RAPD扩增分枝杆菌DNA优化条件及菌型分型的诊断应用

目的探讨随机扩增多态性DNA（Randomly amplified polymorphic DNA，RAPD）技术在分枝杆菌分型诊断中优化条件及其应用价值。方法优化RAPD技术扩增分枝杆菌DNA的奈件，并分别扩增深圳市临床病人分离株DNA，对比RAPD电泳条带特征。结果以条带稳定、丰富、清晰为标准，确定引物1 RAPD最佳反应条件为：50出反应体系中，含100ng模板DNA，2．5mmol／L MgCl2，2U DNA聚合酶，引物0．5μmol／L，dATP、dGTP、dCTP和dTTP各250μmol／L，反应40个循环，每个循环为：94℃1min，36℃1min，72℃2min。所扩增结核杆菌临床分离株的DNA条带丰富、清晰，各条带差异较明显。结论RAPD技术能较好地鉴别MTB和NTM。     

尾加压素Ⅱ对大鼠血管外膜阳离子氨基酸转运体的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(UII)对大鼠主动脉血管外膜阳离子氨基酸转运体(CAT-1、CAT-2B)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达影响。方法 SD大鼠24只,250~300g,随机分为空白对照组、UII组(10-9和10-8mol.L-1)和脂多糖(LPS)阳性对照组,每组6只。分离雄性SD大鼠胸主动脉外膜,分别加入单纯孵育液、不同浓度UII和LPS孵育6h。测定孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量;RT-PCR方法测定CAT-1、CAT-2B和iNOS mRNA基因表达。结果与对照组比较UII(10-9~10-8.L-1)刺激血管外膜NO2-生成增加(27%,P<0.05,和49%,P<0.01);UII组血管外膜阳离子氨基酸转运体(CAT-1和CAT-2B)mRNA水平增加(均P<0.01),iNOS mRNA表达增加(P<0.01)。结论 UII可激活血管外膜CAT-1和CAT-2B基因表达,其变化可能参与了NO释放从而引起血管的扩张。     

高效液相色谱测定尿中香草扁桃酸含量

目的 :建立测定尿中的香草扁桃酸 (VMA)含量的高效液相色谱法。方法 :以Nova PakC18柱为分析柱 ,流速是 0 9ml·min-1,流动相为 40mmol·L-1NaH2 PO4 液 (内含Na2 EDTA和辛基磺酸钠各为 5 0mg·L-1,pH3.0 ) ,采用电化学检测器和利用内标法测定了 30例正常人 2 4h尿中的VMA含量。结果 :当VMA浓度为 5～ 2 0 0 μmol·L-1时呈良好的线性关系。VMA的平均回收率为 99 1% ,平均批内变异系数为 5 8% ,平均批间变异系数为 7 7% ,最低检出量是 5 3 2μg。标本量为 10 0 μl时的最低检出浓度为 0 2 8μmol·L-1;正常人 2 4h尿中VMA含量为 (18 13± 6 17) μmol。结论 :该方法能准确测定尿中VMA含量 ,适合临床常规应用。     

姜黄素对MPP+诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其与iNOS的关系

[目的]观察姜黄素(curcumin,Cur)对MPP 诱导的PC12细胞凋亡的保护作用,并且探讨其与iNOS关系.[方法]采用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,间接免疫荧光FCM检测PC12细胞iNOS的表达.[结果]PC12细胞自然凋亡率为(1.5±0.1)%,0.5 mmol·L-1MPP 作用24 h后,PC12细胞凋亡率为(59.5±2.7)%;20μmol·L-1Cur和0.1 mmol·L-1特异性iNOS抑制剂氨基胍(aminoguanidine,AG)对PC12细胞作用24 h后无明显凋亡诱导作用,但分别使0.5 mmol·L-1MPP 处理组细胞凋亡率由(59.5±2.7)%下降到(15.9±5.3)%和(39.7±8.7)%(P＜0.01);PC12细胞经0.5 mmol·L-1MPP 处理24 h后,其iNOS表达率由正常对照的(13.5±1.5)%增加到(71.9±4.0)%(P＜0.01),加入20 μmol·L-1Cur同时处理24 h后,其iNOS蛋白表达率由(71.9±4.0)%下降到(40.0±3.0)%(P＜0.01).[结论]Cur可以抑制MPP 诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与抑制iNOS高表达有关.     

尾加压素Ⅱ对大鼠血管外膜阳离子氨基酸转运体的影响

目的观察尾加压素Ⅱ（UII）对大鼠主动脉血管外膜阳离子氨基酸转运体（CAT-1、CAT-2B）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达影响。方法 SD大鼠24只,250~300g,随机分为空白对照组、UII组（10-9和10-8mol.L-1）和脂多糖（LPS）阳性对照组,每组6只。分离雄性SD大鼠胸主动脉外膜,分别加入单纯孵育液、不同浓度UII和LPS孵育6h。测定孵育液中亚硝酸盐（NO2-）含量;RT-PCR方法测定CAT-1、CAT-2B和iNOS mRNA基因表达。结果与对照组比较UII（10-9~10-8.L-1）刺激血管外膜NO2-生成增加（27%,P〈0.05,和49%,P〈0.01）;UII组血管外膜阳离子氨基酸转运体（CAT-1和CAT-2B）mRNA水平增加（均P〈0.01）,iNOS mRNA表达增加（P〈0.01）。结论 UII可激活血管外膜CAT-1和CAT-2B基因表达,其变化可能参与了NO释放从而引起血管的扩张。     

红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白介素-8与谷胱甘肽的影响

目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞(16-HBE)表达炎症介质白介素-8(IL-8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制.方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响.将传代后的细胞按24、36、48 h 3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中IL-8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子-κB (NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的含量;应用免疫印迹实验(Western印迹)检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γ-GCS-HS)蛋白表达.结果红霉素(5 μg/ml)预孵育36、48 h后可以抑制H2O2(0.01 mmol/L)诱导的HBE上清中IL-8的含量;红霉素(5 μg/ml)预孵育36、48 h后可以下调H2O2(0.01 mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NF-kB、AP-1的活性;红霉素(5 μg/ml)预孵育48 h抑制H2O2(0.01 mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γ-GCS的含量(3.46±0.41)以及γ-GCS-HS蛋白表达、γ-GCS-HS 启动子区域AP-1转录活性.结论红霉素通过下调NF-κB、AP-1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL-8的释放,进而影响GSH及γ-GCS的合成调控.     

不同氨基酸对小鼠血糖影响的研究

目的观察不同氨基酸对昆明（KM）小鼠餐后血糖水平的影响。方法将KM小鼠按空腹血糖随机分为对照组和不同氨基酸组,每组15只;氨基酸组给予氨基酸（2g/kg）和葡萄糖（2g/kg）混合液灌胃,对照组仅给予葡萄糖（2g/kg）灌胃,测定灌胃后0.5h、1h、2h的血糖水平。结果 1）摄入D-亮氨酸或L-亮氨酸后0.5h、1h、2h血糖和血糖曲线下面积（AUC）明显低于对照组;与D-亮氨酸组相比,摄入L-亮氨酸后0.5h、1h和2h血糖及AUC降低,并具有显著性差异;摄入D-苯丙氨酸或L-苯丙氨酸后0.5h血糖和AUC明显低于对照组;与D-苯丙氨酸组相比,摄入L-苯丙氨酸后0.5h血糖水平有所降低,但无统计学差异。2）摄入苯丙氨酸0.5h血糖和AUC明显低于对照组（P〈0.01）;摄入缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、赖氨酸后0.5h、1h血糖和AUC明显低于对照组（P〈0.01）;摄入亮氨酸、色氨酸后0.5h、1h、2h血糖和AUC明显低于对照组（P〈0.01）。3）摄入谷氨酰胺和丝氨酸后0.5h血糖水平显著低于对照组;摄入甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、脯氨酸后0.5h、1h血糖和AUC显著低于对照组（P〈0.01）,而摄入天冬氨酸、酪氨酸、谷氨酸、组氨酸及天冬酰胺组0.5h血糖水平与其对照组相比无显著性差异（P〉0.05）。结论氨基酸可明显降低KM小鼠餐后血糖水平,其中亮氨酸降糖作用较强。     

非转移性黑色素瘤糖蛋白B对脑缺血再灌注小鼠的神经保护作用

目的 探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(GPNMB)对脑缺血再灌注小鼠的神经保护作用。方法 将20只雄性C57小鼠随机分为磷酸缓冲盐溶液(PBS)组和GPNMB组,每组10只。采用线栓法栓塞大脑中动脉建立脑缺血小鼠模型,栓塞2 h后再灌注,GPNMB组经栓塞侧颈内动脉内注射4μL的50 ng/μL GPNMB,PBS组经颈内动脉给予注射等量的PBS。给予小鼠药物干预并再灌注24 h后处死,处死前进行行为学缺陷评分,制作脑组织切片,计算梗死体积。结果 GPNMB组的脑梗死体积小于PBS组,栓塞再灌注后2 h、给药干预再灌注后24 h的行为学缺陷评分均低于PBS组(均P<0.05)。结论 GPNMB可以减小脑缺血再灌注小鼠的脑梗死体积,并改善其梗死后行为学缺陷。     

99Tcm直接法标记血管抑素

目的: 探索用99Tcm直接标记血管抑素(angiostatin, AS)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其生物活性. 方法:制备的AS经鉴定后,分别用2-巯基乙醇(2-ME)和氯化亚锡(SnCl2)还原法进行标记,并用正交设计筛选最佳合成条件;对标记产物用纸层析法及Sephadex G-50层析柱分离测标记率;产物中分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸(Cys)以观察其体外稳定性;用人脐静脉内皮细胞系ECV304观察其生物活性. 结果:2-ME法最佳标记条件为AS 100 μg,PB(0.5 mol*L-1, pH 7.3) 1 mL, 2-ME 100 μg, 亚甲基二膦酸盐(MDP)(用1 mL生理盐水溶解) 10 μL,加入99TcmO4- 185 MBq,标记率可达(97.0±1.5)%; SnCl2法为AS 100 μg,硼酸缓冲液(0.1 mol*L-1, pH 9.0) 1 mL, 20 g*L-1 SnCl2 (1 mol*L-1盐酸作为溶剂) 20 μL加入MDP药盒,用去氧水稀释至1 mL, 取20 μL,加入99TcmO4- 185 MBq,标记率可达(90.0±3.0)%. 产物在体外稳定;细胞培养观察其抑制内皮细胞生物活性与AS无显著差异. 结论:用99Tcm直接法标记AS简单高效,且对AS生物活性无明显影响.     

反相高效液相色谱法测定人血浆中艾司西酞普兰的浓度

目的 建立测定人血浆中艾司西酞普兰浓度的HPLC-FLD法.方法 以DiamonsilTM C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,流动相为乙腈-0.03 mol·L-1醋酸铵(体积比45:55,调pH=6.0),流速为0.8 mL·min-1,激发波长:235 nm,发射波长307 nm,以正己烷-异戊醇(体积比95:5)为提取剂.结果 艾司西酞普兰的高(25 μg·L-1)、中(10 μg·L-1)、低(1.5 μg·L-1)3个浓度的平均回收率分别为95.29%、97.01%和97.22%,日内(n=5)、日间(n=3)RSD均小于15%;分析方法 的最低定量限为0.5 μg·L-1,线性范围为0.5～50 μg·L-1,回归方程为ρ=20.93A-0.015,r=0.999 9(n=7).结论 该方法 灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究.     

芹菜素对人急性髓性白血病细胞化疗敏感性的增强作用

目的:观察芹菜素(API)能否增强人急性髓性白血病(HL-60)细胞系细胞对顺铂(DDP)的化疗敏感性.方法:取对数生长期的HL-60细胞,分为API组、DDP组、API DDP组与空白对照组.API组加入API,终浓度为1.0 μmol·L-1,DDP组加入DDP,终浓度分别为1.0 mg·L-1,2.0 mg·L-1,4.0 mg·L-1,API DDP组API终浓度为1.0 μmol·L-1,DDP分别为1.0 mg·L-1,2.0 mg·L-1和4.0 mg·L-1,空白对照组仅加入等量完全培养基.采用MTT比色法测定细胞生长抑制率.另取对数生长期的HL-60细胞,分组同上,采用流式细胞术测定细胞凋亡率.另取对数生长期的HL-60细胞,分为3组,前2组加入1.0 μmol·L-1API,分别培养24 h,48 h,对照组仅加入等量完全培养基,采用间接免疫荧光标记流式细胞术观察API对HL-60细胞NF-κB和Bcl-2表达的影响.结果:1.0 μmol·L-1API无细胞毒作用,不能有效诱导HL-60细胞的凋亡,但它与不同浓度的DDP合用,可增强DDP对HL-60细胞增殖的抑制作用,并使细胞凋亡率明显增加.1.0 μmol·L-1API可抑制HL-60细胞NF-κB和Bcl-2的表达(P均＜0.01).结论:API可增强DDP对HL-60细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用,其机制可能与下调NF-κB和Bcl-2的表达有关.     

白藜芦醇体外抑制人胰腺癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)体外对胰腺癌MIAPaCa-2细胞增殖的影响,并探讨其初步机制.方法:采用四甲基氮唑蓝法(MTT)检测Res处理后MIAPaCa-2细胞的增殖情况.用倒置显微镜、透射电镜观察Res处理后细胞形态学改变,用流式细胞仪分析经25 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1 Res分别作用48 h后MIAPaCa-2细胞凋亡率.结果:Res体外能明显抑制MIAPaCa-2细胞的生长增殖,且在一定范围内呈时间、浓度依赖性.经Res处理后,倒置显微镜观察到细胞数目减少,部分细胞变圆,核浓缩,提示可能存在细胞凋亡;电镜证实存在典型的细胞凋亡形态学改变.用25 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1 Res处理48 h后,流式细胞仪检测出各处理组的细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.05).结论:Res在体外能明显抑制MIAPaCa-2细胞的增殖,诱导细胞调亡可能是Res抑制MIAPaCa-2细胞增殖的主要机制之一.     

棕榈酸诱发的肝细胞脂质沉积和炎症机制中AMPKα2的作用研究

目的:探讨AMP活化蛋白激酶（AMPK）α2在棕榈酸（PA）诱发的肝细胞脂质沉积和脂多糖（LPS）诱导的炎症中的作用和机制。方法:分离小鼠原代肝细胞,将一部分细胞分为非特异性小干扰RNA（siRNA）对照组（siNR）和敲除AMPKα2 （siAMPKα2）组,每组细胞再分别用10%牛血清白蛋白（BSA）、200 μmol/L PA、磷酸盐缓冲液（PBS）、10 μg/mL LPS孵育16 h或6 h。油红O染色检测细胞中的脂质,Western 印迹检测核因子κB抑制蛋白（IκB）激酶（IKK）和激活c-Jun氨基末端激酶（JNK）的磷酸化。将另一部分肝细胞分为转染对照腺病毒组（Ad-GPF）和AMPKα2腺病毒组（Ad-AMPKα2）,每组再分别用10% BSA、200 μmol/L PA、PBS、10 μg/mL LPS孵育16 h或6 h,Western 印迹检测JNK和IKKα/β的磷酸化。结果:与对照组相比,siAMPKα2组 PA诱导的细胞内脂质积累增加（t=2.133,P<0.05）,PA和LPS磷酸化JNK（1.51±0.08,t=2.701,P<0.05）和IKKα/β（1.35±0.03,t=1.657,P<0.05）的作用加强,而AMPKα2腺病毒组PA和LPS升高JNK和IKKα/β磷酸化的作用显著受抑制。结论:AMPKα2可能通过抑制JNK及核因子-κB信号通路,改善PA诱导的肝细胞脂质沉积以及和PA和LPS诱导的肝细胞炎症。     

miRNA-122在脓毒症急性肾损伤中的表达及作用

目的:探讨miRNA-122(miR-122)在脓毒症急性肾损伤(SAKI)中的表达模式及作用.方法:将C57BL6小鼠30只随机分为0h、4h、8h、12 h、24 h组,每组6只.0h组为对照组不做任何处理,其它组均采用盲肠结扎穿孔(CLP)法建立小鼠脓毒症模型.建模后4h、8h、12 h、24 h分别处死小鼠,收集血清、肾组织备用.采用全自动生化分析仪检测小鼠血清中肌酐、尿素氮水平;对肾脏组织石蜡切片,应用苏木精-伊红(HE)染色法进行染色,光镜下观察肾组织结构损伤变化;ELISA法检测小鼠肾组织中IL-1β的表达水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肾脏miR-122的表达水平.采用Pearson相关性分析miR-122与IL-1[β水平的相关性.结果:CLP术后小鼠尿素氮、肌酐水平随时间延长逐渐升高;术后尿素氮12h组[(12.8±4.12) mmol·L-1]、24 h组[(22.53±5.19) mmol·L-1]均高于0h组[(4.55±0.98) mmol·L-1],术后肌酐12 h组[(53.87±6.6) μmol·L-1]、24 h组[(69.32±13.34) μmol·L-1]均高于0h组[(5.62±2.07) μmol·L-1],差异有统计学意义(P＜0.05);HE染色显示,与0h组比较实验组肾脏组织均出现不同程度损伤;qPCR结果显示,CLP术后各组肾组织中miR-122表达水平[4 h(0.79±0.14)、8 h(0.55±0.15)、12 h(0.51±0.09)、24h(0.53±0.11)]与0h组比较明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05);ELISA结果显示,各组IL-1β表达水平[4 h(304.20±30.24)、8 h(338.46±13.91)、12 h(345.46±16.27)、24 h(256.17±9.35) pg·mL-1]与0h组[(191.44±16.79) pg·mL-1]比较显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);肾组织中miR-122与IL-1β表达呈负相关(r=-0.560,P＜0.05).结论:miR-122在脓毒症AKI小鼠肾组织中表达下降,并可能通过促进炎症因子的释放参与脓毒症AKI的发生发展.     

重组弓形虫SAG1蛋白免疫小鼠抗弓形虫攻击保护作用

目的 评价重组弓形虫表面抗原1(rTgSAG1)蛋白皮下免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用. 方法 6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别以100 μl PBS、20 μg、40 μg、60 μg或80 μg rTgSAG1(溶于100 μl PBS)/只皮下注射免疫小鼠3次,间隔14 d.末次免疫后14 d,以RH株弓形虫速殖子1×104个/只灌胃攻击所有小鼠,每日观察小鼠健康状况.攻虫后第28天,处死小鼠.分离并计数肝和脑组织内速殖子,分离并计数脾淋巴细胞和小肠上皮内淋巴细胞(IEL),ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液IgA抗体水平. 结果攻虫后6-14 d,小鼠出现不同程度的被毛粗糙、采食饮水减少,PBS组存活率最低(33.3%),40 μg组最高(75%).40 μg组肝(79.60)和脑组织内荷虫数(16.88)低于PBS组(分别为94.43和19.48)(均P<0.05),脾淋巴细胞数(10.31)和IEL数(4.25)高于PBS组(6.24,1.64)(均P<0.01);40 μg组(P<0.01)、20 μg组和60 μg组(P<0.05)血清IgG抗体水平显著高于PBS组;各组肠液IgA抗体水平无明显变化. 结论 rTgSAG1蛋白皮下免疫小鼠能诱导产生抗弓形虫感染保护性免疫,40 μg为免疫的最适剂量.     

丹参酮ⅡA联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡的影响

目的 观察丹参酮ⅡA（Tanshinone,TanⅡA）联合三氧化二砷（ATO）对人急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4细胞）凋亡的作用;并通过观察两药联合诱导NB4细胞凋亡时p53、Bcl-2表达的变化,探讨其可能的机制.方法 通过Annexin V FITC/PI荧光染色观察1.0μg·mL-TanⅡA分别联合0.25、0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO作用于NB4细胞的形态学变化;流式细胞术Annexin V-FITC/PI法测定各组细胞凋亡率;流式细胞仪检测各组细胞p53、Bcl-2的表达.结果 （1） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA分别与0.5、1.0μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞24、48和72h的凋亡率均较相应单独用药组凋亡率明显增高（P＜0.05）;染色荧光显微镜观察1.0μg·mL^-1TanⅡA联合1.0μmol·L^-1ATO实验组较1.0μmol·L^-1ATO对照组72h时更易见到中晚期凋亡细胞和死亡细胞;（2） 1.0μg·mL^-1 TanⅡA与0.5、1.0 μmol·L^-1的ATO联合作用NB4细胞48h、72h表达p53蛋白的细胞较1.0μmol· L^-1ATO单药组明显增多（P＜0.05）,作用高峰时间为72h; 1.0μg·mL^-1TanⅡA分别与0.25、0.5、1.0 μmol·L-的ATO联合作用NB4细胞24h时,表达Bcl-2蛋白的细胞数较1.0μmol· L^-1 ATO单药组显著下降（P＜0.05）,且与ATO的浓度呈负相关（r=-0.858,P=0.000）.结论 联合1.0μg·mL^-1 TanⅡA可增强0.5、1.0μmol·L^-1ATO诱导NB4细胞凋亡;TanⅡA联合ATO诱导NB4细胞p53表达增强和Bcl-2表达减少可能是其促凋亡机制之一.     

CIB1沉默表达对大鼠脑缺血-再灌注损伤后Caspase-3 mRNA表达影响

目的探讨钙离子结合蛋白（calcium and integrin-binding protein,CIB1）双链RNA（CIB1.siRNA）对大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用.方法 SD大鼠120只,随机分成三组（每组40只）：假手术组（S组）、局灶性脑缺血-再灌注组（A组）、局灶性脑缺血-再灌注＋CIB1-siRNA组（B组）.A组、B组行大脑中动脉阻断,阻断1 h再开放,制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型,B组在缺血前即刻、16、24 h水压法尾静脉注射CIB1-siRNA 2.5 mg/kg（用PBS稀释至10 mL）,S组给予等量PBS,S组只作切口,不作缺血再灌注.S组、B组、A组分别于再灌注1、5、11、23、47 h各处死8只大鼠,断头取脑,计算脑梗塞体积比,用RT-PCR法测定脑缺血半影区Caspase-3 mRNA表达水平.结果 B组、A组再灌注23 h时脑梗塞体积比达到高峰,再灌注47 h脑梗塞体积比均高于S组（P〈0.01）;与A组比较,B组脑梗塞体积比增加（P〈0.01）.A组和B组再灌注5 h时Caspase-3 mRNA表达高峰,B组各时间段Caspase-3 mRNA表达均强于A组.结论 CIB1-siRNA预先给药可加重大鼠脑缺血再灌注损伤.     

表皮细胞生长因子对培养表皮角朊细胞DNA合成的影响

目的 :选择培养表皮角朊细胞时添加表皮细胞生长因子 ( EGF)及小牛血清的最适浓度。方法 :添加不同浓度的 EGF及小牛血清 ,测定 3 H- Td R掺入量。结果 :添加 2 0μg· L-1EGF时3 H- Td R掺入量明显高于添加 5和 1 0 μg·L-1EGF时。结论 :2 0 μg·L-1EGF、2 0 %小牛血清为培养表皮角朊细胞的最适浓度。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

目的探讨用5-氮胞苷(5-aza)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的最佳条件.方法用Percoll密度梯度离心法分离培养、纯化大鼠MSCs,取第3代MSCs随机分为A、B、C 3组,分别加入5、10、20 μmol/L5-aza;每组分别孵育12、24、48 h,继续培养28 d.相差显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测细胞肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达,并通过Western印迹法对细胞cTnT进行定量分析.结果MSCs经5-aza诱导培养28 d后,电镜下见细胞胞浆有散在肌丝样结构,免疫组化检测α-actin和cTnT表达均呈阳性;5 μmol/L的5-aza孵育48 h、10 μmoL/L孵育24 h培养28 d的细胞cTnT表达量与10 μmol/L的5-aza孵育48 h、20 μmol/L 3种孵育时间各组比较无显著性差异,且细胞生物学特性未受到明显影响.结论MSCs在体外经5-aza诱导后可分化为心肌样细胞;5 μmol/L的5-aza孵育48 h和10 μmol/L的5-aza诱导24 h是MSCs体外诱导分化心肌样细胞的理想条件.     

蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的影响

目的研究蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的影响。方法用人精子穿透经不同浓度的蛋白水解酶抑制剂处理过的去透明带蛙卵,观察对穿卵率的影响。结果(1)在人精子获能期,1.0×10-3mol.L-1天花粉抑制剂可使人精子的穿卵率明显下降(P<0.01),而同样浓度的慈姑抑制剂,作用不明显。(2)去透明带蛙卵用抑制剂预处理0.5 h,被获能精子的穿卵率和未用抑制剂处理的卵子相似。(3)在获能后的人精子和去透明带蛙卵孵育期,两种抑制剂的浓度为0.5×10-3mol.L-1或1.0×10-3mol.L-1时精子的穿卵率明显下降。(4)在人精子获能期及人精子/去透明带蛙卵孵育期,两种抑制剂的浓度为1.0×10-3mol.L-1时,均使精子的穿卵率下降(P<0.01),而抑制剂浓度为1.0×10-4mol.L-1时,作用不明显。结论蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带蛙卵的穿透能力有显著影响,但不影响精子的活力,提示精子穿透卵子的酶体系受蛋白酶抑制剂的影响。