双抗原夹心免疫层析法在新型冠状病毒感染诊断中的应用

目的:探讨双抗原夹心免疫层析法抗体检测在新型冠状病毒(2019-nCoV)感染中的诊断价值。方法:选取在医院就诊的179例新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者为临床诊断阳性病例,另选同期就诊的85例确诊未感染2019-nCoV患者为临床诊断阴性病例。采用基于双抗原夹心法的胶体金免疫层析法和上转发光免疫层析法进行血清总抗体(IgG、IgM和IgA)检测,分析两种方法2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)检测结果与临床诊断的灵敏度、特异度和总符合率。结果:建立针对2019-nCoV抗体检测的双抗原夹心免疫层析方法,胶体金免疫层析法检测血清2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)与临床诊断的灵敏度、特异度和总符合率分别为97.77%、100%和98.48%;上转发光免疫层析法分别为98.88%、100%和99.24%。两种检测方法检测血清2019-nCoV总抗体(IgG、IgM和IgA)的总符合率与临床诊断结果比较,差异有统计学意义(χ²=246.5,χ²=225.0;P<0.05)。结论:双抗原夹心法对于2019-nCoV抗体检测具有重要应用价值。     

胶体金法与荧光免疫层析法检测新型冠状病毒特异性IgM和IgG的比较分析

目的 对胶体金法与荧光免疫层析法检测新型冠状病毒(简称新冠病毒)特异性IgM和IgG的结果进行比较分析,探讨抗体产生规律及特征。方法 用胶体金法和荧光免疫层析法两种方法对28例新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎)患者87份血液样本和对照组42份血液样本(经核酸检测排除感染新冠病毒)同时检测新冠病毒特异性IgM和IgG,并对不同采样时间段抗体检测结果进行统计分析。结果 胶体金法 检测IgM和IgG敏感性分别为54. 02% (47/87)、93. 10%( 81/87) ,特异性为100. 00%(42/42)、97. 62%(41/42),荧光免疫层析法检测IgM和IgG敏感性分别为93. 10% .(81/87) 96. 55%( 84/87) ,特异性均为97. 62% (41/42) ;两种方法均显示IgM和IgG转阳平均时间为3周左右,IgM可持续存在50d不消失;荧光免疫层析法显示IgM和IgG浓度均呈先升后降变化,于5周左右达到峰值。结论 荧光免疫层析法检测IgM敏感性明显高于胶体金法,两种方法检测IgM和IgG特异性无差异,胶体金法和荧光免疫层析法均可用于新冠病毒感染的筛查,作为核酸检测方法的有效补充,荧光免疫层析法还可以动态监测抗体浓度的变化。     

近红外免疫层析、胶体金及实时荧光PCR法在A群轮状病毒临床样本检测中的应用

目的评估近红外免疫层析法、胶体金法及实时荧光PCR法在A群轮状病毒临床样本检测中的应用效果。方法采用自主研发的免疫层析试纸条和商品化胶体金及实时荧光PCR试剂盒,检测112份腹泻儿童粪便样本中的A群轮状病毒,比较3种方法的检测结果。结果实时荧光PCR法检测轮状病毒阳性率最高,为77.68%;其次为近红外免疫层析法,阳性率为66.96%;胶体金法阳性率最低,为61.61%。与实时荧光PCR法相比,近红外免疫层析法检测灵敏度为83.91%、特异度为92.00%;胶体金法检测灵敏度为73.56%,特异度为80.00%。在25份实时荧光PCR法检测为阴性样本中,近红外免疫层析法检测出2份阳性,两者符合率为85.71%。结论近红外免疫层析法检测A群轮状病毒的灵敏度高于胶体金法,略低于实时荧光PCR法。     

胶体金免疫层析法快速检测类风湿因子的研究

目的 建立一种能够简便、快速地对类风湿疾病进行诊断的胶体金免疫层析检测方法。方法 对胶体金颗粒,标记抗原的标记浓度和p H值,金标复合物浓缩比和喷涂量及包被抗原的包被浓度和划膜量进行优化并组装检测卡。对收集的70份阳性样本和131份阴性样本进行检测,并与免疫比浊法检测结果进行比较。结果 确定了胶体金免疫层析法的最优工艺参数。与免疫比浊法相比,201份样本阳性一致率为100. 00%,阴性一致率为97. 75%,总一致率为98. 52%。结论 建立了快速、简便且能定量检测类风湿因子的双抗原夹心胶体金免疫层析法。     

鼠疫监测中胶体金免疫层析法的应用效果评价

目的 了解胶体金免疫层析法在鼠疫监测中的作用及其影响因素.方法 对2006年自广西隆林县、西林县鼠疫监测中收集的鼠脏器、鼠血清以及既往鼠疫阳性病人血清,利用胶体金免疫层析技术进行鼠疫菌F1抗原(脏器)与F1抗体(血清)检测.结果 鼠肝脏120份、鼠脾脏99份,胶体金法检测鼠疫菌F1抗原均为阴性;鼠血清235份胶体金法检测鼠疫菌F1抗体为阴性、既往鼠疫阳性病人27例胶体金检测鼠疫菌F1抗体灭活组阳性2例,阳性率为7.41%(2/27),升汞组均为阴性.结论 升汞对鼠疫菌F1抗体的检测有抑制作用;胶体金免疫层析法具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速等优点,在鼠疫监测中具有重要的流行病学意义.     

胶体金免疫层法在鼠疫监测中应用效果评价

目的 了解胶体金免疫层析法在鼠疫监测中的作用及其优劣.同时观察56℃30 min灭活与升汞盐水作用1 min对鼠疫菌F1抗体检测的影响.方法 对2006年从广西隆林县、西林县鼠疫监测中收集的鼠脏器、鼠血清以及既往鼠疫抗体阳性患者血清,利用胶体金免疫层析技术进行鼠疫菌F1抗原(脏器)与F1抗体(血清)检测.结果 鼠肝脏120份、鼠脾脏99份,胶体金法检测鼠疫菌Fl抗原均为阴性;鼠血清235份胶体金法检测鼠疫菌F1抗体为阴性、既往鼠疫阳性病人27例,胶体金检测鼠疫菌Fl抗体灭活组阳性2例,阳性率为7.41%(2/27),升汞组均为阴性.结论 升汞对鼠疫菌F1抗体的检测有抑制作用;胶体金免疫层析法具有特异性强、敏感性高、操作简便、快速等优点,在鼠疫监测中具有重要意义.     

两种检测乙肝表面抗原方法的比较

目的了解两种检测乙型肝炎方法的优缺点,为实验室提供快速、准确的检验方法。方法先后采用胶体金免疫层析测试条法和做血清学检测乙型肝炎表面抗原,并将资料进行整理、分析。结果胶体金免疫层析法检出阳性250份,阳性率为54．82％;ELISA法检出阳性275份,阳性率为60.31％。两法检测结果的总符合率为94．52%。以ELISA法为常规法验证胶体金免疫层析法的敏感性,敏感性为90．91％,特异性为100％。结论胶体金免疫层析法敏感性较酶联免疫法(ELISA)差,认为检测HBsAg仍然以ELISA法为主。     

承德市2006年麻疹疑似病例实验室检测分析

目的:对2006年麻疹疑似病例实验室检测结果进行分析.方法:采用细胞培养法进行麻疹病毒分离和鉴定;采用荧光定量-聚合酶链反应法检测麻疹病毒核酸;抗体捕捉ELISA法测定麻疹IgM抗体和风疹IgM抗体.结果:79份咽拭子标本中,分离到16株麻疹病毒,阳性率为20.25%,16株麻疹病毒均为Hla基因亚型;253份血清标本中,145份标本麻疹IgM抗体阳性,阳性率为57.31%,在34份麻疹IgM抗体阴性血清标本中,13份风疹IgM抗体阳性,阳性率为38.24%;14份麻疹疑似患者咽拭子标本中,13份标本检出麻疹病毒核酸,阳性率为92.86%.结论:实验室检测在麻疹监测系统中有非常重要的作用,承德市流行的麻疹病毒为Hla亚型;采用的荧光定量-聚合酶链反应法是一种快速、特异、敏感的检测方法,此方法的建立,将使麻疹网络实验室技术不断扩展和完备.     

免疫层析法检测乙肝病毒表面抗原和表面抗体结果分析

目的:探讨免疫层析法与酶联免疫法(ELISA)检测乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗-HBs)符合率。方法:分别用免疫层析法和酶联免疫法检测待检儿童血清HBsAg和抗-HBs,将两法检测结果做以分析、比较。结果:400例标本中,胶体金法和ELISA法检测HBsAg结果差异无统计学意义,两法符合率为97.25%;乳胶层析法和ELISA法检测抗-HBs结果差异有统计学意义,两法符合率为79.25%。结论:免疫层析法简便快速,但存在一定假阳性或假阴性率,不能完全替代ELISA法进行乙肝病毒血清标志物的检测,适合在不具备ELISA法检测条件的基层医疗单位和标本初筛使用。     

风疹IgG抗体检测在风疹流行病学调查中的应用

目的应用胶体金固相免疫层析法检测风疹IgG抗体,并探讨其在流行病学分析中的应用价值。方法采用风疹抗原、羊抗人IgG抗体为原料,建立胶体金固相免疫层析法,对患者及健康人群进行检测,对结果与临床诊断意义进行分析。结果风疹IgG抗体检测中,不同年龄组风疹感染儿童IgG抗体阳性率有显著差异,不同月份感染儿童IgG抗体阳性率无显著差异;280例临床样本中,可见随着年龄的增长风疹IgG抗体阳性率也随之升高。结论胶体金固相免疫层析法检测风疹IgG抗体具有操作简便、反应快速、灵敏度高、特异性强、稳定性高,无放射性及毒性危害且临床符合率高等特点,可作为风疹病毒感染诊断和疗效观察的良好指标。     

犬恶丝虫感染胶体金试纸条检测方法的建立及应用

目的建立犬恶丝虫血清抗体检测胶体金试纸条方法。方法利用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)作为金标抗体,犬恶丝虫MTFP重组蛋白作为诊断抗原标记检测线(T线),兔抗SPA抗体标记质检线(C线),对建立的各项条件进行优化,制备胶体金试纸条;对建立的方法进行特异性、敏感性、稳定性验证试验。用建立的胶体金试纸条检测方法对62份犬血清样本进行检测。结果所制备的胶体金试纸条敏感性为1∶8,重复性良好,检测犬等孢球虫阳性血清、犬蛔虫阳性血清结果均为阴性。应用制备的胶体金试纸条检测62份犬血清,阳性样本4份,阴性样本58份,阳性检出率6.45%。结论建立的犬恶丝虫感染胶体金试纸条检测方法具有特异性、稳定性等特点,为犬恶丝虫病的诊断提供了一种新的检测方法。     

同时检测优生4项IgM抗体免疫层析试纸条的制备优化

目的:建立一种新型胶体金免疫层析试纸条,用于同时检测优生4项IgM抗体。方法:选择与制备、检测胶体金免疫层析条有关的6个因素进行优化,根据优化结果,制备出同时检测优生4项IgM抗体的免疫层析试纸条。结果:同时检测层析条与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测阴性和阳性血清标本结果对比,发现巨细胞病毒IgM抗体(CMV-IgM)、风疹病毒IgM抗体(RV-IgM)、弓形虫IgM抗体(TOX-IgM)、单纯疱疹病毒IgM抗体(HSV-II-IgM)的总符合率分别为97.9%、100%、100%、100%。结论:4项IgM抗体同时检测层析条具有特异、稳定、操作简便、结果显示直观的优点,有广泛的应用价值。     

抗原片荧光法与免疫胶体金法对流行性出血热抗体检测效果的比较

[目的]比较抗原片荧光法与免疫胶体金法对流行性出血热抗体的检测效果,为选择一种更适合CDC常规工作的方法提供依据;同时,对流行性出血热抗体阴性却疑似登革热的病例进行登革热抗体的检测,以排除登革热病毒的感染. [方法]用抗原片荧光法与免疫胶体金法对2005～2008年45份经抗原片荧光法或免疫胶体金法检测为阳性的血清样本同时进行检测,比较结果判断的难易和实验方法的繁简.同时,对15例流行性出血热抗体阴性却疑似登革热的病例用胶体金法进行登革热抗体的初步检测,然后用抗体捕获法进行检测. [结果]胶体金法,出血热6例IgG阳性,33例IgG、IgM 阳性,6例IgM阳性.抗原片荧光法,出血热44例阳性,1例阴性.15例流行性出血热抗体阴性样本中用胶体金法检测出1例登革热lgM阳性,抗体捕获法检测结果为阴性,需要对病例跟踪回访. [结论]①检测出血热,胶体金法比抗原片荧光法成本高,但检测方法简洁,出结果快,结果容易判断,不需要特殊仪嚣,更适合于CDC常规检测.②鉴于登革热在公共卫生问题中的重要性,建议增加登革热的检测项目. 的病例用胶体金法进行登革热抗体的初步检测,然后用抗体捕获法进行检测. [结果]胶体金法,出血热6 IgG阳性,33例IgG、IgM 阳性,6例IgM阳性.抗原片荧光法,出血热44例阳性,1例阴性.15例流行性出血热抗体阴性样本中用胶体金法检测出1例登革热lgM阳性,抗体捕获法检测结果为阴性,需要对病例跟踪回访. [结论]①检测出血热,胶体金法比抗原片荧光法成本高,但检测方法简洁,出结果快,结果容易判断,不需要特殊仪器,更适合于CDC常规检测.②鉴于登革热在公共卫生问题中的重要性,建议增加登革热的检测项目. 的病例用胶体金法进行登革热抗体的初步检测,然后用抗体捕获法进行检测. [结果]胶体金法,出血热6 IgG阳性,33例IgG、IgM 阳性,6例IgM阳性.抗原片荧光法,出血热44例阳性,1例阴性.15例流行性出血热抗体阴性样本中用胶体金法检测出     

2种免疫层析技术用于4种传染病及其病原体检测的研究

[目的]寻求能够快速定性,定量检测4种传染病及其病原体的试验方法。[方法]应用双抗体夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测炭疽杆菌芽孢(以下简称炭疽芽孢)、鼠疫杆菌、肠出血性大肠埃希菌O_(157)：H_7(以下简称EHEC O_(157)),评价方法的灵敏性、特异性。通过分别检测模拟掺入3种菌/芽孢的“白色粉末”和检测3种细菌的强毒株,评价在实际环境样品检测中的应用。应用双抗原夹心法,建立胶体金免疫层析法、上转磷光(UCP)免疫层析法检测鼠疫F1抗体、SARS病毒抗体,检测239份青海鼠疫疫区人员血清、1236份新疆鼠疫疫源地鼠血清,检测18份恢复期SARS病人血清和9份健康对照者血清,以及206份出入境健康人员血清,考核2种检测抗体的方法在实际样品检测中的应用。通过比较炭疽杆菌、鼠疫杆菌、大肠埃希菌O_(157)以及鼠疫杆菌抗体、SARS病毒抗体的胶体金免疫层析方法、UCP免疫层析方法,比较我们建立的2套系统与加拿大RAMP系统检测炭疽杆菌的能力。[结果]UCP免疫层析方法能在35min内完成检测,炭疽芽孢检测掺入“白色粉末”的样品灵敏性为1×10~4cfu/ test,炭疽芽孢最低检测限为1×10~5cfu/ml(原溶液芽孢浓度),多种不同的芽孢菌及其它细菌共38种54株检测说明该法特异性良好,仅与腊样芽孢杆菌有交叉反应,特异性为97％；鼠疫杆菌检测灵敏性为5×10~4cfu/ml,最低检测菌数为5×10~3cfu/test,在10~7cfu/ml水平上未发现与30余种细菌有交叉反应,包括最近缘假结核耶尔森菌；EHEC O_(157)检测灵敏性为1×10~3cfu/ml,仅与弗氏枸橼酸杆菌有交叉反应,特异性为98％。胶体金免疫层析方法能在10min内完成检测,炭疽芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O_(157)检测灵敏度分别为1×10~6cfu/ml、1×10~5cfu/ml、1×10~5cfu/ml,“白色粉末”等环境样品最低可检测敏感性为1×10~5cfu,1×10~4cfu,1×10~4cfu/test。胶体金免疫层析方法分别应用于炭疽、鼠疫强毒株的检测,检测限为5×10~4cfu/test和7×10~4cfu/test。在实际血清样品检测中,与间接血凝方法对比,鼠疫抗体UCP和胶体金免疫层析方法有更好的敏感性。血清样品检测显示,SARS抗体的胶体金和UCP免疫层析方法均有较好的特异性和敏感性。[结论]2种免疫层析方法都有快速、敏感、特异的特点：上转磷光免疫层析方法可实现定量检测,敏感性优于胶体金免疫层析法；炭疽检测与加拿大RAMP检测系统相当；胶体金免疫层析法具有简便、直观、易行的特点。2种免疫层析方法均适合于炭疽芽孢芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O_(157)、鼠疫杆菌抗体、SARS抗体的现场检测和筛查。     

胶体金技术在鼠疫监测中的应用

目的 选择快速、敏感的鼠疫检测方法,为鼠疫防治提供科学依据.方法 胶体金免疫层析法(GICA)与鼠疫间接血凝(IHA)和反向血凝(RIHA)同步检测鼠疫抗体/抗原.结果 在四川省191份动物肝脾标本中,GICA检出阳性10份,RIHA阳性6份;检测动物血清标本417份,GICA与IHA均检出阳性13份.结论 GICA简便快速,适合现场鼠疫监测.     

鼠疫F1抗体检测金标试纸条样本稀释液的筛选

目的为鼠疫F1抗体检测金标试纸条筛选出较为合适的样本稀释液,以有效避免其非特异性反应,提高试纸条的检测质量。方法选取4种血清样本稀释液,对同一份鼠疫菌免疫兔血清稀释后作鼠疫F1抗体检测,筛选出不影响敏感性的稀释液;用该稀释液检测既往鼠疫患者血清、既往发生非特异反应的血清及现场样本,验证该稀释液的检测效果。结果 4种稀释液检测同一份鼠疫菌免疫兔血清的最高检出滴度无明显差异;用含0.02 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.4、含0.5%牛血清白蛋白第五组份(ABV)生理盐水、含5%兔血清生理盐水对比检测10份既往鼠疫患者血清检测均为阳性;用含0.5%ABV生理盐水检测37份既往发生非特异反应血清和293份现场采集犬血清均为阴性。结论含0.5%ABV生理盐水能有效避免胶体金免疫层析法(GICA)非特异性反应的发生而不影响敏感性,可作为鼠疫F1抗体检测金标试纸条的稀释液。     

麻疹病毒荧光定量RT-PCR反应体系的建立

目的:建立一种快速、敏感、特异性高的麻疹病毒核酸检测方法,以便对早期麻疹病毒感染做出准确及时的临床诊断.方法:采用TaqMan特异性荧光标记探针标记的RT-PCR技术对40例临床疑似麻疹患者的咽拭子进行麻疹病毒核酸的检测,同时对其血清用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测麻疹特异性抗体IgM.结果:40份患者咽拭子RT-PCR检测均阳性,40位患者入院第2天血清ELISA法检测,麻疹特异性抗体IgM阳性28例,阴性12例,1周后对12例麻疹特异性抗体IgM阴性的患者再次检测,结果12例全阳性.结论:荧光定量RT-PCR检测麻疹病毒方法有较好的敏感性和特异性,与血清麻疹特异性抗体IgM检测方法相比,荧光定量RT-PCR法在临床症状出现后就能检测到,同时不受标本量的限制,在短时间内就可完成检测,更适合作麻疹早期诊断的实验室检查依据.     

胶体金免疫层析法应用于环境水体中霍乱检测的效果评价

目的验证胶体金免疫层析法应用于环境水样本中霍乱检测的特异性、灵敏性和实用性,寻求简便、可靠的环境水中霍乱检测方法。方法环境水样置36.5℃经6 h增菌培养后,用胶体金免疫层析法检测,同时用传统分离培养法,培养后的菌落用血清玻片凝集方法作为鉴别霍乱弧菌的金标准,且用统计学方法对这两种方法检测的结果进行比较。结果 747份水样中胶体金试验阳性19份,分离培养法培养出16株霍乱弧菌,经χ2检验,差异无统计学意义(χ2=0.61,P>0.05),表明胶体金免疫层析法与传统分离培养法检测外环境水中霍乱的结果之间差异无统计学意义。胶体金免疫层析法检测外环境水中霍乱的灵敏度为100.00%,特异性为99.59%,假阳性率为0.41%,假阴性率为0.00%,与传统分离培养法的结果一致率为99.60%。结论胶体金免疫层析法检测外环境水中霍乱的敏感度好(100.00%),特异性高(99.59%),与传统分离培养法的结果一致性较高,对外环境水中霍乱检测具有可靠性、简便性、实用性,适宜在基层作为辅助检测方法推广应用。     

3种β-HCG检测方法的比较评价

目的:比较分析胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子酶免疫法(MEIA)检测β-HCG的结果.方法:在相同条件下使用胶体金免疫层析法(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和微粒子酶免疫法(MEIA)分别对100份待测血清标本进行β-HCG平行检测并比较3种方法的测定结果.结果:微粒子酶免疫法(MEIA)检出阳性65例,阴性35例.ELISA法检测出阳性61例,阴性39份,有4份阳性标本没有检出,胶体金免疫层析法(GICA)检测出阳性56份,阴性44份,有9份阳性标本没有检出.若以MEIA法结果作为真值,ELISA法的敏感度为94.2%,特异性为100%,准确率为96%;GICA法敏感度为87.8%,特异性为100%,准确率为91%.结论:胶体金免疫层析法敏感度和准确性最低,但具有操作简便、快速、无需任何仪器等优点,适合于标本量少的基层实验室筛查使用.ELISA法敏感度和准确性较高,既可目测结果又可上机判读,适合广大实验室应用.微粒子酶免疫法(MEIA法)敏感度和准确性最高,但需要特殊仪器设备.     

三种乙型肝炎表面抗原检测方法在口岸体检中的应用评估

目的循证检验医学(EBLM)指导下,对电化学发光法(ECLIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析法等3种乙型肝炎表面抗原(HBsAg)检测方法进行评价,为口岸出入境人员寻求最佳的快速HBsAg检测方法和检测程序提供科学依据。方法ECLIA、ELISA、胶体金免疫层析法检测40份(HBsAg)标准血清盘标本,以血清盘预期结果为标准,比较3种方法灵敏度、特异度、总符合率。同时应用成本最小化分析方法,分别计算3种方法的成本。结果在血清盘HBsAg检测中,ECLIA法的灵敏度、特异性和总符合率皆达100.0%,Kappa值为1.000;而ELISA法国产科华试剂灵敏度76.9%、特异性100.0%和总符合率85.0%,Kappa值为0.432;胶体金免疫层析法灵敏度34.6%、特异性100.0%和总符合率57.5%,经Kappa检验其值为0.216。成本最小化分析结果显示:ECLIA法成本20元,ELISA法(科华,国产试剂)成本3元,胶体金免疫层析法成本3元,ECLIA法成本最高。结论ECLIA方法适用于需评估免疫状态,为接种疫苗做准备的出国留学人员、出国商务人员、入境留学生、入境商务人员的HBsAg检测。ELISA国产试剂适用于出国劳务人员、海员等一般人群。胶体金免疫层析法适用于紧急事情人员和日常复查的检测。