人增生性瘢痕组织中微血管内皮细胞的分离、纯化和培养

目的　微血管内皮细胞 (MEC)增殖和血管发生存在于很多生理和病理过程中 ,为体外重建人增生性瘢痕组织微血管内皮细胞 (HSMEC)生长模型 .方法　正常人包皮和增生性瘢痕经 1.2 5 g· L- 1 dispase和 1.2 5 g· L- 1 胰蛋白酶依次消化 4℃ 2 4h后 ,机械挤压分离组织内 HSMEC和人真皮微血管内皮细胞 (HDMEC) ,经 5 0 0 0 U· L- 1 b FGF,2 0 0m L· L- 1胎牛血清的 DMEM内培养和 0 .1g· L- 1胰蛋白酶 ,0 .15 mmol· L- 1 EDTA的 TE分离、纯化 ,组织学 HE染色和 因子相关抗原免疫组化染色 ,观察 MEC的阳性细胞百分数 .结果　 MEC在含 b FGF培养基中增殖旺盛 ,少量混生的成纤维细胞经 TE分离 MEC而被基本遗弃 ,3代 MEC能获得 97.0 %～ 98.0 %的纯度 ,明显高于原代培养 (P<0 .0 1) ,HSMEC形态学与 HDMEC无明显差异 .结论　低浓度b FGF和 TE细胞分离液分别对 MEC的培养和纯化有可靠作用 ,HSMEC的培养成功为烧伤创面愈合和瘢痕增生机制的研究扩展了空间 .     

成纤维细胞生长因子对大鼠骨髓基质细胞诱导成骨的影响

目的 :探讨在体外培养中成纤维细胞生长因子(FGF)对大鼠骨髓基质细胞诱导成骨的影响。方法 :用IMDM培养基分离、培养出大鼠胫、股骨单层贴壁的骨髓基质细胞 ;用地塞米松 (Dex)、—甘油磷酸钠、抗坏血栓 (VitC)联合诱导培养 ;然后分 :A组 ,单纯诱导 ;B～E组 ,分别加入不同浓度的FGF对骨髓基质细胞 (MSC)的诱导分化过程干涉 ;选择 2 ,8,14 ,2 0 ,2 6d时间点比较各组的增殖指数、碱性磷酸酶活性、骨钙素含量及钙化结节形成率。结果 :当加入浓度为2 ,4 ,6 ,8mg·L-1的FGF后 ,培养细胞的碱性磷酸酶活性依次降低 ,分别为 :(82± 5 ,72± 5 ,5 8± 4 ,4 8± 4 )nkat·L-1,且 4组数据间有明显差异性 (P <0 0 5 ) ,但钙化结节形成率及骨钙素含量依次增加 ,分别为 :(1 998± 0 2 2 3,2 5 79± 0 2 38,3 0 6 7± 0 2 5 9,3 70 1± 0 2 93)ng·L-1,且 4组数据间有明显差异性 (P <0 0 5 ) .结论 :FGF浓度为 2mg·L-1时 ,ALP活性最高 ,钙化结节形成速度及骨钙素含量最小 ,且三者有明显剂量依赖性 (p <0 0 5 ) .     

bFGF对缺氧复氧体外骨骼肌细胞Bc1-2表达的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对缺氧复氧 (A/ R)损伤后肌细胞凋亡 (apoptosis)相关基因蛋白Bc1- 2表达的影响 .方法　将培养的骨骼肌细胞分为正常对照组、A/ R组及浓度分别为 10 ,2 0和 40μg· L- 1 的 b FGF预处理加 A/ R组共 5组 ,然后用免疫组化方法 (ABC法 )进行染色 ,统计分析 Bc1- 2阳性的肌细胞百分率、平均吸光度的变化 .结果　经 b FGF预处理后 ,Bc1- 2阳性的肌细胞百分率(如 b FGF2 0 μg· L- 1组与对照组相比 ,2 3.3%→ 34 .7% ,P<0 .0 1)、平均吸光度 (如 b FGF 2 0μg· L- 1 组与对照组相比 ,0 .13→ 0 .2 0 ,P<0 .0 1)均显著增加 .结论　 b FGF对 A/ R损伤的骨骼肌细胞的凋亡可能具有抑制作用     

血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用

目的　观察血小板源性生长因子 (PDGF)对人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)增殖和移行能力的影响 .方法　将体外培养的第 46代人视网膜色素上皮细胞分为DMEM组(改良型Eagle培养液 )和含有 2 0mL·L-1小牛血清的DMEM组(2 0 g·L-1DMEM ) ,每组分别加入不同浓度 (0 .1,1,5 ,10 ,5 0和 10 0 μg·L-1)的PDGF ,然后采用MTT比色法观察分析其对hRPE的增殖作用 ;应用hRPE损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察PDGF对hRPE移行的影响 .结果　①增殖作用 :0 .110 0 μg·L-1的PDGF均能促进hRPE的增殖 ,DMEM组 10 μg·L-1时促增殖作用最明显 ,增殖率达15 3% ;2 0 g·L-1DMEM组 5 0 10 0 μg·L-1的增殖率为 174% ,作用最强 .②移行作用 :PDGF能够显著促进hRPE的移行 ,并呈剂量依赖性 ,5 0 10 0 μg·L-1时促移行能力最强 ,DMEM组移行率为 5 10 % ,2 0mL·L-1FBS +DMEM组达 6 40 % .结论　PDGF能够促进hRPE的增殖和移行 ,有血清时可以加强这种作用 ,提示它在PVR的发病过程中可能发挥了重要作用     

苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的　研究苏拉明 (suramin)对培养人视网膜色素上皮细胞 (retinal pigm ent epithelium,RPE)增殖的影响 .方法　将不同质量浓度的苏拉明 (1.5 ,15和 15 0 mg· L- 1 )加入RPE细胞培养液 ,采用四甲基偶氮唑盐 (tetrazolium,MTT)比色法 ,细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色(Ag NORs)检测苏拉明对 RPE增殖活力的影响 .结果　含有10 0 m L· L- 1小牛血清的培养液可以显著刺激 RPE的增殖(P<0 .0 1) ,无血清组 A值为 0 .19± 0 .0 1、含血清组 A值为0 .30± 0 .0 1;苏拉明抑制了 10 0 m L· L- 1血清条件下 RPE的增殖 ,呈剂量依赖性 ,最大抑制率达 5 1% ,3种浓度组 A值分别为 0 .2 9± 0 .0 1,0 .2 4± 0 .0 1和 0 .14± 0 .0 1,对细胞的形态无明显影响 .结论　苏拉明对血清刺激 RPE增殖有显著非毒性抑制作用     

胆汁酸对人胰腺癌细胞的毒性作用

目的 :通过研究人胆汁中胆汁酸对人胰腺癌PANC 1和MIAPaCa 2细胞株体外增殖和超微结构的影响 ,探讨胆汁酸对人胰腺癌细胞生长抑制作用 .方法 :选用人胰腺癌PANC 1和MIAPaCa 2细胞在不加或添加 1 0mL·L-1 、2 0mL·L-1 、4 0mL·L-1 胆汁的RPMI 1 6 4 0培养液中经过 2 ,4 ,6 ,8d培养后 ,用MTT方法测定胆汁对细胞增殖抑制率 .PANC 1细胞培养 2 4h和 4 8h以后用扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部超微结构变化 .结果 :PANC 1和MIAPaCa 2细胞在添加胆汁的培养液中增殖受明显抑制 (P <0 .0 1 ) ,其对PANC 1的抑制率为 (2 4 .0 9± 5 .0 5 ) % -(89.6 1± 2 .2 8) % ,对MIAPaCa 2的抑制率为 (1 6 .71±1 0 .5 1 ) % - (78.5 5± 6 .5 9) % .PANC 1细胞在含胆汁培养液中培养后 ,细胞表面微绒毛变短变疏 ,细胞内线粒体、粗面内质网发生空泡变性 .结论 :胆汁中的胆酸对人胰腺癌细胞增殖有抑制作用 ,其抑制机制在于胆酸的细胞膜毒性作用     

高浓度氧抑制兔动脉平滑肌细胞的增殖

目的　探讨缺氧和高氧环境对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,间接判断缺氧与冠脉再狭窄的关系和研究氧疗是否能用于 PTCA支架后冠脉再狭窄的防治 .方法　用含 10 0 m L· L- 1小牛血清的 RPMI16 40培养液体外培养新西兰白兔的主动脉平滑肌细胞至 3～ 7代 ,将含 5 0 m L· L- 1小牛血清的 RPMI16 40培养液与动脉平滑肌细胞的混悬液10 0 μL 加入 96孔培养板中培养 ,按照实验分组分别在 10 0 ,2 10 ,2 5 0 ,5 0 0和 75 0 m L· L- 1 O2 及纯氧环境中培养主动脉平滑肌细胞 48h.用 MTT法和 3H- Td R掺入法检测动脉平滑肌细胞增殖的数量 .结果　以 2 10 m L· L- 1 O2 环境下动脉平滑肌细胞增殖的数量为基准对照组 ,其他各组为实验组 .5 0 0 m L· L- 1 O2 至纯氧环境下动脉平滑肌细胞的增殖显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,2 5 0 m L· L- 1 O2 与 2 10 m L·L- 1 O2环境下主动脉平滑肌细胞的增殖无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,10 0m L· L- 1 O2 环境下动脉平滑肌细胞的增殖显著高于对照组(P<0 .0 5 ) .结论　动脉平滑肌细胞的增殖随着培养环境中氧浓度升高而降低 ,缺氧促进动脉平滑肌细胞的增殖 ,高氧对动脉平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用 ;氧疗可能有助于降低冠脉再狭窄率 ,并为高压氧治疗其他以动脉血管     

人HMGB1诱导单核细胞分泌TNF-α的规律

目的 :探讨人高迁移率族蛋白 1 (HMGB1 )诱导人单核细胞TNF α的分泌规律和HMGB1在脓毒症中的作用 .方法 :HMGB1的剂量效应组分别用含有 0 .1 ,1 .0 ,1 0 ,2 0和5 0mg·L-1 HMGB1的培养基孵育与人单核巨噬细胞系THP1 ,共培养 6h ,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量 ,采用流式细胞技术观察细胞的凋亡 .HMGB1的时间效应组以含有 2 0mg·L-1 HMGB1的培养基、对照组以不含HMGB1的培养基、另外以含有 2 0mg·L-1 HMGB1和10 0mg·L-1 脂肪多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)的混合组的培养基分别培养THP1细胞 0 ,2 ,4 ,6 ,8,1 0 ,1 2和 2 4h ,同上留取离心后的培养液上清 ,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF α含量 .结果 :将HMGB1加入到单核细胞培养液中能明显刺激其TNF α的分泌 .在 0 .1～ 5 0mg·L-1 范围内 ,HMGB1诱导THP1的TNF α分泌增加 ,呈显著剂量依赖性关系 ,5 0mg·L-1 HMGB1能明显诱导THP1细胞的凋亡 ;HMGB1组和HMGB1与LPS的混合组THP1的TNF α分泌在 0～ 2 4h间呈双相性规律 .结论 :人HMGB1能诱导人单核细胞的TNF α分泌与凋亡 ,初步证实HMGB1在脓毒症的发生、发展中发挥重要作用     

自体胸腔积液上清作为培养液对肿瘤浸润淋巴细胞生长的影响

目的：观察自体胸腔积液上清作为培养液对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)生长的影响．方法：恶性胸腔积液中的TIL经贴壁法分离后，分别采用含有细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、CD3单克隆抗体(OKT3)及植物血球凝集素(PHA)的自体胸腔积液上清及含10％人AB型血清的RPMIl640进行培养，比较两种培养液对TIL的增殖速度、培养前后免疫表型变化和对自体肿瘤细胞的杀伤活性。结果：培养2周，经统计学比较发现，自体胸腔积液上清作为培养液对TIL的生长速度、免疫表型和对自体肿瘤细胞杀伤活性的影响与应用含10％人AB型血清的RPMIl640培养液培养无差异。结论：自体胸腔积液上清作为培养液培养TIL是可行的。为自体TIL疗法治疗恶性胸腔积液提供理论基础。     

氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞损伤和阿司匹林的干预

目的 :探讨阿司匹林 (aspirin)对氧化低密度脂蛋白 (oxLDL)致血管平滑肌细胞 (VSMC)损伤的保护作用及其机制。方法 :硝酸酶还原法测定VSMC培养液中一氧化氮 (NO)水平 ;MTT比色法测VSMC增殖活度 ;比色底物法检测VSMC培养液中的组织纤溶酶原激活剂 (t PA)和纤溶酶原激活剂抑制剂 1(PAI 1)的活性。结果 :5 0mg·L- 1 的oxLDL作用 2 4h可使VSMC培养液NO水平由 (82 .0 4± 7.89) μmol·L- 1 降低到 (4 8.11± 6 .4 3) μmol·L- 1 ,并明显刺激VSMC增殖 ,使其增殖活度 (MTT OD值 )明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;同时培养液中PAI 1活性显著升高 ,t PA活性显著降低。治疗剂量 (3,6mmol·L- 1 )Aspirin可显著提高VSMC培养液中NO水平 ,明显抑制oxLDL对VSMC增殖的刺激作用 ,并显著降低培养液中PAI 1活性 ,升高t PA活性。结论 :Aspirin能抑制oxLDL刺激的VSMC增殖 ,逆转oxLDL致VSMC损伤