成骨生长肽羧基端片段及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的探讨成骨生长肽(OGP)羧基端片段[OGP(10~14)]及其衍生物G38I对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法大鼠颅盖骨成骨细胞体外培养至第3代,分别加入10-15~10-7mol/L的OGP(10~14)或G38I,48h后行细胞计数,并用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖情况。细胞分为实验组[OGP(10~14)组和G38I组]及对照组,实验组给予10-11mol/L的药物干预48h。电镜观察细胞超微结构的变化,测定培养上清液碱性磷酸酶(ALP)含量,用免疫组织化学方法比较细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量的变化,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞中核结合因子a1(Cbfa1)和Ⅰ型胶原mRNA表达水平的变化。结果在较低浓度时,随药物浓度升高,OGP(10~14)和G38I促进细胞数增加、提高细胞活性的作用增强,10-11mol/L药物作用时成骨细胞数分别为37×104/ml和30×104/ml,进一步升高药物浓度反而抑制细胞增殖。电镜下实验组细胞粗面内质网发达,胞质中有大量分泌囊泡。对照组细胞囊泡中可见钙盐结晶。OGP(10~14)组和G38I组与对照组比较,细胞培养上清液ALP含量高(4·47U/g、3·82U/g vs2·21U/g),细胞中Ⅰ型胶原蛋白含量多,Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平较高,差异均具有统计学意义(P<0·01,P<0·05)。结论OGP(10~14)及其衍生物G38I具有与OGP全长肽相同的促进成骨细胞增殖、提高细胞活性的作用,OGP(10~14)和G38I可上调成骨细胞Cbfa1和Ⅰ型胶原mRNA表达水平,增加细胞中Ⅰ型胶原的合成,促进细胞分化和成骨作用。     

成骨生长肽调节大鼠成骨细胞样细胞3种mRNA表达和电镜观察

研究了成骨生长肽(简称OGP)调节大鼠成骨细胞样细胞多种mRNAs表达和超微结构。将细胞分为OGP实验组和对照组，用RT—PCR方法检测细胞的I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA，并以GAPDH(磷酸甘油醛脱氢酶)作为内标，可求出各种mRNAs的相对含量。透射电镜观察二组细胞的超微结构。电镜观察到OGP组培养细胞的粗面内质网比对照组丰富，OGP组管状粗面内质网末端膨大成池，核糖体附在粗面内质网的表面上，细胞分化较完善。与对照组比较，OGP组分别上调细胞I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA表达。在10^-12～10^-8mol／L OGP范围内，其浓度较高，细胞I型胶原mRNA和骨钙素mRNA表达也较高。结果表明OGP能促进细胞分化；上调细胞I型胶原mRNA、骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA表达。因此，OGP有促进骨形成功能。     

成骨生长肽对大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响

目的:研究成骨生长肽OGP在体外对大鼠颅盖骨成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响.方法:在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞中加入浓度为10-11～10-7mol/L的OGP,处理7天后收集细胞爬片,采用SABC法行细胞免疫化学染色,通过图像分析系统观察不同OGP作用后,成骨细胞胶原蛋白的变化情况.结果:OGP作用于成骨细胞后,Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强,其中OGP浓度为10-9mol/L时促进作用最为明显.结论:OGP可促进成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白的表达.     

成骨生长肽羧基端5肽OGP（10-14）及其类似物对大鼠破骨样细胞增殖的影响

目的：应用骨髓细胞诱导体系、骨髓细胞与成骨细胞（OB）共培养体系，分别观察成骨生长肽羧基端5肽OGP（10-14）及其结构类似物G48A对体外培养SD大鼠破骨样细胞（0LC）增殖的影响。方法：采用无血清培养条件，分别观察OGP（10-14）、G48A、RG—DY肽（精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-酪氨酸）对骨髓细胞诱导体系、骨髓细胞和OB共培养体系中OLC形成的影响。结果：骨髓细胞与OB共培养体系组（G36G＋0B组，G48A＋OB组）OLC形成数目较骨髓细胞诱导体系（G36G组，G48A组）有增多趋势。     

晚期氧化蛋白产物通过氧化应激抑制大鼠成骨细胞增殖及分化

目的研究晚期氧化蛋白产物（AOPP）对大鼠成骨细胞增殖、分化及氧化应激的影响及作用机制。方法新生大鼠颅骨酶
解法培养成骨细胞,用CCK-8试剂盒和碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测不同浓度AOPP（50、100、200、400 μg/ml）对成骨细胞增殖
和分化的影响;以2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酯为荧光探针检测不同浓度AOPP对成骨细胞OB活性氧含量的影响;实时荧光定
量反转录聚合酶链反应检测成骨细胞ALP、Ⅰ型胶原蛋白、晚期糖基化终末产物受体（RAGE）mRNA表达水平。结果与对照组
相比,AOPP能够显著抑制成骨细胞OB增殖（P<0.01）,降低其ALP活性（P<0.01）,增加成骨细胞中活性氧的生成（P<0.01）,下
调ALP、Ⅰ型胶原蛋白mRNA的转录（P<0.05）,并增加RAGE mRNA的表达（P<0.05）。结论AOPP可抑制成骨细胞增殖及分
化,可能与上调RAGE mRNA表达,诱导成骨细胞产生活性氧有关。
     

成骨生长肽对成骨细胞样细胞的分化和成骨作用

目的"研究成骨生长肽(OGP)对大鼠成骨细胞样细胞的分化和成骨作用.方法"大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞体外培养分实验组与对照组,实验组加OGP,分别测定细胞的Ⅰ型胶原mRNA和骨钙素mRNA表达、胶原和钙含量;测定细胞和培养液的碱性磷酸酶活性和骨钙素含量. 结果"实验组细胞的Ⅰ型胶原mRNA和骨钙素mRNA均高度表达,对照组相对较低;实验组细胞的胶原和钙含量、细胞和培养液的碱性磷酸酶活性和骨钙素含量均显著地高于对照组(P＜0.05,P＜0.001). 结论"OGP能上调成骨细胞样细胞的Ⅰ型胶原mRNA和骨钙素mRNA表达,增加细胞的胶原合成、分泌和钙盐沉积,由此促进成骨.     

OGP(10-14)及其类似物G48A对成骨细胞IGF-1和Cbfα1表达的影响

目的 探讨成骨生长肽羧基端片段[OGP(10-14)](G36G)及其类似物CM8A对大鼠成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响.方法 体外分离SD大鼠成骨细胞,传代培养后取第3代细胞并用于实验.根据不同处理因素,将成骨细胞分为G36G组(培养液含1×10-11mol/L G36G)、G48A组(培养液含1×10-13mol/L G48A)、甲状旁腺激素(PTH)组(培养液含I×10-8moL/L PTH)和对照组(未处理).运用RT-PCR技术分别检测各组成骨细胞Cbfα1、IGF-1mRNA的表达,并进行统计学比较.结果 G36G组、G48A组、PTH组和对照组Cbfα1 mRNA表达分别为1.123±0.081、1.101±0.115、1.104±0.054、0.893±0.067;IGF-1 mRNA表达分别为1.130±0.067、1.213±0.111、1.173±0.180、0.908±0.081.经统计学分析,G36G组、G48A组和PTH组Cbfα1、IGF-1 mRNA表达较对照组显著上升(均P＜0.05),而其三组间比较无显著差异(P＞0.05).结论 OGP(10-14)及其类似物G48A对大鼠成骨细胞Cbfα1和IGF-1 mRNA的表达具有上调作用.     

转化生长因子β1对种植体表面成骨细胞I型胶原蛋白基因表达研究

目的：通过观察特定浓度的转化生长因子β1（TGF-β1）,在不同时间刺激体外培养种植体表面成骨细胞中I型胶原蛋白表达情况,探讨TGF-β1对种植体表面成骨细胞增殖分化的影响。方法：体外培养成骨细胞模拟种植体植入后的体内环境接种于钛片表面,将其分为2个浓度刺激组和对照组。刺激组分别加入0.5ng/mL、10ng/mL的TGF-β1刺激细胞增殖和分化,分别收集刺激后第2d、5d、7d培养的细胞。通过RT-PCR检测不同培养时间成骨细胞中的I型胶原蛋白mRNA表达,对照组不加TGF-β1,比较各组间差异程度。结果：浓度为0.5ng/mL的外源性TGF-β1加入到接种于模拟体内种植体的钛片表面的成骨细胞中后,可显著增加成骨细胞中I型胶原蛋白表达（P〈0.05）;而浓度为10ng/mL的外源性TGF-β1可降低成骨细胞中I型胶原蛋白的表达（P〈0.05）。TGF-β1刺激后的I型胶原蛋白在不同时间培养的成骨细胞中,表达在凝胶成像系统光密度分析后可见与对照组中表达量相比,低浓度刺激组表达量略有升高,高浓度刺激组表达量略有降低。结论：浓度为0.5ng/mL的TGF-β1对I型胶原蛋白的表达有促进作用;浓度为10ng/mL外源性TGF-β1对I型胶原蛋白表达有抑制作用。     

幼年成骨细胞体外培养传代衰老与70岁以上老年人成骨细胞的生物学特性比较

目的通过对幼年人成骨细胞（osteoblasts，OB）体外培养传代衰老与70岁以上老年人成骨细胞的生物学特性比较，观察培养代数与年龄的相关性，拟建立幼年人成骨细胞体外培养传代模拟衰老模型。方法选取≤5岁（2例，男1，女1）和≥70岁（14例，男5，女9）两个年龄组的股骨颈松质骨进行成骨细胞体外培养，幼年组细胞自第二代开始每5～10d传代一次，至第17代终止。培养期间观察第2，5，10，15代细胞的形态、增殖能力与碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性，以及应用RT-PCR方法检测BGP，IGF-1，OPG，ODF基因mRNA表达，并与体外培养的70岁以上老年人成骨细胞进行比较。结果形态观察提示成骨细胞体外连续传代至第10-15代时，其胞体增大、折光性降低，呈塌陷状，细胞器稀少、糖原增多、溶酶体增多，与70岁以上老年人成骨细胞相似。MTT相对比值随传代次数增加而降低，第10-15代细胞明显低于第2-5代细胞，而与70岁以上老年人成骨细胞相似；ALP活性于10-15代时增高，与70岁以上老年人成骨细胞相似。幼年成骨细胞骨钙素（bone gla-protein／osteocalcin，BGP）、胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）、破骨细胞分化抑制因子（osteoprotegerin，OPG）、破骨细胞分化因子（osteoclast differentiation factor，ODF）、OPG／ODFmRNA表达随传代次数增加呈降低趋势，第10与15代细胞其表达量低于第2代细胞，也低于70岁以上老年人成骨细胞。结论幼年成骨细胞体外连续传代培养10-15代时，其形态结构、增殖能力与某些基因mRNA表达与体外培养第二代70岁以上老年人成骨细胞有相似性，有希望作为体外培养模拟衰老模型。     

成骨生长肽对大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞增殖和分化的影响

目的研究成骨生长肽(OGP)在体外对成骨细胞样细胞增殖分化的影响。方法在体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞中加入不同浓度的OGP(10-11mol/L~10-7mol/L),用MTT法检测细胞增殖,酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测核心结合因子1(Cbfa1)mRNA的表达。结果OGP对成骨细胞样细胞增殖有促进作用(P<0.05),最大效应浓度为10-9mol/L;能增加细胞内ALP活性(P<0.05),最大效应浓度为10-8mol/L;可促进Cbfa1mRNA的表达(P<0.05),其最佳促进表达浓度为10-8mol/L,Cbfa1mRNA与β-actinmRNA像素值比值为0.89±0.02。结论OGP可促进成骨细胞样细胞增殖,增强Cbfa1mRNA的表达水平。