中药川芎、当归有效成分对缺氧后复氧大鼠海马神经元钠、钾电流的作用

背景:中药红景天、人参、当归的有效成分具有抗缺氧损伤的作用。目的:从细胞电生理角度观察中药芎归滴丸对脑海马神经元的保护作用。设计:以细胞为观察对象,自身对照观察。单位:解放军第八十八医院和解放军军事医学科学院。材料:实验于2002-03/08在解放军军事医学科学院毒物药物研究所完成。选择新生清洁级Wistar大鼠1只,取其海马,将其分离培养成海马神经元细胞,然后选取9例海马神经元细胞,将其放入3个培养皿中培养,每个培养皿中3例神经元细胞,将其分为缺氧-复氧前后(对照组)、芎归滴丸(由解放军第八十八医院制剂室提供,主要成分为川芎和当归的挥发油)1×10-6mol/L组和芎归滴丸10×10-6mol/L组。方法:缺氧-复氧前后组分为两个亚组(即缺氧-复氧前、缺氧-复氧后),均不进行药物干预;芎归滴丸1×10-6mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸1.0×10-6mol/L 不缺氧组、芎归滴丸1×10-6mol/L 缺氧组);芎归滴丸10×10-6mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸10×10-6mol/L 不缺氧组、芎归滴丸10×10-6mol/L 缺氧组)。采用膜片箝全细胞记录方法检测缺氧-复氧前后体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na 、K 电流。主要观察指标:体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na 、K 电流幅度。结果:①海马神经元的电压门控性Na 电流幅度变化:缺氧-复氧后明显低于缺氧-复氧前犤(-3.8±1.0,-10.3±0.5)nA,t=3.49,P<0.01犦。②海马神经元的电压门控性K 电流幅度变化:缺氧-复氧后K 电流的激活阈值由-40mV变为-20mV,电流幅度变化差异无显著性意义。③芎归滴丸预处理后缺氧-复氧前后海马神经元的Na 、K 变化:缺氧-复氧前海马神经元ⅠNa、Ⅰk在阈值处的幅度很接近,差异无显著性意义。缺氧-复氧后芎归滴丸10×10-6mol/L组高于芎归滴丸1×10-6mol/L组和缺氧-复氧后犤(-58.5±1.9,-6.9±1.4,-3.8±1.0)nA,t=7.51,P<0.05犦。结论:芎归滴丸对海马神经元的缺氧损伤有抑制作用。     

不同浓度利多卡因对大鼠脑海马锥体神经元钠、钙电流的影响

目的：观察不同浓度利多卡因对大鼠海马锥体神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体介导钙电流和钠电流的影响。初步探讨低浓度利多卡因对神经元缺氧保护的电生理基础。 方法：实验于2001-06／2002-08在北大医院麻醉生理实验室进行。将已培养12-14d的Wistar大鼠海马神经元按利多卡因浓度（10^-5-10^-1mol／L）分成5组（n=6），以不含利多卡因组做对照，应用全细胞膜片钳方法。采用无间隙模式，采集记录各组大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流、电压依赖性钠电流的变化及各组静息电位的情况。 结果：①同对照组相比，利多卡因浓度为10^-3，10^-2，10^-1mol几时明显抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流，电流密度依次为5．2&;#177;1．9，3．0&;#177;0．5，3．3&;#177;1．0（P〈0．05或0．01），其余浓度对N-甲基天冬氨酸介导钙电流无明显作用。②利多卡因浓度为10^-4，10^-3mol／L时，电压依赖性钠通道电流密度依次为160．9&;#177;19．2，68．2&;#177;6．5，同对照组相比明显减少，利多卡因浓度为10^-2，10^-1mol／L时钠电流被完全抑制（P〈0．05或0．01）。 结论：利多卡因可浓度依赖性抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流和钠电流，低浓度利多卡因的脑保护作用可能与此有关。     

铝对大鼠海马CA3区诱发电位的抑制及其与胆碱能、γ-氨基丁酸系统的关系

背景：以往的研究表明，铝可通过影响细胞内钙稳态、降低蛋白激酶C(PKC)的活性、影响谷氨酸的释放等多种途径影响动物的学习和记忆。含铝饲料喂养的大鼠，其海马CA3区长时程增强(LTP)形成减弱。经进一步采用急性给铝的方法，将三氯化铝(AlCl3)直接微量注射到海马CA3区，观察到铝能减弱海马CA3区的诱发电位、阻抑LTP的产生，这种作用可能与铝损害了L-Arg-NO途径有关.目的：探讨铝对学习记忆的损害及与胆碱能系统和γ-氨基丁酸(GABA)系统的相关性。设计：以实验动物为研究对象，完全随机对照的研究。单位：一所大学生理系、一所职业技术学院医学院。材料：实验于2000-09／2001-04在华中科技大学同济医学院生理系神经电生理实验室完成。实验用SD大鼠68只，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，普通级，体质量150～250g，雌雄不拘。干预：SD大鼠随机分为9组，分别为生理盐水组对照组6只，在其海马CA3区内先后(间隔1min)2次微量注射生理盐水各1μL；生理盐水+AlCl3组6只，在海马CA3区内先(间隔1min)微量注射生理盐水与0．5mol／L AlCl3各1μL。生理盐水+Tac组6只，在CA3区先后微量注射生理盐水与1&;#215;10^-9mol／L各Tacrine 1μL。生理盐水+Bic组6只，在CA3区先后微量注射生理盐水和1&;#215;10^-3mol／L Bicuculline各1μL。Tac+AlCl3组：预先分别向大鼠海马CA3区注入1&;#215;10^-9mol／L(n=8)。1&;#215;10^010mol／L(n=6)和1&;#215;10^-8mol／L(n=6)Tacrine 1μL，1min后再注入0．5mol／L AlCl3 1μL。Bic+AlCl3组：向海马CA3区先分别注入1&;#215;10^-3mol／L(n=9)，1&;#215;10^-4mol／L(n=7)Bicuculline 1μL，1min后再注入0．5mol／L AlCl3 1μL。单个脉冲刺激穿通纤维(PP)后，记录海马CA3区诱发的群体峰电位(PS)。待PS稳定后，向海马CA3区微量注射药物，观察铝对海马CA3区诱发电位的影响及某些中枢递质对铝抑制PS效应的影响。主要观察指标：海马CA3区诱发的群体峰电位。CA3区诱发电位的影响及某些中枢递质对铝抑制PS效应的影响。结果：①海马CA3区局部微量给予0．5mol／L AlCl3，记录的PS幅度1min时下降达峰值，为给药前的(33．8&;#177;11．0)％(n=6)。AlCl3的这种抑制作用持续120min。②预先CA3区微量注入1&;#215;10^-9mol／L Tacrine(胆碱酯酶抑制剂)，1min后再注入AlCl3，结果1～30min内拮抗了AlCl3抑制PS的效应(n=8)；给予1&;#215;10^-8mol／L Tacrine(n=6)，则拮抗作用延长至60min；而给予1&;#215;10^-10mol／L Tacrine(n=6)，拮抗作用在3～5min弱于1&;#215;10^-9mol／L组。③海马CA3区先给予1&;#215;10^-3mol／L Bicuculline，1min后再注入AlCl3，在1～20min内Bicuculline部分减弱了AlCl3的作用(n=9)。结论：一定浓度的铝可抑制海马CA3区的诱发PS幅度；Tacrine能拮抗这种作用，且可能与剂量有关。因此提示铝的抑制作用可能与损害了ACh递质系统有关；应用GABAA受体阻断剂Bicuculline也使铝对PS抑制效应减弱。表明铝的抑制作用也可能部分通过GABA途径起作用。     

蛇床子素对成骨样细胞UMR106增殖和分化的影响

目的：以在某种程度上可反映成骨细胞增殖的成骨样细胞UMR106为靶细胞，考察蛇床子素对其细胞形态、增殖率和分化程度的影响。方法：实验于2003-03／2004—03，在中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。以大鼠成骨肉瘤细胞系UMR106为靶细胞，以雌二醇1&;#215;10^-8mol／L为阳性对照，同时设空白对照组，蛇床子素干预组分为1&;#215;10^-8mol／L，1&;#215;10^-7mol／L，1&;#215;10^-6mol／L3个浓度组。①调整细胞浓度为4&;#215;10^-7L^-1，接种于12孔培养板上。48h后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。②调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于96孔培养板，采用四唑盐法测定各孔的吸光度，计算平均增殖率。③调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于24孔培养板，磷酸对硝基苯基质动力学法测定细胞内外碱性磷酸酶括性。上述实验每组均设8个复孔。结果：①培养基中加入蛇床子素培养48h后，与对照组相比UMR106细胞数量明显增多，核分裂期多见，1&;#215;10^-6mol／L，1&;#215;10^-7mol／L组可见细胞重叠生长，分泌基质堆积明显。②UMRl06细胞经蛇床子素处理48h后，相对于对照组，1&;#215;10^-6mol／L组增殖率为52％，1&;#215;10^-7mol／L组为37％，1&;#215;10^-8mol／L组为16％。3个给药组与对照组相比差异均有显著性（t=37．36，14．94，6．81，P〈0．01）。③UMR106细胞经蛇床子素1&;#215;10^-6mol／L和经雌二醇1&;#215;10^-8mol／L处理24h和48h后。细胞内碱性磷酸酶活性均显著高于对照组[（825．17&;#177;1234），（775．16&;#177;8．67），（715．14&;#177;14．17）μkat／g；（2415．48&;#177;15．84），（2355．47&;#177;5．67），（2285．49&;#177;7．67）μkat／g；t=16．56，10．22；20．89，34．90，P〈0．01]。④UMR106细胞在浓度为1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-7mol／L的蛇床子素及雌二醇10^-8mol／L培养24h后，细胞外碱性磷酸酶活性显著高于对照组[（781．66&;#177;50），（733．15&;#177;15．34），（728．81&;#177;9．84），（652．80&;#177;11．34）μkat／g；t=22．56，11．9，14.32,P〈0．01]。结论：蛇床子素可剂量依赖地促进UMR106细胞的增殖，刺激UMR106细胞的碱性磷酸酶活性，提示其可能具有直接促进成骨细胞增殖、分化的作用。     

垂体腺苷环化酶激活肽对原代培养海马神经元氧化损伤的保护作用

目的：在原代培养的大鼠海马神经元上观察不同浓度垂体腺苷环化酶激活肽-38对活性氧所致神经元氧化损伤的保护作用，为垂体腺苷环化酶激活肽-38的神经保护作用提供依据。 方法：实验于2001-09／2002-03在解放军总医院老年医学研究所神经生物学研究室完成。取新生1-3d的SD大鼠海马进行神经元原代培养，将细胞随机分成5组：对照组，活性氧组，1&;#215;10^-8mol/L，1&;#215;10^10mol／L和1&;#215;10 mmol／L垂体腺苷环化酶激活肽-38组。分别用次黄嘌呤（mmol／L）／黄嘌呤氧化酶（U/L）1．0／200,1．5／150，2．0／200,2．0／300,3．0／300处理细胞诱导氧化损伤模型，选择次黄嘌呤2．0mmol／L/黄嘌呤氧化酶200U／L作为最终的活性氧浓度，进一步观察垂体腺苷环化酶激活肽-38的神经保护作用。采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定神经元存活率，光学显微镜下照像，利用计算机图像分析软件分析神经元的形态改变，应用荧光素JC-1染色-激光流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位，利用反转录-聚合酶链反应法半定量天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA水平。 结果：①细胞存活率分别为：对照组77．8％，次黄嘌呤1．0mmol／L／黄嘌呤氧化酶200U／L活性氧组62．5％，次黄嘌呤1．5mmol／L／黄嘌呤氧化酶150U／L, 活性氧组50．1％，次黄嘌呤2．0mmol／L／黄嘌呤氧化酶200U／L活性氧组48．4％，次黄嘌呤2．0mmol/L／黄嘌呤氧化酶300U/L活性氧组25．3％，次黄嘌呤3．0mmol／L／黄嘌呤氧化酶300U／L活性氧组28．9％。与对照组比较，神经元的存活率随着培养液中活性氧浓度的增加而呈显著下降趋势（P〈0．01）。②活性氧不仅能引起培养神经元的存活率下降（P〈0．01），还能导致神经元出现神经退行性变样的形态学损伤，包括细胞皱缩，突起脱落、突起数减少[对照组（2．6&;#177;0．6）个，活性氧组（0．5&;#177;0．2）个，P〈0．011，多极神经元百分率下降（对照组为32．6％，活性氧组为10．1％，P〈0．01），同时，也能引起神经细胞的线粒体膜电位显著下降（对照组为40，活性氧组为12．3，P〈0．01）和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3 mRNA水平增加（对照组为0．13％，活性氧组为3％，P〈0．01）。⑧预先给予1&;#215;10^-8mol／L，1&;#215;10^-10mol／L和1&;#215;10^-2mol／L的垂体腺苷环化酶激活肽-38能显著改善活性氧引起的神经退行性损伤和线粒体膜电位下降（P〈0．05或P〈0．01），抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的表达（P〈0．01），其中，1&;#215;10^-7mol／L垂体腺苷环化酶激活肽-38的神经保护作用最强（P〈0．01）。 结论：活性氧可直接损伤培养的神经元，导致神经元出现形态学退行性改变和神经元存活率下降，形态学改变和死亡率增高与线粒体功能下降和神经细胞核内凋亡基因表达均有关。垂体腺苷环化酶激活肽-38具有明显的抗氧化损伤和神经保护作用，并且这种保护作用具有浓度依赖性.     

复智散对神经细胞胞体面积和轴突长度变化的影响

背景：自制中药复智散经已往的实验证实可延缓大鼠的自然老化过程，提示该药可能具有对抗衰老作用。目的：观察复智散培养神经细胞最佳有效浓度对神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞形态学改变的影响设计：重复测量设计。材料：实验于2002-06／2003-04在前都医科大学宣武医院北京脑老化重点实验室完成。自制中药复智散（菖蒲、远至等6味中药组成）由哈尔滨医科大学第一临床医学院神经科王德生教授和上海东方医院神经科徐晓云教授共同组方，淀粉样β蛋白25—35片段，SH-SY5Y神经母细胞瘤株。方法：用不同浓度的复智散孵育神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞，利用噻唑蓝比色法测定细胞存活率，制定量一效关系曲线，寻找最佳药物浓度；6孔板培养细胞分为正常对照组、淀粉样β蛋白25—3525μmol／L组、淀粉样β蛋白25～3525μmol／L ＋复智散45&;#215;10^-3g／L组和复智散45&;#215;10^-3g／L组，孵育24h，观察细胞形态学改变，测定神经细胞的胞体面积和轴突长度主要观察指标：①各组SH-SY5Y细胞噻唑蓝代谢率的变化。②各组神经细胞胞体面积及轴突长度。结果：①复智散可增进SH-SY5Y细胞的存活，最佳有效浓度为45&;#215;10^-3g／L。②SH-SY5Y细胞胞体面积和轴突长度：淀粉样β蛋白25-3525μmol／L组明显低于正常对照组[（505．5&;#177;122．36），（599．8&;#177;141．25）μm^2；（26．0&;#177;13．97），（363&;#177;15．58）μm，（t=3．903,3．447,P=0．000）]。复智散45&;#215;10^-3g／L组与淀粉样β蛋白25—3525μmol／L＋复智散45&;#215;10^-3 g／L组均明显高于淀粉样β蛋白25—3525μmol／L组[（918．3&;#177;178．34），（896．6&;#177;257．14），（505．5&;#177;122．36）μm^2；（968&;#177;43．31），（88．3&;#177;30．23），（26．0&;#177;13．97）μm．t=10．922，14．172，P=0．000）1。结论：在淀粉样β蛋白25—35损伤条件下复智散依旧有促进培养神经细胞存活的作用，表现在增进细胞胞体面积的增长和轴突的延伸方面。     

神经肽P物质促进增生性瘢痕中肥大细胞组胺释放的定量检测

目的：神经肽P物质可以促进入增生性瘢痕中肥大细胞组胺的释放，定量分析在此过程中神经肽P物质浓度因素的作用，探讨增生性瘢痕中神经肽P物质与肥大细胞的相互作用及作用条件。 方法：实验于2005-01／10在解放军第三军医大学西南医院中心实验室进行。将取自于西南医院整形美容外科烧伤患者的增生性瘢痕活体组织块切下后立即处理（患者或监护人同意），修剪成0．5mm&;#215;0．5mm&;#215;0．5mm^-1 mm&;#215;1mm&;#215;1mm大小，将组织块放入0.5mL含10^-6，5&;#215;10^-6．10^-5&;#215;10^-5，10^-4mol／L神经肽P物质的DMEM液中，以0mol／L神经肽P物质为对照组。组织块作用30min后提取上清液，为样品组胺；提取上清液后的组织块分别加入去离子水0．5mL，加热煮沸（破坏细胞，释出组胺）20min，摇匀后离心（1500g，10min），吸出上清液，为剩余组胺。荧光法测定作用后上清液中肥大细胞的组胺释放率f组胺释放率=样品组胺／（样品组胺＋剩余组胺）&;#215;100％]。 结果：神经肽P物质10^-6，5&;#215;10^-6，10^-6，5&;#215;10^-6，l0^-4mol／L组组胺释放率显著高于对照组[（49．78&;#177;3．56）％，（54．56&;#177;1．90）％。（57．12&;#177;1．49）％，（60．49&;#177;1．41）％，（63．16&;#177;2．61）％，（43．96&;#177;3.18）％，P〈0．011，且神经肽P物质浓度越高，组胺释放率越高（P〈0．01或0．05）。 结论：在增生性瘢痕中，神经肽P物质以剂量依赖方式刺激肥大细胞组胺的释放，当神经肽P物质达到10μmol／L时即有肥大细胞组胺的显著释放，随神经肽P物质浓度提高，组胺释放率升高。     

一氧化氮对心肌细胞缺氧复氧时脂质过氧化损伤的保护作用

目的：研究一氧化氮对培养鼠心肌细胞缺氧复氧所致脂质过氧化损伤的保护作用，探讨心肌缺血修复机制。方法：采用细胞缺氧复氧损伤模型，培养细胞随机分为4组：A组正常对照组(培养3h)；B组单纯缺氧／复氧(A／R缺氧2h复氧1h)；C组缺氧预处理组(缺氧20min后复氧20min，然后缺氧复氧)；D组一氧化氮预处理组[加入S-亚硝基-已酰青酶胺(s-nitroso-n-acety1-penicil—lamine，SNAP)使其终浓度为1mmol／L，预处理40min后A／R。与复氧后测定培养液中肌酸激酶(creatine kinase，CK)、乳酸脱氢酶(1actic dehydrogenase，LDH)活性变化及细胞内丙二醛含量和细胞存活率。结果：与正常组比，单纯缺氧／复氧组CK[(941．35&;#177;152．53)nkat／L]、LDH[(7416．48&;#177;984．20)nkat／L]、丙二醛[(1．35&;#177;0．26)μmol／g]，水平显著升高(P&;lt;0．01)，细胞存活率(54．68&;#177;6．00)％显著降低(P&;lt;0．01)。1mmol／L SNAP预处理组[细胞存活率为(74．55&;#177;4．11)．CK为(582．45&;#177;140．86)nkat／L，LDH为(5766．15&;#177;941．69)nkat／L，丙二醛为(0．89&;#177;0．16)μmol／g]和缺氧预处理组[细胞存活率为(74．69&;#177;6．14)．CK为(547．94&;#177;125．52)nkat／L，LDH为(5882．34&;#177;844．67)nkat/L，丙二醛为(0．85&;#177;0．12)μmol／g]上述变化明显减轻(P&;lt;0．01)。结论：一氧化氮可抑制脂质过氧化反应，减轻自由基对心肌细胞的损伤，对细胞缺氧复氧损伤具有与缺血预处理相似的保护作用。     

睾酮浓度与人脐静脉组织因子途径抑制物的表达

目的：观察生理及超生理浓度睾酮对人脐静脉内皮细胞合成、分泌组织因子途径抑制物的影响。方法：实验于2005-01／06在汕头大学医学院药理实验室完成。将人原代脐静脉内皮细胞复苏后于37℃，体积分数为0．05的CO2培养箱中静置培养，所用细胞为两三代。将消化好的细胞移人96孔板，接种密度为1&;#215;10^8每孔100μL。24h后分为不同浓度睾酮组（3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^4, 3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^-5 mol/L）及单纯培养液对照组，继续孵育48h，吸取上清，酶联免疫吸附法测定各组组织因子途径抑制物蛋白含量。反转录-聚合酶链反应法观察各组组织因子途径抑制物基因表达水平。结果：①人血管内皮细胞组织因子途径抑制物含量：对照组，3&;#215;10^-9, 3&;#215;10^-8, 3&;#215;10^-6. 3&;#215;10^-5 mol/L睾酮组组织因子途径抑制物含量分别为（6．43&;#177;0．61），（9．8&;#177;1．18），（9．8&;#177;1．05），（6．43&;#177;1．19），（5．43&;#177;0．66）μg／L生理浓度睾酮可明显增加内皮细胞上清液中组织因子途径抑制物含量。而3&;#215;10^-5mol／L组的组织因子途径抑制物含量明显低于对照组（P〈0,05）。②不同浓度睾酮组组织因子途径抑制物mRNA水平：3&;#215;10^-9，3&;#215;10^-8mol／L组组织因子途径抑制物mRNA水平明显高于对照组（P〈0．05）。而3&;#215;10^-5mol／L组组织因子途径抑制物mRNA水平又显著降低（P〈0．05）。结论：生理浓度睾酮通过雄激素受体促进组织因子途径抑制物合成、分泌，增强抗凝系统活性，有利于预防男性冠心病及心肌梗死等血栓性疾病的发生。     

肾上腺髓质素对缺血再灌注大鼠心肌血管细胞黏附分子1表达的抑制作用

背景：降钙素基因相关肽可减轻心肌缺血再灌注损伤。肾上腺髓质素与降钙素基因相关肽有一定的同源性，因此，一些研究推测肾上腺髓质素也可能对心肌有保护作用。目的：探讨肾上腺髓质素对缺血再灌注大鼠心肌组织血管细胞黏附分子1表达的抑制及其对心肌缺血的保护作用。设计：实验对象为SD大鼠心脏缺血再灌注模型，完全随机分组。随机设计。材料：本实验于2003—12／2004—05在成宁学院医学院实验动物中心完成。实验选用健康雄性SD大鼠24只。方法g24只雄性SD大鼠心脏制成离体心脏缺血再灌注模型，随机分为对照组和肾上腺髓质素1．50(1&;#215;10^-9)，(1&;#215;10^-8)，(1&;#215;10^-7)mol／L组。心脏缺血60min，对照组用氧合KHB液再灌注60min，其他3组分别用氧合KHB液加肾上腺髓质素1．50(1&;#215;10^-9)，(1&;#215;10^-8)，(1&;#215;10^-7)mol／L再灌注15min，再用KHB液灌注45min。收集冠状动脉流出液，检测肌酸激酶同工酶含量。留取左室心尖部心肌进行总RNA提取，采用RT-PCR法测定血管细胞黏附分子1mRNA的表达。主要观察指标：对照组及不同浓度肾上腺髓质素1-50组心肌组织VCAM-1mRNA的表达。结果：电泳后，各组在194bp处均可见一明显的扩增条带，此为甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA扩增片段，各组间甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA的表达基本一致。对照组、肾上腺髓质素1-50(1&;#215;10^-9)mol／L组在334bp处可见亮度强、边界明显清楚的条带为血管细胞黏附分子1mRNA扩增片段。肾上腺髓质素1-50(1&;#215;10^-8)mol／L组血管细胞黏附分子1mRNA扩增条带亮度明显减弱。肾上腺髓质素1．50(1&;#215;10^-7)mol／L组仅为亮度微弱且模糊的扩增条带。肾上腺髓质素1．50(1&;#215;10^-8)。(1&;#215;10^-7)mol／L组扩增的血管细胞黏附分子1mRNA与甘油醛-3-磷酸脱氢酶mRNA的灰度值比值(0．6&;#177;0．31，0．5&;#177;0．36)明显低于对照组(1．2&;#177;0．52)(P&;lt;0．05)。结论：心肌缺血再灌注时，肾上腺髓质素1—50可呈浓度依赖性地抑制心肌组织血管细胞黏附分子-1mRNA的表达。     

刺五加皂甙对缺氧复氧性神经元损伤的保护作用

目的：从细胞分子水平研究刺五加皂甙(acanthopanax senticosus saponins，ASS)对培养神经元缺氧复氧损伤的保护作用及其机制。方法：取孕13～15d ICR胎鼠大脑皮质神经元进行原代分离培养，建立缺氧复氧诱导的皮质神经元损伤模型。随机分成正常对照组、缺氧复氧组及ASS组；用MTT法测定神经元存活率，用硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中一氧化氮合酶(NOS)的含量，用流式细胞仪检测神经元凋亡率。结果：神经元缺氧2，4，6，8h复氧24h后，存活率分别为(0．604&;#177;0．022)％，(0．592&;#177;0．017)％，(0．543&;#177;0．037)％，(0．534&;#177;0．021)％；缺氧8h复氧24h后，神经元凋亡率由(4．13&;#177;0．87)％增加至(31．34&;#177;0．85)％，NOS含量由(5．23&;#177;0．28)μmoL／L增加至(11．39&;#177;0．21)μmoL／L(P&;lt;0．01)；ASS组神经元存活率、神经元凋亡率、NOS含量分别为(0．636&;#177;0．021)，(16．37&;#177;0．66)％，(8．02&;#177;0．18)μmoL／L，与缺氧8h复氧24h比较差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：ASS对缺氧复氧引起的神经元损伤有保护作用；ASS可能是通过抑制一氧化氮的释放、抑制神经元凋亡来拮抗神经元损伤。     

肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响

目的：观察肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增殖及胶原生成的影响。 方法：实验于2003-09／2004-09在南方医科大学珠江医院中心实验室进行。①采用组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞。②实验分组：空白对照组；1&;#215;10^-9 1&;#215;10^-8 ，1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6mol／L血管紧张素Ⅱ组；1&;#215;10^-9，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6mol／L肾上腺髓质素N端20肽组；1&;#215;10^-7mol／L血管紧张素Ⅱ＋（1&;#215;10^-9，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6mol／L）肾上腺髓质素N端20肽组。③以^3H脯氨酸掺入试验测定血管平滑肌细胞的胶原合成功能，以四氮唑盐法测定细胞增殖情况。分别观察不同浓度肾上腺髓质素N端20肽、血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及合成胶原的影响。 结果：①肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞的胶原合成功能的作用：肾上腺髓质素N端20肽组的。H脯氨酸掺入率与对照组相比（P〉0．05），差异均无显著性。随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高，血管平滑肌细胞的。H脯氨酸掺入率呈递增趋势。血管紧张素H＋肾上腺髓质素N端20肽组的^3H脯氨酸掺入率在血管紧张素H浓度不变的情况下，随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高，血管平滑肌细胞的^3H脯氨酸掺入率呈递减趋势，各组之间差异有显著意义（P〈0．01）。②肾上腺髓质素N端20肽及血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖的影响：随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高，四氮唑盐比色值差异无显著性（P均〉0．05）。随着血管紧张素Ⅱ浓度的增高，四氮唑盐比色值增也明显增高，各组间差异有显著性意义（P均〈0．01）。血管紧张素Ⅱ＋肾上腺髓质素N端20肽组中，在血管紧张素Ⅱ浓度不变的情况下，随着肾上腺髓质素N端20肽浓度的增高，四氮唑盐比色值均显著降低（P〈0．01）。 结论：肾上腺髓质素N端20肽对血管紧张素Ⅱ刺激血管平滑肌细胞增生及胶原的生成起明显抑制作用。     

苦豆子对豚鼠内脏平滑肌收缩活动的干预

目的：观察苦豆子水煎剂对豚鼠离体内脏平滑肌作用的影响，分析其发挥作用途径。 方法：实验于2004—12在宁夏医学院基础学院生理实验室完成。①选用健康成年三色毛豚鼠24只，雌雄不拘。②苦豆子（由银川市中医院提供，由该院检定）被制备成1kg／L的水煎剂，实验的系列质量浓度为1&;#215;10^-4，3&;#215;10^-4，1&;#215;10^-3，3&;#215;10^-3，1&;#215;10^-2，2&;#215;10^-2kg／L。③实验方法：实验时分别取出豚鼠胆囊、胃、小肠及膀胱。每个胆囊制备3条平滑肌肌条，共72条；胃、小肠及膀胱各制备12条平滑肌肌条。累积于置胆囊、胃、小肠及膀胱平滑肌肌条各12条的肌槽中加入1&;#215;10^-4，3&;#215;10^-4，1&;#215;10^-3，3&;#215;10^-3，1&;#215;10^-2，2&;#215;10^-2kg／L苦豆子水煎剂，加药间隔2min。容量50μL。④按随机抽签法将其余60条胆囊肌条分为5组：阿托品＋苦豆子组、酚妥拉明＋苦豆子组、维拉帕米＋苦豆子组、苯海拉明＋苦豆予组、吲哚美辛＋苦豆子组，每组12条。上述5组分别加入拮抗剂阿托品（胆碱能M受体阻断剂）1&;#215;10^-6mol／L，酚妥拉明（肾上腺素能α受体阻断剂）1&;#215;10^6mol／L，维拉帕米（Ca^2＋拮抗剂）1&;#215;10^-7mol／L，苯海拉明（组织胺H1受体阻断剂）1&;#215;10^-6mol／L，吲哚美辛（前列腺隶受体阻断剂）1&;#215;10^6mol／L后2min再依次加入前述“累积加药”中各质量浓度苦豆子。⑤通过JH-2肌肉张力换能器将信号输出BL-410生物机能实验系统读出标本的张力、收缩波平均振幅及收缩频率的变化值。⑥数据间差异性比较采用均数t检验。 结果：①累积加入苦豆子水煎剂1&;#215;10^-4，3&;#215;10^-4，1&;#215;10^-3，3&;#215;10^-3，1&;#215;10^-2.2&;#215;10^-2kg／L后，胆囊肌条张力逐渐增高、收缩频率逐渐加快、收缩波平均振幅逐渐减小。（函当苦豆子水煎剂累积质量浓度为2&;#215;10^-2kg／L时，酚妥拉明＋苦豆子组离体胆囊肌条张力和收缩频率明显低于或慢于苦豆子组（t=2，3401，2．1404，P〈0．05），而收缩波平均振幅明显高于苦豆子组（t=2．8256，P〈0．05）。维拉帕米＋苦夏子组离体胆囊肌条张力明显低于苦豆子组（t=2．3464，P〈0．05）。③当苦豆子水煎剂累积质量浓度为1&;#215;10^-2kg／L时，酚妥拉明＋苦夏子组离体胆囊肌条张力明显低于苦豆子组（t=2．430，P〈0．05），而收缩波平均振幅明显高于苦豆子组（t=2．2279，P〈0．05）。维拉帕米＋苦豆子组离体胆囊肌条张力明显低于苦豆子组（t=2．6576，P〈0．05）。④累积加入不同质量浓度苦赢子水煎剂后对豚鼠胃、小肠及膀胱肌条的张力、收缩波平均振幅及收缩频率无明显影响（P〉0．05）。 结论：①苦豆子水煎刺可呈剂量依赖性增高胆囊平滑肌肌条的张力、加快收缩频率、减小收缩波平均振幅，其作用可被酚妥拉明及维拉帕米部分阻断，且该种作用可能与胆囊平滑肌细胞膜上的肾上腺素能Ⅱ受体和细胞膜上的Ca^2＋通道有关。②苦豆子水煎剂对豚鼠胃、小肠及膀胱平滑肌的收缩活动无明显影响。     

葛根素体外影响小鼠胚胎长骨雌激素受体β表达的作用

目的：以体外培养小鼠胚胎长骨为靶器官，观察葛根素对骺板雌激素受体亚型雌激素受体β分布及含量的影响，并与内源雌激素比较，分析葛根素对骨可能的作用机制。方法：实验于2003-05／2004-05在中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。以小鼠胚胎长骨为靶器官，以雌二醇1&;#215;10^-6mol／L处理为阳性对照组，同时设空白对照组、葛根素干预组分为1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4mol／L 3个浓度组。①小鼠怀孕16d时取出胚胎，剔除雌性胎鼠前肢肌肉和软组织，剥离出尺骨，做为实验靶器官置于BGJb培养基中，葛根素和雌二醇作用48h后，测量长骨总长和骨干长。每组培养长骨8根，重复3次。②长骨固定、脱钙后作石蜡切片，进行免疫组织化学染色，光镜下观察阳性细胞定位，图像分析系统下测定免疫反应阳性细胞数和阳性细胞面积。结果：雌性胎鼠长骨全部进入结果分析，无脱失。①长骨经葛根素和经雌二醇处理48h后，葛根素1&;#215;10^-4，1&;#215;10^-5mol／L组及阳性对照组骨总长及骨干长与空白对照组相比，差异有非常显著性意义[（3．97&;#177;0．12），（1．51&;#177;0．07）；（3．79&;#177;0．06），（1．40&;#177;0．03）；（4．05&;#177;0．1），（1．62&;#177;0．05）；（3．43&;#177;0．05，1．2&;#177;0．04）mm；P〈0．01]，葛根素10^-6mol／L组仅骨总长与空白对照组相比差异有显著性意义[（3．56&;#177;0．06）mm，P〈0．05]；葛根素1&;#215;10^-6mol／L的作用与阳性对照组差异无统计学意义（P〉0．05），1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-6moL／L组作用弱于阳性对照组（P〈0．01）。②空白对照组骺板静止区和肥大区雌激素受体β蛋白几乎不表达，仅增殖区有较弱表达。经葛根素和1&;#215;10^-6mol／L雌二醇作用后，增殖区表达明显增强，肥大区和静止区软骨细胞也都出现雌激素受体β蛋白的阳性表达。葛根素1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4mol／L组阳性细胞数和阳性细胞面积均小于阳性对照组[29．8&;#177;2．9，43．5&;#177;5．1，63．3&;#177;5．8．833&;#177;6．9，（819．78&;#177;164．53）．（1175．76&;#177;188．73），（1585．15&;#177;198．93），（2036．12&;#177;384．23）μm^2，P〈0．01～0．05]，作用明显弱于雌二醇，并表现出剂量依赖的趋势。结论：葛根素在体外可促进软骨内成骨。同雌激素一样，葛根素也能够上调骺板雌激素受体β的表达。提示葛根素对软骨内成骨的促进作用可能与其上调雌激素受体β在骺板的表达有关。     

离体海马脑片CA1区锥体细胞缺氧期间电生理指标变化与N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801干预后的变化

背景：海马CA1区锥体细胞是对缺血缺氧性损伤最为敏感的神经元，缺血缺氧后海马CA1区锥体细胞膜电位表现为缺氧早期细胞膜的超极化，随着缺氧时间的延长，细胞膜发生缓慢去极化及快速去极化，引起神经元不可逆性损伤。目的：应用细胞内记录技术，观察N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801对离体海马脑片CA1区锥体细胞缺氧期间电生理指标的变化。设计：观察对比实验。单位：解放军第九七医院，徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室，Healthy-Science Center,State University of New York．材料：实验于2002—09／2003—02在美国纽约州立大学医学中心完成。选择成年雄性SD大鼠5只，预吸纯氧3min后以体积分数为0．02的异氟醚麻醉，快速断头取脑，制备离体海马脑片。方法：大鼠海马脑片随机分为单纯缺氧组和MK801组，每组10个。单纯缺氧组海马脑片给予10min缺氧；而MK801组的海马脑片在缺氧前10min及10min的缺氧期间分别应用100μmol／L的MK801。所有脑片均给予60min的复氧。应用细胞内记录技术记录海马CA1区神经元缓慢去极化及快速去极化的时间、快速去极化的幅度。在复氧末，应用细胞内注入电流及经Schaffer通路刺激，观察神经元对刺激的反应。主要观察指标：①两组海马CA1区锥体神经元缓慢去极化速率。②两组海马CA1区神经元的快速去极化时间。③两组海马CA1区神经元的快速去极化幅度。④MK801对海马CA1区神经元功能恢复的影响。结果：①海马CA1区锥体神经元缓慢去极化速率：单纯缺氧组显著高于MK801组[（0．20&;#177;0．05）mV／s，（0．08&;#177;0．03）mV／s，（P〈0．05）]。②海马CA1区神经元的快速去极化时间：MK801组显著高于单纯缺氧组[（537&;#177;139）s，（261&;#177;26）s，（P〈0．05）]。③海马CA1区神经元的快速去极化的幅度：MK801组显著小于单纯缺氧组[（4&;#177;13）mV，（53&;#177;7）mV，（P〈0．05）。④在复氧末期，MK801组的10个神经元中，9个神经元恢复对刺激的反应。结论：N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801可以显著降低缺氧引起的神经元缓慢去极化速率，延缓神经元快速去极化的发生及降低快速去极化的幅度，说明N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂可显著减轻神经元的缺氧性损伤，促进复氧后神经元功能的恢复。     

红色发光二极管照射对C2C12细胞增殖的光生物调节作用

目的：采用小鼠成肌细胞C2C12作为模型，观察光生物调节作用对他汀类药物引起的肌病的作用。 方法：实验于2004-09／2005-01在华南师范大学激光运动医学实验室完成。C2C12细胞用浓度分别为2.0&;#215;10^-5, 2.0&;#215;10^-6, 2.0&;#215;10^-7 ，2．0&;#215;10^-8 mol／L的辛伐他汀培养，然后用强度分别为0，0．229，0．506，0．848，1．401，1．670mW／cm^2的红色发光二极管[波长（640&;#177;15）nm]照射2d，15min／d。用甲基噻唑基四唑比色法评价细胞增殖。 结果：浓度为2.0&;#215;10^-6, 2.0&;#215;10^-7 and 2.0&;#215;10^-8的辛伐他汀对C2C12的增殖没有影响，无光生物调节作用；浓度为2．0&;#215;10^-5 mol／L的辛伐他汀抑制C2C12的增殖，发光二极管强度为0，0．229，0．506，0．848，1．401，1．670mW／cm^2时C2C12细胞增殖吸光度百分率分别降为（37．2&;#177;84）％，（58．4&;#177;94．9）％，（37．0&;#177;8．6）％，（63．0&;#177;8．8）％，（59．2&;#177;12．6）％，（28．9&;#177;90．3）％。强度为0．848mW／cm^2的红色发光二极管照射2d，15min／d可促进被抑制的C2C12增殖效应。 结论：红色发光二极管可以促进被辛伐他汀抑制的C2C12细胞的增殖作用，对服用他汀类药物引起的肌病可能有光生物调节作用。     

大鼠腹膜间皮细胞CD40表达与阿托伐他汀的干预效应

目的：探讨阿托伐他汀对大鼠腹膜间皮细胞CD40表达的影响。方法：实验于2004-06／2005-03在南京大学生命科学院实验室完成。分离、培养大鼠腹膜间皮细胞，于不含血清的F12培养基中分别加入不同浓度的阿托伐他汀，即2．5％腹透液加入1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4，0mol／L阿托伐他汀，其中0mol／L阿托伐他汀为对照组，刺激腹膜间皮细胞，通过反转录-聚合酶链反应检测腹膜间皮细胞的CD40mRNA的表达。结果：①培养的大鼠腹膜间皮细胞呈多边形、菱形、椭圆形，大小不等。细胞融合后，呈典型的鹅卵石状上皮细胞形态。传代后用抗大鼠角蛋白和抗Ⅷ因子抗体检测相关抗原，结果抗角蛋白阳性，抗Ⅷ因子相关抗原阴性。②加入1&;#215;10^-7，1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5，1&;#215;10^-4mol／L阿托伐他汀后腹膜间皮细胞的CD40mRNA表达量明显低于对照组（分别为0．247&;#177;0．084，0．180&;#177;0．060，0．106&;#177;0．052，0．025&;#177;0．023，0．319&;#177;0．101，P〈0．05）。结论：阿托伐他汀对腹膜间皮细胞细胞CD40的表达有显著的抑制作用。     

鼠骨髓间充质干细胞对缺氧-复氧神经元修复的体外实验

目的：观察在体外培养条件下骨髓间充质干细胞对缺氧-复氧新生大鼠大脑皮质神经元活性的影响。方法：实验于2005—01／2006—12在兰州大学第一医院中心实验室完成。健康Wistar大鼠成鼠5只，健康新生Wistar大鼠20只，无菌条件下分离、培养、传代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，细胞融合达90％时更换培养基培养24h，收集细胞培养液即为骨髓间充质干细胞条件培养基；无菌条件下培养新生Wistar大鼠大脑皮质神经元，第8天随机分为正常对照组、缺氧组、间充质干细胞条件培养基处理组，即用骨髓间充质干细胞条件培养基进行缺氧神经元的修复。分别于缺氧0h、缺氧6h、复氧24h用噻唑蓝盐比色法测定吸光度值和BeckMan全自动生化仪测定培养液乳酸脱氢酶漏出量，分别检测各组神经元的活性和细胞损伤后修复的程度。结果：各实验组均全部进入结果分析。①各组神经元的活性：鼠大脑皮质神经元缺氧6h及复氧24h后缺氧组噻唑蓝明显低于正常对照组，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组复氧24h后噻唑蓝高于缺氧组（缺氧6h：缺氧组0.42&;#177;0.14，正常对照组0．81&;#177;0.12；复氧24h：缺氧组0.35&;#177;0.15，正常对照组0.82&;#177;0．21，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组0.74&;#177;0．25，P〈0．01或0.001）。②各组细胞损伤后修复的程度：缺氧6h和复氧24h后，缺氧组乳酸脱氢酶漏出量比正常对照组明显增多，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组比缺氧组明显减少[缺氧6h：缺氧组（790．16&;#177;34．51）nkat／L，对照组（340．07&;#177;25．17）nkat／L，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组（570．11&;#177;53．18）nkat／L；复氧24h：缺氧组（1790．36&;#177;252．38）nkat／L，对照组（340．07&;#177;19．00）nkat／L，骨髓间充质干细胞条件培养基处理组（860．17&;#177;40．17）nkat／L，P〈0．001]。结论：在体外培养条件下骨髓间充质干细胞能增加缺氧神经元的细胞活性，促进缺氧神经元的修复。     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用，为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法：实验皮肤标本来源于2002—07／2003—07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者，取冗余全层皮肤组织，患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞，实验分为异搏定组：包括1&;#215;10^-3, 1&;#215;10^-4, 1&;#215;10^-5, 1&;#215;10^-6, 1&;#215;10^-7, 1&;#215;10^-8,1&;#215;10^-9,1&;#215;10^-10mol／L组，分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液；氢化可的松组：在细胞培养孔中加入2mL浓度为1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松的培养液；对照组：在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0．005的新生牛血清的Dulbecco＇s改良的Eade＇s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色；细胞增殖状况测定应用^3氚标记的胸腺嘧啶掺入法；观察细胞增殖抑制率[抑制率（1％）=（阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值）／阴性对照每分钟脉冲数值]，取各例样本的平均值。结果：①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果：对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖，24h达到高峰，48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应：各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用，其中1&;#215;10^-6mol／L异搏定与1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异（t=0．135,P=0．896〉0．05）。③浓度为1&;#215;10^-6mol/异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应：氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12,48h时[（60．67&;#177;18．94）％比（-19．69&;#177;21．26）％，（10．89&;#177;11．61）％，（37．03&;#177;12．17）％，q=10．867．6．732，3．197；P〈0．051；异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12，48h时[（51．42&;#177;15．30）％比（-16．83&;#177;16．90）％．（1．09&;#177;11．62）％，（17．41&;#177;13．41）％，q=10．566，7．791，5．265，〈0．051；在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松（t=2．423,P=0．042〈0．05）。结论：不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用，异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

纳洛酮对缺氧大鼠皮质神经元细胞内钙的影响

目的：观察缺氧对大鼠皮质神经元细胞内钙的影响及纳洛酮的保护作用。方法：实验于2003年在军事医学科学院神经生物学研究室进行。取体外培养12d的Wistar大鼠皮质神经元细胞，随机分为3组：①正常对照组：细胞置于36℃，含体积分数为0．9的空气、体积分数为0．1的CO2的培养箱内培养30h。②缺氧组：细胞移至4000cm^3的恒温（36℃）密闭容器内，连续充以无氧气体（体积分数为0．9氮气、体积分数为0．1的CO2），在缺氧条件下培养6h后改在常氧下继续培养24h。③纳洛酮组：在缺氧前24h在培养液中加入1 μmol／L的纳洛酮，其他处理同缺氧组。用流式细胞仪检测不同时间段培养的神经元细胞内钙。结果：3组在缺氧前神经元细胞内钙差别不显著（P〉0．05）。培养6h后缺氧组和纳洛酮组神经元细胞内钙明显高于正常对照组（7．94&;#177;0．13，6．68&;#177;0．33，3．39&;#177;0．36，P〈0．01），且缺氧组高于纳洛酮组（P〈0．01）。缺氧6h及再复氧24h纳洛酮组细胞内钙仍明显低于缺氧组（8.67&;#177;0．61，11．59&;#177;1．34，P〈0．01），但两组均高于正常对照组（3．48&;#177;0.28，P〈0．01）。结论：缺氧6h复氧24h时神经元细胞内钙显著升高，证实[Ca^2＋]i水平和神经细胞的缺氧损害密切相关，且恢复氧供并不能纠正[Ca^2＋]i异常。应用纳洛酮后，在缺氧条件下和缺氧后复氧期间的[Ca^2＋]i升高幅度较缺氧组明显减小，说明纳洛酮对缺氧的神经元[Ca^2＋]i具有一定的稳定作用，可以减轻神经元[Ca^2＋]i的升高，进而对神经元细胞起到保护作用。