低氧诱导因子2在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的探讨低氧诱导因子2（EPAS-1／HIF-2α）在膀胱移行细胞癌中的表达。方法应用免疫组织化学技术检测60例膀胱移行细胞癌和8例正常膀胱组织中EPAS1／HIF-2α的表达,并分析其与膀胱癌分级和分期间的关系。结果EPAS1／HIF-2α在正常膀胱组织中不表达,而在膀胱癌组织中表达较强,且与肿瘤的病理分级和临床分期有显著相关性。结论EPAS1／HIF-2α与膀胱癌的生长、浸润密切相关,对其研究开发可能为浸润性膀胱癌提供一个诊断标准或基因治疗效靶。     

EPAS1在妇产科领域中的研究进展

内皮PAS区域蛋白1(Endothelial PAS domain-containing protein 1,EPAS1)又称为低氧诱导因子2α(Hypoxia inducible factor,HIF-2α),其普遍存在于哺乳动物体内,在低氧反应中起到核心作用,并参与许多疾病的病理生理过程。现对EPAS1在妇产科领域疾病中的研究进展作一综述。     

肝细胞癌中PHD2蛋白与HIF-1α蛋白表达的关系及意义

目的 研究肝癌组织中脯氨酸羟化酶(PHD)2蛋白的表达情况及其与缺氧诱导因子(HIF)-1α蛋白表达和患者临床特征的关系.方法 选取肝细胞癌标本80例,应用免疫组织化学染色方法(SP法)研究PHD2蛋白与HIF-1α蛋白的表达情况,并探讨PHD2蛋白的表达与多种临床指标的关系.结果 PHD2在肝癌组织中表达的阳性率为47.5%(38/80),与HIF-1α蛋白(66.3%)的表达率无显著差异,但在低分化肝细胞癌组织中的表达率明显高于高分化者,与肿瘤直径和是否有转移或者血管侵犯没有明显关系.结论 PHD2虽然是HIF-1α的直接下游基因,但其蛋白表达受多种因素的影响,两者的关系在肝癌组织中没有协同性.以增加肿瘤组织中PHD2的表达降解HIF-1α来治疗肿瘤可能对低分化肿瘤的效果明显.     

高原鼠兔低氧诱导因子-2α基因的克隆

目的 克隆高原鼠兔(Ochotona curzoniae低氧诱导因子-2α(Hypoxia inducible factor-2,HIF-2α)基因的cDNA部分片段,以获得HIF-2α cDNA的全长序列和进行HIF-2α的表达研究.方法 从高原鼠兔肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出HIF-2α基因的c...     

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1...     

六味地黄汤含药血清对HK-2细胞PHD2/HIF-1α信号途径的影响

目的以缺氧诱导的HK-2细胞为研究对象,探讨脯氨酸羟化酶2/缺氧诱导因子1α(PHD2/HIF-1α)信号途径对肾间质纤维化的影响,以及六味地黄汤含药血清干预作用。方法 40只SPF级雄性SD大鼠分为空白组和给药组,每组20只,空白组以10 m L/(kg·d)生理盐水,给药组以67.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃连续1周,腹主动脉取血,离心后分离血清。体外培养HK-2细胞,将实验分为空白对照组(10%胎牛血清)、正常血清组(10%正常大鼠血清)、氯化钴(Co Cl2)处理组(150μmol/LCo Cl2+10%正常大鼠血清)和含药血清组(150μmol/LCo Cl2+10%六味地黄汤含药血清)。体外培养HK-2,分组处理24 h后,用Western Blot法和RT-PCR法分别检测六味地黄汤含药血清对缺氧诱导的HK-2细胞中PHD2、HIF-1α、结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平和mRNA表达的影响。结果与正常血清组比较,Co Cl2处理组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均降低(P0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均升高(P0.05);与Co Cl2处理组比较,含药血清组HK-2细胞中PHD2的蛋白水平和mRNA表达均升高(P0.05),而HIF-1α、CTGF的蛋白水平和mRNA表达均降低(P0.05)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可能通过上调PHD2的表达,促进HIF-1α的降解,后者下调CTGF的表达,从而抑制肾间质纤维化。     

高原适应性的基因学研究进展

高海拔世居民能够很好的在缺氧、寒冷的环境下生存。从生理角度分析,高海拔世居民具有较低血红蛋白浓度、更高的一氧化氮水平等特点。近年来的研究显示这些适应性的改变是具备遗传学基础的,这些研究给我们提供了多个基因在高原人群中的特征,例如EPAS1、EGLN1、CBARA1,VAV3、PPARA、eNOS等,涉及缺氧诱导途径,缺氧诱导因子及其配体,红细胞的生产以及血管舒张性物质的产生。这些研究结果从遗传学角度给我们提供了新的线索,为我们揭示高原性自然环境选择的独特性、加深对高原疾病发生机制的理解、治疗和避免高原性疾病的发生提供了新的研究思路和策略。     

HIF-1α与PHD2在几种皮肤恶性肿瘤组织中的表达

目的 检测HIF-1α与PHD2在几种皮肤恶性肿瘤中的表达,探讨两者的相关性.方法 采用免疫组织化学的方法检测18例基底细胞癌,16例纤维肉瘤,12例恶性黑色素瘤以及20例正常组织中HIF-1α及PHD2表达.结果 HIF-1α在正常组织中、皮肤基底细胞癌、纤维肉瘤及恶性黑色素瘤组织中的阳性表达率分别为12.0%、46.2%、72.8%、82.6%;PHD2在正常组织中、皮肤基底细胞癌、纤维肉瘤及恶性黑色素瘤组织中的阳性表达率分别为72.7%、85.8%、76.2%、89.1%.结论 HIF-1α的表达高低可能与肿瘤的侵袭性有关,保持PHD2对HIF-1α的正常负性调控可能是癌性组织向正常组织转归的枢纽之一.     

低氧对小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1表达的影响

目的 探讨低氧环境对小鼠成骨细胞富含半胱氨酸61(Cyr61/CCN1)表达的影响.方法 分别在氧浓度和去铁敏诱导的低氧环境下培养小鼠成骨细胞,Real-time PCR和Western blotting于不同时间点检测成骨细胞低氧诱导因子- 1α(HIF-1α)、Cyr61/CCN1和血管内皮生长因子的表达.分别敲除小鼠成骨细胞中HIF-1α和VHL基因,检测细胞Cyr61/CCN1的表达.结果 两种低氧环境下,小鼠成骨细胞HIF-1α通路被激活,Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).HIF-1α基因敲除小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著减少,VHL基因敲除成骨细胞Cyr61/CCN1 mRNA和蛋白表达均显著增加(P<0.05或P<0.01).结论 低氧环境通过激活HIF-1α通路来上调小鼠成骨细胞Cyr61/CCN1的表达.     

中国北方汉族人群低氧诱导因子-1α基因C1772T多态性研究

目的:研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因C1772T单核苷酸多态性(SNP/C1772T)在中国北方汉族人群中的分布特征。方法:通过PCR-RFLP实验方法,解析206名中国北方汉族人群HIF-1α基因C1772T单核苷酸多态性。结果:HIF-1α基因C1772T单核苷酸多态性基因型频率、等位基因频率在中国北方汉族人群中分布为:CC基因型93%,CT基因型7%,C等位基因96%,T等位基因4%,未发现突变纯合子TT基因型。且中国北方汉族人群中HIF-1α基因C1772T单核苷酸多态性等位基因频率的分布特征与欧洲白种人相比有显著性差异(P<0.05);与美洲人及日本人在基因型、等位基因频率的分布上基本一致。结论:HIF-1α基因C1772T单核苷酸多态性具有一定的种族差异性。     

蜂毒素对骨肉瘤Saos-2细胞系HIF-1α及VEGF表达的影响

目的：研究低氧条件下蜂毒素（melittin）对骨肉瘤Saos-2细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨蜂毒素抗骨肉瘤细胞血管生成的机制。方法：分别设空白对照组和低氧对照组,以及加入终浓度为2、4、8μg/ml的蜂毒素组;采用免疫印迹试验（Western—blot）检测细胞HIF-1α蛋白表达,逆转录RT—PCR检测HIF-1α和VEGFmRNA转录水平的变化。结果：与空白对照组比较,低氧对照组细胞中HIF-1α的蛋白表达及VEGF的mRNA表达均明显升高（P〈0．05）;蜂毒素组细胞的HIF-1α蛋白表达明显低于低氧对照组（P〈0．05）,并具有剂量依赖性;蜂毒素组细胞的VEGF mRNA水平明显低于低氧对照组（P〈0．05）,且有剂量依赖性。结论：模拟的低氧条件可以诱导骨肉瘤Saos-2细胞系中HIF-1α通路的激活;蜂毒素通过抑制HIF-1α蛋白水平的表达、影响其通路中下游基因VEGF mRNA水平的表达而抑制骨肉瘤Saos-2细胞中低氧诱导的HIF-1α通路的激活。由此推断蜂毒素可能通过此途径抑制骨肉瘤血管的生成,达到抗肿瘤的效果。     

低氧细胞应激的HIF-1信号通路

低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)由HIF-1α和HIF-1β两个亚基组成,在低氧下其能激活多种靶基因的转录,在细胞、组织生长发育和生理应激,以及某些病理过程中具有重要的作用.近10年来,有关HIF-1在细胞低氧应激时的信号转导通路,特别是HIF-1α介导的基因转录调控的研究取得了巨大进展.     

低氧诱导因子-1α通路在成骨细胞及破骨细胞耦联中的调控效果探讨

目的探讨成骨细胞及破骨细胞耦联中低氧诱导因子-1α通路调控效果。方法选取出生2~3d条件性基因敲除小鼠及SFP级4~8周龄C578B/L6小鼠,行破骨与成骨细胞共培养体系建立及培养。结果采用RT-PCR检查鉴定结果:HIF-1α基因条带长度经观察为112bp,依据净吸光值,对HIF-1α1/1成骨细胞对应的基因敲除率推算,结果90%。经观察Vhl基因条带长度为265bp,基因敲除率同上。相较野生型共培养,HIF-1α1/1共培养的成骨细胞中基因RANKL mRNA表达呈上调显示,HIF-1α1/1/Vhl1-1和Vh-1-共培养的成骨细胞中OPG mRNA表达上调,RANKL mRNA表达下调,有统计差异(P0.05)。结论激活低氧/HIF-1α通路后,成骨细胞对破骨细胞的分化功能抑制,阻断低氧/HIF-1α通路后,成骨细胞对破骨细胞的分化功能有促进作用。     

缺氧诱导因子1与妊高征发病研究进展

缺氧诱导因子1(hypoxia inducible factor 1,HIF-1)是一种缺氧反应基因的中介因子,可传导缺氧信号,激活一些与缺氧有关的基因,使细胞适应低氧环境,同时也可引起多种病理变化。研究表明,HIF-1参与了与妊娠高血压综合征(简称妊高征)相关的低氧反应,在妊高征的发现及病理生理过程中起重要作用。本文就HIF-1与妊高征关系方面的研究进展作一综述。1 HIF-1的结构HIF-1属于BHLH-PAS蛋白家族,由HIF-1α和HIF-1β2个亚基组成的异二聚体结构[1]。每个亚基的N末端都有basic helix-loop-helix(bHLH)结构和PER-ARNT-SIM(RAS)的同源结构…     

六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠PHD2和HIF-1α表达的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾衰模型大鼠肾组织中脯氨酸羟化酶2(PHD2)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响,探讨慢性肾衰的发病机制以及六味地黄汤防治慢性肾脏病的分子机制。方法 60只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组。5/6肾切除法复制慢性肾衰模型。六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组分别给予3.38 g/(kg·d)、6.75 g/(kg·d)、13.5 g/(kg·d)六味地黄汤灌胃。假手术组和模型组给予10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃12周。造模12周后,检测各组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐,HE染色观察各组大鼠肾组织形态学变化,免疫组化法和RT-PCR法分别检测各组大鼠肾组织中PHD2、HIF-1α蛋白水平和基因表达。结果模型组大鼠24 h尿蛋白、血尿素氮和血肌酐较假手术组明显升高(P0.05),六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组明显降低(P0.05)。HE染色假手术组大鼠肾组织肾间质纤维化不明显,模型组肾间质纤维化明显,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组较模型组肾间质纤维化程度明显减轻。与假手术组比较,模型组大鼠肾组织PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P0.05)。与模型组比较,六味地黄汤低剂量、中剂量和高剂量组大鼠肾组织中PHD2蛋白水平和mRNA表达均明显升高(P0.05),HIF-1α蛋白水平和mRNA表达均明显降低(P0.05),且PHD2与HIF-1αmRNA的表达呈负相关(r=-0.653,P=0.00)。结论 PHD2/HIF-1α信号途径参与肾间质纤维化,六味地黄汤可有效防治慢性肾脏病,其作用机制可能与上调PHD2、降低HIF-1α表达有关。     

低氧诱导因子1α在骨关节炎软骨退变中作用的研究进展

骨关节炎是临床常见病、多发病,其重要始发因素及病理改变是软骨退变。软骨组织处于低氧微环境中,低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）是介导细胞低氧反应的核转录因子,是关节软骨适应低氧环境的一个关键性的调控因子。它对于关节软骨的形成、能量代谢、基质合成等具有重要作用,如果敲除此基因,软骨将不能维持正常形态及功能,导致软骨退变,产生骨关节炎等疾病。中药可以调节HIF-1α基因的表达,从而治疗骨关节炎。本文综述了近年来关于HIF-1α基因与骨关节炎软骨退变的相关性研究现状。     

低氧微环境下siRNA靶向沉默HIF 2α基因对前列腺癌PC 3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察体外低氧条件下缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在人前列腺癌细胞PC-3中的表达情况,并研究siRNA沉默HIF-2α基因对前列腺癌PC-3细胞生长及凋亡的影响.方法 在体外培养的PC-3细胞中加入化学诱导剂CoCl2建立低氧模型,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法检测CoCl2诱导HIF-2αmRNA和蛋白表达的时-效和量-效关系.合成HIF-2αsiRNA片段并转染前列腺癌PC-3细胞,采用RT-PCR及Western印迹法检测HIF-2αsiRNA对HIF-2α基因表达的影响,采用MTT法检测转染HIF-2αsiRNA后对PC-3细胞生长的抑制情况,采用流式细胞仪检测RNA干扰对PC-3细胞凋亡的影响.结果 (1)低氧可诱导PC-3细胞的HIF-2αmRNA表达,与常氧组比较,低氧12,24及48 h组的HIF-2αmRNA和蛋白表达量逐渐升高(P<0.05).100μmol/L的CoCl2作用48 h可作为最佳前列腺癌细胞PC-3低氧模型.(2)低氧+HIF-2αsiRNA干扰组的HIF-2αmRNA和蛋白表达水平明显低于低氧+阴性对照组和低氧组(P<0.05),而低氧+阴性对照组与低氧组的HIF-2αmRNA和蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05).低氧+HIF-2αsiRNA干扰组细胞增殖受抑制、细胞凋亡增加(P<0.05),而常氧组、低氧组、低氧+阴性对照组细胞增殖活力和凋亡差别均无统计学意义(P>0.05).     

低氧诱导因子1α、2α在不同海拔健康世居藏族及移居汉族的水平及意义

目的 探讨低氧诱导因子(HIF)-1α、HIF-2α.在不同海拔藏、汉族的水平及意义.方法 研究对象为2010年6至8月3个海拔高度的健康体检者,分为平原汉族组(P组,海拔5 m),中度海拔藏、汉族组(M1和M2组;海拔2260 m)及高海拔藏、汉族组(H1组和H2组,海拔4380 m),每组20名.应用ELISA方法测定血清HIF-1α、HIF-2α的水平,分析其与动脉血氧分压(PaO2)、血红蛋白(Hb)的相关性.结果 H2组HIF-1α水平[(6.06±1.85)μg/L]高于P组[(4.56 ±0.85)μg/L]、M1组[(4.41±1.05) μg/L]和M2组[(4.59±1.03) μg/L](均P＜0.05);H1组HIF-1α水平[(5.27±0.98) μg/L]高于M1组(P＜0.05).H2组HIF-2α水平[(0.83 ±0.48) μg/L]高于P组[(0.33±0.11) μg/L]、M1组[(0.14 ±0.06) μg/L]和M2组[(0.24 ±0.11) μg/L](均P＜0.01);M1组HIF-2α水平低于P组和H2组(均P＜0.01);H1组HIF-2α水平[(0.18 ±0.16)μg/L]低于P组和H2组(均P＜0.05).汉族组HIF-1α、HIF-2α水平与PaO2呈负相关(r=-0.475、-0.551),与Hb呈正相关(r =0.433、0.463)(均P＜0.01);藏族组HIF-1α、HIF-2α与Pa02无线性相关(r=-0.270、-0.198),HIF-1α与Hb无线性相关(r=-0.141)(均P＞0.05),HIF-2α与Hb正相关(r=0.325,P＜0.05).结论 藏、汉族在不同低氧环境下,HIF-1 α、HIF-2α变化不同,HIF-2α在Hb的调节方面可能起着较HIF-1α更为重要的作用.     

低氧和牙周炎对牙周组织中HIF-1α和MMP2表达的影响

目的 研究低氧条件下HIF-1α、MMP2在大鼠牙周炎牙周组织中的表达及其与牙周炎的相关性,初步探讨HIF-1α与MMP2之间的关系.方法 建立低氧牙周炎动物模型,40只大鼠采用简单随机化分组法分为常氧组、常氧牙周炎组、低氧组、低氧牙周炎组,每组10只,分别检测牙龈指数、菌斑指数、探诊深度及牙槽骨吸收度4项牙周炎临床指标;牙周组织切片HE染色观察牙周炎症程度;免疫组化及Western blot检测牙周组织中HIF-1α、MMP2的表达.结果 牙周炎各临床指标及组织切片的HE染色均表明低氧牙周炎组大鼠牙周组织炎症程度最重;与常氧两组比较,低氧组均促进了牙周组织中HIF-1α、MMP2的表达(P＜0.05);与非牙周炎组比较,牙周炎组HIF-1α、MMP2表达明显增加(P＜0.05);低氧牙周炎组HIF-1α、MMP2表达最高(P＜0.05).结论 低氧促进了牙周炎组织中HIF-1α、MMP2的表达,加速了牙周炎的发展进程.     

紫草素通过抑制PKM2/PHD3/HIF-1α通路诱导肝癌细胞凋亡

目的 探讨紫草素诱导人肝癌细胞SMMC-7721死亡的可能机制。方法 体外培养人肝癌细胞（SMMC-7721）和正常肝细胞（L-02）,实验分为对照组和紫草素给药组（4、8、16μmol/L）。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,MTT法检测细胞活力,试剂盒检测三磷酸腺苷（ATP）和乳酸水平,免疫共沉淀和免疫荧光双染实验明确M2型丙酮酸激酶（PKM2）、脯氨酰酸羟化酶3(PHD3)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)三者之间的作用关系及蛋白表达情况;Annexin V/PI检测细胞凋亡;Western blot观察PKM2、PHD3、HIF-1α及凋亡蛋白Bax、cleaved caspase-3、Bcl-2表达水平;采用小干扰核糖核酸（siRNA）干扰法建立PKM2低表达的人肝癌SMMC-7721细胞,Western blot检测PKM2低表达对人肝癌SMMC-7721细胞中的PHD3、HIF-1α蛋白表达水平的影响。结果 紫草素对SMMC-7721和L-02细胞的半抑制浓度（IC50）分别是8.0...