活血解毒方对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响＊

目的 研究活血解毒方对缺氧/复氧（H/R）所致的心肌细胞凋亡的影响。方法 体外培养H9C2心肌细胞并分成正常对照组（Control组）、缺氧复氧组（H/R组）、H/R + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组，其中正常对照组给予DMEM培养基培养，缺氧复氧组给予缺氧4 h、复氧6 h处理，缺氧复氧 + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组分别给予活血解毒中药、LY294002、活血解毒中药配合LY294002预处理24 h，然后均给予缺氧4 h、复氧6 h处理。采用CCK8检测各组心肌细胞的存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平，电镜观察各组心肌细胞中线粒体、自噬体的变化，Western Blot检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase3）、β-连环蛋白（β-Catenin）、p-p65、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白的表达。结果 活血解毒方预处理显著增加H/R诱导的H9C2心肌细胞凋亡，降低凋亡相关蛋白Cleaved caspase3、β-Catenin、p-p65表达，增加Bcl-2表达。结论 活血解毒方可通过抑制细胞凋亡，降低缺氧/复氧所致的心肌细胞损伤，其作用机制可能与PI3K信号通路相关。     

加味丹参饮含药血清对缺氧/复氧H9C2心肌细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Beclin1表达的影响

目的探讨加味丹参饮治疗心肌缺血再灌注损伤的可能作用机制。方法将体外培养的H9C2心肌细胞随机分为6组,每组6个复孔。空白血清组在含15%空白血清培养液中常规培养29 h;缺氧预处理组更换缺氧培养液缺氧20 min,复氧20 min,再缺氧20 min后换为空白血清培养液常规培养24 h,缺氧2 h,再给氧3 h;缺氧/复氧组在含15%空白血清培养液中常规培养24 h,更换缺氧培养液,缺氧2 h,再给氧3 h;含药血清组在含15%药物血清中常规培养24 h,缺氧2 h,再给氧3 h;含药血清+自噬抑制剂组用3-甲基腺嘌呤10 mmol/L预处理30 min,余同含药血清组;含药血清+自噬激动剂组用雷帕霉素100 nmol/L预处理30 min,余同含药血清组。倒置显微镜观察各组心肌细胞生长及形态变化,比色法检测定各组细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,透射电子显微镜观察心肌细胞自噬体形态及数量变化,Western blot法检测各组自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Beclin1表达。结果与空白血清组比较,缺氧/复氧组镜下心肌细胞变性坏死程度增加,电镜下有少量自噬体,培养液中LDH漏出率增加,Beclin1蛋白水平增加(P0.05或P0.01);与缺氧/复氧组比较,含药血清组及含药血清+自噬激动剂组镜下心肌细胞变性坏死程度减轻,电镜下自噬体数量增多,培养液中LDH漏出率显著降低,LC3Ⅱ及Beclin1蛋白表达上升(P0.05)。结论加味丹参饮可能通过上调自噬相关蛋白LC3Ⅱ及Beclin1表达,增强细胞自噬,从而保护损伤的心肌细胞。     

加味丹参饮预处理诱导大鼠心肌细胞HSP70 mRNA的表达

目的观察加味丹参饮预处理诱导大鼠缺氧／复氧心肌细胞热休克蛋白70（HSP70）mRNA的表达。方法将培养72小时的乳鼠心肌细胞随机分6组，空白组正常培养；血清对照组加50％大鼠血清培养；含药血清组加50％含加味丹参饮的药物血清培养；缺氧／复氧组予缺氧再给氧。缺氧预处理组、加味丹参饮预处理组先给予缺氧预处理和加味丹参饮预处理，24小时后再予缺氧再给氧。结果加味丹参饮预处理和缺氧预处理24小时后心肌细胞存活率显著高于缺氧／复氧组（P〈0．01），乳酸脱氢酶（LDH）及肌酸激酶（CK）显著低于缺氧／复氧组（P〈0．01），HSP70 mRNA表达显著高于缺氧／复氧组（P〈0．01）。结论加味丹参饮预处理具有延迟保护作用，其机理与诱导细胞内HSP70 mRNA合成有关。     

温阳振衰颗粒对阿霉素致心肌细胞损伤MEF2表达的影响

目的观察温阳振衰颗粒含药血清对H9C2心肌细胞损伤模型肌细胞增强因子2(MEF2)表达的影响。方法实验分为正常对照组、H9C2损伤组、5%含药血清组和10%含药血清组。H9C2损伤组的细胞培养基中加入2.67μmol/L的阿霉素(ADR),两含药血清组培养基中加入2.67μmol/L的ADR和5%,10%温阳振衰颗粒含药血清,共培养44 h。检测实验末各组H9C2心肌细胞中p-MEF2、MEF2表达量。结果各损伤组细胞存活率和p-MEF2表达量均明显低于正常对照组(P均0.05),5%含药血清组和10%含药血清组细胞存活率和p-MEF2表达量均明显高于H9C2损伤组(P均0.05),且10%含药血清组均明显高于5%含药血清组(P均0.05);各组间H9C2心肌细胞MEF2表达量比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论温阳振衰颗粒能抑制MEF2蛋白的过度去磷酸化,这可能是其治疗慢性心力衰竭的重要机制之一。     

大脑性瘫痪兼有语言障碍患儿实施不同康复治疗方法的疗效

〔摘 要〕 目的：研究丹参注射液在保留肾单位手术（NSS）中对于肾功能的保护,肾脏缺血再灌注损伤方面的 影响。 方法：选取佳木斯市中心医院 2019 年 5 月至 2021 年 7 月收治的 75 例早期肾脏肿瘤患者。按照数表法随机分 为对照组 38 例和观察组 37 例,对照组采用单纯手术治疗,观察组采用丹参注射液联合手术治疗。比较两组患者肾动 脉阻断时间差异,手术前后血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肾功能及 Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白 –1 （Keap1）– 核因子 E2 相关因子 2（Nrf2）表达情况。 结果：两组患者血清术后 SOD 水平均低于术前,MDA 水平均 高于术前,且观察组患者术后血清 SOD 水平高于对照组,MDA 水平低于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）; 两组患者治疗后血肌酐（Scr）均高于治疗前,肾小球滤过率（GFR）均低于治疗前,且观察组 Scr 低于对照组, GFR 高于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。两组患者术后 Keap1 信使核糖核酸（mRNA）及 Nrf2 mRNA 表达量均低于术前,且观察组患者术后 Keap1 mRNA 及 Nrf2 mRNA 表达量高于对照组,差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）。 结论：丹参注射液在 NSS 中对患者肾功能可起到保护作用,并可缓解氧化应激损伤,其作用机制可 能与调节 Keap1–Nrf2 信号通路表达有关。     

丹参注射液在保留肾单位手术中的临床疗效及作用机制

〔摘 要〕 目的：研究丹参注射液在保留肾单位手术（NSS）中对于肾功能的保护，肾脏缺血再灌注损伤方面的 影响。 方法：选取佳木斯市中心医院 2019 年 5 月至 2021 年 7 月收治的 75 例早期肾脏肿瘤患者。按照数表法随机分 为对照组 38 例和观察组 37 例，对照组采用单纯手术治疗，观察组采用丹参注射液联合手术治疗。比较两组患者肾动 脉阻断时间差异，手术前后血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肾功能及 Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白 –1 （Keap1）– 核因子 E2 相关因子 2（Nrf2）表达情况。 结果：两组患者血清术后 SOD 水平均低于术前，MDA 水平均 高于术前，且观察组患者术后血清 SOD 水平高于对照组，MDA 水平低于对照组，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）； 两组患者治疗后血肌酐（Scr）均高于治疗前，肾小球滤过率（GFR）均低于治疗前，且观察组 Scr 低于对照组， GFR 高于对照组，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。两组患者术后 Keap1 信使核糖核酸（mRNA）及 Nrf2 mRNA 表达量均低于术前，且观察组患者术后 Keap1 mRNA 及 Nrf2 mRNA 表达量高于对照组，差异具有统计学意义 （P ＜ 0.05）。 结论：丹参注射液在 NSS 中对患者肾功能可起到保护作用，并可缓解氧化应激损伤，其作用机制可 能与调节 Keap1–Nrf2 信号通路表达有关。     

双参宁心方的正常与心肌缺血模型大鼠血清对 缺氧/复氧H9C2细胞作用的比较

目的:比较大鼠在正常状态与心肌缺血状态下制备的双参宁心方(SSNX)空白及含药血清对体外缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力的影响。方法:分别设立正常组、心肌缺血模型组。大鼠心肌缺血模型由冠状动脉结扎法建立,术后缝合伤口继续喂养。术后2 h除正常空白、模型空白、模型假手术组给予生理盐水外,均按高、中、低剂量(180,90,45 mg.kg-1)分别ig给予SSNX 5日。末次给药后30,90,150 min分批处死大鼠,分别制备正常及模型血清。将其作用于缺氧/复氧H9C2细胞。MTT法检测H9C2细胞活力。结果:正常空白血清与模型空白血清对缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力影响差异明显(P<0.05),正常动物SSNX含药血清与心肌缺血模型动物SSNX含药血清均有提高缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力的作用,分别与正常动物空白血清及模型动物血清比较(P<0.05);各时间点正常含药血清与相应时间点模型含药血清相比更显著提高了H9C2心肌细胞活力。结论:2种方法制备的SSNX血清对体外缺氧/复氧H9C2心肌细胞活力的作用趋势一致,但强度有一定差异。     

温阳振衰颗粒对阿霉素致心肌细胞损伤ERK5/CREB的影响

目的观察温阳振衰颗粒含药血清对H9C2心肌细胞损伤模型ERK5/CREB表达的影响。方法 H9C2心肌细胞分为正常对照组,H9C2损伤组,5%含药血清组和10%含药血清组。H9C2损伤组的培养基中加入2.67μmol/L的ADR,两含药血清组培养基中加入2.67μmol/L的ADR和5%或10%的温阳振衰颗粒含药血清,共培养44h。检测实验末各组细胞p-ERK5、ERK5、p-CREB、CREB的表达水平。结果与正常对照组相比,各组p-ERK5表达明显下调,p-CREB表达明显上调,差异具有统计学意义(P0.05),10%含药血清组p-ERK5下调及p-CREB上调均相对缓慢(P0.05)。各组细胞ERK5、CREB的表达无明显差异(P0.05)。结论温阳振衰颗粒能抑制ERK5蛋白的过度去磷酸化和CREB蛋白的过度磷酸化,这可能是其治疗慢性心衰的重要机制之一。     

白藜芦醇对氧糖剥夺过程中 H9C2 细胞的保护机制

〔摘 要〕 目的：白藜芦醇是一种具有生物活性的多酚类物质,生物学功能目前尚不清楚。本研究旨在探讨白藜芦醇对 氧糖剥夺（OGD）过程中心肌细胞损伤的保护机制。方法：采用大鼠心肌细胞 H9C2 细胞,建立 OGD 模型;经白藜芦醇干 预后,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达量,细胞活性检测试剂盒（CCK8） 检测细胞活性,Westernbolt、免疫荧光检测铁死亡相关蛋白的变化情况。结果：白藜芦醇能增强 OGD 诱导 H9C2 细胞中 SOD 的表达水平,降低 MDA 的表达,增强细胞活性,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;同时白藜芦醇也能够显著提高 铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶 4（GPX4）和铁蛋白重链 1（FTH1）的表达,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论： 白藜芦醇通过降低氧化应激水平和减轻铁死亡来保护 OGD 条件下心肌细胞损伤。白藜芦醇可以作为一种预防心肌缺血 / 再 灌注（I/R）损伤的潜在药物。     

葛根素激活AMPK/Akt/GSK-3β信号通路减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞肥大作用研究

[目的] 探讨葛根素对高糖诱导的H9c2心肌细胞的保护作用及机制。[方法] 采用高糖损伤H9c2心肌细胞48 h,建立体外糖尿病心肌损伤细胞模型;罗丹明标记的鬼笔环肽标记细胞骨架,测定细胞表面积;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测细胞中心肌肥大相关蛋白β-肌球蛋白重链（β-MHC）的水平、AMP活化蛋白激酶α（AMPKα）、丝氨酸/苏氨酸激酶（Akt）和糖原合成激酶3β（GSK-3β）蛋白的磷酸化水平、以及1,4,5-三磷酸2型受体（IP3R2）和Sigma-1受体（Sig-1R）的蛋白水平。[结果] 葛根素（20 μmol/L）能显著抑制高糖诱导的心肌细胞表面积增大;Western Blot分析结果显示,高糖能上调β-MHC蛋白水平、抑制AMPK和Akt磷酸化,葛根素能下调β-MHC、IP3R2蛋白水平同时促进AMPK、Akt和GSK-3β的磷酸化。[结论] 葛根素可能通过激活AMPK/Akt/GSK-3β信号通路减轻高糖诱导的心肌肥大。     

尖瓣瑞香茎中双黄烷酮类成分研究

目的 研究尖瓣瑞香Daphne acutiloba茎中双黄烷酮类化学成分.方法 采用硅胶柱色谱与Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法鉴定化合物的结构.结果 从尖瓣瑞香茎95％乙醇回流提取物醋酸乙酯萃取部位中分离得到14个双黄烷酮,分别鉴定为毛瑞香素A(1)、毛瑞香素C(2)、毛瑞香素C'(3)、毛瑞香素F(4)、毛瑞香素E(5)、荛花醇(6)、毛瑞香素K(7)、异狼毒素(8)、狼毒素(9)、毛瑞香素D1 (10)、毛瑞香素H(11)、3-甲氧基-毛瑞香素H(12)、毛瑞香素K ’(13)和毛瑞香素B (14).结论 除化合物14外,其他化合物均为首次从该植物中分离得到.     

UPLC/Q-TOF-MS/MS鉴定西南银莲花中的皂苷类成分

目的 通过超高效液相色谱-飞行时间质谱（UPLC/Q-TOF-MS/MS）联用技术,对西南银莲花Anemone davidii根茎的皂苷类化学成分进行鉴定。方法 采用Welch C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）,以0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱进行色谱分离;质谱采用电喷雾（ESI）离子源,在负离子模式下采集数据,运行时间40.25 min,使用质谱分析软件中的目标化合物筛查法,通过保留时间、精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片鉴定监测到的化学成分。结果 包括常春藤型皂苷及齐墩果酸型皂苷在内的52个三萜皂苷类成分得到良好的分离和鉴定,47个为该植物中首次发现,其中有9对同分异构体。结论 该方法快速、准确,为西南银莲花的化学成分鉴定提供一种新的策略。     

毛酸浆浆果的化学成分研究

目的 研究毛酸浆Physalispubescens浆果的化学成分.方法 利用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、中压柱色谱及半制备高效液相色谱等方法分离纯化,根据核磁共振谱、质谱等谱学数据鉴定化合物结构.结果 从毛酸浆浆果中分离得到16个化合物,分别鉴定为3,7,3′-三甲基槲皮素(1)、山柰酚(2)、金圣草酚(3)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、2α,3β,23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸(5)、白头翁皂苷A(6)、白头翁皂苷D(7)、咖啡酸(8)、1-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖(9)、N-反式-阿魏酰酪胺(10)、新橄榄脂素(11)、梣皮树脂醇(12)、松脂醇(13)、蔗糖(14)、尿苷(15)、β-谷甾醇(16).结论 化合物5～7、9～15为首次从酸浆属植物中分离得到,化合物3、8为首次从该植物中分离得到.     

广西不同产区两面针HPLC指纹图谱研究

目的 采用高效液相色谱法建立两面针的HPLC色谱指纹图谱分析方法,为其品质控制提供可靠依据.方法 采用HPLC-UV分析两面针的指纹图谱.色谱柱:UltimateTMXB C8柱(250 nn×4.6 mm,5μm);流动相为水(0.2％磷酸+0.2％三乙胺)(A)-乙腈(B),梯度洗脱;0～5 min,8％～12％ B; 5～7 main,12％～15％B;7～14 main,15％～21％ B; 14～35min,21％～25％B; 35～40min,25％～36％B; 40～60min,36％～52％B; 60～80min,52％～100％B; 80～95min,100％B;体积流量1.0 mL/min柱温35℃;检测波长250 nm,测定24批两面针指纹图谱,应用相似度分析、系统聚类分析,对两面针进行分类研究.结果 在色谱指纹图谱中,确定了22个共有峰,根据相似度分析、系统聚类分析的结果,将24批药材分为2类.结论 该指纹图谱检测方法方便,重现性好,可用于两面针质量控制.     

椪柑柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶基因的克隆、分析及表达

目的克隆中药橘核主要来源品种椪柑Citrus reticulata的柠檬苦素-UDP-葡萄糖基转移酶(limonoid-UDP-glucosyl transferase gene,LGT)基因,并进行生物信息学及表达分析为橘核有效成分合成及调控机制研究提供基础。方法克隆获得LGT序列,通过生物信息学对该基因蛋白的特征进行分析,构建LGT与相关物种LGT的系统进化树,利用RT-PCR分析橘皮、橘肉以及橘核中LGT基因表达量,并进行分析和比较。结果测序所得椪柑LGT序列全长为1 530 bp,具有1 509 bp的完整开放阅读框,编码502个氨基酸。并对其蛋白二级、三级结构进行了分析和预测。基因表达分析结果发现椪柑LGT基因在橘核中表达量最低,其次为橘皮,表达量最高为橘肉。结论成功克隆、分析并表达了椪柑LGT基因,为橘核中柠檬苦素类物质合成及调控机制研究提供基础。     

大籽獐牙菜的化学成分研究

目的 研究大籽獐牙菜Swertia macrosperma的化学成分。方法 利用高效液相色谱、柱色谱、重结晶等方法进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据分析鉴定化合物的结构,采用半叶枯斑法进行抗烟草花叶病毒（TMV）活性实验。结果 从大籽獐牙菜全草甲醇提取物中共分离得到8个化合物,分别鉴定为9, 10-二羟基獐牙菜苷（1）、3′-O-(3-羟基苯甲酸酯) 獐牙菜苷（2）、芒果苷（3）、2, 6, 8-三羟基口山酮-1-O-β-葡萄糖苷（4）、1, 2, 3, 4-四氢-1, 6, 8三羟基口山酮-4-O-葡萄糖苷（5）、1, 2, 3, 4-四氢-1, 4, 6, 8-四羟基口山酮（6）、顺-4, 4′-二羟基二苯基乙烯（7）、反-4, 4′-二羟基二苯基乙烯（8）。结论 化合物1为新化合物,命名为大籽獐牙菜苷A,其具有微弱的抗TMV活性,其中化合物2、7、8为首次从獐牙菜属植物中分到。     

清开灵注射液HPLC/UV/MS/MS指纹图谱研究

目的:建立一种HPLC/UV/MS/MS清开灵注射液(板蓝根,栀子,金银花等)指纹图谱研究方法,为其质量控制提供新思路。方法:采用Phenom enex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相分别为0.1%甲酸水溶液和乙腈梯度洗脱,流速0.5 mL/m in;采用电喷雾离子阱质谱(ESI-ITMS)分析,正、负离子二级扫描。结果:得到分离度和重现性良好的HPLC/UV/MS/MS指纹图谱,对其指纹图上13个色谱峰进行了初步定性,成功鉴别了新绿原酸、绿原酸和异绿原酸3个异构体。结论:本方法建立了清开灵注射液HPLC/UV/MS/MS指纹图谱,为中药复杂体系的分析及其质量控制提供了一种有效、可靠的模式。     

赶黄草的转录组测序及分析

目的获得赶黄草Penthorum chinense转录基因参考序列和表达量信息,探索赶黄草药用活性成分生物合成的遗传基础,为赶黄草的重要功能基因研究提供参考。方法采用Illumina Hi Seq 2000高通量测序技术,对赶黄草进行转录组测序,对获得的数据进行过滤组装,对得到的unigene进行比对注释,同时对本研究获得赶黄草活性成分合成相关代谢通路基因进行分析。结果共获得了40 005 442条有效的短读序,通过de novo拼接得到42 306个unigene,开放阅读框(ORF)分析共计得到518个ORF,其中75个ORF具有转录因子结构域。通过KEGG分析,检测到33、32、59、68个unigene分别参与黄酮类生物合成、固醇类生物合成、萜类骨架生物合成和羧酸代谢。结论本研究发现的这些基因对赶黄草遗传改良和药用活性物质的生物合成路径相关基因研究有着重要意义。     

白芷香豆素储库型贴剂的研制及其体外评价

目的制备白芷香豆素储库型贴剂,考察其体外释药特性和离体皮肤渗透性,筛选有效的透皮吸收促进剂,提高白芷香豆素的透皮吸收速率。方法选取羟丙甲纤维素为储库介质,以乙烯-醋酸乙烯共聚物膜为控释膜,制备白芷香豆素储库型透皮贴剂。用Franz扩散池进行乳猪离体皮肤渗透实验,用HPLC测定欧前胡素量,考察凝胶用量、药物用量、促渗剂对药物透皮速率的影响,并对优选的贴剂进行体外释放研究。结果最佳处方为1%羟丙基甲基纤维素(HPMC)、1%白芷香豆素、3%肉豆蔻酸异丙酯、3%氮酮;由该处方制得的贴剂稳态透皮速率(Js)达到0.713μg/(cm2·h),体外释放速率接近零级。结论储库型白芷香豆素贴剂有较高的经皮渗透速率,体外释药完全,有望成为新型的透皮制剂。     

朱砂根化学成分和药理作用的研究进展

朱砂根Ardisiae Crenatae Radix是一种民间常见的观赏性中药材,具有解毒消肿、活血止痛、祛风除湿的功效,是贵州特色民族药八爪金龙的3大来源之一。朱砂根主要含有香豆素类、皂苷类、黄酮类、挥发油等多种化学成分,具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、降血糖、保肝、抗生育等药理作用。主要综述了朱砂根化学成分和药理作用的研究进展,旨在为朱砂根的进一步开发和应用提供参考。