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1.
本研究利用结合到 BSA上的 deltorphin 肽 (DADT )免疫 Balb/c小鼠 ,成功地制备了特异性抗 DADT 单克隆抗体。交叉试验表明 ,所获抗体仅识别 DADT 和 DADT 而不识别其 L型同分异构体 L ADT ,也与其它 DADT 类似物无交叉反应。Epitope分析表明 ,该抗体识别 DADT 的 N末端特异氨基酸序列 ,其中包括对其活性有重要影响的第二位的 D-Ala-nine。利用这一抗体对成年大鼠脑组织和新生大鼠培养神经元进行了免疫组织化学研究。大鼠脑中有含量较低的 DADT 样免疫活性 ,主要分布在某些特定部位的神经纤维和神经元胞体 ,如终纹床核、杏仁核、海马、伏核、下丘脑外侧区、黑质、中央灰质等部位。然而在培养的大鼠脑神经元 ,DADT 样免疫活性的含量却很丰富 ,神经元的胞体和突起均呈较强的 DADT 样免疫活性。两项结果均提示哺乳动物脑神经元很可能产生一种与 DADT 在结构上极其类似的物质  相似文献   
2.
吴燕  于顺  丁爱石  范明 《神经解剖学杂志》2002,18(2):184-186,T035
为了探讨一种适合培养细胞的低本底、低成本免疫细胞化学方法 ,本研究将低浓度的 Triton X-10 0加入抗体稀释液和洗液中 ,观察了其对 ABC反应时的抗体和 ABC的使用浓度和反应效果的影响。结果证明 ,在抗体稀释液和洗液中加入 0 .1%Triton X-10 0可以增强细胞对抗体的通透性 ,在不减弱阳性信号的状况下使 -抗的使用浓度明显降低 ,使生物素化二抗和 ABC的使用浓度达到 1/ 10 0 0~ 1/ 40 0 0 ,并大大减弱染色本底。本研究结果提示 ,在这一稀释度明显低于目前试剂盒建议的使用浓度。在充分显示阳性信号的前提下 ,使抗体的使用浓度和量大幅度减少 ,从而实现了降低本底和实验成本的目的  相似文献   
3.
目前已知降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene-Releted Peptide,CGRP)可以舒张血管、增加局部血流。本工作研究CGRP对脑血流的影响。采用体重280~300克的成年雄性大鼠48只,腹腔注射20%乌拉坦麻醉后固定于脑立体定位仪。根据Louis鼠脑定向图谱进行侧脑室定位并钻孔,为侧脑室注射备用。脑血流采用非损伤阻抗法测定,将记录电极分别置于大鼠头部两侧乳突部位,通过国产XLT-73型晶体管血流图仪与日本光电RM-6000型多导生  相似文献   
4.
5.
取培养 1 2天的神经元 ,置于缺氧环境中培养 4小时后取出 ,再置含 0 .1 0L LCO2 和空气培养箱内复氧培养 2 4小时和 72小时 ,于不同时间取出 ,观察其存活数、Jun表达阳性和阴性的神经元数。结果发现缺氧前对照组和低氧预处理组神经元存活数未见明显变化 ;缺氧前两组海马细胞中Jun表达阳性细胞百分率分别为 1 0 .5 7%± 3 .45 %和1 0 .1 7%± 2 .84%。缺氧 4小时复氧 2 4小时~ 72小时后 ,神经元中Jun表达阳性百分率较缺氧前显著增多。经缺氧预处理的神经元缺氧———复氧后Jun表达阳性百分率明显低于对照组 ,神经元存活数明…  相似文献   
6.
目的观察人N-甲基-D-门冬氨酸受体(NMDAR,NR)主亚基(NR1)单克隆抗体mAbN1对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元Ca2 内流的影响。方法建立谷氨酸介导的大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,以mAbN1及MK-801分别预处理海马神经元,用Fluo-3/AM法,在激光扫描共聚焦显微镜下观察对细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。结果mAbN1能显著抑制谷氨酸所致海马神经元[Ca2 ]i升高,此作用强于MK-801,且其本身对生理状态下神经元[Ca2 ]i无影响。结论mAbN1的抗兴奋毒性作用可能是通过改变NR的蛋白质二级结构从而影响兴奋毒性作用中的Ca2 内流实现的。  相似文献   
7.
人重组白细胞介素—6对缺氧对后海马培养神经…   总被引:2,自引:1,他引:1  
用免疫组化方法,观察缺氧诱导体外培养大鼠海马神经细胞Fos表达及人重组白细胞介素-6(rhIL-6_的影响。结果显示,经rhIL-6卵育的海马神经细胞缺氧后Fos免疫反应一胸核的百分率和Fos反应阳性胸核的平均光密度均明显低于对照组,表明缺氧能诱导体外培养海马神经细胞Fos的表达,rhIL-6能抑制缺氧神经细胞Fos的表达。提示rhIL-6可能参与脑缺氧损伤的调控。  相似文献   
8.
采用免疫组织化学方法观察了重组人白细胞介素-1β、重组人白细胞介素-2和重组人白细胞介素-6对体外培养大鼠海马神经胶质细胞c-fos表达的影响。结果证明,培养12d的海马神经胶质细胞与重组人白细胞介素-1β(100U/ml)、重组人白细胞介素-2(200U/ml)和重组人白细胞介素-6(200U/ml)一起孵育2h后出现FOS-免疫反应阳性的细胞核,随着所给剂量的逐渐加大,FOS反应阳性胞核数量也  相似文献   
9.
目的:转染并筛选Lhx4高表达的PC12细胞株,观察Lhx4基因对PC12细胞的缺氧保护作用.方法:①用RT-PCR检测PC12细胞缺氧培养后Lhx4基因的表达变化;②Lhx4基因连接至pLXIN逆转录病毒载体,收集病毒上清,感染PC12细胞,G418筛选阳性克隆,PCR鉴定,所筛选的克隆缺氧培养;③通过台盼蓝染色和培养液中乳酸脱氢酶活性的检测评价PC12细胞的存活状态.结果和结论:PC12细胞缺氧培养4 h后Lhx4基因的表达明显上调;缺氧8 h后Lhx4基因表达开始下调.所筛选的Lhx4高表达转染细胞株表现出明显的缺氧耐受性,相同的损伤条件下,细胞的存活数目及生存状态明显优于对照组.说明Lhx4基因在PC12细胞的缺氧损伤保护中具有重要的作用.  相似文献   
10.
目的 观察N-甲基-D-门冬氯酸受体(NMDAR,NR)主亚基(NR1)M3M4环重组肽自身抗血清对不同浓度谷氨酸诱导的神经元死亡的保护作用。方法 用NR1 M3M4环重组肽免疫Balh/C(H-2^d)小鼠制备抗血清,用锥虫蓝染色法和原位末端标记(TUNEL)法观察抗血清对原代培养海马神经元兴奋毒性坏死和凋亡的保护效应。结果 在高浓度谷氨酸(500μmoL/L)条件下,阳性抗血清可以使神经元坏死减少16%;在低浓度谷氨酸(50μmol/L)作用下,阳性抗血清保护可使神经元凋亡率减少13%。结论 NMDAR重组肽自身免疫抗血清具有抗兴奋毒性作用,这一结论为免疫防治兴奋毒性脑损伤策略的建立提供了坚实的体外基础。  相似文献   
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