温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

温补肾阳药对甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的:研究温补肾阳药对肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响.方法:12只SD大鼠,随机分为3组,每组4只.模型组和治疗组切除两侧甲状腺,正常组做相应的假手术,但不切除甲状腺.喂养7 d后模型组和治疗组大鼠出现拱背耸毛、大便稀溏等肾阳虚的症状.从第8天开始,治疗组每天喂饲温补肾阳药1次,给药剂量6.7 g·kg~(-1),其他2组喂饲等体积的生理盐水,连续6 d后,断头处死3组大鼠,分离提取其肝线粒体蛋白质,分别用荧光染料Cy3,Cy5标记,每个Cy3及Cy5标记的样品与等量Cy2标记的内标混合后在同一块凝胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder 6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:双向电泳后,平均每块胶检测到997个蛋白质点,其中所有图谱共有的点有687个,并从中筛选到22个差异蛋白,其中热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、氨甲酰磷酸合成酶I,ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白和类钙离子激活中性蛋白酶12在肾阳虚状态下表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和GTP结合调节蛋白在肾阳虚状态下表达量均降低.经温补肾阳药治疗后,热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶和GTP结合调节蛋白表达量均增加,而氨甲酰磷酸合成酶I和类钙离子激活中性蛋白酶12表达量减少.结论:温补肾阳药可能通过调节物质代谢、保护线粒体膜稳定性和维护细胞内信号传导而起到治疗肾阳虚的作用.     

温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响的研究

 目的利用双向凝胶内差异显示电泳技术,分析温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响。方法正常大鼠、肾阳虚大鼠及温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质样品分别用荧光染料Cy2,Cy3,Cy5标记,经双向电泳后用不同波长光激发扫描后得到不同样品的蛋白质组图谱,经DeCyder软件分析,以肾阳虚动物与正常动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,其中11个蛋白质得到鉴定。结果肾阳虚动物由于肾上腺皮质功能受损,引起热休克蛋白60和70含量增加,可能起到调整处于应激状态的细胞存活、保护细胞免受损伤的作用;肾阳虚动物糖代谢和脂代谢功能降低,而蛋白质代谢和核酸代谢功能增强,表现为二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂酰辅酶A脱氢酶活性降低,而肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶和亚硫酸氧化酶活性增加;肾阳虚动物由于三羧酸循环和脂肪酸β-氧化功能障碍,引起ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶活性代偿性增加,试图通过增加ATP的产量以缓解能量代谢的不足;但肾阳虚动物由于鸟氨酸氨基转移酶活性降低,导致储存能量的肌酸合成降低,使产生的ATP大部分通过热能形式消耗掉,从而导致肾阳虚的临床虚寒症状。应用温补肾阳药治疗后使热休克蛋白60更趋增加,可能加强对细胞的保护作用;温补肾阳药增加二氢硫辛酰胺脱氢酶的活性,可通过改善糖代谢和促进三羧酸循环功能使机体的能量代谢增强;温补肾阳药还可以通过增加ATP合酶和醛脱氢酶的含量,使ATP的产量增加,缓解能量代谢功能障碍。结论温补肾阳药可以通过调整线粒体内多种与能量代谢相关蛋白质表达而起到治疗肾阳虚的作用。     

甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的研究

目的:应用差异蛋白质组学技术研究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组.方法:正常大鼠和甲状腺切除的肾阳虚模型大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记,与等量Cv2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCvder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:在肾阳虚大鼠肝线粒体中,氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ、乳铁传递蛋白、热休克蛋白60、过氧化氢酶、甲基丙二酸半醛脱氢酶、类钙激活中性蛋白酶、电子传递黄素蛋白、酯酶同工酶ESl、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶和ATP酶质子通道蛋白表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和鸟苷酸结合调节蛋白表达量降低.结论:肾阳虚大鼠可能因糖类和脂类物质分解代谢受抑以及细胞内信号转导异常而出现虚寒症状.     

温热中药对寒症模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用双向电泳和质谱技术研究温热中药对寒证模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响,阐述寒证与能量代谢的关系及温热中药的作用。方法 提取正常大鼠、寒证模型大鼠和温热中药治疗后大鼠的肝线粒体蛋白质,经双向电泳分离后获得蛋白质组图谱,用Image Master 2D 6.0软件进行差异蛋白质分析,筛选出差异蛋白,进行质谱鉴定,用Western blotting法验证差异蛋白的表达。结果 寒证大鼠肝线粒体中H⁺转运ATP合酶、电压依从性阴离子选择性通道蛋白1（VDAC）表达量增加,伴侣素groEL、丝氨酸蛋白酶抑制剂、Tu转运延伸因子、乙醛脱氢酶、二甲基甘氨酸脱氢酶、脂酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、酰基辅酶A脱氢酶、丝氨酸蛋白酶、电子传递黄素蛋白、腺苷酸激酶、DJ-1蛋白、羧酸酯水解酶、氨甲酰磷酸合成酶1表达量降低;应用温热中药治疗后F1-ATP合酶、H⁺转运ATP合酶表达量降低,丙酰辅酶A羧化酶、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、Tu转运延伸因子、乙酰辅酶A酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、丝氨酸蛋白酶、丙酮酸脱氢酶、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40 S核糖体蛋白、热休克蛋白1、烯酰辅酶A水解酶表达量增加。结论 寒证模型大鼠线粒体内脂肪酸的β-氧化受阻,蛋白质的合成、折叠及分泌障碍,类固醇激素减少影响糖代谢,导致能量不足。应用温热中药治疗后,糖、脂代谢增强、蛋白质合成增加导致能量代谢活跃。     

温补心阳和肾阳方对心力衰竭大鼠心功能和心肌磷酸腺苷含量的影响

目的研究温补心阳和肾阳方对心力衰竭大鼠心功能和心肌磷酸腺苷含量的影响。方法采用结扎冠状动脉前降支术制备心力衰竭大鼠模型,用温补心阳和温补肾阳方于术后2周灌胃,以假手术组为空白对照组,曲美他嗪为阳性药物对照组。给药8周,采用酶联免疫吸附法检测心梗后心力衰竭大鼠药物干预前后脑钠肽（BNP）水平,测定治疗后血流动力学改变,包括心率（HR）、左室收缩压（LVSP）、左室舒张压（LVEDP）、左室内压上升下降最大速率（±LVdp／dtmax）,并行高效液相法测定心肌组织中AMP、ADP、ATP的含量。结果对心力衰竭大鼠心功能的影响,温补心阳和肾阳组较模型组,显著降低BNP水平（P〈0．01）,改善心肌收缩、舒张功能。而肾阳组大鼠LVSP、＋LVdp／dtmax较心阳组升高（P〈0．05）,LVEDP、-LVdp／dtmax、HR、BNP较心阳组降低（P〈O．05）。对心力衰竭大鼠心肌磷酸腺苷含量的影响：温补心阳和肾阳组大鼠较模型组心肌AMP、ADP降低（P〈0．05）,ATP含量升高,而肾阳组大鼠心肌ATP含量显著高于模型组（P〈0．01）,较心阳组更接近曲美他嗪和假手术组。结论温补心阳和温补肾阳可改善心力衰竭大鼠能量代谢,提高心功能,其中以温补肾阳作用更显著。     

基于“肾为元阳之本”探讨温补肾阳方治疗抑郁症

目的:文章通过文献和实验研究,探讨温补肾阳方治疗抑郁症的可行性。方法:文献研究基于"肾为元阳之本"的理论结合抑郁症特点,从理论、实验、临床找出文献依据,提出"肾阳不足是抑郁症发病的重要机制"。实验部分以分养和长期不可预知的中等强度应激造成大鼠抑郁模型,观察温补肾阳方对大鼠单胺类神经递质及下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamus-pituitary-adrenocorticalaxis,HPA)的影响。结果:各治疗组可改善单胺类神经递质和HPA轴,与模型组比较,有显著性差异(P<0.05);各治疗组之间比较,无统计学差异。结论:肾阳不足是抑郁症的重要病机之一,温补肾阳法可用于治疗抑郁症。     

肝郁气滞型乳腺增生组织蛋白质组的研究

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术进行肝郁气滞型乳腺增生组织的蛋白质组研究。方法：提取正常乳腺组织及肝郁气滞型乳腺增生组织总蛋白,分别用cy3或Cy5标记。每一对Cy3和Cy5标记样品都与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。所获得的图谱经DeCydcr6．5软件进行分析,筛选表述量有差异的蛋白质进行质谱鉴定。结果：在肝郁气滞型乳腺增生组织中,有8个蛋白质表达水平具显著变化。其中S-腺苷谷胱甘肽水解酶、蛋白体5、超氧化物岐化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、过氧化物酶5、肽酰脯氨酰顺反式异构酶表达量增加,而三联组氨酸核酸结合蛋白1表达量显著下降。结论：8种差异蛋白质可能与肝郁气滞型乳腺增生疾病的发生与发展有关。     

六味地黄汤对甲亢型肾阴虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用双向电泳技术和质谱技术研究六味地黄汤对甲亢型肾阴虚大鼠肝线粒体蛋向质组的影响.方法 双向电泳分离甲状腺素造成的肾阴虚模型和六味地黄汤治疗大鼠肝线粒体蛋白质,银染后扫描得到蛋白质组图谱,用Image Master2D6.0软件进行差异蛋白质组分析,筛选差异在2倍以上的蛋白质进行质谱鉴定和生物信息学分析.结果 大鼠Major urinary protein precursor、Peroxiredoxin-6、内质网蛋白29前体、大鼠转甲状腺素蛋白D链表达升高,78 kDa葡萄糖调节蛋白前体、谷胱甘肽硫转移酶Mu 1、热休克蛋白60、肽基脯氨酰顺反式异构酶、核转录因子-κB 2、H~+-转运ATP合酶、BNIP1 protein表达均降低.结论 六味地黄汤滋阴补肾作用机理可能与下调线粒体内H~+-转运ATP合酶表达量从而减缓能量代谢、抑制NF-κB过量表达和活化以调节炎性细胞因子紊乱状态和凋亡抑制状态、上调PDX6表达对抗氧自由基损伤以及增强性激素分泌水平相关.     

西江桂和清化桂对肾阳虚大鼠HPA 轴、HPG 轴的影响

目的观察西江桂和清化桂对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺（HPA 轴）、下丘脑-垂体-性腺（HPG 轴） 的影响。方法SD 大鼠40 只随机分为正常组（8 只）和模型复制组（32 只）,模型复制组大鼠采用肌注氢化可的 松复制肾阳虚大鼠模型,模型复制成功后,随机分为模型对照组、阳性对照组（2.33 g·kg-1）、清化桂组（0.7 g·kg-1）、 西江桂组（0.7 g·kg-1）。给药28 d,记录大鼠体质量、肛温、脏器指数;用ELISA 法检测血清CORT、CRH、 ACTH、T、E2 含量;HE 染色观察肾上腺、睾丸病理变化;qRT-PCR 法检测下丘脑CRH、GnRH 基因的表 达。结果与模型对照组比较,西江桂组、清化桂组的肛温、肾上腺指数、CORT、CRH、ACTH、T 值均明显 升高（P＜0.05,P＜0.01）;睾丸指数、E2、CRH mRNA 水平均明显降低（P＜0.05,P＜0.01）;体质量、GnRH mRNA 表达均有升高趋势（P＞0.05）;均可改善肾上腺、睾丸病理损伤。与清化桂组比较,西江桂组体质量、 肛温无统计学意义（P＞0.05）。结论研究表明西江桂和清化桂两药温补肾阳作用差异不大,其作用机制均与 改善HPA 轴、HPG 轴有关。     

老龄肾阳虚中医证候特征的流行病学调查

目的 探讨老龄肾阳虚的中医证候及其分布规律,在其主症确定的前提下,探索对老龄肾阳虚贡献度大的次症.方法 采用流行病学调查方法,通过分层整群抽样调查3 405例60~79岁老龄人群,将调查所得数据建立数据库,采用卡方检验、logistics回归统计方法进行分析.结果 3 405例调查对象中有915名为肾阳虚患者,2 490名为非肾阳虚者.无论是单因素还是多因素非条件logistics回归,结果均显示次症中夜尿频多、下肢浮肿、动则气促和舌淡苔白有显著意义(P﹤0.01).结论 老龄肾阳虚次症中以夜尿频多、下肢浮肿、动则气促和舌淡苔白发生频率较高,且具显著性意义,体现了老龄人群段的肾阳虚证候特征.     

大鼠肾阳虚证的代谢组学研究

目的 利用代谢组学技术观察糖皮质激素所造的肾阳虚证大鼠模型的内源性代谢物特征.方法 将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组和模型给药组各8只;肌注氢化可的松琥珀酸钠造模;造模成功后,给予模型给药组大鼠白附片溶液灌胃,连续14 d;末次给药24 h后取血制备血浆;采用高效液相色谱-质谱联用的代谢组学技术检测内源性代谢物.结果 正常组与模型组相比,溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)和468.4m/z的未知化合物的谱峰峰形改变较为明显.发生改变的代谢物可作为肾阳虚证的生物标志物做进一步研究.结论 从代谢组学分析中找出特异的标志性代谢产物,以利于深入研究中医证候的生物学本质.     

老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的 采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系.方法 筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus 2.0基因表达谱芯片,通过组间比较,筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因.结果 芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因,聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因,主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫.结论 老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程,可能与个体的衰老存在密切关联.     

敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠抗应激作用影响的研究

目的 研究敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠抗应激作用的影响.方法 用氢化可的松给小鼠皮下注射,造成肾阳虚动物模型,观察敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠体重、负重游泳时间、常压耐缺氧能力、负重游泳后肝糖原和血清乳酸含量的影响.结果 与模型组比较,敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重,显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间,提高负重游泳后肝糖原含量,降低运动后血清乳酸含量.结论 与模型组比较,敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重,显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间,提高负重游泳后肝糖原含量,降低运动后血清乳酸含量.     

从2067例流行病调查资料探讨肾阳虚证辨证细化分型

目的 对肾阳虚证流行病调查资料进行肾阳虚证辨证细化分型的探索.方法 通过采集2067例60岁以上老年人肾阳虚证候资料,并结合国家诊断标准对肾阳虚证样本进行筛选,采用描述性分析、聚类分析、主成分分析阐述其数据的内部关系.结果 2067例样本共筛选出937例符合肾阳虚证诊断的资料.结论通过数据分析显示出肾阳虚证内部数据存在着症状亚型,夜尿频多等可作为肾阳虚诊断新的主症.     

肾阳虚与血瘀关系的实验研究

目的探讨肾虚与血瘀之间的发展变化规律,为补肾活血法提供实验依据。方法制作肾阳虚动物模型,选取Wistar大鼠37只,分为对照组、模型组、治疗组。观察动物外观、一般体征、脏器重量和血脂等改变。结果模型组动物皮毛稀疏,精神萎靡,懒动,大便溏稀,耳垂毛细血管紫暗;模型组肾上腺、精囊腺的重量与对照组比较明显降低;血清睾酮含量降低;模型组血清TC和LDL-C明显增高,TG增高不明显,HDL-C降低。结论肾阳虚同时伴有血瘀,血瘀时间的延迟可出现肾阳虚。     

五更泄非尽肾虚

临床每谈及五更泄泻，多从肾虚论治，方药多用四神丸、五得汤（山东中医药大学附属医院协定方，由黄连、木香、当归、白芍、干姜等组成）等加减。笔者跟随导师曹志群教授于2004年9月12日诊治一女性患者。该患者病史3年，每于凌晨发生腹痛腹泻，肠中雷鸣，泻下完谷不化，未见脓血，在某省级医院多次行电子结肠镜、大便常规、隐血试验等检查未发现器质性病变，诊断为“肠激惹综合征”，行中西药治疗屡不见效，遂求诊于曹老师。查前医用药多为桂、附、肉蔻、故纸、吴萸、诃子、罂粟壳辈。     

五更泄非尽肾虚

临床每谈及五更泄泻,多从肾虚论治,方药多用四神丸、五得汤(山东中医药大学附属医院协定方,由黄连、木香、当归、白芍、干姜等组成)等加减.笔者跟随导师曹志群教授于2004年9月12日诊治一女性患者.该患者病史3年,每于凌晨发生腹痛腹泻,肠中雷鸣,泻下完谷不化,未见脓血,在某省级医院多次行电子结肠镜、大便常规、隐血试验等检查未发现器质性病变,诊断为"肠激惹综合征",行中西药治疗屡不见效,遂求诊于曹老师.查前医用药多为桂、附、肉蔻、故纸、吴萸、诃子、罂粟壳辈.曹老师询问患者,自述除凌晨入厕外,每逢抑郁恼怒或情志紧张之时亦可出现腹痛、腹泻诸症;再问有无形寒肢冷、腰膝酸软、小便清长等症,患者否认.查舌脉,见舌质红,苔黄厚,脉弦滑、尺部不细不弱.曹老师认为患者证属肝郁侮脾,而非肾虚,处方:葛根30 g,车前子20 g,白术15 g,防风15 g,炒薏苡仁30 g,白头翁9 g,黄连9 g,白芍15 g,陈皮15 g,木香6 g.6剂后患者复诊告知凌晨腹泻已止,遂行守方善后治疗.