葛根素干预肺动脉高压大鼠时钙网蛋白前体变化的研究

目的：观察正常组与野百合碱致肺动脉高压组及葛根素干预组大鼠肺组织差异蛋白质组学的变化,在蛋白质组学水平探讨葛根素抑制肺动脉高压、肺血管重建的机制。方法：制备各组模型大鼠后分别测定平均肺动脉压力（mPAP）、平均颈动脉压力（mCAP）、右心室重量比[Rv／（LV＋S）]％,制作光镜标本、测量肺血管重建指标（PAMT））及统计学分析,明确模型制备成功。对各组肺组织提出的总蛋白质进行双向电泳、串联质谱鉴定有差异的蛋白质并用NCBInr数据库进行检索。对鉴定的蛋白质进行分析。结果：野百合碱组与正常组比较,mPAP、[RV／（LV＋S）]％、PAMT显著增高（P〈0．05）,提示肺动脉高压模型制备成功。葛根素干预组与野百合碱组比较,mPAP、IRV／（LV＋S）]％、PAMT显著下降（P〈0．05）,表明葛根素可抑制野百合碱引起的肺动脉高压、肺血管重建与右心室肥大。通过双向凝胶电泳、串联质谱鉴定及数据库检索发现钙网蛋白前体在正常组表达几乎为0,在野百合碱组大量表达,而在葛根素干预组迅速下调至0水平。结论：钙网蛋白前体可能与葛根素抑制肺动脉高压形成相关,值得深入研究。     

狼疮肾炎小鼠肾脏的比较蛋白质组学研究

目的探讨狼疮肾炎(LN)小鼠肾脏和正常小鼠肾脏蛋白质组的差异。方法应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分离肾组织总蛋白质,凝胶用银染显色,扫描仪获取凝胶图像并对其进行软件分析。结果同组实验重复3次,其中正常对照组3张图找到蛋白质点平均573±52个,匹配率为83%;LN组找到蛋白质点平均658±43个,匹配率为87%。经软件分析,LN组和对照组比较表达增加大于2倍的点有119个;降低大于0.5倍的点有140个。结论LN小鼠肾脏蛋白质表达发生了显著变化,这可能和LN的发生发展有着密切关系。     

TRPV1激活对内毒素血症小鼠肺组织炎症损伤的影响及机制

 目的：探讨用辣椒素（CAP）激活瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对内毒素血症所致肺损伤在炎症反应产生的影响及相关机制。方法：SPF级ICR小鼠108只随机分为6组：正常对照组、CAP对照组、抗辣椒碱（CAPZ）对照组、内毒素血症组、CAP干预组和CAPZ干预组。脂多糖（LPS）经腹腔注射,CAP及CAPZ均在LPS注射前30 min经皮下注射。分别在LPS注射后3 h、8 h和16 h取肺组织,ELISA法检测肺组织TNF-α、IL-6、IL-10、P物质（SP）和降血钙素基因相关肽（CGRP）,Western blotting法检测肺组织Toll样受体4（TLR4）和核内NF-κB的表达水平,光镜下观察肺组织病理学改变。结果：内毒素血症组小鼠3 h、8 h和16 h肺组织TNF-α、IL-6和IL-10水平较正常对照组均显著升高（P<0.05）;CAP干预组各时点肺组织TNF-α和IL-6水平较内毒素血症组显著降低（P<0.05）,而IL-10均明显升高（P<0.05）;CAPZ干预组3 h、8 h和16 h 肺组织TNF-α和IL-6较内毒素血症组显著升高（P<0.05）,而IL-10水平均显著降低(P<0.05)。内毒素血症组和CAP对照组各时间点SP和CGRP较正常对照组均显著升高（P<0.05）,CAP对照组SP和CGRP水平明显低于内毒素血症组（P<0.05）;与同时点内毒素血症组相比,CAP干预组SP和CGRP显著升高（P<0.05）,而CAPZ干预组显著降低（P<0.05）。内毒素血症组小鼠肺组织TLR4和核内NF-κB表达较正常对照组显著升高（P<0.05）;与内毒素血症组相比,CAP干预组和CAPZ干预组小鼠肺组织TLR4表达均无显著差异（P>0.05）,而CAP干预组核内NF-κB表达显著降低（P<0.05）,CAPZ干预组核内NF-κB表达显著升高（P<0.05）。光镜下,CAP对照组和CAPZ对照组较正常对照组病理学变化不明显,内毒素血症组肺组织在8 h和16 h损害明显,CAP干预组较内毒素血症组损害减轻,CAPZ干预组较内毒素血症组肺组织损害加重。结论：TRPV1激活后能显著降低内毒素血症小鼠肺组织TNF-α、IL-6和核内NF-κB水平,升高IL-10水平,提高肺组织SP和CGRP表达,减轻肺组织炎症损伤程度,但不改变肺组织TLR4水平。     

温补肾阳药对丙基硫氧嘧啶引起肾阳虚大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

目的：应用凝胶内差异显示电泳技术研究温补肾阳药对药物性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组的影响。方法：正常大鼠、通过喂饲丙基硫氧嘧啶造成肾阳虚模型大鼠和温补肾阳药治疗大鼠的肝线粒体蛋白质经荧光染料Cy2、Cy3、Cy5标记，等量混合后在同一胶中进行电泳分离，经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。经DeCyder软件进行差异蛋白质组分析，筛选出16个差异蛋白质。经质谱测定及数据库比对，其中10个蛋白质得到鉴定。结果：肾阳虚时氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺支链酰基转移酶、泛醇-细胞色素C还原酶核心蛋白I、异戊酰辅酶A脱氢酶、热休克蛋白60、琥珀酰CoA合成酶、羟氨基辅酶A脱氢酶／酮脂酰辅酶乙酰辅酶A脱氢酶α亚基、鸟氨酸转氨甲酰酶、谷胱甘肽过氧化物酶表达量均增加，而鸟氨酸氨基转移酶表达量降低。应用温补肾阳药治疗后，上述蛋白质的表达量均有不同程度的纠正。结论：喂饲温补肾阳药的肾阳虚模型大鼠糖、脂类和蛋白质代谢均得以改善，可能与温补肾阳药维护线粒体膜稳定性有关。     

红树植物秋茄ISSR条件的优化

目的:探讨红树植物秋茄简单序列重复区间扩增多态性分子标记(ISSR-PCR)分析的最优条件,以获得清晰、重复性好的简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)扩增结果。方法:对ISSR-PCR多个条件中的单个条件包括DNA的提取、模板浓度、Taq酶的选择与用量、Mg2+和三磷酸脱氧核糖核苷酸(dNTP)浓度等进行了比较、优化。结果:从单条件中得出每个条件的最优条件,从而获得清晰、重复性高的电泳图谱。结论:秋茄ISSR-PCR分析最适宜的扩增条件为:25μL PCR反应体积中,0.75～1.0 U Taq DNA聚合酶,0.8μmol/L引物,0.2 mmol/L dNTP,2.0～2.5 mmol/L MgCl2,40 ng/μL模板DNA。     

肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液差异蛋白质组学分析

目的：建立肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者蛋白质表达的差异和特点。方法：选取肺腺癌伴胸腔积液标本12例,肺鳞癌伴胸腔积液标本8例,以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直板SDS-PAGE为第二向分离胸水蛋白质,银染显色,扫描仪获取凝胶图像并对其进行分析。结果：同组实验重复3次,其中肺腺癌胸腔积液蛋白质点平均（376±17）个,同组匹配率为88.3%;肺鳞癌胸腔积液蛋白质点平均（383±21）个,同组匹配率为86%。经软件分析,肺腺癌胸腔积液中表达增高2倍的差异蛋白点29个,降低50%的蛋白质点50个。有3个点仅在肺腺癌胸腔积液表达,5个点仅在肺鳞癌胸腔积液中表达。结论：肺腺癌与肺鳞癌胸腔积液差异蛋白可能是不同病理类型的肺癌细胞分泌的特殊蛋白或特异性蛋白标志物。     

蛋白质组学和中医药研究

主要介绍了蛋白质组学研究的主要技术及其发展,以及蛋白质组学在中医药领域的应用和前景.     

肾上腺切除的肾阳虚大鼠肝组织蛋白质双向电泳图谱的建立与分析

目的:建立具有高分辨率和稳定性的大鼠肝组织蛋白质组研究的双向电泳图谱,并对其进行差异蛋白质组分析.方法:正常大鼠和肾上腺切除造成的肾阳虚模型大鼠,肝组织匀浆后提取总蛋白,用Cy3或Cy5标记,每一个Cy3标记样品和一个Cy5标记样品与一个Cy2标记的内标等量混合,上样于同一胶中进行电泳分离,经不同波长单色光激发下扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.所获得的图谱用DeCyder软件进行分析.结果:在肾阳虚大鼠肝组织,有8个蛋白质表达水平显著增加,9个蛋白质表达水平显著下降.结论:分析所得的17个差异蛋白质可能与肾阳虚疾病有关.     

肺癌性与结核性胸腔积液蛋白质组的差异

目的：建立肺癌性胸腔积液与结核性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者蛋白质表达的差异和特点。方法：以固相pH梯度等电聚焦为第一向,垂直板SDS-PAGE为第二向分离胸水蛋白质,银染显色,扫描仪获取凝胶图像并对其进行软件分析。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白质。结果：双向电泳结果显示,肺癌性胸腔积液中表达增高2倍的差异蛋白点52个,降低50%的蛋白质点60个。有9个点仅在结核性胸腔积液表达,11个点仅在肺癌胸腔积液中表达,并通过肽指纹图分析成功鉴定了6个蛋白质。结论：肺癌性胸腔积液组与结核性胸腔积液组的双向电泳结果显示蛋白表达图谱有明显差异,这些差异蛋白可能是肺癌相关蛋白或肺癌特异性蛋白标志物。     

大肠杆菌不同SOD调控序列红色荧光蛋白报告基因载体的构建及功能鉴定

目的 通过将大肠杆菌BL21中MnSOD、FeSOD以及Cu/ZnSOD调控序列(包括启动子,-3518～+15 bp)与红色荧光蛋白(RFP)连接,构建成含SOD调控序列的红色荧光蛋白报告基因,用以研究不同SOD启动子对RFP的调控作用.方法 采用重组PCR技术,分别构建以MnSOD、FeSOD、Cu/ZnSOD启动子驱动的RFP报告基因载体,并将构建的融合基因通过T克隆转化入大肠杆菌,通过不同浓度Cd2+作用,分别诱导RFP表达.结果 正确构建了三种SOD -RFP融合基因,重组PCR结果与测序结果完全一致;该报告基因在室温静息状态下,红色荧光有微弱表达,经Cd2+诱导后,红色荧光亮度明显增强,其中MnSOD调控序列驱动的RFP表达最为明显.结论 该报告基因载体的成功构建,为研究SOD的基因表达调控机制和研制检测环境中污染物的微生物传感器提供了重要基础和工具.