温补肾阳药对甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的:研究温补肾阳药对肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响.方法:12只SD大鼠,随机分为3组,每组4只.模型组和治疗组切除两侧甲状腺,正常组做相应的假手术,但不切除甲状腺.喂养7 d后模型组和治疗组大鼠出现拱背耸毛、大便稀溏等肾阳虚的症状.从第8天开始,治疗组每天喂饲温补肾阳药1次,给药剂量6.7 g·kg~(-1),其他2组喂饲等体积的生理盐水,连续6 d后,断头处死3组大鼠,分离提取其肝线粒体蛋白质,分别用荧光染料Cy3,Cy5标记,每个Cy3及Cy5标记的样品与等量Cy2标记的内标混合后在同一块凝胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder 6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:双向电泳后,平均每块胶检测到997个蛋白质点,其中所有图谱共有的点有687个,并从中筛选到22个差异蛋白,其中热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、氨甲酰磷酸合成酶I,ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白和类钙离子激活中性蛋白酶12在肾阳虚状态下表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和GTP结合调节蛋白在肾阳虚状态下表达量均降低.经温补肾阳药治疗后,热休克蛋白60、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶、乳铁传递蛋白、ATP酶质子通道蛋白、电子传递黄素蛋白二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶和GTP结合调节蛋白表达量均增加,而氨甲酰磷酸合成酶I和类钙离子激活中性蛋白酶12表达量减少.结论:温补肾阳药可能通过调节物质代谢、保护线粒体膜稳定性和维护细胞内信号传导而起到治疗肾阳虚的作用.     

温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究温补肾阳药对肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响。方法：通过切除两侧肾上腺造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记，与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。利用DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出18个差异蛋白质进行质谱鉴定，其中15个蛋白质得到鉴定。结果：经温补肾阳药治疗后，肾阳虚动物氨甲酰磷酸合成酶、过氧化氢酶、二氢硫辛酸脱氢酶、热休克蛋白60、亚硫酸氧化酶、ATP合成酶、醛脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、3-巯基丙酮酸转硫酶、腺苷酸激酶同工酶5、谷胱甘肽过氧化物酶表达均增高。结论：温补肾阳药可能通过加快糖、脂类、蛋白质和核酸分解代谢，加快ATP合成以及清除自由基和过氧化物，维持线粒体膜稳定性，从而起到治疗肾阳虚的作用。     

肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的研究

肾在中医脏腑学说中占有重要地位,其功能广泛、作用特殊,有主宰生命之概念,故历代医学家称"肾为先天之本"、"生命之根".肾阳虚证是指由于肾阳虚衰、温煦失职、气化失权所表现的一类虚寒证候.     

甲状腺切除的肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的研究

目的:应用差异蛋白质组学技术研究肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组.方法:正常大鼠和甲状腺切除的肾阳虚模型大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy3、Cy5标记,与等量Cv2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCvder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:在肾阳虚大鼠肝线粒体中,氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ、乳铁传递蛋白、热休克蛋白60、过氧化氢酶、甲基丙二酸半醛脱氢酶、类钙激活中性蛋白酶、电子传递黄素蛋白、酯酶同工酶ESl、谷胱甘肽过氧化物、ATP合成酶和ATP酶质子通道蛋白表达量均增加,而二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、鸟氨酸转氨酶和鸟苷酸结合调节蛋白表达量降低.结论:肾阳虚大鼠可能因糖类和脂类物质分解代谢受抑以及细胞内信号转导异常而出现虚寒症状.     

肾阳虚患者血清甲状腺激素水平变化及温补肾阳的疗效观察

甲状腺激素的正常分泌对人体的生长发育有着重要的作用 ,而甲状腺功能的降低 ,在肾阳虚病机学中占有重要的位置。有报道[1] ,肾阳虚患者血清Ｔ3和Ｔ4 水平明显低于健康人 ,用助阳药治疗后则能恢复。为了进一步研究肾阳虚患者与甲状腺激素之间的关系 ,以及肉蓉补阳汤 (自拟 )对肾阳虚患者甲状腺激素水平的影响 ,我们观察了 31例肾阳虚患者治疗前后甲状腺激素的变化 ,现报道如下。1　资料与方法1.1　一般资料　治疗组 31例肾阳虚患者均为我院病人 ,符合 1986年全国中西医结合会议拟定的中医虚证参考标准[2 ] 中肾阳虚的诊断标准 ,其中男性12例…     

温补肾阳方药治疗肾阳虚证作用机制分子生物学研究进展

肾阳虚证为临床常见的中医证候。温补肾阳方药因具其有补肾助阳、益精填髓、生精化气等功效,在治疗肾阳虚证的各类疾病中发挥了不同的治疗效果。现代分子生物学以基因、递质、激素、细胞、信号分子为切入点,研究温补肾阳方药对肾阳虚证在分子生物学层面发挥的作用,为临床疾病治疗提供了新的研究方向,不仅在一定意义上推动了中医药的现代化发展,也为更好地运用现代分子生物学技术研究中医、中药提供较好的思路与方法。     

温补肾阳药对大鼠LDH同工酶活性的影响

为了研究温补肾阳基本方中附子、肉桂、肉苁蓉及巴戟的作用及相互关系,我们选择了大鼠"肾阳虚模型"血清LDH同工酶活力作为观察指标,进行动物实验研究,报告于下。材料和方法一、药物:(1)醋酸氢化考的松注射液,南京第三制药厂出品,批号:871025。(2)温里药附子、肉桂与补阳药肉苁蓉、巴戟均由本院门诊部药房提供。将这些药物组成三组,即附桂组(A)、苁戟组(B)及附桂加苁戟组(C),药物各以1∶1的比例,按传统方法水煎浓缩至100%(100g生药/100ml),纱布过滤备用。二、动物:SD大鼠,雌性,体重170～220g,由     

张仲景温补肾阳合用助阳法治疗肾阳虚证探讨

仲景治疗肾阳虚证代表方为金匮肾气丸,还有回阳救逆的四逆汤、温阳利水的真武汤、温肾阳散寒除湿的附子汤、温肾阳化痰饮的苓桂术甘汤等。其温肾阳每每选用附子、桂枝、干姜等辛温之品,然常合用阴中求阳、利水通阳、健脾生阳、心肾相济、风药升阳等助阳法,有效地增强了温补肾阳的效果。     

温热中药对寒症模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的 应用双向电泳和质谱技术研究温热中药对寒证模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响,阐述寒证与能量代谢的关系及温热中药的作用。方法 提取正常大鼠、寒证模型大鼠和温热中药治疗后大鼠的肝线粒体蛋白质,经双向电泳分离后获得蛋白质组图谱,用Image Master 2D 6.0软件进行差异蛋白质分析,筛选出差异蛋白,进行质谱鉴定,用Western blotting法验证差异蛋白的表达。结果 寒证大鼠肝线粒体中H⁺转运ATP合酶、电压依从性阴离子选择性通道蛋白1（VDAC）表达量增加,伴侣素groEL、丝氨酸蛋白酶抑制剂、Tu转运延伸因子、乙醛脱氢酶、二甲基甘氨酸脱氢酶、脂酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、酰基辅酶A脱氢酶、丝氨酸蛋白酶、电子传递黄素蛋白、腺苷酸激酶、DJ-1蛋白、羧酸酯水解酶、氨甲酰磷酸合成酶1表达量降低;应用温热中药治疗后F1-ATP合酶、H⁺转运ATP合酶表达量降低,丙酰辅酶A羧化酶、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、Tu转运延伸因子、乙酰辅酶A酰基转移酶、脂酰辅酶A脱氢酶、丝氨酸蛋白酶、丙酮酸脱氢酶、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40 S核糖体蛋白、热休克蛋白1、烯酰辅酶A水解酶表达量增加。结论 寒证模型大鼠线粒体内脂肪酸的β-氧化受阻,蛋白质的合成、折叠及分泌障碍,类固醇激素减少影响糖代谢,导致能量不足。应用温热中药治疗后,糖、脂代谢增强、蛋白质合成增加导致能量代谢活跃。     

益肾疏肝法治疗抑郁症肾虚肝郁型的随机对照临床研究

目的：探讨中药培元解忧方和西药氟西汀对抑郁症肾虚肝郁型患者的疗效，并对肾虚肝郁型的症状评定标准进行进一步验证。方法：在轻、中度抑郁症患者中，选取抑郁症肾虚肝郁型的患者，采取随机、对照、盲法的原则，对73例抑郁症患者进行中药培元解忧方和西药氟西汀的对照研究。使用证候研究中制订的《抑郁症肾虚肝郁证型症状评定表》和HAMD抑郁量表进行评定。结果：采用培元解忧方治疗轻、中度肾虚肝郁型抑郁症基本与氟西汀等效，6周观察结束时，二者HAMD总分无统计学差异（P〉0．05）。但培元解忧方起效较氟西汀快，在2周时培元解忧方组的HAMD总分和因子分已明显下降（P〈0．01），并且在胁肋胀痛，腰酸背痛等躯体症状和睡眠障碍的改善方面优于氟西汀。结论：培元解忧方治疗轻、中度肾虚肝郁型抑郁症基本与氟西汀等效。但是起效较氟西汀快，在躯体症状和睡眠障碍等改善方面优于氟西汀。     

运用蛋白质组学方法研究肾阳虚异病同证的思路与方法

探讨运用蛋白质组学技术研究肾阳虚异病同证的思路与方法。分析蛋白质组学与证候的内在联系,采用双向电泳(2-DE) 质谱(MS) 数据库的蛋白质组解决方案及药理学实验方法,探求肾阳虚证的蛋白质学本质。     

四物汤对血虚证模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的探讨四物汤治疗血虚证的机理。方法Wistar大鼠随机分为模型组、治疗组、正常组各6只。模型组和治疗组大鼠在第1、4、7d皮下注射2%乙酰苯肼生理盐水注射液,第4d起模型组生理盐水灌胃,治疗组给予四物汤灌胃,正常组给予生理盐水,连用7d后,检测外周血象、肝脾湿重;提取肝脏线粒体蛋白质,用双向电泳等蛋白质组学技术测定大鼠肝线粒体中有影响的蛋白质。结果模型组大鼠出现萎靡、苍白等血虚症状,肝脾明显肿大,红细胞数和血红蛋白量明显降低,白细胞、网织红细胞计数明显升高(P0.01);四物汤治疗后外观较快恢复,红细胞、血红蛋白、网织红细胞数较上升(P0.01);模型大鼠肝线粒体蛋白质与正常相比有14个能量代谢相关蛋白质的水平发生改变,四物汤可使这些改变的蛋白质水平有所恢复。结论四物汤可以调节肝线粒体内一些酶和伴侣分子,清除自由基和过氧化物,稳定线粒体结构,保护线粒体功能;改善糖、脂类、蛋白质代谢,从蛋白质分子水平改善血虚动物的虚损状况。     

补冲丸对肾阳虚型黄体功能不全患者子宫内膜雌孕激素受体影响

【目的】探讨中药治疗肾阳虚型黄体功能不全的作用机制。【方法】采用SP免疫组化检测技术、电化学发光法对30例患者治疗前后子宫内膜雌孕激素受体、血清性激素进行定量检测。【结果】治疗前30例中有16例患者血清孕酮在正常值（10ng／mL）水平以上，但子宫内膜分泌不良，同时伴有雌二醇（E2）、孕激素受体（PR）下降，治疗后E2水平上升，PR增加，经统计学处理差异显著（P〈0．05），并且有6例妊娠。另14例患者孕激素（P）水平低于正常值，子宫内膜雌激素受体（ER）、PR与对照组无显著差异，但E2水平低于对照组（P〈0．05），治疗后，E2水平及孕酮P水平显著上升（P〈0．05），5例妊娠。【结论】补冲丸具有弱雌激素样作用，通过调节下丘脑—垂体功能，进而改善卵巢分泌E2、P的作用，并能提高患者子宫内膜PR含量，从而改善子宫内膜分泌状况，使患者妊娠。     

毓宫胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2-IFN-NKC免疫调节网影响的研究

[目的]观察毓宫胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2(白介素-2)-IFN(干扰素)-NKC(自然杀伤细胞)免疫调节网的影响,探讨其治疗子宫发育不良的机制。[方法]通过对幼龄SD雌鼠40只随机分为4组:正常对照组(A组)、模型组(B组)、右归丸组(C组)、毓宫胶囊组(D组),肌注地塞米松复合双侧卵巢切除建立肾阳虚型子宫发育不良模型,对模型动物用毓宫胶囊治疗,右归丸做对照,治疗18d后处死,取胸腺、脾脏、子宫称质量,并测定脾组织IL2、IFN、NKC活性。[结果]肾阳虚子宫发育不良大鼠胸腺、脾脏、子宫质量以及IL2、IFN、NKC活性均较正常组明显下降(P<0.01),毓宫胶囊能提高胸腺、脾脏、子宫质量及IL2、IFN、NKC活性(P<0.01)。[结论]肾阳虚型子宫发育不良大鼠的非特异性免疫力下降;毓宫胶囊在促进肾阳虚型子宫发育不良大鼠子宫发育的同时,提高IL2、IFN、NKC活性,正向调节其免疫功能。即毓宫胶囊有调节神经内分泌免疫网的作用。     

毓宫胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2-IFN-NKC免疫调节网影响的研究

【目的】观察毓官胶囊对肾阳虚型子宫发育不良大鼠IL2（自介素-2）-IFN（干扰素）-NKC（自然杀伤细胞）免疫调节网的影响，探讨其治疗子宫发育不良的机制。【方法】通过对幼龄SD雌鼠40只随机分为4组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、右归丸组（C组）、毓宫胶囊组（D组），肌注地塞米松复合双侧卵巢切除建立肾阳虚型子宫发育不良模型，对模型动物用毓宫胶囊治疗，右归丸做对照，治疗18d后处死，取胸腺、脾脏、子宫称质量，并测定脾组织IL2、IFN、NKC活性。【结果】肾阳虚子宫发育不良大鼠胸腺、脾脏、子宫质量以及IL2、IFN、NKC活性均较正常组明显下降（P〈0．01），毓宫胶囊能提高胸腺、脾脏、子宫质量及IL2、IFN、NKC活性（P〈0．01）。【结论】肾阳虚型子宫发育不良大鼠的非特异性免疫力下降；毓宫胶囊在促进肾阳虚型子宫发育不良大鼠子宫发育的同时，提高IL2、IFN、NKC活性，正向调节其免疫功能。即毓宫胶囊有调节神经内分泌免疫网的作用。