H22肝癌荷瘤小鼠辨证论治操作规程的研究

目的构建早期常见证候肝癌荷瘤小鼠的辨证论治及疗效评价的操作规程。方法采用小鼠计量化辨证方法,从大量荷瘤小鼠中筛选出邪毒壅盛、气虚、肿瘤居中等证候荷瘤小鼠,分为对照组与治疗组,对治疗组进行对症治疗;综合带瘤生存时间等计量化辨证指标,对辨证论治方案进行评价。结果构建起早期常见证候肝癌荷瘤小鼠的辨证论治及疗效评价的操作规程,观察到3种辨证论治方案在带瘤生存期及常见证候等方面的疗效差异。结论所构建的肝癌荷瘤小鼠的辨证论治及疗效评价的操作规程是可行的。     

H22荷瘤小鼠早期阶段的辨证论治尝试

目的：观察辨证论治对早期邪毒壅盛证、气虚证H22荷瘤小鼠的疗效。方法：将雄性昆明种小鼠随机分组．除正常组外，腋下接种H22腹水癌细胞．出瘤后．做四诊检测并辨证．按照一定标准从160只荷瘤小鼠中挑选出单纯邪毒壅盛小鼠36只、气虚证小鼠30只，将2组小鼠分别分为对照组、成方组、辨证组．成方组予固定成方．辨证组予邪毒方或益气方，综合比较药物对各组疾病与证候的疗效。结果：辨证论治在延长小鼠带瘤生存时间和抑制肿瘤生长方面的优势不突出，但具有显著地保护荷瘤小鼠阳气的作用，有助于减缓邪毒壅盛荷瘤小鼠阴虚的发生发展。结论：辨证论治对于提高早期邪毒壅盛证、气虚证荷瘤小鼠的生存质量有益。     

荷瘤小鼠非创伤性辨证指标的对照研究

目的：初步建立荷瘤小鼠非创伤性辨证指标。方法：观察H22荷瘤小鼠瘤径（瘤重）、体重、悬尾反应、尾爪毛外观、生存期等，运用中医辨证方法筛选非创伤性辨证指标。结果：荷瘤后小鼠个体差异有扩大的趋势，瘤重与去瘤体重比值与生存天数呈高度负相关（P＜0．01），悬尾反应明显低于（P＜0．01），个别出现亢进变化；尾爪毛在形、质、色泽方面有瘦阉、枯镐、色淡白或晦暗，失光泽，污物附着，形态挛缩等不舒展等表现。结论：疾病动物模型亦有有证可辨，根据中医八纲辨证的原则，可将荷瘤小鼠初步分为4种证型。     

阳虚荷H22肝癌小鼠的中医辨证辨病治疗实验研究

目的：通过对阳虚荷瘤小鼠不同治疗措施的干预结果观察，研究并探讨辨病、辨证、辨证辨病结合治疗对阳虚荷瘤小鼠的作用及其机理。方法：以氢化可的松和肝癌H22瘤株复制阳虚荷瘤小鼠复合模型，实验分模型对照组、辨证组、辨病组和辩证＋辨病组，并设不加处理的空白对照组。各组分别在造模结束后第1至15天对其进行生存状态学观察；实验结束后检测各组动物抑瘤情况、IL-1、TNF-α水平。结果：①生存状态学观察结果显示：辨证组辨证辨病结合组动物的生存状态改善明显好于其他两组。②在抑肿瘤生长方面，辨证辨病结合组与对照组比较P〈0．01，差异为极显著性；辨病组与对照组比较0．01〈P〈0．05，差异为显著性；而辨证组与对照组比较P〉0．05，无统计学意义。③IL-1和TNF-α以辨证辨病结合组的上升幅度最大，辨证组居其次，但两者之间无统计学意义（P〉0．05）。辨病组的上升幅度最小，且与前两组均有统计学意义（P〈0．05）。结论：阳虚荷H22肝癌小鼠的复合动物模型是可以成功建立的。辨证结合辨病治疗是目前较为理想的中医治疗模式。从不同角度探索证型的实质，进一步丰富了证型的内涵，为证型治疗开拓了新思路。     

H22肝癌荷瘤小鼠最佳中药个体化治疗方案的探索和研究

目的:探索H22肝癌小鼠的中药个体化最佳治疗方案。方法:昆明种雄性小鼠腋下接种H22腹水瘤细胞,将中药个体化辨证论治联合肿瘤局部介入化疗/索拉非尼口服综合治疗方案进行调整:对预判预后可能较差者,给予积极治疗,预后可能较好者缓治,并运用小鼠标准化、计量化辨证方法,观察调整后的方案及肿瘤局部介入化疗/索拉非尼口服单纯西医治疗方案对小鼠带瘤生存时间、抑瘤率和证候的影响。结果:前者延长小鼠带瘤生存时间的作用较好(与对照组比较,P<0.05),然而对气血阴阳证候以及胸腺和脾脏指数等指标的影响,未表现出明显的优势。结论:调整后的中药个体化辨证论治方案为H22肝癌荷瘤小鼠的有效治疗方案,其还有待于进一步的优化以成为最佳治疗方案。     

气虚证H22荷瘤小鼠甲状腺独特上下调基因的表达特征

目的：揭示荷瘤小鼠气虚证甲状腺基因表达的特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,应用GeneChip Mouse Exon1.0STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候甲状腺基因表达的差异,重点关注早期气虚证上下调且表达量高的基因。结果：气虚证荷瘤小鼠甲状腺独特上调基因有33个,其中表达较高的基因6个,分别为Mta2d1、Comd3、Ucp1、Psmc6、LOC665964、Cyp2j11;独特下调的基因有31个,其中正常组表达较高的基因有5个,分别为Lcn2、Arntl、Mansc1、Hk1、Rpl29。结论：肿瘤发生后,H22荷瘤小鼠甲状腺存在大量的基因表达改变,其中早期气虚证独特上调或下调基因,可能与气虚证本质有关。     

荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸下调的基因

目的:观察H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸组织一致下调的基因。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊和辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和早期气虚证睾丸组织基因表达谱的差异,重点关注早期阶段2个证候一致下调且表达量较大的基因。结果:筛选出早期邪毒壅盛和气虚证一致下调的基因共150个,其中有11类可以简单归类的基因;气虚与邪毒壅盛证这些基因的表达量差异不大,前者略高于后者;中晚期荷瘤小鼠这些基因表达接近正常对照组,甚至上调。结论:肿瘤发生的早期睾丸基因改变以下调为主,一些基因涉及精子发生,提示荷瘤小鼠生殖受到影响;鉴于两个证候这些基因表达的差异不大,及中晚期表达有增加趋势,提示这些基因下调可能与肿瘤早期应激有关;多数基因在睾丸组织中的功能还不清楚,提示有大量探索工作。     

荷瘤小鼠证候的发生、演变、兼证及预后

目的观察荷瘤小鼠证候及其演变。方法采用小鼠四诊工作站及其标准,定量检测小鼠瘤径、体重、腋温、爪、尾显微数码拍照屏提取r值、小鼠水平和垂直移动,估算出瘤体积和去瘤体重。并据此建立痰瘀邪盛、阴虚、气虚、阳虚、阳气虚等辨证标准,计量辨证。结果荷瘤小鼠肿瘤早期增长速度差异大;随着病情的发展,不同虚证发生率和程度增加,以气虚最严重,其次是阳气虚,阴虚发生率低。随着病情的发展,荷瘤小鼠虚证兼证的比例增加,无证可辨和单证的数量下降,复合证组合显著增加。早期肿瘤增长迅速者,预后差,相关分析具有统计意义(P=0.01),阳气虚、气虚、阳虚等预后较差。病程中,腋温下降、体重持平和下降是预后差的重要标志。研究提示,早期控制肿瘤增长十分必要;治疗重点应在肿瘤局部,不宜损伤机体正气;扶持阳气十分必要。建议,作为肿瘤疗效比较,要求在荷瘤小鼠出瘤后,依据肿瘤大小分层随机分组,以免造成分组偏倚,影响疗效评价。结论本研究在疾病小鼠证候采集中,首次采用了标准化四诊检测技术,四诊和辨证实现了计量化,所建立的方法和思路,有助于揭示疾病状态下证候的自然发生及其演变,为中医药病证结合和辨证论治的基础研究提供了方法学,具有重要的学术意义和应用价值。     

同病异证H22肝癌小鼠脾脏细胞周期通路基因表达的特征

目的 观察同病异证H22肝癌小鼠脾脏细胞周期通路基因转录的特征.方法 运用小鼠计量化四诊及辨证方法及Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 Array等技术,从接种H22肝癌昆明种小鼠出瘤早期筛选邪毒壅盛证、气虚证小鼠,检测其脾脏细胞周期通路基因的表达.结果 与正常组比较,邪毒壅盛证和气虚证小鼠脾脏细胞周期通路相关基因一致发生了明显的上调,其中,邪毒壅盛证上调更明显.结论 肿瘤发生后,小鼠脾脏细胞周期通路总体处于比较活跃的状态,细胞增殖加速,邪毒壅盛证、气虚证等同病异证小鼠差别不大.     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠甲状腺独特上调和下调基因的检测

我们以往的研究一再发现,荷瘤小鼠在肿瘤发生后,会自发形成证候及其演变,早期以邪毒壅盛证、气虚证多见,且发现邪毒壅盛证动物预后差,带瘤生存时间短.鉴于学术界以往的研究观察到中医证候的形成与甲状腺密切相关,那么,邪毒壅盛证发生时,甲状腺是否存在独特的基因表达特征,是否与该证候形成有关?因此,我们通过业已建立的小鼠四诊工作站及其系列标准[1-2],对H22荷瘤小鼠进行辨证,筛选出早期邪毒壅盛证、气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个常见证型,继而采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术对以上各证候荷瘤小鼠甲状腺等组织的基因进行了检测,本文重点报道邪毒壅盛证甲状腺独特上调与下调且表达量较高的基因.     

H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸表达改变显著的基因

目的:探讨H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸基因表达谱改变的特征。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊及辨证方法,以及Gene Chip Mouse Exon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠睾丸组织早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证3个阶段4个证候睾丸基因表达谱的差异,重点关注肿瘤发生后一致上调或下调明显且表达量大的基因。结果:肿瘤发生后三个阶段一致上调的基因5个;一致下调的基因12个,其中7个与性激素和生殖有关;早期上调、中期和中晚期下调的基因1个;早期和中期上调、中晚期下调的基因3个。在这些基因中,Saa3在晚期气阴阳虚证表达上调了近60倍,Abpg、Pip、Car6在早期邪毒壅盛证表达上调了40~80倍,值得关注。结论:肿瘤发生后荷瘤小鼠睾丸基因表达的改变以下调为主,性激素合成与生殖受到影响;一些表达显著改变的基因值得进一步研究。     

不同证候小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴基因表达的特征

目的：观察不同证候小鼠下丘脑-垂体-甲状腺轴（HPTA）相关主要已知基因表达的特征。方法：采用小鼠计量化四诊和辨证方法、及GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray等技术,观察正常偏气虚证小鼠、早期邪毒壅盛证和早期气虚证荷瘤小鼠HPTA相关基因表达差异。结果：（1）正常小鼠气虚证者,甲状腺机能减退,Atp1a1、Atp1a2、Atp1a3、Atp1b1、Atp1b2、Pax8、Tg、Tpo、NIS等与甲状腺素合成有关基因的表达水平一致下降;而垂体、下丘脑处于积极的代偿之中,TRH、TSH等激素表达增加。（2）肿瘤发生后的早期,荷瘤小鼠亦出现甲状腺机能的减退,垂体、下丘脑亦处于积极的代偿之中,TRH、TSH等激素表达增加。但是,该阶段邪毒壅盛证小鼠,垂体已出现失代偿的征兆,TSHb的表达量已显著低于同期的气虚证以及正常气虚小鼠。结论：甲状腺机能减退可能是气虚证发生的重要基础,而非下丘脑和垂体。荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证垂体继发的失代偿表现,可能与该证候荷瘤小鼠带瘤生存期短、预后差有关。     

脾虚证荷瘤小鼠比较性治疗的实验研究

目的:研究比较3组不同治疗模式脾虚荷肝癌H-22小鼠的整体疗效,从实验的角度探讨中医治疗肿瘤的最佳治疗模式。方法:昆明小鼠60只,以泻下加劳倦过度方式结合皮下接种H-22肿瘤细胞的模式造成脾虚型荷瘤小鼠模型,利用取数字随机法分成4组(对照组、辨病组、辨证组和病证组),每组15只。4组分别给予生理盐水、抑瘤汤、四君子汤、抑瘤汤+四君子汤进行干预,共10天。观察小鼠生存期。结果:造模后,各组出现明显食少、稀便、肛门污秽、神软萎靡、喜聚堆倦伏、毛色枯槁、拱背竖毛、活动缓慢、反应迟钝等脾虚证状,以第6天最显著,制作成脾虚荷瘤小鼠模型。经过10天的干预治疗,各组小鼠的上述症状有不同程度的改善。结论:1抑瘤汤、四君子汤、抑瘤汤+四君子汤对抑制脾虚型H-22肝癌小鼠肿瘤生长有一定的作用,对肿瘤抑制作用强度为:抑瘤汤+四君子汤抑瘤汤四君子汤。3抑瘤汤、四君子汤、抑瘤汤+四君子汤对脾虚型H22肝癌小鼠的生存期都有一定程度的改善,其中抑瘤汤+四君子汤的作用最强,四君子汤次之,抑瘤汤较弱。结果提示从动物实验的角度提示辨证联合辨病治疗效果最佳。     

不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤ABC转运蛋白家族基因转录特征

目的:观察不同证候H22荷瘤小鼠肿瘤组织ABC转运蛋白家族基因表达的特征。方法:对来源于早期邪毒壅盛和单纯气虚、中期阳气虚和中晚期气阴阳虚四种证候小鼠H22肿瘤组织4张Affymetrix GeneChip Mouse Exon 1.0 STArray数据标准化处理后,筛选其中的ABC转运蛋白基因进行差异分析。结果:从芯片中共筛选出与ABC转运蛋白有关的基因47个,以邪毒壅盛小鼠肿瘤基因转录最活跃,气虚次之,阳气虚最低;四种常见证候间共有25个基因转录具有明显差异;Abce1和Abcf1等7个基因中在四种常见证候肿瘤中转录水平最高。结论:Tap1(Abcb2)和Abcd2等6个高表达基因可能是邪毒壅盛型小鼠肿瘤增长快的重要因素;不同证候荷瘤小鼠肿瘤组织中的ABC转运蛋白基因转录既存在一定共性又存在很大差异,进一步证明了H22荷瘤小鼠证候客观存在的物质基础,为中医辨证论治提供分子依据。     

荷瘤小鼠气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调基因的表达及特征

目的：筛选荷瘤小鼠中晚期气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调的基因并描述其特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法，及Gene Chip Mouse Exonl．0ST Array等技术，检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异，重点关注那些表达量大、差异显著的基因，筛选气阴阳虚证独特上调和下调的基因。结果：筛选到气阴阳虚证独特上调的基因13个：Apoe、S100a8、Anxal、LOC383949、Iq2-Ea、S100a6、Vim、Tjnf2、Ngp、Gbp5、Myc、Cls、Ltf；独特下调的基因5个：Klklb5、A1bl、Scdl、Bglap2、Gc。结论：①存活到中晚期的气阴阳虚证荷瘤小鼠，垂体细胞的增殖与代谢十分活跃；②这些基因的表达变化可能是肿瘤小鼠气阴阳诸虚证的标志之一。     

同病异证H22肿瘤小鼠内分泌-免疫网络的物质基础

目的:揭示同病异证肿瘤小鼠内分泌-免疫网络的物质基础。方法:采用标准化诊法技术在接种同样H22腹水癌细胞数的肿瘤小鼠中筛选出不同组别的同病异证肿瘤小鼠,ELISA法检测血清内分泌-免疫网络有关激素与分子含量。结果:筛选出邪危组、邪毒组、邪中组、邪微组及邪中兼气虚组等5个同病异证组别小鼠,发现其ACTH、醛固酮、TSH、T3、T4、FT3、FT4、睾酮、IL-2、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ等含量与同病异证有着对应性改变。结论:荷瘤小鼠存在同病异证且有其内在复杂及特征性的内分泌和免疫系统改变,这为荷瘤小鼠个体化辨证论治及其疗效评价提供了客观依据,也为比较和优化辨证论治方案提供了模式生物的依据。     

依据证候要素辨证组方治疗慢性心力衰竭的疗效观察

目的：评价基于证候要素辨证论治慢性心力衰竭的疗效及对超声LVEF值、6 min步行试验(6MWT)、患者生活质量的改善。方法：将55例慢性心衰患者随机分为试验组和对照组，对照组给予常规西药治疗，试验组在西药常规治疗基础上通过证候要素辨证给予相应的中药治疗。观察患者治疗前后的中医证候疗效、超声LVEF值、6 min步行试验结果、慢性心衰生存质量量表总积分的变化。结果：试验组的有效率为66.67%，对照组为72%，差异无统计学意义(P>0.05);2组超声LVEF值、6 min步行试验、慢性心衰生存质量量表总积分较治疗前均有提高，差异有统计学意义(P<0.05)，组间比较无统计学差异(P>0.05)。结论：以证候要素辨证论治慢性心衰可以改善中医症状，提高LVEF值及慢性心衰患者的生存质量，值得进一步研究。     

胃瘤安对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及哭免疫功能影响的研究

目的：观察胃瘤安对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：先建立H22荷瘤小鼠模型,小鼠接种24h后随机分为空白组、环磷酰胺组、胃瘤安高剂量组和胃瘤安低剂量组。分别给药处理后进行T淋巴细胞酯酶染色试验,计算T淋巴细胞酯酶染色率;溶血素抗体生成试验,计算HC50。取肿瘤称重,计算抑瘤率．比较各组差异。二硝基氯苯（DNCB）诱导的迟发型变态反应试验,以小鼠左右耳片重量差的毫克数作为鼠耳迟发型超敏反应的强度。并计算肿胀抑制百分率。结果：胃瘤安高、低剂量均可增加荷瘤小鼠T淋巴细胞酯酶染色率,促进小鼠溶血素抗体生成,与空白组比较具有显著性差异。胃瘤安高剂量对DNCB诱导的H22荷瘤小鼠迟发型超敏反应具有明显的免疫促进作用,与空白组比较有显著性差异。胃瘤安高、低剂量组小鼠的H22实体瘤也比空白组明显减小。结论：胃瘤安在抑制肿瘤的同时具有促进H22荷瘤小鼠体液免疫和细胞免疫的作用。     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChipMouseExon1．0STArray等技术及芯片分析方法，观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个，其中包括Tete3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个，Adipoq、Nream、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个，以及Atp8b3、Pnpla3、Retn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个，有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因，可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

乳酸脱氢酶C4在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨乳酸脱氢酶C4(LDH-C4)在邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织的表达水平及其意义。方法采用Affy-metrix Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array及其方法检测乳酸转运和氧化相关基因在H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异,芯片重复两次;并采用实时荧光定量PCR对两种高乳酸亲和力的脱氢酶基因Ldhb和Ldhc在各种证候中的表达量进行检测。结果乳酸转运相关基因的表达要高于氧化相关基因,尤其以H22接种后早期最明显;Ldhb基因的表达在H22接种后早期、中期和晚期变化不明显,而Ldhc基因在H22接种后早期气虚、中期和晚期的表达也不明显,且与Ldhb表达量相近,但它在早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织中表达量显著升高。结论在荷瘤小鼠肿瘤组织中,尤其是H22接种后早期,肿瘤细胞产生的乳酸作用不仅在于氧化产能;LDH-C4可能代替LDH-B4参与了早期邪毒壅盛证荷瘤小鼠肿瘤组织缺氧肿瘤细胞的代谢拯救途径。