转录因子FOXC1促进胶质瘤细胞系U87的侵袭能力

目的：探讨转录因子FOXC1对人脑胶质瘤细胞系U87侵袭的促进作用。方法：qPCR、Western blot检测胶质瘤细胞系U87、U251及正常星型胶质细胞中FOXC1 mRNA和蛋白表达水平。将FOXC1-siRNA转染至U87细胞中,分别用qPCR、Western blot检测FOXC1-siRNA的转染效率。细胞划痕实验和Transwell实验检测U87细胞转染FOXC1-siRNA后对细胞侵袭能力的影响,利用 Western blot检测U87细胞上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）、标记蛋白（N-cadherin、Vimentin、E-cadherin）表达水平。结果：U87细胞下调FOXC1表达后侵袭能力明显减弱,上皮间质化相关通路蛋白（Snail1、β-catenin、Twist1）表达水平下降,上皮细胞标记蛋白表达水平E-cadherin表达水平升高、间质细胞标记蛋白N-cadherin、Vimentin表达水平降低。结论：转录因子FOXC1通过上皮间质化促进胶质瘤细胞的侵袭。     

醋酸棉酚通过诱导铁死亡抑制脑胶质瘤细胞生长

目的: 探讨醋酸棉酚（gossypol acetate,GAA）对人脑胶质瘤细胞铁死亡的影响。方法: 选取处于对数生长期的人脑胶质瘤U87MG、LN229和U251MG细胞,各分为2组,分别用0,10 μmol/L GAA处理,CCK-8法和克隆形成实验检测脑胶质瘤细胞增殖能力;实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法分别检测谷胱甘肽过氧化物酶4（glutathione peroxidase 4,GPX4） mRNA和蛋白表达水平;化学发光法检测还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛含量。另将3种人脑胶质瘤细胞分别用0、10 μmol/L GAA联合0、1 μmol/L Ferrostatin-1（铁死亡挽救剂）进行培养,CCK-8法检测细胞增殖率。结果: 与0 μmol/L GAA组相比,10 μmol/L GAA组U87MG、LN229和U251MG细胞相对增殖率和克隆形成能力明显下降（P均<0.05）,LN229和U251MG细胞中GPX4 mRNA和蛋白表达水平明显降低（P均<0.05）,GSH含量明显减少且代谢产物丙二醛含量明显增加（P<0.05）,而U87MG细胞内上述指标变化不明显（P＞0.05）。与10 μmol/L GAA+0 μmol/L Ferrostatin-1组相比,10 μmol/L GAA+1 μmol/L Ferrostatin-1组3种脑胶质瘤细胞相对增殖率明显升高（P均<0.05）。结论:GAA可以诱导脑胶质瘤细胞发生铁死亡,且LN229和U251MG细胞较U87MG细胞对GAA更敏感。     

褪黑素对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖和迁移的影响及机制探讨

目的:探讨褪黑素对内蒙古绒山羊毛囊干细胞增殖和迁移的影响及机制.方法:将培养后的内蒙古绒山羊毛囊干细胞分为空白对照组、褪黑素干预A组、褪黑素干预B组、褪黑素干预C组、IWR-1组、褪黑素+IWR-1组,利用CCK8实验检测各组细胞增殖活性,Transwell细胞迁移实验检测各组细胞的迁移数目.经Western Blot法检测各组LEF-1、β-catenin蛋白相对表达量.结果:伴随褪黑素浓度的增加,毛囊干细胞的活力值、迁移细胞数目有显著升高趋势.IWR-1组的细胞活力值、迁移细胞数目均显著低于褪黑素干预组(P<0.05);褪黑素+IWR-1组的细胞活力值、迁移细胞数目均显著高于IWR-1组(P<0.05).Western-blot检测结果显示,褪黑素干预组的β-catenin蛋白、LEF-1蛋白的相对表达量明显高于空白对照组(P<0.05);IWR-1组的β-catenin蛋白、LEF-1蛋白的相对表达量显著低于褪黑素干预组(P<0.05);褪黑素+IWR-1组的β-catenin蛋白、LEF-1蛋白的相对表达量显著高于IWR-1组(P<0.05).结论:褪黑素可能通过激活典型的Wnt/β-catenin通路促进毛囊干细胞的增殖与迁移.     

去泛素化酶USP9X对胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响

目的:通过检测放疗对胶质瘤细胞β-catenin及去泛素化酶USP9X表达的影响,以期了解去泛素化酶USP9X与胶质瘤细胞放射敏感性的关系。方法:培养胶质瘤细胞U251细胞株,通过不同放疗剂量照射后,Realtime PCR法检测细胞中USP9X与β-catenin基因表达,Western Blotting法检测USP9X与β-catenin的蛋白表达,流式细胞仪检测不同放射剂量处理后U251细胞凋亡水平。结果:Real Time PCR结果显示在1Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平最高,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin基因表达成下降趋势,WesternBlotting结果显示USP9x、β-catenin的蛋白表达量与基因表达水平成正相关,凋亡实验结果显示细胞凋亡率与放射剂量成正相关。结论:在1Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平最高,证明小剂量放疗可提高U251细胞的放射抵抗,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin的表达成下降趋势,证明USP9x与胶质瘤细胞的放射后凋亡水平相关。     

X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响

目的:探讨X射线对肺腺癌细胞粘附分子及其相关生物学特性的影响.方法:不同剂量X射线照射肺腺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖抑制;免疫细胞化学法蛋白水平检测细胞中E-cadherin及其连环蛋白β-catenin的表达;Transwell小室检测细胞的侵袭力.结果:X射线对A549细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性;照射后E-cadherin和β-catenin蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.05),其变化趋势是随照射剂量增加表达逐渐增加;Transwell小室结果表明随着照射剂量的增加.细胞侵袭力逐渐降低(P<0.05).结论:X射线上调A549细胞上粘附分子E-cadherin和β-catenin在细胞中的表达,增加细胞间的粘附力,降低肿瘤细胞的侵袭力,这可能是X射线抑制肺腺癌细胞转移的作用机制之一.     

GDNF 通过 AKT/β-catenin 调节人胶质瘤细胞增殖的研究

目的：研究胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)促进人胶质瘤细胞增殖的机制。方法将胶质瘤样本分为低级别胶质瘤组和高级别胶质瘤组,脑挫裂伤患者样本作为正常对照组,每组各12例;将胶质瘤细胞系 C6细胞分为细胞对照组、牛血清蛋白(BSA)组和 GDNF 组。CCK-8实验检测细胞增殖率,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组 AKT、p-AKT、β-catenin 和p-β-catenin 的表达。结果与正常对照组相比,胶质瘤组 AKT、p-AKT、β-catenin 和 p-β-catenin 的蛋白水平显著增加(P <0.05),且高级别胶质瘤组的蛋白水平明显高于低级别胶质瘤组(P <0.05)。CCK-8检测 C6胶质瘤细胞实验中,与细胞对照组相比, GDNF 组细胞增殖率明显增高(P <0.05),Akt 表达水平没有明显变化,而 p-Akt、β-catenin 和 p-β-catenin 的蛋白表达均显著增加(P <0.05)。结论GDNF 可能通过上调胶质瘤细胞 p-AKT、β-catenin 和 p-β-catenin 来促进胶质瘤细胞的增殖。     

蝙蝠葛苏林碱调控Akt/mTOR信号通路对胶质瘤细胞增殖及自噬的影响

目的 探讨蝙蝠葛苏林碱（DAS）对胶质瘤U251和U87细胞生长与增殖的影响及其分子机制。方法用2.5、5.0和10.0μmol/L DAS(DAS组)、10.0μmol/L替莫唑胺（TMZ组）和空白对照（对照组）处理U251和U87细胞。采用CCK-8法检测DAS对细胞活力的影响,细胞集落形成和Edu实验检测DAS对细胞增殖的影响,流式细胞术检测DAS对细胞凋亡的影响,透射电镜观察自噬小体的形成,Western blotting检测DAS对胶质瘤细胞凋亡、自噬和Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,不同浓度DAS组胶质瘤细胞活力逐渐降低（P <0.05）,DAS组细胞活力低于TMZ组（P <0.05）。胶质瘤U251和U87细胞IC50分别为5.11μmol/L和6.35μmol/L。Edu和克隆结果显示,DAS能抑制胶质瘤细胞增殖,且随着药物浓度升高细胞增殖逐渐减少（P <0.05）。流式细胞术结果显示,DAS能诱导胶质瘤细胞凋亡,且随着药物浓度升高细胞凋亡增加（P <0.05）。DAS能增加胶质瘤细胞Bax、L...     

脑神经胶质瘤细胞癌胚抗原相关细胞黏附分子1对替莫唑胺化疗敏感性的作用及其机制研究

目的 探究脑神经胶质瘤细胞癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)表达对替莫唑胺（TMZ）化疗敏感性的作用及其机制研究。方法 体外培养TMZ耐药人脑神经胶质瘤细胞系U251/TMZ细胞，采用空载质粒或siRNA转染U251/TMZ细胞，分为空载组、TMZ组、siRNA组及siRNA+TMZ组，转染48 h后，GFP荧光检测细胞转染效率。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞CEACAM1 mRNA的表达，MTT法检测U251/TMZ细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验和Western blotting检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果 与空载组比较，siRNA组、siRNA+TMZ组CEACAM1 mRNA相对表达量降低（P <0.05），细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高（P <0.05）,Wnt1蛋白表达水平、β-catenin及c-myc蛋白相对表达量降低（P <0.05）；与TMZ组比较，siRNA组、siRNA+TMZ组CEACAM1 mRNA相对表达量降低（P <0.05），细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高（P <...     

siRNA干扰相互作用蛋白1表达抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移

目的探讨小干扰RNA（siRNA）干扰降低PC4和SFRS1相互作用蛋白1（PSIP1）的表达对人胶质瘤U87细胞侵袭和迁移 的影响并初步探讨其机制。方法采用化学合成靶向PSIP1的siRNA,脂质体法转染U87细胞,用Real-time PCR检测RNA干 扰效率;Transwell侵袭实验测细胞侵袭能力;划痕实验检测其迁移能力;干扰PSIP1表达后,Western blot 检测间质细胞来源的 N-cadherin、β-catenin蛋白和转录因子Slug的表达。结果PSIP1-siRNA 转染胶质瘤U87细胞后,PSIP1的mRNA水平及蛋白 水平明显下降（P<0.001）,U87 细胞侵袭和迁移能力下降,与阴性转染组及未转染组相比差异有统计学意义（P<0.001,P< 0.001）,Western blot 显示,间质细胞来源的N-cadherin、β-catenin 蛋白表达量降低,同时与上皮间质转化（EMT）相关的转录因 子Slug 的表达降低。结论在胶质瘤中,抑制PSIP1 的表达可抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移,N-cadherin、β-catenin 蛋白和转录 因子Slug的表达量降低,提示PSIP1 可通过调控经典Wnt/β-catenin 信号通路来调节Slug 的表达,进而调控EMT,从而参与胶 质瘤U87 细胞的侵袭及迁移。     

斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U-251MG生长、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨斑蝥素酸镁对人星形胶质瘤细胞U 251MG生长、凋亡和侵袭的影响及机制。方法 体外培养人星形胶质瘤细胞U 251MG,分为空白组（Control组）、低剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 5μM组）、中剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 10μM组）和高剂量斑蝥素酸镁组（Canthardin 20μM组）。采用克隆形成实验检测细胞增殖情况;Hocest染色检测细胞凋亡情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;Western blot 检测相关蛋白表达情况。结果 平板克隆实验结果显示,斑蝥素酸镁可以明显抑制人星形胶质瘤细胞U 251MG的增殖,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Hocest染色结果显示,斑蝥素酸镁可以明显促进人星形胶质瘤细胞的凋亡,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Transwell小室实验显示,斑蝥素酸镁可以显著抑制细胞的侵袭,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;Western blot 检测结果显示,斑蝥素酸镁处理后,人星形胶质瘤细胞中PCNA蛋白、VEGF蛋白、Bax蛋白及p-AKT蛋白表达均显著降低（均P＜0.05）,Caspase 3蛋白、Bcl 2蛋白表达显著升高（P＜0.05）,AKT总蛋白表达无显著差异（P＞0.05）。 结论 斑蝥素酸镁可以通过调控Akt信号通路抑制人星形胶质瘤细胞U-251MG的增殖和侵袭,并促进其凋亡,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性。     

二甲双胍诱导铁死亡抑制胶质瘤细胞增殖作用机制的研究

目的 探讨二甲双胍通过诱导铁死亡抑制胶质瘤细胞增殖的作用和机制。方法 常规培养正常人神经胶质细胞和胶质瘤细胞,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞脂质过氧化产物[5-、12-和15-羟二十碳四烯酸（HETE）]的变化,Western blot检测细胞铁死亡标志蛋白谷胱甘肽过氧化物酶（GPX4）和链脂肪酸-CoA连接酶（ACSL-4）表达;二甲双胍处理胶质瘤细胞U87,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力改变,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞LDH释放量,5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EdU）染色检测细胞增殖,丙二醛（MDA）试剂盒检测细胞MDA水平,流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）水平,Western blot检测细胞铁死亡标志蛋白GPX4和ACSL-4蛋白表达;二甲双胍联合铁死亡抑制剂（ferrostatin-1）处理U87细胞,进一步验证胶质瘤细胞铁死亡机制。结果 与正常胶质细胞比较,胶质瘤细胞脂质过氧化产物5-、12-和15-HETE水平降低,铁死亡标志蛋白GPX4表达增多,ACSL-4蛋白表达减少;二甲双胍处理U87细胞后,铁死亡蛋白G...     

大鼠C6脑胶质瘤X刀治疗后细胞周期的改变及相关蛋白的表达

目的通过观察大鼠C6脑胶质瘤模型经X射线照射后细胞周期的改变及相关蛋白P16、CyclinD1和Cdk4的表达,探讨辐射对肿瘤的杀伤机制。方法建立大鼠C6脑胶质瘤颅内接种模型,通过免疫组化法检测其经X射线照射后P16、CyclinD1和Cdk4的表达情况及应用流式细胞仪检测其细胞周期的变化。结果肿瘤经X射线照射后,胶质瘤细胞出现G1百分数增多,S期细胞百分数减少,诱导发生了G1阻滞。P16蛋白表达量显著增高,Cyclin D1和Cdk4表达显著下降,与对照组相比具有显著性(P<0.05);且这种变化具有时程效应,即P16蛋白在24h时表达最高,CyclinD1、Cdk4在48h时表达最低。结论辐射可诱导细胞发生G1阻滞,P16、CyclinD1和Cdk4在辐射诱导的G1阻滞中起着重要的作用。     

miR-106a对胶质瘤增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA（miR）-106a对人胶质瘤细胞中腺瘤样息肉（APC）基因的靶向调控作用以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集2020年1月至2021年12月浙江省立同德医院减压切除的10例胶质瘤组织和10例对照组织。采用实时荧光定量PCR法检测miR-106a在胶质瘤组织和对照脑组织中、在胶质瘤LN229、U251和U87等细胞系中的表达水平并作比较。使用miR-106a抑制物转染LN229和U251细胞,采用克隆形成实验检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过TOP/FOP荧光素酶实验检测荧光素酶活性,采用Western blot法检测Wnt通路相关蛋白和核内β-连环蛋白（β-catenin）的表达。采用qRT-PCR和Western blot法检测APC的mRNA和蛋白表达水平。利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-106a和APC的靶向关系。通过表型拯救实验检测miR-106a靶向APC对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果 miR-106a在胶质瘤组织和细胞系中高表达。抑制miR-106a表达降低胶质瘤细胞的增殖水平,提高胶质瘤细胞的凋亡水平,并抑制了Wnt/...     

人脑胶质瘤wnt1、β-catenin、gsk-3β的表达

目的 探讨wnt1信号转导通路主要表达蛋白wnt1、β-catenin、gsk-3β在人脑胶质瘤的表达，并研究其与细胞增殖的相关性。方法 利用免疫组化方法检测wnt1、β—catenin、gsk-3β在正常脑组织、低／高级别胶质瘤细胞中的表达。结果 正常脑组织中wnt1、β—catenin、gsk-3β表达均为阴性或弱阳性；wnt1、β-catenin表达均随胶质瘤级别增高而表达增高，且表达均与肿瘤级别成正相关（P〈0．01），wnt1、β-catenin的表达水平彼此间均呈正相关（P〈0．01）；而gsk-3β随胶质瘤级别增高而表达降低，表达与组织分级成负相关（P〈0．01）。结论 wnt1和β—catenin表达异常增加及gsk-3β表达异常减少均是胶质瘤发生、发展的重要因素。     

靶向抑制 DNMT1对人脑胶质瘤细胞增殖的影响

目的：应用靶向 DNA 甲基转移酶1（DNMT1）基因的小干扰 RNA（siRNA）重组质粒来转染体外培养的人脑胶质瘤细胞,观察其对胶质瘤细胞增殖活性的影响。方法实验组予以 siRNA-DNMT1序列进行转染,对照组仅予以 siRNA-阴性对照序列。应用 qRT-PCR 分析 DNMT1基因表达变化, Western blot 法分析 DNMT1、PCNA 和 Cyclin D1蛋白表达变化,MTT 法检测细胞增殖生长能力,细胞克隆法分析细胞增殖克隆形成能力。结果与对照组比较,qRT-PCR 结果表明实验组 DNMT1 mRNA 表达明显减少（ P <0.01）;Western blot 法表明实验组 DNMT1、PCNA 和 Cyclin D1蛋白表达水平明显降低（P <0.01）;MTT 法检测表明实验组中活细胞数明显低于对照组（P <0.05）;细胞克隆法表明实验组细胞的增殖克隆形成能力明显低于对照组（ P <0.01）。结论靶向 DNMT1基因的 siRNA 重组质粒可减少人脑胶质瘤细胞内 DNMT1基因的表达,从而抑制胶质瘤细胞的增殖。     

敲减长链非编码RNA ATB抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 采用shRNA ATB敲减胶质瘤U87细胞中ATB后,研究其对人胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 本研究采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测ATB在人胶质瘤细胞系U87与正常人脑胶质细胞HEB中的表达情况.并在此基础上构建了ATB表达载体shRNA ATB 质粒,利用其转染人胶质瘤U87细胞株,获取低表达ATB的U87细胞.应用MTT法检测敲减ATB后对U87细胞增殖的影响;应用细胞克隆实验检测敲减ATB后对U87细胞克隆增殖能力的影响;应用Transwell实验检测敲减ATB后对U87细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 qRT-PCR结果显示,与正常人脑胶质细胞HEB相比,人脑胶质瘤细胞系U87中ATB 表达明显上调(P<0.01);与shRNA对照组相比,转染了shRNA-ATB实验组能显著减少ATB 水平(P<0.01);细胞克隆实验显示shRNA-ATB实验组细胞克隆形成能力较shRNA对照组明显降低(P<0.01);MTT结果表明敲减细胞内ATB后细胞增殖的速率明显低于shRNA对照组(P<0.01).此外,Transwell实验进一步验证了敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01).结论 靶向敲减U87细胞中的ATB后能够抑制其增殖、迁移和侵袭,表明ATB基因可能是胶质瘤患者的潜在治疗靶点.     

上皮-间质转化胶质瘤细胞的干细胞样特性及白藜芦醇对其干细胞样特性的抑制作用

目的：探讨发生上皮-间质转化（EMT）的胶质瘤细胞的干细胞样特性,阐明白藜芦醇（Res）对其干细胞样特性的抑制作用。方法：采用TGF-β1诱导胶质瘤U87细胞发生EMT,倒置显微镜观察细胞的形态表现,Western blotting法检测细胞间质标志物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和诱导EMT的转录因子（Snail、Slug、Zeb1和Twist1）表达水平。确定胶质瘤细胞发生EMT后,实验分为对照组（U87细胞不做处理）、EMT组（TGF-β1诱导胶质瘤细胞发生EMT）和Res处理组（Res处理发生EMT的U87细胞）,检测各组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数和细胞中干细胞标志物（Bmi1和Sox2）表达水平。结果：经TGF-β1处理48 h的胶质瘤U87细胞表现出分散、拉长和类似成纤维细胞的外观。与对照组比较,不同浓度TGF-β1组胶质瘤细胞中N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Zeb1和Twist1表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,表明胶质瘤U87细胞发生EMT改变。与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数明显增多（P<0.01）,胶质瘤细胞中干细胞标志物Bmi1和Sox2表达水平升高（P<0.05或P<0.01）。与EMT组比较,Res处理组胶质瘤U87细胞二代胶质球形成数明显减少（P<0.01）,胶质瘤细胞中干细胞标志物Bmi1和Sox2表达水平明显降低（P<0.01）。结论：发生EMT的胶质瘤U87细胞呈现干细胞样特性,Res能抑制其干细胞样特性。     

HOXA4调控Wnt/β-cateni n信号通路对裸鼠移植胶质瘤的抑制作用

目的：建立人胶质瘤荷瘤裸鼠模型,探讨HOXA4对胶质瘤U251细胞体内生长的影响以及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及其机制。方法：采用慢病毒转染,建立胶质瘤U251细胞稳转同源异型盒基因A4（HOXA4） siRNA细胞系（si-HOXA4）和稳转空载体阴性对照U251细胞系（si-NC）。取对数生长期U251、si-NC和si-HOXA4细胞接种于BALB/c裸鼠颈背部皮下,建立荷瘤裸鼠模型,命名为对照组、si-NC组和si-HOXA4组。观察各组裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线;培养21 d处死裸鼠后剥离肿瘤组织,测量肿瘤体积和质量;qRT-PCR法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、CTNNB1和Gsk3β mRNA相对表达量;免疫组织化学（IHC）法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、β-catenin、Gsk3β、CyclinD1和P53蛋白表达水平。结果：si-HOXA4组裸鼠肿瘤体积和质量小于si-NC组和对照组（P<0.05）;si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中HOXA4 mRNA相对表达量和HOXA4蛋白表达水平低于其他2组（P<0.05）;与si-NC组和对照组比较,si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中CTNNB1 mRNA相对表达量降低（P<0.05）,β-catenin和CyclinD1蛋白表达水平亦降低（P<0.05）,但Gsk3β和P53蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：抑制人胶质瘤U251细胞HOXA4表达可在体内通过Wnt/β-catenin信号通路调控CyclinD1和P53蛋白的表达,从而抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长。     

雷公藤甲素通过Wnt/β-catenin通路抑制胶质瘤细胞增殖的机制研究

目的 探究雷公藤甲素（triptolide,TPL）对胶质瘤细胞系（U251细胞）增殖的影响,并探索其潜在分子机制。方法 取胶质瘤细胞分为空白对照组、TPL组及TPL+HLY78(Wnt活化剂)组。除空白对照组不做干预外,TPL组以100 nM TPL处理24 h,TPL+HLY78组以100 nM TPL处理24 h后,10μM HLY78处理30 min。分别采用CCK-8、细胞划痕、Transwell方法分别检测U251细胞增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测上皮-间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-钙粘蛋白（E-cadherin）、N-钙粘蛋白（N-cadherin）表达以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达;免疫荧光检测β-连环蛋白（β-catenin）的表达。结果 与空白对照组相比,TPL组细胞增殖、侵袭和迁移能力均显著降低（P<0.01）;E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.01）,N-cadherin蛋白表达显著降低（P<0.01）;细胞周期蛋白D1(Reco...     

Wnt/β-catenin信号通路在体外调控诱导性多能干细胞向神经干细胞分化中的作用及机制研究

[目的]探讨Wnt/β-catenin信号通路在体外调控诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)向神经干细胞分化中的作用及机制。[方法]体外培养小鼠iPS,采用N2B27培养基联合维甲酸(retinoic acid,RA)诱导法,诱导其向神经干细胞分化;免疫荧光法检测iPS来源神经干细胞中的巢蛋白(Nestin)、β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)的表达情况;将细胞分为正常组、Wnt3a组、Dickkopf相关蛋白-1(Dickkopf-1,DKK-1)组和IWR-1组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)、Western blot分别检测iPS神经分化过程中Nestin、β-tubulinⅢ及β-catenin的表达情况;采用悬浮培养法检测Wnt/β-catenin信号通路对iPS来源神经干细胞增殖能力的影响。[结果]iPS来源神经干细胞表达神经干细胞的表面特异性标志物Nestin,以及早期神经元特异性标志物β-tubulinⅢ;iPS向神经干细胞分化过程中,Nestin、β-tubulinⅢ的表达均升高(P0.05,P0.05),β-catenin表达降低(P0.05);采用Wnt3a处理后,iPS来源神经干细胞增殖能力较弱;采用DKK-1和IWR-1处理后,iPS来源神经干细胞增殖能力较强,且Nestin表达提高(P0.01),β-catenin表达降低(P0.05)。[结论]Wnt/β-catenin信号通路在iPS向神经干细胞诱导分化过程中受到抑制;采用DKK-1和IWR-1下调Wnt/β-catenin信号通路,可促进iPS向神经干细胞分化,提高iPS来源神经干细胞的增殖能力,提示Wnt/β-catenin信号通路在iPS向神经干细胞分化过程中具有负调控的作用。