体外分离与培养SD乳鼠神经干细胞实验过程中部分方法的改进

目的：探讨体外培养与分离SD乳鼠神经干细胞的方法，以便获得大量的神经干细胞，方法：实验于2003-06／10在四川大学华西医学中心细胞生物学教研室完成分别取出生3d的SD乳鼠侧脑室和大脑皮质，用改进后的胰蛋白酶消化法分离单个细胞，进行细胞培养，加20μg／L表皮生长因子，20μg／L碱性成纤维细胞生长因子刺激生长，用半定量法换培养液，用免疫细胞化学方法对神经干细胞进行鉴定，流式细胞仪分别对每天培养的神经干细胞凋亡率进行检测。结果：①所获得的克隆细胞具有抗巢蛋白免疫荧光反应阳性、具有增殖、血清诱导分化的特性，证明这些细胞为神经干细胞。②培养的侧脑室神经干细胞比大脑皮质的神经干细胞增殖快。③改进的胰蛋白酶消化法得到了1&;#215;10^8L^-1单细胞，避免了过度消化或过度机械吹打造成的细胞碎片。④含20μg／L表皮生长因子和20μg／L碱性成纤维细胞生长因子培养基适合神经干细胞短期培养。⑤流式细胞仪定量检测细胞凋亡率呈下降趋势。结论：SD乳鼠体外培养神经干细胞取材最佳位置应该是脑室管膜或室管膜下。神经干细胞的存活和分裂有赖于表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子按一定比例的共同作用。采用改进的胰酶消化法提高有效细胞产生率，应用半定量换液法可有效减少细胞凋亡率。     

C6细胞中诱导体外培养大鼠神经干细胞迁移蛋白的初步分析

目的：许多体内实验表明神经干细胞具有向胶质瘤细胞迁移的特性，该特性使神经干细胞有可能成为基因治疗脑胶质瘤潜在的基因携带者。实验拟观察大鼠星形胶质瘤C6细胞诱导体外培养的大鼠神经于细胞的迁移作用，并初步分离C6细胞中诱导神经干细胞迁移的蛋白： 方法：实验于2005—01/2006—05在南通大学江苏省神经再生重点实验室完成。实验材料：C6细胞用含10％小牛血清的DMEM/F12培养基进行培养，使用时细胞处于对数生长期：清洁级的新生1周内的SD大鼠由南通大学实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。实验方法：从新生5～7dSD大鼠大脑皮质分离培养、纯化神经干细胞。从SD新生红皮鼠大脑皮质分离、培养、纯化星形胶质细胞。采用“Transwell Inserts”细胞培养室培养系统共培养36h，比较C6细胞和大鼠星形胶质细胞对体外培养的大鼠神经干细胞的迁移作用；自然系统聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳分离C6细胞和星形胶质细胞差异蛋白，观察各蛋白凝胶条带对神经干细胞的迁移作用。 结果：体外培养C6细胞能诱导神经干细胞迁移，迁移细胞数目与星形胶质细胞相比，差异有显著意义（P〈0．001）。将C6细胞中差异蛋白条带与神经干细胞共培养，与对应的星形胶质细胞蛋白条带相比，可观察到与相对分子质量约67000蛋白胶条共培养的神经细胞球在接近蛋白胶条的一侧细胞向胶条迁移生长。 结论：C6细胞可以诱导体外培养的神经干细胞迁移，其总蛋白在自然系统聚丙烯酰胺凝胶电泳分离实验中获得的相对分子质量为67000的蛋白组分具有诱导神经干细胞迁移的活性。     

二例重型再生障碍性贫血患者血清体外加速正常人CD34+细胞凋亡的研究

目的：了解再生障碍性贫血患者血清中的造血抑制物及其与造血细胞过度凋亡之间的关系。方法：应用甲基纤维素体外培养法，亲和层析法，ＤＮＡ末端标记及流式细胞术分析观察２例重型再生障碍性贫血Ⅰ型（ＳＡＡⅠ）患者血清在体外抑制正常人骨髓造血祖细胞增殖及促进正常人ＣＤ３４＋细胞凋亡的作用。结果：２例患者血清在体外均可明显抑制正常人ＢＦＵＥ及ＣＦＵＧＭ的增殖，这种抑制活性存在于血清ＩｇＧ片段中，为非补体依赖性。患者血清及ＩｇＧ片段在体外均可加速正常人ＣＤ３４＋细胞凋亡，其中ＩｇＧ较血清的促凋亡作用更为显著（Ｐ均＜０．０１）。经研究证实这种ＩｇＧ可特异性吸附于ＣＤ３４＋细胞表面。经甲泼尼龙治疗后的恢复期血清上述作用消失。结论：某些ＳＡＡⅠ患者血清中存在促进ＣＤ３４＋细胞过度凋亡的造血抑制物ＩｇＧ，造血细胞过度凋亡是患者发病机制之一。甲泼尼龙对这类患者疗效显著     

胶质细胞源性神经营养因子对猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响

背景：鉴于骨髓间充质干细胞体外分化为神经样细胞的最终研究目的,是将诱导后的细胞移植入体内参与损伤神经系统的修复过程,因此,保证移植细胞的活性显得十分重要。目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子对隐丹参酮体外诱导猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的保护作用。方法：以隐丹参酮为诱导剂诱导第8代猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞,应用流式细胞仪检测不同时段诱导细胞的凋亡百分比（每间隔0.5h为1组,共12组）。选择细胞凋亡百分比较高的一个时段,观察添加不同质量浓度胶质细胞源性神经营养因子（0-100μg/L,共11组）对诱导细胞凋亡的影响。结果与结论：诱导后细胞凋亡百分比逐渐升高,约4h时达到峰值,维持约1h后下降（P〈0.05）。随着胶质细胞源性神经营养因子质量浓度由0μg/L提高到30μg/L,细胞凋亡百分比逐渐下降（P〈0.05）,当胶质细胞源性神经营养因子质量浓度超过30μg/L后,细胞凋亡水平受胶质细胞源性神经营养因子质量浓度影响不再显著。结果可见胶质细胞源性神经营养因子在隐丹参酮体外诱导猴骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞过程中具有保护作用。     

小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性和相关基因的表达

目的：观察小鼠胚胎神经干细胞的体外生长特性并检测其相关基因的表达。方法：实验于2005—02／06在暨南大学医学院中心实验室进行。①取妊娠13．5d昆明小鼠分离胚胎大脑中的神经干细胞，用添加碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基进行体外培养，取培养3d的神经球接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶，用含血清的培养基诱导分化。②免疫细胞化学检测细胞表面抗原。（爹四甲基偶氮唑盐法绘制生长曲线。④流式细胞术检测细胞周期。⑤反转录-聚合酶链反应和免疫细胞化学技术对神经干细胞进行鉴定。结果：①胚胎神经干细胞及其分化细胞的抗原表达：血清诱导8h，分化细胞中（8．9&;#177;5．6）％细胞呈Tubulin阳性，（87．5&;#177;7．4）％细胞胞浆呈胶质纤维酸性蛋白阳性表达。未诱导细胞近100％呈巢蛋白阳性，仅有极少数细胞Tubulin阳性或胶质纤维酸性蛋白阳性。②胚胎神经干细胞的细胞周期：从小鼠胚胎大脑获取的神经干细胞3d左右进入指数生长期；原代培养细胞83．8％处于静止期／DNA合成前期。③原代与传代细胞均表达巢蛋白mRNA，聚集形成的神经球巢蛋白阳性。血清诱导4h胚胎神经干细胞开始转录神经元相关基因Tau和胶质细胞相关基因胶质纤维酸性蛋白。结论：从小鼠胚胎大脑可成功分离获得大量胚胎神经干细胞．并在含碱性成纤维细胞生长因子的条件培养基中迅速增殖，血清诱导下分化生成神经元和星型胶质细胞。     

体外分离与培养SD乳鼠神经干细胞实验过程中部分方法的改进

目的:探讨体外培养与分离SD乳鼠神经干细胞的方法,以便获得大量的神经干细胞.方法:实验于2003-06/10在四川大学华西医学中心细胞生物学教研室完成.分别取出生3 d的SD乳鼠侧脑室和大脑皮质,用改进后的胰蛋白酶消化法分离单个细胞,进行细胞培养,加20μg/L表皮生长因子,20μg/L碱性成纤维细胞生长因子刺激生长,用半定量法换培养液,用免疫细胞化学方法对神经干细胞进行鉴定,流式细胞仪分别对每天培养的神经干细胞凋亡率进行检测.结果:①所获得的克隆细胞具有抗巢蛋白免疫荧光反应阳性、具有增殖、血清诱导分化的特性,证明这些细胞为神经干细胞.②培养的侧脑室神经干细胞比大脑皮质的神经干细胞增殖快.③改进的胰蛋白酶消化法得到了1×108 L-1单细胞,避免了过度消化或过度机械吹打造成的细胞碎片.④含20μg/L表皮生长因子和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子培养基适合神经干细胞短期培养.⑤流式细胞仪定量检测细胞凋亡率呈下降趋势.结论:SD乳鼠体外培养神经干细胞取材最佳位置应该是脑室管膜或室管膜下.神经干细胞的存活和分裂有赖于表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子按一定比例的共同作用.采用改进的胰酶消化法提高有效细胞产生率,应用半定量换液法可有效减少细胞凋亡率.     

GFP转基因胚胎大鼠神经干细胞生物学特性研究

目的 体外分离、培养、鉴定绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）转基因胚胎大鼠神经干细胞，研究其体外活性与生物学性状，为在体分化示踪研究奠定基础。方法 采用机械分离，无血清传代培养法从GFP胚胎大鼠海马获得神经干细胞，免疫荧光和免疫细胞化学法染色进行体外神经干细胞性质和分化活性鉴定，并利用流式细胞计数法行纯度检测。结果 成功从GFP胎鼠海马获得神经干细胞，体外生长情况与活性良好，能分化成神经元和胶质细胞；体外连续传代3次后绝大部分细胞Nestin表达阳性，且分化后细胞的GFP表达不受影响。结论 GFP胚胎大鼠来源神经干细胞具有普通胎鼠NSCs相同的自我更新和多向分化潜能，且能稳定表达GFP，因此它可以成为示踪神经干细胞研究的有效工具细胞。     

人脑损伤后皮质细胞间黏附分子1表达及甲泼尼龙的影响

目的：观察细胞间黏附分子1在人创伤性脑损伤后挫伤区皮质中的表达情况，包括表达位置、表达强度和表达时相，同时观察甲泼尼龙对其表达的影响。 方法：2004-01／2005-06南京军区南京总医院神经外科收治的48例创伤性脑损伤患者，按伤后时间分为8组，〈24h创伤性脑损伤组、2448h创伤性脑损伤组、48-72h创伤性脑损伤组、〉72h创伤性脑损伤组以及相同时间段创伤性脑损伤＋甲泼尼龙组。选择南京军区南京总医院收治的6例脑外肿瘤患者为阴性对照组。取样时间从伤后5h到5d，所有病例均行常规开颅血肿清除术，术中用咬骨钳夹取约0．5cm^3挫伤区边缘的脑组织，各时间段创伤性脑损伤＋甲泼尼龙组患者于术前2小时给予甲泼尼龙30mg／kg，快速静脉滴注。利用免疫组化技术测定细胞间黏附分子1的表达，在200倍显微镜下随机选择10个高倍视野，计数阳性血管数。同一时间段各组间使用独立样本的t检验，不同时间段各组间比较采用单因素方差分析及Student Newman Keuls检验。 结果：入选的48例脑损伤患者都进入结果分析。免疫组化测定结果显示，在人创伤性脑损伤后的挫伤区皮质中，细胞间黏附分子1主要在血管内皮细胞中表达，在神经胶质细胞和神经元细胞中未见表达。与阴性对照组比较，各时间段创伤性脑损伤组、创伤性脑损伤＋甲泼尼龙组，细胞间黏附分子1表达极显著上调（P〈0．01），同一时间段中创伤性脑损伤与创伤性脑损伤＋甲泼尼龙组比较，甲泼尼龙治疗组的患者细胞间黏附分子1显著下调（P〈0．05），伤后48-72小时组与其它组比较，细胞间黏附分子1表达升高差异有显著性（P〈0．05）。 结论：细胞间黏附分子1在人创伤性脑损伤后的挫伤区皮质中表达上调，提示其可能在创伤性脑损伤后的病理生理过程中起着重要作用，甲泼尼龙抑制了细胞间黏附分子1的表达。     

辛伐他汀防治激素所致股骨头坏死的实验研究

目的：研究降脂药物对激素所致股骨头坏死的防治。方法：选用金黄地鼠42只随机分3组：各组均予以相同饮食喂养，a组，正常对照组；b组，肌注甲泼尼龙并口服辛伐他汀；C组，单给甲泼尼龙处理。实验周期21周，在给药前和给药后第4、8、11、15、17、21周检测血脂变化，取肝脏和股骨头标本进行HE染色，油红O染色，并进行细胞凋亡检测。结果：c组肝脏出现大面积胞浆疏松样变、脂肪变性，股骨头出现连片空骨陷窝；b组肝脏未见脂肪变性，股骨头未见连片空骨陷窝。C组骨细胞凋亡较b组多。结论：辛伐他汀具有一定防治激素所致股骨头坏死的作用。     

昆明种小鼠胚胎神经干细胞的分离及培养

目的：在神经干细胞的分离培养过程中，国内外的报道多数是用胰蛋白酶对组织细胞进行消化，但是消化时间比较难把握。采用胰酶消化与机械分离法相结合的方式对昆明种小鼠胚胎脑神经干细胞进行分离、培养和初步的免疫组织化学检测，为相关研究建立实验条件。 方法：实验于2006—10／2007-09在广西医科大学基础医学实验室完成。实验室为广西重点实验室、基础医学博士后工作站。①实验材料：孕14-16d的昆明种小鼠由广西医科大学实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：分离昆明种小鼠胎鼠的脑组织，经胰酶消化加机械吹打后，在加入碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的B27无血清培养基中培养。③实验评估：用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞。 结果：在无血清DMEM／F12培养液中，加入碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子及B27的条件下，培养24h后可见细胞以悬浮方式生长，三五聚集成团块，48h后形成由十数个至数十个细胞组成的，大小不等的细胞球，形态规则，细胞无突起，形成典型的神经球，可传代。免疫细胞化学法检测显示，细胞表达神经巢蛋白。 结论：①来自昆明种小鼠胎脑的神经干细胞能在体外培养、增殖并具有增殖传代能力。②无血清B27培养基添加表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子有利于神经干细胞的体外培养和促进其增殖。     

地黄低聚糖对过氧化氢-血清饥饿诱导的脂肪组织来源干细胞凋亡的影响

目的探讨地黄低聚糖(RGOs)对过氧化氢-血清饥饿诱导的脂肪组织来源干细胞(ASCs)凋亡的影响。方法过氧化氢(200μM)联合血清饥饿(H2O2/SD,6 h)建立小型猪ASCs凋亡模型。RGOs(0.01 g/L、0.1 g/L、1 g/L、10 g/L)预处理12h并继续干预6 h。Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率,CCK-8法测定细胞活性,酶标仪比色法测定细胞caspase-3的活性。结果 RGOs在一定浓度范围(0.1~10 g/L)可以减轻H2O2/SD引起的ASCs损伤,表现在细胞凋亡率下降,细胞活性增加,caspase-3活性降低。结论地黄低聚糖对过氧化氢-血清饥饿诱导的脂肪组织来源干细胞的凋亡具有保护作用。     

Acute methylprednisolone administration induces a transient alteration of glucose tolerance and pyruvate dehydrogenase in humans

BACKGROUND: Glucocorticoid administration induces alteration of glucose tolerance, and impairment of glucose oxidation may contribute to glucocorticoid-induced derangement of glucose metabolism. We investigated glucose tolerance following methylprednisolone administration in humans. In the same model, we evaluated pyruvate dehydrogenase (PDH), the rate limiting enzyme of glucose oxidation, in peripheral blood mononuclear cells. MATERIALS AND METHODS: Methylprednisolone (2 x 40 mg, iv, one dose every 12 h) was administered to six healthy volunteers. Glucose tolerance was evaluated through an oral glucose tolerance test (oGTT, 75 g glucose) at least a week before and after drug administration (2 and 24 h post-drug). To assess modifications of lipid metabolism circulating free fatty acids (FFA) and glycerol were measured, during fasting and oGTT. The active form of PDH (PDHa) was evaluated in peripheral blood mononuclear cells, both as ex vivo activity and as in vitro response to insulin (30 pmol l-1). RESULTS: Methylprednisolone induced an alteration of glucose tolerance 2 h after its administration. Such alteration was completely reversed at 24 h. Alteration of glucose tolerance was accompanied by decreased ex vivo PDHa activity. PDH responsiveness to insulin in vitro was also impaired. Circulating FFA were unmodified, but decreased glycerol levels suggested a slight inhibition of lipolysis. CONCLUSIONS: Acute methylprednisolone administration in humans induced a transient decrease of glucose tolerance 2 h after drug administration, accompanied by hyperinsulinaemia, inhibition of ex vivo PDH activity and its response to insulin in vitro. These alterations were completely abolished at 24 h, suggesting that methylprednisolone can be safely administered acutely. Furthermore, methylprednisolone induced only minor modifications of circulating FFA and glycerol, indicating minimal impact on lipid metabolism.     

骨髓间充质干细胞表达神经营养因子及对神经干细胞的保护作用

目的 研究大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）表达脑源性神经营养因子（BDNF）和神经生长因子（NGF）以及BMSC条件培养液对神经干细胞的保护作用。方法 取大鼠骨髓培养BMSC，用CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色进行鉴定。提取BMSCmRNA，RT-PCR检测BDNF和NGF表达，ELISA检测BMSC培养液中BDNF和NGF的含量。原代取材培养新生大鼠皮质神经干细胞，nestin染色鉴定。用不同比例的BMSC条件培养液培养神经干细胞24h后，热休克诱导凋亡，流式细胞仪检测凋亡细胞比率。结果 BMSC贴壁生长，免疫细胞化学染色CD44和CD71阳性表达．CD45阴性表达。BMSC表达BDNF和NGFmRNA，BMSC培养液中含有BDNF和NGF；随培养时间的延长，培养液中BDNF和NGF的浓度增加。BMSC条件培养液可以减少热休克诱导的神经干细胞凋亡比率．并且BMSC条件培养液浓度高者有更好的保护作用。结论 BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF，对神绎千细朐凋亡有保护作用．     

Persephin基因转染对缺氧诱导神经干细胞凋亡的影响

背景:如何抑制或减少神经干细胞凋亡的发生,促进缺氧后神经干细胞的存活,成为脑梗死神经干细胞移植治疗的研究热点。目地:观察在缺氧状态下转染人类persephin基因对神经干细胞凋亡的作用。设计:完全随机分组,对照实验。单位:中山大学附属第二医院神经内科。材料:实验于2006-07/2006-12在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成,重组腺病毒pAd persephin由本实验室构建保存,C17.2神经干细胞由美国哈佛大学医学院Snyder教授惠赠。胰蛋白酶、DMEM/F12购自Gibco公司;胎牛血清来自杭州四季青生物工程公司;多聚赖氨酸购自美国Sigma公司;TUNEL检测试剂盒,阳离子脂质体FuGENE购自瑞士Roche公司;S-P免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自福建迈新生物工程公司;鼠抗人Nestin单抗,Persephin兔抗人多抗购自美国Santa Crus公司,persephin反义寡核脱氧苷酸由上海生工合成。方法:①实验干预:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,分为4组,A组:正常对照组,C17.2神经干细胞不作缺氧处理。B组:缺氧处理组,即置于37℃、体积分数0.95N2,体积分数0.05CO2厌氧培养箱培养。C组:缺氧 pAdpersiphin转染组,即:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,pAdpersiphin转染48h后的细胞置同B组条件的厌氧培养箱培养。D组:缺氧 pAdpersiphin转染组 persiphin反义寡核脱氧苷酸,即pAdpersiphin persiphin反义寡核脱氧苷酸转染。②实验评估:Western-blotting法分析Persephin蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;流式细胞术测定细胞凋亡率的变化。主要观察指标:Persephin蛋白的表达、细胞凋亡指数和凋亡率。结果:①Persephin蛋白表达:C组细胞经Western blot检测可见一特异性蛋白条带存在,Mr约为24000,符合预期结果,说明persiphin成功表达,D组亦可见一Mr 24000的条带,但条带较单纯pAdpersiphin感染组明显为淡,说明反义persiphin反义寡核脱氧苷酸可成功抑制pAdCMVpersiphin的表达。②细胞凋亡指数:C组凋亡细胞明显减少,凋亡指数低于B、D组(P<0.01),但高于A组(P<0.01),表明细胞凋亡未完全避免。③细胞凋亡率:B、D组凋亡率明显高于A组(P<0.01),C组明显较B组、D组低(P<0.01)。结论:腺病毒介导的Persephin基因能高效表达Persephin;外源性Persephin对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性。     

促红细胞生成素体外培养鼠胚脑皮质神经干细胞的分化

背景:促红细胞生成素最早作为生长因子被认识,近些年来其对中枢神经系统保护作用的体内研究较多。目的:观察促红细胞生成素对体外培养大鼠胚脑皮质神经干细胞凋亡及分化的影响。方法:无菌条件下取孕14dSD大鼠胚脑皮质,体外先悬浮增殖培养后贴壁诱导分化。巢蛋白免疫细胞荧光染色检测神经干细胞,以微管相关蛋白2、神经胶质原纤维酸性蛋白检测神经干细胞分化。取第3代神经干细胞向培养基中添加0.5,5,50,500U/mL的促红细胞生成素,另设不添加促红细胞生成素的对照组。应用半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3检测神经干细胞凋亡,微管相关蛋白2检测神经干细胞向神经元方向的分化。结果与结论:加入≥5U/mL促红细胞生成素,神经球内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达显著下降(P<0.01),分化培养后微管相关蛋白2阳性细胞较对照组明显升高(P<0.01)。提示促红细胞生成素可降低体外培养鼠胚脑皮质神经干细胞的凋亡率,促进其神经干细胞向神经元方向分化。     

The effect of methylprednisolone on platinum kinetics and urinary enzyme excretion following intravenous cisplatin in vivo and on the growth inhibition of LLC-PK1 cells by cisplatin in vitro

In order to evaluate the mechanism of the protective action of methyl-prednisolone against cisplatin-induced nephrotoxicity, plastinum kinetics and urinary enzyme excretion following intravenous cisplatin, with or without methyl prednisolone, were studied in vivo. The growth inhibition of LLC-PK1 cells by cisplatin in the presence or absence of methylprednisolone was studied in vitro. Rats intravenously injected with cisplatin combined with subcutaneous methylprednisolone 4 h prior to the cisplatin injection excreted more platinum in urine than rats treated with cisplatin alone. Both plasma and kidney platinum concentrations in rats injected with both cisplatin and methylprednisolone were significantly lower than those in rats given cisplantin alone at 4 h after cisplatin injection. However, there was no significant difference in urinary excretion of lactate dehydrogenase, γ-glutamyl transpeptidase or N-acetyl-β-d-glucosaminidase between methylprednisolone-treated rats and control rats. Methylprednisolone did not affect the inhibitory effects of cisplatin on the cell growth of LLC-PK1. These findings indicate that methylprednisolone-induced increase in urinary platinum excretion, accompanied by a decrease in plasma and kidney platinum concentrations following cisplatin injection in rats, may be one of the mechanisms responsible for the protective action of methylprednisolone.     

激素性兔股骨头坏死模型的建立(英文)

背景:激素的应用已经成为激素性股骨头缺血坏死发病的首要原因。目的:拟应用马血清与皮质醇激素联合制备兔股骨头缺血性坏死早期模型,探讨激素性股骨头坏死的发病机制。方法:新西兰大白兔随机分成3组。激素联合马血清组静脉注射马血清10mL/kg,3周后再次注射马血清6mL/kg,再2周后注射甲强龙45mg/kg,1次/d,连续5d。激素组注射甲强龙45mg/kg,1次/d,连续5d。正常对照组不做任何处理。于激素给予前及激素注射后1,3,7和14d检测定血胆固醇、三酰甘油水平;于激素注射后第2、4、8周行股骨头MRI和组织病理学检测。结果与结论:与对照组比较,激素联合马血清组和激素组大白兔血清三酰甘油和总胆固醇分别于激素注射后1d和3d明显高于对照组(P<0.01)。MRI检测结果显示,激素联合马血清组大白兔股骨头于激素注射后第4周出现坏死信号;激素组第8周出现坏死信号。组织学检测结果显示,激素联合马血清组大白兔于激素注射第4周时股骨头出现骨小梁部分变细、断裂,空骨陷窝增加;第8周骨小梁稀疏、破碎,脂肪细胞增大,空骨陷窝明显增大。激素组病理坏死程度各时段均较激素联合马血清组轻。结果表明,激素联合马血清方法可成功制备股骨头坏死早期模型。     

磁刺激对大鼠神经干细胞CDK5基因表达的影响

目的：研究脉冲磁刺激对离体神经干细胞内CDK5蛋白和基因表达的影响。方法：神经干细胞克隆在体外培养传代后，置于0．5Hz，1．44T的磁刺激，每天1次，30个脉冲；作用3d后诱导分化，用CDK5的特异性引物对诱导分化后0、48和72h的神经干细胞进行RT—PCR分析，并用Western—Blot法检测神经干细胞中CDK5蛋白的表达。结果：通过RT-PCR可见，对照组CDK5在分化前已有表达，随着分化的进展，CDK5的表达逐渐增强，至48h达高峰，然后逐渐减低；磁刺激组与对照组呈现相同的趋势，但在不同时间点CDK5的表达均高于对照组。Western-Blot显示神经干细胞中CDK5蛋白的表达与RT-PCR的结果一致。结论：0．5Hz，1．44T磁刺激能够促进神经干细胞分化时CDK5基因和蛋白表达，这可能是磁刺激促进神经干细胞向神经元方向分化的机制之一。     

Pharmacokinetic and pharmacodynamic interactions between diltiazem and methylprednisolone in healthy volunteers

OBJECTIVES: The pharmacokinetics and pharmacodynamics after administration of methylprednisolone alone, diltiazem alone, and both drugs jointly were assessed in healthy volunteers. METHODS: An unblinded, controlled, fixed-sequence, 2-period study was carried out in 5 healthy white men who received a single dose of intravenous methylprednisolone, 0.3 mg/kg, on day 2, followed by diltiazem alone, 180 mg, on days 5, 6, and 7, with joint dosing of both drugs on day 8. Methylprednisolone and diltiazem disposition was assessed from plasma concentrations. Pharmacodynamic factors were assessed by plasma cortisol and T-helper and T-suppressor lymphocytes by means of extended indirect response models. RESULTS: The clearance of methylprednisolone was significantly reduced in the presence of diltiazem (25.2 L/h versus 16.8 L/h), resulting in a longer half-life (2.28 hours versus 3.12 hours) and increased area under the plasma concentration-time curve (AUC) (871 ng x h/mL versus 1299 ng x h/mL). The AUC of diltiazem was unchanged in the presence of methylprednisolone. No significant intrinsic pharmacodynamic differences were observed for methylprednisolone versus methylprednisolone-diltiazem. The 50% inhibitory concentration values were 0.446 ng/mL versus 0.780 ng/mL for cortisol, 9.20 ng/mL versus 10.7 ng/mL for T-helper cells, and 18.5 ng/mL versus 20.9 ng/mL for T-suppressor cells (P >.05). Greater net suppression, as indicated by the area between the effect curve and suppression ratios, was observed for the methylprednisolone-diltiazem combination versus methylprednisolone alone, which was attributed to reduced elimination of methylprednisolone. CONCLUSIONS: Controlled-delivery diltiazem, 180 mg, significantly increased methylprednisolone AUC and half-life and reduced clearance, lending to greater systemic exposure to the steroid. However, significant differences between 50% inhibitory concentration values for methylprednisolone when given alone and for methylprednisolone in combination with diltiazem were not seen, which implies no change in cortisol or cell-trafficking sensitivity in the presence of diltiazem.     

牡蛎提取物在高温诱导皮质神经干细胞凋亡中的保护作用

背景:课题组前期研究表明,牡蛎提取物对高温所致神经管畸形中的凋亡细胞有一定的保护用用,该提取物对体外培养的神经干细胞的凋亡是否也有保护作用,尚未见报道目的:观察牡蛎提取液在高温所致神经干细胞凋亡中的保护作用.方法:取孕13 d小鼠胚胎大脑皮质细胞培养,采用免疫荧光法检测巢蛋白的表达以鉴定神经干细胞,将培养3代的神经干细胞随机分为4组:高温对照组和牡蛎保护Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(分别加入质量浓度2.5,5,10 g/L的牡蛎提取液),同时设立培养液对照组(其中无细胞)、培养液+牡蛎提取液对照组(其中无细胞),各牡蛎保护组及对照组均经过39℃高温处理.锥虫蓝染色法检测神经干细胞存活率;MTT法检测神经干细胞的增殖活性;蛋白质印迹方法检测神经干细胞凋亡相关蛋门p53的表达.结果与结论:牡蛎保护Ⅱ、Ⅲ组中细胞的存活率及MTT值明显高于高温对照组(P<0 05);而p53的表达则明显低于高温对照组.提示牡蛎提取液对高温所致神经干细胞的凋亡具有一定的保护作用,这种作用有浓度依赖性.