AKT 信号转导途径在尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的：探讨AKT信号途径在尼古丁诱导大鼠气道平滑肌细胞增殖中发挥的作用。方法（1） Western blot检测不同浓度尼古丁作用原代培养的大鼠气道平滑肌细胞不同时间段,AKT／磷酸化AKT、GSK3β／磷酸化GSK3β在气道平滑肌细胞上的表达水平;（2）细胞分析计数仪检测AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞增殖活性的影响。实验分组：对照组、尼古丁单独作用组、AKT抑制剂LY294002组、AKT抑制剂LY294002＋尼古丁组、GSK3β抑制剂SB216763组、GSK3β抑制剂SB216763＋尼古丁组;（3） EDU摻入法测定AKT抑制剂和GSK3β抑制剂对尼古丁处理大鼠气道平滑肌细胞DNA复制活性的影响,实验分组同上。对照组应用1％胎牛血清培养基,各抑制剂和尼古丁应用1％胎牛血清培养基配制,分别在尼古丁加入前30 min应用。结果（1）大鼠气道平滑肌细胞上有AKT和GSK3β的表达;尼古丁引起AKT和GSK3β的快速磷酸化,且尼古丁促进AKT和GSK3β的磷酸化作用具有时间依赖性;（2）细胞计数法显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞计数明显低于尼古丁单独作用组,差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）EDU摻入法测定显示,AKT抑制剂与尼古丁联合组细胞DNA复制水平明显下降,与尼古丁单独作用组相比,差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论尼古丁促进大鼠气道平滑肌细胞的增殖作用依赖AKT／GSK3β信号途径。     

肺癌基因治疗

肺癌基因治疗冉丕鑫，李岱宗，陈顺存，钟南山一、肺癌治疗现状近年来，肺癌的发病率和死亡率逐渐上升，在我国沿海城市，肺癌在男性中已占常见肿瘤的首位，女性中居第２或第３位。尽管人们花了很大精力去探究防治肺癌的方法，效果仍不理想，如非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）...     

吸烟对40岁以上人群的肺功能的影响

目的 观察吸烟对40岁以上人群的肺功能的影响.方法 本研究前瞻性调查了2 682例居民的吸烟状况、规律合并用药情况、性别、年龄、身高、体质量等资料,并进行了肺通气功能检测.结果 随访时间2年.2 290例(85.4%)得到了有效随访,其中1 197例(52.3%)从不吸烟,467例(20.4%)曾经吸烟,626例(27.3%)现吸烟.三组人群的年龄、性别、BMI、肺功能、COPD患者例数及合并用药差异均有统计学意义.随访结果显示,肺功能FEV1、FEV1%pred、FVC、FEV1/FVC均逐年下降.经调整上述差异性变量(年龄、性别、BMI、COPD患者例数、合并用药及基线肺功能),曾吸烟组肺功能FEV1(P=0.030)、FEV1%pred(P=0.011)和FEV1/FVC(P<0.001)较从不吸烟组显著下降.现吸烟组FEV1/FVC较从不吸烟组下降快.结论 从不吸烟居民肺功能下降最慢,提倡不吸烟或尽可能早期戒烟.     

大鼠γ谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位基因5′端调控序列初步分析

目的　分析大鼠γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚单位 (GCLC)基因 5′端调控区域和相应转录因子的特性。方法　克隆 1 760bp大鼠GCLC上游调控基因并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC-Luc(GCLC/pGL-3),利用外切核酸酶Ⅲ将大鼠GCLC基因的 5′端序列单向切成不同长度的缺失体,将所构建的GCLC-Luc及其 11个缺失体转染大鼠肺泡上皮细胞,通过测量转染后细胞的荧光素酶活性确定该基因的调控区域,并通过转录因子分析软件分析出可能与这些调控区域结合的转录因子,最后通过电泳迁移率改变实验 (EMSA)以明确该调控区的顺式元件和转录因子。结果　实验成功地克隆出大鼠GCLC上游调控基因及其报道载体GCLC-Luc及GCLC-Luc的 11个缺失体。将GCLC-Luc及其缺失体转染肺泡上皮细胞并分析荧光素酶活性:GCLC Luc(-1 758 /+2 Luc),缺失体 1(-1 231 /+2 Luc),缺失体 2(-1 108 /+2 Luc),缺失体 3(-1 087 /+2 Luc),缺失体 4(-876 /+2 Luc),缺失体 5(-745 /+2 Luc),缺失体 6(-705 /+2 Luc),缺失体 8(-613 /+2 Luc),缺失体 9(-595 /+2 Luc),缺失体 10( -403 /+2 Luc)和缺失体 11( -111 /+2 Luc)的荧光素酶值分别为(90 012±2 445)、(77 652±840)、(149 927±4 915)、(71 588±1 108)、(99 283±2 612)、(75 443±1 438)、(28     

吸入异丙托溴胺对慢性阻塞性肺疾病患者运动肺功能的影响

目的 评价吸入异丙托溴胺(ipratropium bromide,IPB)是否改善慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者的静态肺功能,运动通气功能和运动耐量.方法 随机抽取稳定期COPD患者12例,吸入IPB溶液2 mg,吸人前后分别进行静态肺功能和运动肺功能测定.结果 吸入IPB后,COPD患者最大运动功率(Wmax)、最大耗氧量(VO2max)、最大运动时每分钟通气量(Vemax)和比潮气量(Vtmax/IC),较吸人前均有显著增加;死腔通气(VD/VT)和二氧化碳通气当量(Vemax/VCO2max)无明显改变.Vtmax/IC的变化(⊿Vtmax/IC)与VO2max的变化(⊿VO2max)有显著相关性(r=0.598,P＜0.05);⊿Vtmax/IC与最大运动功率的变化(⊿Wmax)也存在显著相关性(r=0.743,P＜0.05).结论 吸入IPB能够增加COPD患者的运动耐量,COPD患者吸入IPB后,⊿Vtmax/IC可能是运动耐量增加机制中的一个重要环节.     

尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞内钙离子浓度及膜瞬时受体电位通道mRNA表达的影响

目的 观察尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)后细胞内基础钙离子浓度的改变及平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道(TRPC1,TPRC6)mRNA表达水平变化.方法 不同浓度尼古丁[O(对照组)、10、20、50、100μg/L]刺激大鼠气道平滑肌细胞,作用24及48 h后,采用Incyte细胞内钙浓度检测系统观察细胞内钙离子浓度的变化.提取细胞总RNA,反转录成cDNA,实时定量PCR方法检测细胞TRPC1和TRPC6 mRNA表达量变化.结果 20、50、100μg/L的尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细24和48 h后,细胞内基础钙离子浓度均较对照组明显升高[(117.99±19.39)、(122.89±17.91)、(124.70±17.93)nmol/L比(85.85±12.60)nmol/L;(142.07±18.99)、(162.27±19.91)、(207.30±26.56)nmol/L比(98.04±2.39)nmol/L,均P＜0.05].而细胞中TRPC1和TPRC6 mRNA相对浓度也均较对照组显著升高(P＜0.05),其中,100μg/L尼古丁刺激气道平滑肌细胞48 h后,细胞内基础钙离子浓度和TRPC6 mRNA相对表达量均较刺激24 h后的明显升高(P＜0.05).结论 尼古丁可能通过上调大鼠气道平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道TRPC1和TPRC6的表达而导致大鼠气道平滑肌细胞内基础钙离子浓度增加.     

大蒜素对大鼠肺泡上皮细胞γ谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响

目的观察大鼠肺泡上皮细胞(CCL149细胞系)谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)等表达变化,了解大蒜素对CCL149细胞抗氧化能力的影响。方法在以四甲基偶氮唑盐(MTT)法确定大蒜素适当作用浓度的基础上,用不同浓度大蒜素(0、0.1、1.0、5.0μg/ml)作用CCL149不同时间(6、12、24、48h),用分光光度法检测细胞内GSH、MDA的变化;用Westernblot法检测细胞内γGCS蛋白的表达,分析不同处理剂量、不同处理时间大蒜素对细胞内GSH、MDA及γGCS的影响。结果(1)大蒜素浓度≤5μg/ml不影响细胞活力。(2)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在处理6h后细胞内GSH含量[6h组GSH含量分别为(16.45±0.69)、(16.81±0.79)、(17.80±1.10)mg/g蛋白]较对照组[(13.38±1.16)mg/g蛋白]显著增加(t=3.92～4.78,P均<0.05),MDA含量[(1.07±0.02)、(1.02±0.06)、(1.00±0.05)nmol/mg蛋白]较对照组[(1.23±0.05)nmol/mg蛋白]下降(t=5.75～6.34,P均<0.05)。细胞内GSH水平升高至24h达顶峰,48h有所下降,仍较对照组高,相同时间点不同大蒜素浓度组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。(3)大蒜素0.1、1.0、5.0μg/ml组在刺激6、12、24h细胞内γGCS蛋白表达(24h为0.693±0.027、0.646±0.081、0.667±0.077)较对照组(0.531±0.007)显著增强(t=2.82～9.92,P<0.05),各观察指标未呈现剂量依赖性。结论大蒜素能增强大鼠肺泡上皮细胞的抗氧化作用,可能与其促进γGCS的表达有关。     

对慢性阻塞性肺疾病的新认识--解析慢性阻塞性肺疾病防治全球倡议(GOLD)

讨论内容　　制订 ＧＯＬＤ 的背景和必要性　　ＣＯＰＤ 的定义和病情分级　　ＣＯＰＤ 的发病机制　　ＣＯＰＤ 的诊断和病情评估　　稳定期 ＣＯＰＤ 的治疗　　急性加重期 ＣＯＰＤ 的治疗康　健　教授　　康健　各位专家好 !非常感谢大家能在百忙当中参加本刊编委会和编辑部组织的关于“对慢性阻塞性肺疾病新认识”的专家讨论会。 2 0 0 1- 0 4,美国心、肺、血液研究所和世界卫生组织发表了《慢性阻塞性肺疾病全球倡议》(ＧｌｏｂａｌＩｎｉｔｉａｔｉｖｅｆｏｒＣｈｒｏｎｉｃＯｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅＬｕｎｇＤｉｓｅａｓｅ,ＧＯＬＤ)…     

红霉素干预对烟雾暴露大鼠肺部炎症的影响

长期小剂量应用大环内酯类抗生素在治疗弥漫性泛细支气管炎等慢性肺部炎症性疾病中取得了良好的疗效,其可能的作用机制是抑制吞噬细胞(如中性粒细胞)的氧化爆发,抑制炎性细胞炎性介质、细胞因子的释放,从而削弱肺部炎症反应[1]。长期吸烟会导致气道、肺部一系列的炎症反应,本实     

缺氧对大鼠肺组织成纤维细胞生长因子和C-myc癌基因表达的影响

目的为探讨成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ－ｂ）和Ｃ－ｍｙｃ基因在缺氧性肺动脉重建中的作用。方法采用免疫组化和原位分子杂交方法，对不同缺氧时期大鼠肺组织中ＦＧＦ－ｂ的表达及癌基因Ｃ－ｍｙｃ信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）转录水平进行了观察。结果缺氧１４天时肺动脉平滑肌及外膜间质的ＦＧＦ－ｂ明显增多，而Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ在缺氧７～２１天组大鼠肺组织中有过量表达。结论（１）缺氧可激活Ｃ－ｍｙｃ癌基因以及增强ＦＧＦ－ｂ的表达；（２）ＦＧＦ－ｂ和Ｃ－ｍｙｃ癌基因参与了慢性缺氧所致肺动脉壁的改建过程。