CD4+CD25+调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜患者中的变化

目的探讨CD4^＋CD25^＋T细胞在特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者发病机制中的作用。方法应用流式细胞术检测ITP患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋FOXP3^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞的数量；实时荧光定量PCR检测外周血FOXP3 mRNA的表达水平。将ITP患者和正常人CD4^＋CD25^highT细胞与自身CD4^＋CD25^-T细胞混合培养，检测CD4^＋CD25^high T细胞免疫抑制功能。结果ITP患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞约占CD4^＋T细胞的（15．64±5．82）％，明显高于正常对照组（9．30±3．95）％（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞比例为（1．53±0．66）％，与对照组[（1．36±0．55）％]比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4^＋FOXP3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞分别为（1．82±1．42）％和（1．25±0．94）％，均明显低于对照组[（3．90±1．37）％和（2．65±0．92）％]（P值均〈0．01）。ITP患者外周血FOXP3 mRNA表达水平较正常人明显下调（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞的抑制活性较正常人减弱（P〈0．01）。结论ITP患者中CD4^＋CD25^＋T细胞FOXP3表达水平降低，抑制活性减弱。     

骨髓增生异常综合征患者外周血树突细胞数量、亚群及其表面协同刺激分子表达的研究

目的 检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血树突细胞（DC）总量、亚群（pDC和mDC）比例及其表面协同刺激分子（CD80、CD86和CIMO）表达，探讨MDS患者细胞免疫异常的形成机制。方法 选取38例MDS患者及19名正常对照，采用荧光素单克隆抗体标记法和流式细胞术检测MDS患者外周血中Lin1^—HLA-DR^＋细胞（DC）、Lin1^-HLA—DR^＋CD123^＋细胞（pDC）、Lin1—HLA—DR^＋CD11c^＋细胞（mDC）的数量以及CD80、CD86和CIMO在DC膜上的表达。结果低危MDS组、高危MDS组和正常对照组外周血DC总量分别为（33．7±7．0）×10^6／L、（56．3±29．0）×10^6／L和（12．1±1．4）×10^6／L（P〈0．05），pDC数量分另U为（12．6±4．1）×10^6／L、（3．6±1．0）×10^6／L和（6．6±0．7）×10^6／L（P〉0．05），mDC数量分别为（16．7±6．3）×10^6／L、（28．7±17．6）×10^6／L和（5．5±0．9）×10^6／L（P〈0．05）。低危MDS组、高危MDS组和正常对照组DC占外周血单个核细胞（PBMNC）百分比分别为（2．37±0．53）％、（3．58±1．39）％和（0．68±0．08）％（P〈0．05），pDC占PBMNC百分比分别为（0．82±0．29）％、（0．31±0．06）％和（0．37±0．04）％（P〉0．05），mDC占PBMNC百分比分别为（0．96±0．35）％、（1．51±0．70）％和（0．32±0．05）％（P〈0．05）。低危MDS组、高危MDS组和正常对照组外周血中CD80^＋DC分别为（30．6±11．8）×10^6／L、（2．3±0．9）×10^6／L和（2．3±0．6）×10^6／L（P〈0．05），CD86^＋DC分别为（25．1±7．4）×10^6／L、（12．4±6．3）×10^6／L和（6．2±3．2）×10^6／L（P〈0．05），CD40^＋DC分别为（2．8±1．0）×10^6／L、（1．5±0．9）×10^6／L和（3．2±2．3）×10^6／L（P〉0．05）。结论 MDS患者外周血中DC数量增多、比例异常；以mDC增多为主，pDC无明显增多；MDS患者DC高表达CD80和CD86，CD40表达不增高。提示MDS患者诱导抗肿瘤细胞免疫的抗原呈递细胞（pDC）数量及功能不足；而与正常造血克隆炎性损伤有关的抗原呈递细胞（mDC）却增多。这可能是导致MDS患者细胞免疫异常的重要机制之一。     

CD28/CTLA-4共刺激分子在再生障碍性贫血免疫发病机制中的作用

目的 研究CD28、CTLA-4在再生障碍性贫血（AA）免疫发病机制中的可能作用。方法 以流式细胞术分别分析23例发病期AA、10例恢复期AA患者和15名正常人骨髓细胞中CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、CTLA-4表达率，Th1、Th2细胞比例，评价CD28、CTLA4表达与Th1／Th2、中性粒细胞绝对值（ANC）之间的关系。结果 ①正常对照组CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、cTLA4表达率及CD28^＋／CTLA-4^＋比值分别为（31．40±10．83）％、（2．45±1．30）％、17．02±13．44，AA患者发病期分别为（39．84±10．89）％、（1．43±0．67）％、43．04±37．61，AA患者恢复期分别为（22．00±9．08）％、（3．46±2．26）％、10．49±7．80；与正常对照组比较，AA患者发病期CD28显著升高（P〈0．05），CTLA-4显著下降（P=〈0．01），CD28^＋／CTLA4^＋比值相应地亦显著升高（P〈0．05），而恢复期上述数值与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。②正常对照组Th1、Th2细胞、Th1／Th2比值分别为（4．21±2．11）％、（1．99±1．27）％、2．46±1．28，AA发病期为（11．13±4．96）％、（2．46±1．65）％、5．20±1．98，恢复期分别为（5．39±4．29）％、（2．53±2．41）％、2．87±1．43；与正常对照组比较，AA发病期Th1增高，Th1、Th2平衡向Thl偏移（P值均〈0．01），恢复期与正常对照组比较，差异无统计学意义。③AA患者CD28^＋／cTLA4^＋比值与Thl／Th2比值呈正相关（P〈0．05），ANC与CD3^＋CD4^＋CD28^＋T细胞数呈负相关（P〈0．01），与CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋T细胞数呈正相关（P〈0．01）。结论 ①AA发病期患者骨髓CD4^＋T细胞表面共刺激分子表达异常，CD28升高，而CTLA-4下降，AA患者骨髓T细胞处于“预激活”状态；②CD28／CTLA-4比值与Th1／T12．比值呈正相关提示：CD28、CTLA-4表达失衡可引起Th细胞格局偏移，Th1型细胞增多。③ANC和CD28、CTLA-4间相关分析进一步说明CD28、CTLA-4与AA的发生、发展有关。     

人参二醇促骨髓CD34+细胞增殖和分化的研究

本研究探讨人参二醇（PDS）对正常人骨髓CD34^＋细胞的促进增殖和诱导分化作用。用吸附单克隆抗体的免疫磁珠技术从正常人骨髓分离出CD34^＋细胞,采用琼脂半固体多向祖细胞集落（CFU-Mix）培养方法观察PDS对CD34^＋细胞的增殖作用;用液体培养使CD34^＋细胞增殖,并向红系、粒系定向生长,用流式细胞仪分析PDS诱导后细胞表面标记变化。结果显示：免疫磁珠分离CD34^＋细胞的获得率占骨髓有核细胞（MNC）的（1.0±0.15）%;活细胞比例占（95.6±1.2）%,CD34^＋细胞富集度达（86.8±2.8）%。中浓度PDS（25mg/L）能够有效地促进CD34^＋细胞增殖,生成CFU-Mix集落,提高率为（56.3±3.5）%,与对照相比较有显著差异（p〈0.01）。液体培养生成粒系、红系细胞的数量明显增高,与对照相比差异有显著性,提高率分别为（35.6±3.2）%和（22.3±2.1）%,与对照相比差异有显著性（p〈0.01）,且呈剂量依赖性。经PDS诱导14天后,细胞表面分化标记明显增高,CD33^＋细胞在PDS50mg/L时最高,CD71^＋细胞在25mg/L时最高,G-A^＋细胞在10mg/L时最高,而CD15^＋细胞数量无明显变化。结论：PDS不但促进CD34^＋细胞增殖,且能诱导其定向分化,提示PDS具有类似造血生长因子和协同生长因子的效应。     

不同来源人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异

目的 比较不同来源的人造血干／祖细胞在NOD／SCID小鼠体内归巢能力的差异性，并探讨其体内归巢能力与膜表面归巢相关分子CXCR4表达水平的相关性。方法 采用流式细胞术（FACS）检测新鲜脐血、冻存脐血、动员后外周血（mPB）及骨髓来源的CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平；将荧光染料CFSE标记的人CD34^＋细胞移植人接受照射的NOD／SCID小鼠，移植后20小时检测已归巢于NOD／SCID小鼠骨髓及脾脏中不同来源的人CD34^＋细胞，计算其相应的骨髓及脾脏归巢效率；并将小鼠股骨制成组织切片，荧光显微镜下观察人CD34^＋细胞在小鼠骨髓腔内的分布。结果 新鲜脐血、冻存脐血、mPB和骨髓CD34^＋细胞膜表面CXCR4表达阳性率分别为（49.52±1．12）％。（46．12±2．29）％，（48．50±2．48）％和（65．39±1．27）％，CD34^＋细胞在NOD／SCID小鼠骨髓的归巢效率分别为（3．00±0．44）％，（2．84±0．46）％，（4．06±0．70）％及（5．76±0．52）％；在脾脏的归巢率分别为（1．88±0．12）％，（1．80±0．15）％，（1．90±0．22）％，（2．16±0．34）％。归巢的CD34^＋细胞主要分布于小鼠股骨的骨内膜区域。结论 脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和骨髓。经冻存复苏后脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平略有下调。脐血CD34^＋细胞在照射NOD／SCID小鼠的骨髓归巢效率低于mPB和骨髓。     

原发性胆汁性肝硬化动物模型的建立及外周血T淋巴细胞表面CD40配体分析

目的用聚肌苷酸胞苷酸（polyinosinic polycytidylic acid，PolyI：C）注射C57BIL/6小鼠以研究建立原发性胆汁性肝硬化（PBC）动物模型，探讨CD40配体（CD40L）在外周血T淋巴细胞表面的表达，和在PBC中T淋巴细胞的活化情况。方法20只C57BIM6小鼠随机分对照组和模型组。将polyI：C以5ms／kg的剂量腹腔注射模型组小鼠，对照组注射PBS，每周2次，120d后处死，留取外周血和肝组织，间接免疫荧光法检测血清抗线粒体抗体（AMA），HE染色观察胆管病理变化，生化分析仪测定血清碱性磷酸酶（ALP）含量，流式细胞术分析外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例及CD40L在T淋巴细胞表面的表达情况。结果PolyI：C注射120d后模型组小鼠均出现AMA阳性，肝组织小胆管周围有不同程度的炎性细胞浸润，血清ALP明显高于对照组（P〈0．001）；对照组胆管及血清ALP均未发生明显变化；模型组小鼠CD40L^＋／CD4^＋、CD40L^＋／CD8^＋T淋巴细胞[（4．35±0．34）％，（1．42±0．10）％）显著高于对照组[（0．78±0．10）％，（0．43±0．04）％，P〈0．01]；而模型组小鼠CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例[（25．83±1．80）％，（24．84±2．70）％]与对照组[（20．51±3．46）％，（17．84±1．53）％]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PolyI：C腹腔注射C57BIM6小鼠120d可引起PBC病变，活化的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞在PBC发病中起重要作用。     

婴幼儿急性上呼吸道感染淋巴细胞亚群的改变

目的研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况。方法采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率，CD4^＋与CD8^＋细胞百分率，CD4^＋／CD8^＋比值及CD19^＋和CD19^＋CD23^＋的表达水平，以探讨婴幼儿急性上呼吸道感染T淋巴细胞亚群的变化及B淋巴细胞的活化状况。结果上呼吸道感染的患儿的外周血Th1，Th2的细胞百分率（13．15%±6．23%及4．57％±3．10％）均显著高于对照组（7．14％±5．09％及2．03％±0．95％），患儿组CD4^＋细胞百分率亦较对照组为高（P〈0．05）；CD8^＋，CD4^＋／CD8^＋比值均与正常对照组之间无统计学差异（P〉0．05），CD19^＋与CD19^＋CD23^＋的表达阳性率无明显升高。结论婴幼儿上呼吸道感染时可活化T辅助淋巴细胞亚群，表现为Th1扫Th2细胞百分率均增加，Th1和Th2细胞免疫反应增强，而B淋巴细胞状况无明显改变。     

抗TGF-β1单克隆抗体对脐血CD34^＋细胞体外扩增作用的研究

为了探讨TGF—β1单克隆抗体对脐血CD34^＋细胞的扩增作用,本研究将分离纯化的脐血CD34＋细胞分为3组：①空白对照组：当天分选的新鲜脐血CD34＋细胞;②对照组：含SCF、FLT3-L、IL-3、IL-6四种因子组合的无血清液体培养体系中培养3天的脐血CD34＋细胞;③实验组：条件同对照组,但加入了TGF—β1单克隆抗体。3组均检测单个核细胞（MNC）计数,流式细胞术检测CD34和c—kit,计数混合集落（CFU—GEMM）、红系爆式集落（BFU—E）、粒系集落（CFU—GM）。结果显示：实验组MNC、CD34＋细胞、CD34＋c—kit＋细胞计数分别为[（2．35±0．25）×10^5、（1．16±0．29）×10^5、（1．09±0．26）×10^5],明显高于对照组[（1．25±0．13）×10^5、（0．55±0．19）×10^5、（0．51±0．2）×10^5],（P均〈0．01）。实验组CD34＋c—kit -亚群计数为（12．95±3．17）×10^3,明显高于对照组（1．71±0．83）×10^3,二者相比有显著性差异（P〈0．01）。实验组中早期集落CFU—GEMM、BFU—E的产率[（16．3±4．72）×10^3,（65．0±20．96）×10^3]明显高于对照组[（5．0±2．58）×10^3,（16．25±7．93）×10^3]（P〈0．01）,相对较晚期集落CFU—GM的产率在对照纽[（4．0±2．28）×10^3]和实验组[（6．33±2.85）×10^3]均高于空白组[（0．75±0．29）×10^3],但在对照组和实验组之间无显著性差异（P〉0．05）。此结果表明,TGF—β1单克隆抗体促进了脐血MNC和CD34＋细胞的扩增,且早期细胞CD34＋c—kit -细胞扩增更为突出;提高了早期集落CFU—GEMM和BFU—E的产量,而对相对较晚期的髓系集落CFU—GM的产量无明显影响。结论：TGF—β1单克隆抗体能协同其它生长因子有效扩增脐血CD34＋细胞,并保留一定量更早期的造血祖细胞,减轻了造血祖细胞分化的压力。     

慢性再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群和粒-单核细胞集落形成单位的检测

目的探讨慢性再生障碍性贫血（CAA）发病的免疫因素，为CAA的临床治疗提供依据。方法采用骨髓细胞半固体集落培养法检测粒一单核细胞集落形成单位（GM—CFU），同时用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果CAA骨髓细胞培养GM—CFU产率明显少于正常对照组，（7．9±0．5）个／ml vs （88．7±2．7）个／ml（P〈0．01）；CAA骨髓细胞加正常血清培养GM-CFU的产率与正常对照组比较差异无统计学意义，（82．4±2．6）个／ml vs （88．7±2．7）个／ml（P〈0．05），其中有21例的GM-CFU的产率（60．1±2．1）个／ml与对照相比较明显减少；CAA血清与正常骨髓细胞培养的GM—CFU为（105．6±3．2）个／ml，显著高于正常组。CAA组的CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋／CD8^＋均比对照组降低，分别为（49．8±0．6）％ vs （64．3±0．9）％、（29．7±0．4）％ vs （38．6±0．3）％和（1．2±0．1）％ vs （1．7±0．1）％（均P〈0．01）；CD8^＋细胞明显高于正常，（28．9±0．3）％ vs （24．5±0．3）％（P〈0．01）。结论CAA患者普遍存在着T细胞亚群失衡的免疫异常；CAA患者骨髓细胞中可能有抑制患者GM—CFU形成的因素，而血清中存在着升高的粒一单核细胞集落刺激因子等，其临床意义尚需进一步观察。GM-CFU体外培养联合T细胞亚群检测，可作为CAA异常免疫机制的诊断指标。     

可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体在间充质干细胞微环境中对脐带血粒-单系造血前体细胞分化的影响

目的探讨在间充质干细胞（MSC）微环境中可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体（solu—ble M-CSF receptor，sMR）对脐带血造血前体细胞增殖和分化的影响。方法实验组[单纯细胞因子组（CK组）＋sMR组]以MSC为基质层细胞，建立基于MSC的造血细胞体外扩增体系，接种脐带血单个核细胞，培养体系中加入外源性造血生长因子SCF、Fh3L、TPO和IL-6，同时加入sMR，培养1、2、3、4周对扩增的细胞进行细胞计数、集落培养，对照组为无sMR的CK组。结果①培养3、4周，细胞数量迅速增加，对照组和实验组分别达108．47倍和120．67倍，细胞数量差异无统计学意义（P〉0．05）。②随体外培养时间延长集落形成细胞（colony forming cell，CFC）增加，对照组和实验组培养3周时每1×10^5细胞CFC分别达38．1×10^3和54．1×10^3，4周对照组逐渐下降至18．1×10^3，但实验组仍持续增加至84．0×10^3；从第3周开始，实验组扩增CFC的能力明显高于对照组（P〈0．01）。③红系CFC于扩增1周后迅速达到高峰，对照组和实验组每1×10^5细胞CFC分别为5891．2和5635．6，此后红系CFC数迅速下降，3周时为0，两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。④粒单系CFC在体外扩增过程中逐渐增加，对照组和实验组培养3周时每1×10^5细胞CFC分别达31．5×10^3和54．1×10^3；对照组从第4周开始出现回落（18．3×10^3），但实验组培养4周时仍持续增加（80．8×10^3）。结论sMR能抑制脐带血造血前体细胞在间充质干细胞微环境中扩增时出现的分化，其作用体现在粒单系，对红系无明显影响。     

Expansion of human NOD/SCID-repopulating cells by stem cell factor, Flk2/Flt3 ligand, thrombopoietin, IL-6, and soluble IL-6 receptor

Here, we demonstrate a significant ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells capable of repopulating in NOD/SCID mice. Using a combination of stem cell factor (SCF), Flk2/Flt3 ligand (FL), thrombopoietin (TPO), and a complex of IL-6 and soluble IL-6 receptor (IL-6/sIL-6R), we cultured cord blood CD34(+) cells for 7 days and transplanted these cells into NOD/SCID mice. Bone marrow engraftment was judged successful when recipient animals contained measurable numbers of human CD45(+) cells 10-12 weeks after transplantation. When cells were cultured with SCF+FL+TPO+IL-6/sIL-6R, 13 of 16 recipients were successfully engrafted, and CD45(+) cells represented 11.5% of bone marrow cells in engrafted recipients. Cells cultured with a subset of these factors were less efficiently engrafted, both as measured by frequency of successful transplantations and prevalence of CD45(+) cells. In animals receiving cells cultured with all 4 factors, human CD45(+) cells represented various lineages, including a large number of CD34(+) cells. The proportion of CD45(+) cells in recipient marrow was 10 times higher in animals receiving these cultured cells than in those receiving comparable numbers of fresh CD34(+) cells, and the expansion rate was estimated at 4.2-fold by a limiting dilution method. Addition of IL-3 to the cytokine combination abrogated the repopulating ability of the expanded cells. The present study may provide a novel culture method for the expansion of human transplantable hematopoietic stem cells suitable for clinical applications.     

Erythroid progenitors differentiate and mature in response to endogenous erythropoietin

We reported previously that stimulation of glycoprotein 130 (gp130) by a combination of human IL-6 and soluble IL-6 receptor (sIL-6R) could support proliferation, differentiation, and terminal maturation of erythroid cells in the absence of erythropoietin (EPO) from human CD34(+) cells in culture with stem cell factor (SCF). This observation suggested that differentiation of hematopoietic stem/progenitor cells to erythroid cells progressed according to an intrinsic program and that EPO receptor (EPOR) could be replaced by other cytokine receptors. In other words, EPOR appeared to be dispensable for erythropoiesis. Here we examined the role of EPOR in erythropoiesis stimulated by SCF, sIL-6R, and IL-6. Surprisingly, reduction of EPOR expression using antisense oligodeoxynucleotides suppressed erythropoiesis stimulated not only by SCF and EPO, but also by SCF, sIL-6R, and IL-6. EPO mRNA was detected in erythroid cells but not myeloid cells cultured in the presence of SCF, sIL-6R, and IL-6. Furthermore, high concentrations of anti-EPO-neutralizing antibody abrogated erythropoiesis in cultures without exogenous EPO. Based on these results, we suggest that erythroid progenitors themselves secrete EPO and that they have the potential to differentiate and mature in response to this endogenous EPO.     

Analysis of interleukin 6 receptor and gp130 expressions and proliferative capability of human CD34+ cells

We recently demonstrated that stimulation of gp130 by a combination of soluble interleukin 6 receptor (sIL-6R) and IL-6 but not IL-6 alone significantly stimulates the ex vivo expansion of primitive hematopoietic progenitors and the generation of erythroid cells from human CD34+ cells in the presence of stem cell factor (SCF). Here, we show that gp130 is found low positively on most CD34+ cells, whereas IL- 6R is expressed on only 30-50% of these cells. Although most of the colonies generated from FACS-sorted CD34+IL-6R+ cells were granulocyte/macrophage (GM) colonies, CD34+IL-6R- cells gave rise to various types of colonies, including erythroid bursts, GM, megakaryocytes, and mixed colonies in methylcellulose culture with a combination of IL-6, sIL-6R, and SCF. Similar results were obtained in culture supplemented with a combination of IL-3, IL-6, SCF, granulocyte colony-stimulating factor, erythropoietin, and thrombopoietin. A limiting dilution analysis of long-term culture-initiating cells (LTC- IC) showed that the CD34+IL-6R- cells contained a larger number of LTC- IC than did the CD34+IL-6R+ cells. In a serum-free suspension of CD34+IL-6R- cells, the addition of sIL-6R to the combination of IL-6 and SCF dramatically increased the total and multipotential progenitors, whereas CD34+IL-6R+ cells failed to do so under the same conditions. These results indicate that most of the erythroid, megakaryocytic, and primitive human hematopoietic progenitors are included in the IL-6R- populations, and the activation of gp130 on these progenitors can be achieved by a complex of IL-6-sIL-6R, but not by IL-6 alone. The present culture system using IL-6, sIL-6R, and SCF may provide a novel approach for ex vivo expansion of human primitive hematopoietic progenitors.     

Serum soluble interleukin 6 (IL-6) receptor and IL-6/soluble IL-6 receptor complex in systemic juvenile rheumatoid arthritis.

By using a sandwich ELISA, soluble human IL-6 receptor (sIL-6 R) levels were measured in the sera of 20 healthy children and of 25 patients with systemic juvenile rheumatoid arthritis (JRA). In patients with systemic JRA, serum sIL-6 R levels (114.6 +/- 37.7 ng/ml) were significantly lower (P < 0.01) than those of healthy children (161.2 +/- 45.5 ng/ml). Serum sIL-6 R levels were negatively correlated (r = -0.610, P < 0.001) with serum IL-6 levels measured with the B9 cells. The serum IL-6/sIL-6 R complex was detected using an ELISA based on a monoclonal antibody to IL-6 for capture and on a monoclonal antibody to human sIL-6 R for detection. Healthy controls had little, if any, detectable serum IL-6/sIL-6 R complex (OD 0.024 +/- 0.027), while the majority of patients with systemic JRA presented measurable serum IL-6/sIL-6 R complex (OD 0.492 +/- 0.546). IL-6 levels estimated in the circulating IL-6/sIL-6 R complexes were in the range of nanograms per milliliter and approximately 20-fold higher than those measured by the B9 cells. Since serum C-reactive protein concentrations were much more correlated with serum levels of IL-6/sIL-6 R complexes (r = 0.713, r2 = 0.51, P < 0.0001) than with the serum IL-6 levels measured with the B9 cells (r = 0.435, r2 = 0.19, P = 0.05), the large quantities of serum IL-6 present in IL-6/sIL-6 R complexes appear to be biologically relevant in vivo, at least as far as the induction by IL-6 of acute phase protein production.     

脐血间充质干细胞的生物学特征及其对造血干/祖细胞体外扩增的支持作用

目的探讨脐血间充质干细胞(MSC)的生物学特征及其对造血干/祖细胞体外扩增的支持作用。方法用液体培养法分离脐血贴壁细胞,采用ELISA方法检测贴壁细胞条件培养液中细胞因子的表达;用流式细胞术分析其免疫表型特征;在成软骨细胞诱导培养条件下诱导细胞分化,并用RTPCR方法检测分化后细胞原胶原Ⅱ型基因的表达。采用分阶段共培养方法观察脐血贴壁细胞对CD34+细胞体外扩增的支持作用。结果脐血单个核细胞纤维样细胞集落形成率为(3.5±0.7)/106。脐血MSC体外至少可以扩增15代。没有分化的脐血MSC表型为CD13、CD29、CD90、CD105、CD166、SH2、SH3和SH4阳性,CD45、CD34和CD14阴性;脐血MSC培养上清中干细胞因子、IL6和肿瘤坏死因子α检测阳性。在成软骨细胞诱导培养基培养条件下,脐血MSC原胶原Ⅱ型基因mRNA表达阳性。脐血MSC与CD34+细胞共掊养14d,CD34+细胞扩增率高于未共培养组4倍。结论脐血MSC具有类似于成体骨髓MSC的特征,对造血干细胞增殖有明显的支持作用。     

脐血CD133^＋细胞体外扩增巨核系祖细胞的研究

本研究探讨脐血CD133^＋（UCB—CD133^＋）细胞体外扩增巨核系祖细胞的能力和最佳收获时间。采用免疫磁珠激活细胞分选系统（MACS）分选UCB—CD133^＋细胞，将纯化的UCB—CD133^＋细胞接种于含TPO、IL-3和SCF的无血清液体培养体系中体外扩增巨核系祖细胞，在培养第7、10和14天进行细胞计数，流式细胞仪检测扩增过程中CD133、CD34、CD41抗原表达的动态变化，并采用半固体法对不同扩增阶段的细胞进行巨核祖细胞集落形成单位（CFU—MK）培养。结果表明：培养至第7天时，UCB—CD133^＋细胞扩增效果最佳，扩增了8、2-1-2．2倍；培养至第14天，细胞总数扩增了116倍；培养至10天时，平均1个CD133^＋细胞所产生的CD133^＋CD41^＋和CD34^＋CD41^＋细胞数最多，分剐为2．5±0．9和2．6±0.5个，所产生的CD41^＋细胞为20．3±5、9个；扩增前后的UCB—CD133^＋细胞均能形成CFU—MK，扩增第10天的UCB—CD133^＋细胞所形成的CFU—MK总数最多，CFU—MK扩增倍数为59．5±11．8倍。巨核细胞免疫组织化学染色显示，扩增后的巨核系细胞多呈幼稚状态，未见血小板形成。结论：UCB—CD133^＋细胞具有较强的体外扩增巨核系祖细胞的能力，培养第10天扩增效能最佳。     

重型再生障碍性贫血患者骨髓中辅助性T细胞亚群数量及功能的变化

目的　研究重型再生障碍性贫血 (SAA)患者在免疫抑制治疗 (IST)恢复前后骨髓中辅助性T细胞 (Th细胞 )亚群改变情况及与造血功能的关系。方法　以流式细胞仪测定 2 4例发病期、15例恢复期SAA患者及 16名正常对照者骨髓中Th细胞亚群及CD3 CD8 细胞改变情况 ;以放射免疫法测定 2 0例发病期SAA患者、12例IST后恢复期患者及 16名正常对照者血清中TNF α、IL 4水平 ;评价Th1与CD3 CD8 细胞、TNF α的相关关系 ;评价Th1、CD3 CD8 细胞、TNF α、IL 4及Th1/Th2平衡与网织红细胞、中性粒细胞绝对值的相关关系。结果　正常对照组骨髓中Th1细胞、Th2细胞百分率及Th1/Th2比值分别为 (0 .4 2± 0 .30 ) %、(0 .2 4± 0 .17) %、1.5 7± 0 .93;发病期SAA分别为 (4 .87± 2 .6 4 ) %、(0 .4 1±0 .2 6 ) %、2 1.2 2± 5 .0 7,均显著多于正常对照 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,恢复期分别为 (0 .5 3± 0 .2 2 ) %、(0 .4 4± 0 .15 ) %、1.38± 0 .4 5 ,与正常对照组相当 (P均 >0 .0 5 ) ;CD3 CD8 细胞亦由发病期的(32 .32± 18.6 9) %显著下降为 (13.76± 2 .96 ) % (P <0 .0 1) ;SAA发病期血清中TNF α、IL 4为 (4 .2 9± 3.15 ) μg/L、(1.2 4± 0 .73) μg/L ,高于正常对照组的 (1.2 1± 1.16 ) μg/L     

脐血体外同时诱导扩增T,NK和CD34+细胞

体外研究表明,人脐血含有比骨髓细胞更原始更早期的造血干细胞群。移植后所引起的GVHD发生率及程度都比骨髓及外周血要低,但其相应的GVL效应也较低,容易复发。单份脐血所含有的造血细胞量仅可以满足一定体重以下的儿童患者需求,对需移植的大部分成人患者则要进行体外扩增。脐血体外扩增后进行干细胞移植是一种新的设想和尝试,移植物中免疫细胞的组成和功能是决定干细胞移植能否成功重建造血与免疫、以及平衡GVHD和GVL的重要因素。为了研究脐血体外同时诱导扩增T、NK和CD34 细胞的可能性,本实验无菌采集健康正常足月产新生儿脐血,并分离出单个核细胞,在不同的细胞因子组合作用下用IMDM培养液培养14天。在培养0、3、7、14天时收集细胞,用FCM分析扩增前后脐血干/祖细胞及T、NK免疫细胞含量。结果表明,与无细胞因子的对照组相比,所有细胞因子SCF,IL3,IL6,IL7,IL2组合组别均能显著扩增脐血中的单个核细胞。所有细胞因子组合组别均能显著增加脐血中的CD34 细胞比例,使其含量从新鲜脐血中的1.6%升高到最高D组的11.9%。第7天时CD34 细胞平均增加10至50倍不等。新鲜脐血中CD3 T细胞平均为(18.7±4.3)%,在无细胞因子的对照组中CD3 T细胞下降明显,而在含细胞因子的组别中CD3 T有不同程度的增加,扩增最高的组别中CD3 T细胞是新鲜脐血的2倍。在新鲜脐血中含(3.6±1.9)?56 细胞。CD56 细胞数量仅在含细胞因子IL2的组别中有显著增加,其它组则无明显变化。结论:脐血中T细胞、NK细胞在一定细胞因子组合下,可与干/祖细胞同时在体外被扩增和诱导分化。     

可溶性抗CD47单抗对人树突细胞分化与功能的影响

目的探讨抗CD4 7可溶性单抗B6H12对树突细胞分化及功能的影响。方法利用rhGM CSF、IL 4、细菌脂多糖 (LPS)组合在体外诱导人外周血单核细胞为树突细胞 ,并在培养体系中添加单抗B6H12。以透射电镜观察树突细胞形态 ,流式细胞术分析树突细胞膜表面分子表达。半定量RT PCR法及ELISA法分别检测树突细胞IL 12mRNA表达水平及蛋白质含量。Brdu ELISA法检测树突细胞刺激同种异型淋巴细胞增殖能力。结果树突细胞膜表面有CD4 7高表达 (94 %～ 98% )。B6H12单抗处理的树突细胞组与未加B6H12单抗组比较 ,CD80 细胞为 (6 8.14± 7.4 1) %vs(89.17± 8.5 9) % ;CD86 细胞为 (6 7.33± 4 .71) %vs(87.2 7± 3.5 6 ) % ;CD83 细胞为 (40 .0 8± 14 .80 ) %vs(72 .77± 8.6 8) % ;CD1a 细胞为 (6 6 .4 5± 4 .0 6 ) %vs(95 .93± 3.0 3) % ,HLA DR 细胞为 (40 .6 7± 13.4 8) %vs(98.97± 1.0 1) %。B6H12单抗显著地下调树突细胞IL 12mRNA及IL 12 P70 表达水平 (P <0 .0 5 ) ,且Brdu掺入量也显著的降低 (P <0 .0 1)。结论　可溶性CD4 7单抗能影响人树突细胞向成熟分化 ,并抑制其功能。