HCV核心区增强和抑制性多肽对小鼠CTL相互作用研究

目的　建立细胞毒性T细胞 (cytotoxicTcell ,CTL)检测体系 ,探讨丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV)感染者体内CTL功能缺陷的原因。方法　选择HCV核心区多肽中对CTL有抑制作用和增强作用的多肽各 2条 ,交叉组合后共同皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,用乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾细胞CTL活性。结果　用LDH检测HCV核心区多肽免疫BALB/c小鼠的CTL活性 ,CTL活性可被CPA10 ( 5～ 2 3位氨基酸 )增强及被CPA9( 3 9～ 74位氨基酸 )抑制。CPB2 CPB8、CPB6 CPB8组中效靶比 10∶1,2 0∶1的CTL活性显著高于对照组 ,CPB2 CPB7、CPB6 CPB7组与对照组无明显差异 ,双因素方差分析显示HCV核心区抑制性多肽和增强性多肽有交互作用。结论　LDH可稳定检测BALB/c小鼠的CTL活性 ,HCV核心区抑制性和增强性多肽有相互作用。     

两种抗原致敏方式负载树突状细胞疫苗对结直肠癌细胞株的体外杀伤作用

目的 比较两种抗原负载方式对树突状细胞(DCs)疫苗的影响.方法 抽取HLA表型为A11的健康志愿者外周血,分离单核细胞,体外培养.通过反复冻融LoVo细胞,提取肿瘤细胞裂解物或者使用含CEA片断的重组腺相关病毒转染未成熟DCs,诱导特异性细胞毒性T细胞.检测体外培养的DCs和CTL活性,并使用MTT法检测两组CTL对LoVo细胞的杀伤作用.结果 两种方式均可培养的成熟DCs,诱导的CTL细胞分泌IFN-γ有所增加;转染后DCs诱导特异性CTL可有效识别并杀伤HLA-A11阳性的LoVo细胞,腺相关病毒提呈抗原制备的DCs疫苗对LoVo细胞的杀伤作用明显高于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.结论 两种抗原提呈方式均可培养出成熟的DCs,不明显改变DCs表型和刺激淋巴细胞增殖、分化功能,并可诱导自体CTL增殖.使用腺相关病毒转染DCs的方式明显优于肿瘤细胞裂解物的抗原负载方式.     

龙威口服液对小鼠免疫功能的调节

目的 研究中药制剂龙威口服液扶正固本作用的机制。方法 通过检测小鼠细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性、T淋巴细胞亚群、IgG水平来观察龙威口服液对免疫功能的调节作用。结果 龙威口服液可提高小鼠CTL细胞毒活性和增加小鼠CD4~ 和CD8~ T细胞数量;使小鼠的IgG产生具有一定的正向调节作用,以中等剂量组作用明显。结论 中药制剂龙威口服液扶正固本作用的机制是免疫增强作用。     

大鼠脊髓损伤前后外周血CD3+ CD8+ CD28-和CD3+ CD8+ CD28+细胞亚群的变化

目的：：探讨SD大鼠脊髓损伤( spinal cord injury,SCI)前后外周血抑制性T细胞( suppress T lymphocytes,Ts)和细胞毒性T细胞( cytotoxic T lymphocytes,Tc)亚群的变化规律。方法：取10只健康雌性SD大鼠,采用纽约大学脊髓损伤撞击仪制作重物坠落SCI模型。于SCI前及后1、3、5、7、14、21、28和56 d收集外周血,流式细胞术检测外周血淋巴细胞CD3+CD8+CD28-Ts 和CD3+CD8+CD28+Tc亚群的变化规律。结果：SCI前,正常大鼠外周血中Ts和Tc亚群占CD3+总T细胞的百分比分别为(30.27±12.09)%和(14.75±4.29)%。损伤后1 d,Ts的比例为(22.58±12.12)%。术后5 d时其百分比下降至最低,为(20.86±10.41)%。术后7~21 d,其比例恢复至术前水平,28 d时显著升高,其比例为(37.90±12.98)%。56 d时其比例为(33.79±11.44)%,恢复至损伤前水平(P>0.05)。 Tc和Ts亚群的变化趋势相反,在损伤后1、5、21和28 d时其比例分别为(17.29±7.10)%、(20.02±6.24)%、(23.89±6.78)%和(13.81±11.21)%。但56 d时其比例没有恢复至术前水平,而是进一步下降至(8.71±6.44)%(P<0.01)。结论：在SCI后的早期阶段,SD大鼠外周血Tc占明显优势,提示Ts功能抑制、Tc功能增强是SCI免疫损伤机制之一。 SCI后5~21 d是进行免疫调节治疗的关键时间窗。     

树突状细胞对肿瘤特异性CTL体外激发、扩增及功能的作用研究

目的:研究凋亡肿瘤细胞负载的DCs联合细胞因子对T细胞体外激发、扩增及功能的诱导作用。方法:人B淋巴瘤细胞株Raji经顺铂(DDP)诱导凋亡，体外共育法负载DCS，DCs和T细胞体外共培养观察DC5对T细胞的效应，采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析T细胞表型：ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、IL-10的含量；溶血实验检测细胞毒性T细胞(CTL)产生穿孔素的能力；体外肿瘤杀伤实验分析CTL的特异性肿瘤杀伤作用。结果：凋亡肿瘤细胞负载联合CD40激发的DCs能有效地激发自体T细胞的体外扩增并诱导具有较特异杀伤肿瘤细胞作用的CTL。结论：凋亡肿瘤细胞负载的DCS在CD40信号的作用下对自体T细胞具有较强的激发和扩增效应．所获得的CTL对肿瘤细胞具有较特异的杀伤作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血Tc和Ts细胞分析

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒感染后外周血Tc细胞和Ts细胞状态。方法:用双重染色免疫细胞学技术检测40例慢性乙型肝炎患者外周血Tc和Ts细胞,并与HbsAb(+)、HbcAb(+)健康人对比。结果:慢性乙型肝炎外周血Tc细胞水平低于对照组,Ts水平高于对照组,差异均有显著性。结论:慢性乙型肝炎患者外周血Tc和Ts细胞水平与HbsAb(+)、HbcAb(+)健康人不同,这两种细胞水平可能与乙型肝炎病毒感染后慢性化机制有关。     

三氯乙烯致敏小鼠Tc1/Tc2细胞失衡研究

目的检测小鼠经三氯乙烯( TCE )致敏后Tc1、Tc2细胞的变化,探讨Tc1/Tc2细胞失衡在三氯乙烯药疹样皮炎( DMLT)中的可能作用。方法 BALB/c雌性小鼠随机分为空白对照、溶剂对照和TCE处理组,在末次激发后24、48、72 h和7d根据皮肤肿胀程度和病理表现分为致敏组和未致敏组。无菌取出脾脏,用流式细胞术检测Tc1、Tc2细胞数量,实时荧光定量PCR检测T-bet、GATA-3 mRNA转录水平。结果与未致敏组相比,致敏组Tc1细胞数量在24、48、72 h和7 d显著上升(P<0.01),72 h水平最高;致敏组Tc2细胞数量在24、48、72 h显著上升(P<0.01),72 h水平达到峰值,7 d较未致敏组差异无统计学意义( P >0.05);致敏组Tc1/ Tc2比例于48、72 h 和7 d 较未致敏组显著上升(P <0.01)。致敏组T-bet、GATA-3 mRNA 转录水平在48、72 h 和7 d 较相应时点未致敏组显著上升(P <0.05,P <0.01),72 h 达到峰值。结论Tc1/ Tc2细胞失衡可能参与了TCE 致敏小鼠的免疫损伤过程并发挥重要的作用。     

细胞毒性T淋巴细胞在乙型肝炎中的作用研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染后，决定病情严重程度及病程转归的一个主要因素是机体的免疫反应能力。由于患者体内抗病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)在清除病毒方面发挥重要的功能，下面就CTL在乙型肝炎中作用研究近况综述如下。     

肾癌相关抗原G250致敏的树突状细胞瘤苗体外诱导特异性抗肾癌免疫

目的 探讨肾癌相关抗原G250致敏的树突状细胞(DC)瘤苗体外诱导自体T淋巴细胞特异性抗肾癌免疫效应.方法 自健康人外周血中提取单核细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4刺激活化、经肾癌相关抗原G250致敏(同时设未致敏的DC为对照),用流式细胞仪检测DC细胞和T细胞表面分子的表达,MTT检测肾癌相关抗原G250致敏的DC刺激自体T淋巴细胞增殖效应,以及诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对不同靶细胞(肾癌细胞株786-0、肺癌细胞株A549)的杀伤活性.结果 两组细胞均高表达CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR,较低表达CD1a,两组无明显差异(P＞0.05).经G250蛋白致敏的DC激发自体T细胞增殖的能力明显强于未致敏组的DC,由其激活的CTL对786-0的杀伤率明显高于对照组(P＜0.05),而两组对A549细胞均无明显杀伤活性.结论 肾癌相关抗原G250致敏的DC瘤苗体外可有效的诱导特异性抗肾癌效应.     

大豆异黄酮对老龄大鼠雌激素水平和子宫雌激素受体表达的影响

目的将白细胞介素2（IL-2）基因修饰树突状细胞（DC）,观察其和对胰腺癌荷瘤裸鼠的治疗作用。方法将IL-2基因转染单个核细胞来源的DC后,用于激发自体细胞毒性T淋巴细胞（CTL）,检测其对CTL的增殖和人胰腺癌PC3细胞杀伤性的影响：检测CTL对荷人胰腺癌PC3细胞肿瘤裸鼠肿瘤生长情况影响和对肿瘤细胞分裂指数和端粒酶活性的影响。结果IL-2基因修饰的DC细胞所激发的CTL对胰腺癌PC-3细胞有较强的抑制作用,并能抑制荷瘤裸鼠肿瘤细胞的分裂指数和端粒酶活性。结论IL-2基因修饰DC细胞激活的CTL抗PC-3肿瘤免疫作用明显增强,能明显抑制人胰腺癌PC3细胞种植瘤的生长。     

树突状细胞介导的肝癌免疫治疗实验研究

目的探讨以树突状细胞（DC）为介导的原发性肝癌免疫治疗新方法。方法采用肝癌细胞制备肿瘤细胞性抗原冲击致敏体外培养的DC,体外混合淋巴细胞反应检测抗原致敏DC;刺激同基因T淋巴细胞增殖的能力,观察负载肿瘤抗原的DC;体内外诱导产生肿瘤特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）及其抗肿瘤能力。结果经肝癌细胞抗原致敏的DC;能诱导较强的自体T细胞增殖,且诱导特异性CTL,该CTL对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC和未经肝癌细胞抗原致敏的DC;激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对非同种肿瘤细胞无明显的杀伤作用,经BEL7402肿瘤细胞抗原致敏的DC;经皮下免疫小鼠可诱导有效的免疫保护作用,可抵抗野生型BEL7402细胞的再攻击,肿瘤生长受到明显抑制,瘤体出现延迟,生长减慢。结论DC具有强大的刺激T淋巴细胞增殖和诱导产生特异性CTL的能力,在体内外均能激发特异性抗肿瘤免疫应答。     

细胞毒T细胞

细胞毒T细胞(CTL)分为CD8 CTLs、CD4 CTLs和CD4-CD8-CTLs几个亚群,它来源于淋巴样造血干细胞的T细胞库,在胸腺中发育成熟,并在周围淋巴组织中活化。效应CTL对靶细胞实行杀伤的途径主要有两条:FasL-Fas介导的细胞凋亡作用和颗粒胞吐途径介导的溶细胞作用。由于CTL在抗肿瘤和抗病毒中效应显著,因而受到广泛重视。     

Relationship between serum HBV DNA level and HBV-specific, nonspecific cytotoxic T lymphocytes and natural killer cells in patients with chronic hepatitis B

Background The response of patients with chronic hepatitis B （CHB） to antiviral therapy against hepatitis B virus （HBV） is related to the base line level of HBV DNA, but the mechanism is not clear. The present study aimed to understand the possible relationship between the level of HBV DNA and HBV-specific, nonspecific cytotoxic T lymphocytes （CTL） and natural killer （NK） cells of CHB patients and the mechanism how the HBV DNA level influences the antiviral therapeutic effect. Methods Totally 100 adult patients with CHB who were positive for HBV DNA, HBeAg and （HLA）-A2 were enrolled into this study. HBV DNA was tested by real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （PCR）. HBV specific and nonspecific CTL and NK cells were tested by flowcytometry. Serum alanine aminotransferase （ALT） and total bilirubin （TBil） were determined for each patient using routine biochemical tests. The 100 cases were assigned to two groups based on their HBV DNA level： group A had 48 cases, their HBV DNA level was 104-105 copies/ml, group B had 52 cases their HBV DNA level was 106-107 copies/ml. HBV specific CTL, nonspecific CTL, NK cells, ALT and TBil of the two groups were compared. Results HBV DNA level of groups A and B was （4.81±0.39） log10 copies/ml and （6.81±0.40） log10 copies/ml, respectively （t=25.32, P 〈0.001）. HBV specific CTL and NK cells of group A were significantly higher than those of group B （P 〈0.001 for both）. Nonspecific CTL of group A was significantly lower than that of group B （P 〈0.01）. ALT and TBil of group A were significantly lower than those of group B （P 〈0.01 and P 〈0.05, respectively）. Conclusions Serum HBV DNA level of patients with CHB is related to HBV specific CTL, nonspecific CTL and NK cells, which might result in inflammatory reaction of liver and cause more damage to liver function. Mechanism of HBV DNA level affecting the efficacy of anti-viral treatment may be related to the levels of HBV specific CTL and NK cells.     

细胞毒性T淋巴细胞在乙型肝炎中的作用研究

乙型肝炎病毒(HBV)感染后,决定病情严重程度及病程转归的一个主要因素是机体的免疫反应能力。由于患者体内抗病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在清除病毒方面发挥重要功能,CTL通过非细胞裂解机制控制HBV感染,本文就CTL在乙型肝炎中作用,针对HBV的主要组织相容性复合体Ⅰ类分子的CTL反应特异性,CTL的细胞效应机制以及慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTL反应低下的原因等几方面的研究近况进行了综述。     

慢性HBV感染者特异性细胞毒性T淋巴细胞及HLA-A2的变化研究

目的：探讨慢性HBV感染者特异性细胞毒性T淋巴细胞（specific cytotoxic T lymphocyte,CTL）及人类白细胞抗原一A2（human leucocyte antigen-A2,HLA-A2）的变化。并分析CTL与血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase,ALT）水平和病毒载量的关系,以了解慢性HBV感染者特异性细胞免疫功能的状态。方法：采用HLA-A2限制的HBVcore18-27抗原表位肽五聚体（MHC Pentamersl法结合流式细胞技术,分析CHB组慢性乙型肝炎46例、LC组乙型肝炎肝硬化29例和NC组23例正常对照健康体检者,外周血HBV特异性CTL及HLA-A2的变化,并分析CTL与ATL水平和病毒载量的关系。结果：CHB组、LC组HLA-A2检出率均明显高于NC组;ALT水平和病毒载量与HBV特异性的CTL有一定的关系。结论：采用HLA-A2限制的HBVcore18-27抗原表位肽五聚体（MHCPentamers）法结合流式细胞技术可以检测到低水平的HBV特异性CTL;HLA-A2是乙型肝炎肝硬化的易感基因之一;ALT水平和病毒载量与HBV特异性CTL有一定的关系。     

rhHSP70对食管癌细胞RNA转染的脐血树突状细胞诱导CTL抗肿瘤功能的影响

目的研究重组人热休克蛋白70(rhHSP70)联合食管癌细胞RNA转染脐血树突状细胞(DCs)对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性抗肿瘤作用的影响。方法分离脐血单个核细胞,经rhSCF、rhGM-CSF和IL-4诱导和食管癌RNA转染形成成熟DCs,加入rhHSP70,检测DCs表面标志及DCs诱导的T细胞增殖、CTL杀伤活性。结果食管癌RNA转染后DCs高表达抗原提呈分子、协同刺激分子和黏附分子,对T细胞的促增殖作用和CTL杀伤活性显著增强(P<0.01),rhHSP70能显著促进DCs功能。结论 rhHSP70具有增强食管癌细胞RNA转染的DCs对T细胞的促增殖和CTL杀伤活性的作用。     

NK／T细胞对肺腺癌患者生存与预后的影响

目的研究NK／T细胞在肺腺癌组织中的浸润程度及对患者生存与预后的影响。方法将CD8作为细胞毒T淋巴细胞（CTL）的标记物，CD56作为自然杀伤细胞（NK）的特异性标记物，应用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中NK／T细胞的分布和浸润情况。结果48例肺癌中，CTL无-轻度浸润的29例，5年生存率为20％；显著浸润的19例，5年生存率为57％；NK细胞无-轻度浸润的34例，5年生存率为23％，显著浸润的14例，5年生存率为64％：NK／T均显无-轻度浸润的36例，5年生存率为25％，显著浸润的12例，5年生存率为66％。经Log-rank检验，NK／T显著浸润组和无-轻度浸润组二者的5年生存率之间存在显著性差异（P〈0．05），有统计学意义。结论肺腺癌组织中NK／T细胞显著浸润组的预后和生存时间明显好于轻度浸润组。其机理与机体细胞免疫有关。     

QLFATINSTL（93-102aa）是隐球菌抗原MP98CTL优势表位

目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA—A＊0201限制性CD8^＋CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA—A＊0201限制性CD8^＋CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A＊0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞（PBMC5）对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定MP98的HLA—A＊0201限制性CD8^＋CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽3（93—102aa）与HLA—A＊0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA—A＊0201阳性个体PBMC增殖,并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽3QLFATINSTL（93—102aa）是抗原MP98上HLA—A＊0201限制性CD8^＋CTL的优势表位,可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。     

肿瘤抗原MAGE-3 CTL预测表位的计算机分子模拟研究

目的 从理论上分析预测表位与ＨＬＡ－Ａ２分子的结合情况及其为ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位的可能性。方法 应用计算机分子模拟的方法,建立ＭＡＧＥ－３４个ＣＴＬ预测表位的ＨＬＡ－Ａ２结合三维结构和各多肽与ＨＬＡ－Ａ２分子所形成复合的三维结构。结果 ４个预测表位的三维结构完全符合ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位的结构要求,且都能与ＨＬＡ－Ａ２分子结合。结论 ４个ＣＴＬ预测表位为ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位的