑浓度在40.0～400.0 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好,r=0.999 7(n=6),平均回收率为98.7%;RSD为1.1%;甲氧苄啶浓度在8.0～80.0 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好,r=0.999 8(n=6),平均回收率为99.1%,RSD为1.0%.结论:该方法灵敏、结果可靠、重现性好,可用于颠茄磺苄啶片的溶出度测定.     

高效液相色谱法测定人肝细胞色素P450 3A4转基因细胞中氨氯地平

目的 :研究氨氯地平经人肝细胞色素 P4 5 0 3A4 (CYP3A4 )的代谢 ,建立反相高效液相色谱的测定人肝转基因细胞 CYP3A4酶 S9孵育液中氨氯地平浓度的方法。方法 :与人肝转基因细胞提取的 S9上清液孵育之后的样品 ,用 3倍量的甲醇沉淀后离心 ,取上清液用 0 .4 5μm微孔滤膜滤过后进样。采用 Hypersil C18柱 ,以乙腈 -磷酸盐缓冲液 (4 5∶ 5 5 ,v/ v,p H4 .5 )为流动相 ,普萘洛尔为内标 ,在 2 5 0 nm波长处测定。结果 :氨氯地平浓度在 0 .2～ 30 .0μg/ ml范围内线性关系良好 ,r=0 .9993,方法平均回收率为 (98.2± 2 .4 ) % (n=5 ) ,日内和日间相对标准偏差(RSD)均小于 10 % ,检测限为 2 0 ng/ ml,定量限为 0 .2 μg/ ml(回收率为 10 4 .0 % ,RSD为 11.4 % ,n=5 )。结论 :建立的反相高效液相色谱方法简便、准确 ,可用于研究氨氯地平在人肝 CYP3A4转基因细胞中的代谢。     

HPLC法测定阿司匹林咀嚼片中游离水杨酸含量

目的 建立HPLC法测定阿司匹林咀嚼片中游离水杨酸含量的方法。方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水-冰醋酸(8．0：5．5：1．0)为流动相测定阿司匹林咀嚼片中游离水杨酸含量(检测波长302nm)。结果 该法具有良好的分离度，被测溶液稳定，水杨酸在2．65—31．77μg／ml(r=0．99997)的浓度范围内线性关系良好；此方法平均回收率为100．21％，相对标准偏差(RSD)为0．53％(n=6)。结论 本方法快速、准确、稳定，适用于测定阿司匹林咀嚼片中游离水杨酸的含量。     

高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法检测茴三硫片含量的有效性比较

目的:探讨高效液相色谱法和紫外-分光光度法检测茴三硫片含量的有效性。方法:高效液相色谱法设定色谱柱为Kromasil+C1 8(250mm×4.6mm),流动相为甲醇-水80∶20,设置检测波长为432nm,分光光度法以432nm处以外标法测定。结果:高效液相色谱法显示茴三硫样品色谱中辅料无干扰,浓度在33.0～252.5μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.998),加样回收试验平均回收率为99.89%,RSD为0.43%;分光光度法显示茴三硫浓度在4.106～20.524μg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系(r=0.999),加样回收试验平均回收率为99.87%,RSD为0.46%。两种方法测量3个批次样品茴三硫含量差异无明显差别。结论:高效液相色谱法和紫外-可见分光光度法测定茴三硫含量的准确性均较高,均可用于茴三硫片的质量控制。     

HPLC法测定裸花紫珠中齐墩果酸与熊果酸的含量

目的：建立裸花紫珠中齐墩果酸与熊果酸的含量测定方法,考察海南五指山地区野生裸花紫珠中齐墩果酸与熊果酸的含量。方法：采用高效液相色谱法测定裸花紫珠中齐墩果酸与熊果酸的含量,乙腈-甲醇-3.5%乙酸胺水溶液（69∶10∶21）为流动相;流速为1mL/min,检测波长为215nm。结果：齐墩果酸与熊果酸的线性范围分别为1.63～6.53μg（r=0.9996）与1.20～7.20μg（r=0.9997）,回收率分别为98.11%和101.64%。结论：本法操作简单,测定结果准确,适于裸花紫珠中齐墩果酸与熊果酸的含量测定。     

高效液相色谱法测定人血清中胺碘酮的浓度

【目的】采用高效液相色谱法建立和改良测定人血清中胺碘酮的方法学。【方法】色谱柱：shim—packvp—ODS柱（150mm×4．6mm,5μm）。流动相为甲醇：乙腈：乙酸铵缓冲液=45：45：10（v／v／v）,流速1．0ml／min,检测波长242nln。最低检出限为0．125μg／ml。【结果】纯甲醇色谱峰出现在进样后1．809 min,AD标准品色谱峰出现在进样后10．421 min。以峰面积与标准浓度做回归,得回归方程Y=2．67049×10^-6 X-0．1619,r=0．962（n=10）。线性范围为：0．125—4 μg/ml。日内变异系数为2．1％～5．1％,日间变异系数为3．2％-7．9％。【结论】此法是较为简便可行的检测血清胺碘酮浓度的方法。     

HPLC法测定利福昔明干混悬剂中利福昔明的含量

目的：建立高效液相色谱法测定利福昔明干混悬剂中利福昔明的含量限度的方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil C8，甲醇-乙腈-0．075mol／L磷酸二氢钾溶液-1．0mol／L枸橼酸溶液（50：22．5：22．5：5）为流动相，流速为1．0ml／min，检测波长为240nm。结果：利福昔明在41．02～164．08μg／ml范围内线性关系良好（r=0．99997），平均回收率为99．79％，RSD为1．30％，规定含量限度为90．0％～110．0％。结论：本法准确、灵敏、可靠，能有效地控制该制剂的质量。