异土木香内酯通过介导ROS 产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡

目的:探讨异土木香内酯通过介导ROS 产生及线粒体损伤诱导人宫颈癌Hela 细胞凋亡机制。方法:不同终浓度异土木香内酯体外诱导Hela 细胞24 h 及加入抑制剂NAC 作为实验组,以正常细胞作为对照组,MTT 测定细胞活性;Hoechst 33258 染色观察Hela 细胞凋亡细胞核变化;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期和ROS 产生变化和MMP 水平;Western blot 方法测定细胞色素C 蛋白、Bcl-2、Bax 和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:异土木香内酯以浓度依赖性抑制Hela 细胞生长;20 mol/ L 和40 mol/ L 终浓度异土木香内酯处理Hela 细胞24 h 后,细胞核出现典型的核固缩及核碎裂凋亡形态,细胞凋亡率增加,可抑制细胞生长于S 期,细胞内均可诱导ROS 的产生。ROS 抑制剂NAC 可以明显阻断异土木香内酯对Hela 细胞生长的抑制作用,降低细胞凋亡率;20 mol/ L 和40 mol/ L 终浓度异土木香内酯处理Hela 细胞24 h后,Bax 蛋白表达水平明显增加而Bcl鄄2 蛋白表达水平明显降低,同时Caspase-3 蛋白也被活化,出现cleaved Caspase 蛋白,线粒体内细胞色素C 蛋白释放增加。结论:异土木香内酯在体外可通过介导ROS 产生及线粒体损伤来抑制人宫颈癌Hela 细胞生长且诱导其凋亡,且伴随Bax 蛋白表达上调、Bcl-2 蛋白表达下调及Caspase-3 活化相关变化。     

8-硝基白杨素对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察8-硝基白杨素(8-NOChR)抑制体外培养人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导凋亡作用。方法：体外培养人宫颈癌Hela细胞系细胞。MTT比色法测定Hela细胞增殖活性。软琼脂培养克隆形成法检测Hela细胞集落形成能力。AO/EB染色荧光显微镜观察Hela细胞凋亡形态学改变。DNA凝胶电泳观察梯形DNA条带。结果：MTT比色测定显示，8-NOChR抑制Hela细胞增殖，呈剂量依赖性。软琼脂培养克隆形成法检测表明，8-NOChR显著抑制Hela细胞集落形成，呈剂量依赖性。AO/EB染色荧光显微镜观察发现，8-NOChR诱导Hela细胞呈现典型凋亡细胞形态特征。8-NOChR（30μmol/L）处理Hela细胞72h，琼脂糖凝胶电泳出现“梯形”DNA条带。结论：8-NOChR具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导细胞凋亡作用     

钙离子对重组创伤弧菌溶细胞素诱导THP-1细胞损伤的影响机制

目的 研究重组创伤弧菌溶细胞素( rVvhA)诱导人单核细胞白血病细胞(THP-1)的凋亡机制及其Ca2+的变化.方法 采用CCK-8法、激光共聚焦显微镜结合Fluo 3/AM法、流式细胞术结合AnnexinV -PI标记等检测rVvhA对THP-1细胞的影响,并观察胞内Ca2+浓度变化.结 果rVvhA可诱导THP-1细胞发生凋亡并引起细胞内Ca2+浓度升高,细胞内钙离子螯合剂BAPTA-AM处理组胞内钙离子升高幅度远高于细胞外钙离子螯合剂EGTA处理组.结论 rVvhA具有诱导THP-1细胞凋亡的生物学活性,并能引起细胞内Ca2+浓度升高,升高的Ca2+主要源于胞外钙离子内流.     

铁离子对Caco-2细胞内钙离子转运的影响及钙离子浓度变化与细胞凋亡关系的研究

目的研究细胞外铁离子(Fe^3 )浓度变化对钙离子(Caco-22)细胞内Ca^2 转运的影响及细胞内钙离子浓度升高与Caco-2细胞凋亡的关系。方法采用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞技术进行观察与检测。结果(1)利用激光共聚焦扫描显微镜(cLSM)观察发现,随着Caco-2细胞外Fe^3 浓度的减少(DFO终浓度为1130～300μmol／L),Ca^2 向细胞内的转运量增加;而随着细胞外Fe^3 浓度的增加(FAC终浓度为10～100μmol／L),Ca^2 向细胞内的转运呈降低趋势;(2)经A23187,和Fluo-3,AM处理后Caco-2细胞的存活率较高,达90％以上(用荧光素二醋酸酯检测);(3)A23187升高Caco-2细胞的胞内Ca^2 浓度,呈剂量依赖性;经流式细胞技术(FCM)检测发现胞内Ca^2 浓度增加具有诱导Caco-2细胞凋亡的作用。结论Caco-2细胞外Fe^3 浓度的减少有促进Ca^2 向细胞内转运的作用。但胞外Fe^3 浓度增加时有抑制Ca^2 向胞内转运的作用;胞内Ca^2 浓度增加对Caco-2细胞凋亡具有诱导作用。     

抗CD28＋B7．1单抗共刺激T细胞诱导肝癌细胞凋亡的第二信使系统研究

目的：探讨T淋巴细胞活化、增殖、诱导肝癌细胞凋亡过程中第二信使系统的调控机制。方法：用CD28＋B7．1（CD80）单克隆抗体共刺激T淋巴细胞诱导肝癌细胞（BLE－7402）凋亡,测定不同诱导时间T细胞内cAMP,cGMP和Ca^2 的浓度改变及肝癌细胞凋亡情况。结果：活化的T淋巴细胞中,cAMP浓度在初期短暂升高,继而快速下降,作用于肝癌细胞后逐步回升至1－2倍,而细胞内cGMP的浓度急剧升高6－7倍,Ca^2 浓度也显著增加2－3倍,且均在第4天达最高值,与癌细胞的凋亡呈正相关,结论：T淋巴细胞内第二信使系统cAMP、cGMP和Ca^2 的水平与细胞的活化增殖、杀伤效应密切相关。     

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物诱导HepG2细胞凋亡研究

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物（Silybin-phosphatidylcholine Compound,SPC）诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制。方法不同浓度SPC处理肝癌HepG2细胞,通过MTT法、细胞形态学观察、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察SPC对HepG2细胞的生长抑制作用及其细胞凋亡的影响。结果SPC可抑制HepG2细胞的增殖。其GI50为46．8μg/ml;50μg／ml的SPC作用HepG2细胞24h后,细胞出现早期调亡的形态;75μg／ml、100μg／ml的SPC对HepG2细胞凋亡率分别为（17．22±3．45）％和（25．50±5．72）％;50μg／ml、75μg／ml、100μg／ml的SPC作用于HepG2细胞24h后,细胞内的Ca^2＋浓度显著升高（P〈0．05,P〈0．01）。结论SPC能够诱导肝癌细胞系HepG2细胞凋亡,其机制与SPC升高细胞内Ca^2＋浓度有关。     

槲皮素诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的作用

目的:检测槲皮素体外对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,并探讨线粒体在诱导凋亡机制中的作用.方法:采用酸性磷酸酶法检测细胞增殖抑制率;丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)荧光染色观测细胞形态结构变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位（△ψm）.结果:槲皮素对人宫颈癌Hela细胞有明显的增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.经槲皮素作用48 h后,AO/EB染色可见细胞呈凋亡形态学改变.100 μmol/L槲皮素作用Hela细胞24、48 h后,与对照组相比线粒体膜电位下降.结论:槲皮素体外能抑制人宫颈癌Hela细胞生长,引起线粒体膜电位下降,诱导细胞凋亡.     

毒胡萝卜内酯对人晶状体上皮细胞HLE-B3生长抑制作用的研究

目的： 探讨青胡萝卜内酯(TG)对人晶状体上皮细胞HLE-B3细胞系的生长抑制作用及其机制。方法：采用MTT法分析TG对HLE-B3细胞生长抑制作用，流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳观察TG对HLE-B3细胞凋亡诱导作用，Western blotting分析凋亡诱导过程中的相关蛋白的变化。此外，应用荧光分光光度计分析处理后不同时间的细胞内Ca2+浓度变化。结果：不同剂量的TG对HLE-B3细胞生长有不同的抑制作用，并呈现出时间和剂量依赖性关系，12 h、24 h和48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为：（2.27±0.61）μmol/L、（0.77±0.12）μmol/L和（0.15±0.04）μmol/L。0.01、0.1、1和10μmol/L TG明显诱导HLE-B3细胞凋亡。在凋亡诱导过程中，1 μmol/L的TG孵育细胞4 h后开始抑制SERCA2蛋白，引起细胞胞浆内Ca2+负载，并且刺激凋亡诱导蛋白Bax和凋亡执行蛋白caspase3的表达增加。结论：TG能够抑制HLE-B3细胞生长并诱导其凋亡，其机制可能是促发了内质网途径介导的凋亡过程。     

氧化应激诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究(英)

目的：直接暴露细胞于活性氧能诱导发生凋亡，本文研究氧化应激诱导HepG2肝癌细胞的死亡及其机制。方法：暴露细胞于2 mmol/L过氧化氢产生氧化应激，用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡，用荧光染色法检测细胞线粒体膜电位变化，Western blotting检测细胞浆中细胞色素c变化，fluorometric assay kit检测caspase活性变化。结果：氧化应激作用于HepG2细胞后12 h开始发生凋亡；氧化应激作用后4 h，细胞线粒体膜电位明显下降；胞浆中细胞色素c浓度呈时间依赖性增高；氧化应激作用8 h、12 h后细胞内caspase-3、caspase-9活性分别升高6.7及3.6倍，但caspase-8活性无变化。结论：氧化应激能诱导HepG2肝癌细胞发生凋亡，其途径与线粒体通路及caspase激活有关。     

家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响.采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响.并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响.Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象.因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生.     

长春新碱诱导的自噬性凋亡与细胞内游离Ca~(2+)浓度的相关性研究

目的　研究长春新碱 (VCR)诱导的L 0 2细胞自噬性凋亡时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 +]i)的变化 ,以及自噬特异性抑制剂 3 methyladenine(3MA)对此自噬性凋亡和 [Ca2 +]i的影响。方法　应用已建立的VCR诱导L 0 2细胞自噬性凋亡模型 ,使用电镜、流式细胞术检测细胞凋亡 ;用Fluo 3/AM荧光探针经流式细胞仪测定L 0 2细胞平均 [Ca2 +]i。结果　电镜及流式细胞术检测证实VCR诱导L 0 2细胞发生了自噬性凋亡 ,此凋亡过程中 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显 :3MA可显著抑制VCR所致的 [Ca2 +]i升高并能降低凋亡细胞比例。结论　在体外条件下VCR可以诱导L 0 2细胞自噬性凋亡 ,其发生可能与VCR导致 [Ca2 +]i升高有关 ;3MA可能通过抑制 [Ca2 +]i升高而抑制自噬及VCR所致的自噬性凋亡。     

蒺藜皂苷对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡及细胞内钙变化的作用

目的： 观察蒺藜皂苷(TTLS)对缺氧/复氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡及细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法： 原代培养大鼠皮层神经元，建立缺氧/复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。比色法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放漏出率；Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙平均荧光值变化。结果： 缺氧3 h复氧12 h可诱导出皮层神经元凋亡，引起细胞内钙离子浓度增高,高于对照组（P<0.01）。蒺藜皂苷(0.025 g/L)能明显降低缺氧/复氧诱导的神经元凋亡，并可降低细胞内钙浓度,与模型组比较有显著差异（P<0.01）。结论： 蒺藜皂苷可降低由缺氧/复氧诱导的皮层神经元的凋亡，减轻细胞损伤，这种作用机制可能与其抑制神经细胞内钙超载有关。     

氯化钴预处理减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡

目的　研究氯化钴 (CoCl2 )预处理对大鼠海马神经元缺氧 复氧后凋亡的影响及其机制。　方法　用CoCl2 处理原代培养大鼠海马神经元 ,并使其暴露于无氧环境。用TUNEL染色法和激光共聚焦显微镜分别检测缺氧后细胞凋亡率以及细胞线粒体膜电位和胞内游离钙。　结果　CoCl2 预处理明显减少海马神经元在缺氧 复氧后的凋亡数 ,并对急性缺氧期间海马神经元的细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位具有稳定作用。　结论　CoCl2 预处理对急性缺氧引起的海马神经元凋亡可能具有保护作用 ,其机制可能与其稳定缺氧时细胞内Ca2 +浓度和线粒体膜电位有关。     

耳蜗外毛细胞两种胞内钙库的初步探讨

为探讨毛细胞胞内钙库的种类 ,本文观察了在无钠、无钙和含镧液体中 ,在不受胞外 Ca2 +内流和质膜上 Ca2 +转运机制影响的条件下 ,和在三磷酸肌醇敏感钙库的工具药 thapsigargin和 ryanodine敏感钙库的工具药 caffeine作用下 ,毛细胞胞内游离钙([Ca2 + ] i)的变化过程。分离的豚鼠耳蜗外毛细胞经钙敏荧光染料 5μmol/L fluo-3染色后 ,用激光扫描共聚焦显微镜监测 ,以 fluo-3荧光相对值指示毛细胞 [Ca2 + ] i的高低。 3 0 nmol/L thapsigargin使外毛细胞 [Ca2 + ] i由静态值 1.0增至 1.64± 0 .76,再加入 10mmol/L caffeine后更增至 2 .45± 1.5 9(x± s,n=11,F=7.90 ,P<0 .0 1)。Q值检验示两种试剂引起外毛细胞 [Ca2 + ] i增高程度的差别有极显著意义 (P<0 .0 1) ,表明毛细胞内有对三磷酸肌醇敏感和对 ryanodine敏感的两种钙库参与了胞内 Ca2 + 释放机制     

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化前后基因及Ca2+浓度的变化

背景：单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside,GM1)在神经细胞的生长发育、分化、再生和细胞内外信息传递等多种生理过程中发挥重要作用。 目的：探讨GM1对骨髓间充质干细胞按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面和细胞内游离Ca2+浓度的变化。 方法：分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入50 mmol/L神经节苷脂设为GM1组,预培养24 h后按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,设置对照组,采用免疫组化和Realtime PCR技术分别检测诱导前后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。 结果与结论：①加入GM1组诱导分化后较对照组生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白表达水平增高(P < 0.05),GM1能够促骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。②更换诱导液后,两组细胞内荧光强度逐渐增加,到100 s 达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min 时细胞荧光强度仍高于诱导前,加入GM1组,细胞内游离Ca2+浓度较对照组有所增加(P < 0.05)。说明GM1能够促进细胞内Ca2+浓度增加,游离Ca2+在诱导过程中可能有促进作用。③诱导后生长相关蛋白43、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白和神经巢蛋白基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控。     

A transient acidification linked to intracellular Ca2 in anti-μ-stimulated human B-lymphocytes

Mitogen-induced cellular proliferation is in many cell types preceded by rapid changes in intracellular pH and free Ca²⁺ concentration. We studied the patterns of pH and Ca²⁺ changes in normal resting human B-lymphocytes after exposure to and-μ antibodies and the monoclonal antibody 1F5, reactive with the CD20 antigen, both able to activate resting B-lymphocytes to enter the G₁ phase of the cell cycle. Monitoring intracellular pH with the pH-sensitive, fluorescent dye, 2',7'-bis(carboxyethyl)-5,6-carboxy-fluorescein, we demonstrated that poly- and monoclonal anti-μ antibodies induced a rapid (maximum change within 2 min) intracellular acidification of 0.06 pH units followed by a slower (10–15 min) alkalinization towards, or slightly above, the resting pH of 6.88. The acidification response was amiloride-resistant, whereas the return to baseline was sensitive. Intracellular free Ca²⁺ was measured by using the fluorescent Ca²⁺ dye, indo-i. Exposure of cells to anti-/i resulted in a rapid increase (maximum change within 2 min) in cytoplasmic Ca²⁺ of 340 nM and a slower decline in fluorescence back to baseline of about 180 nM. In contrast to anti-μ, 1F5 caused no change in cytoplasmic Ca²⁺ and pH. However, the Ca²⁺ ionophore ionomycin at low concentrations mimicked the Ca²⁺ response as well as the pH response to anti-μ. In Ca²⁺-free solutions the intracellular Ca²⁺ stores are usually rapidly depleted and, indeed, the Ca²⁺ and pH responses to anti-μ were reduced after 5 min and almost abolished after 35 min under such conditions. Our data therefore suggest that the anti-μ-induced rapid acidification is the result of increased intracellular Ca²⁺ and dependent on it.     

低氧与缺血诱导培养海马和皮质神经元钙应答反应的比较

目的：钙作为重要信使参与多种生理和病理代谢过程,而且在缺血性神经元损伤机制中起着重要的作用。本实验模拟脑缺血的病理生化改变,用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）和Fluo-3荧光探针标记技术,观察低氧缺血状态下体外培养的海马,皮质神经元内钙浓度的变化。方法：用100μmol/L氰化钠造成细胞低氧;100μmol/L氰化钠和3.5mmol/L碘醋酸盐模拟在体完全性脑缺血;1mmol/LL-谷氨酸模拟在体脑缺血时兴奋性氨基酸大量释放;无葡萄糖介质剥夺细胞能量代谢的底物。结果：低氧使海马神经元[Ca^2 ]i显著升高,但有两种不同的钙振荡现象,谷氨酸引起海马神经元[Ca^2 ]i持续升高,但峰值低于低氧组,缺血组未见[Ca^2 ]i大幅升高,葡萄糖缺如不引起[Ca^2 ]i升高,结论：低氧和谷氨酸引起的神经元损害是能量依赖性的,轻度酸中毒可阻止胞内Ca^ 升高,糖对神经元具有保护作用,但单纯无糖引起的神经元损害与Ca^2 超载机制无关。     

急性低氧大鼠肺动脉平滑肌内质网钙信号的变化及意义

目的：观察急性低氧大鼠肺动脉平滑肌内质网钙信号的变化及意义。方法:细胞水平：钙荧光探针(Fura-2/AM)负载大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs），荧光分光光度法，细胞外液无Ca2+及含Ca2+，在常氧（37 ℃、5% CO2、21 %O2、74 %N2 ）和急性低氧(37 ℃、5% CO2、2% O2、93 %N2)时，检测理阿诺碱（RD）和环匹阿尼酸（CPA）等对细胞浆内游离钙离子浓度（［Ca2+］i）的影响；离体血管环水平：相同条件，离体血管灌流方法检测肺动脉环张力变化。结果:(1)急性低氧时［Ca2+］i升高：常氧组［Ca2+］i为（96.99±7.16） nmol/L，低氧组为(257.06±32.48) nmol/L (P<0.01)。(2)与低氧组比较，预先用RD或普鲁卡因(procain)抑制内质网理阿诺碱受体敏感钙库，随后再给予低氧刺激时［Ca2+］i不升高，为（100.91±11.21） nmol/L (P<0.01)；而用CPA或thapsigargin（TG）抑制内质网摄取Ca2+，再给低氧刺激时［Ca2+］i呈升高状态(P>0.05)，而在细胞外液含钙及低氧下CPA及TG引起［Ca2+］i进一步升高(P<0.05)。(3)低氧引起肺动脉环收缩：常氧对基础张力无影响，低氧引起肺动脉环收缩，最大收缩张力达（49.28±8.64） g/g,P<0.01。(4)与低氧组比较，预先用RD或procain抑制内质网理阿诺碱受体敏感钙库，再给予低氧刺激，肺动脉环不收缩，最大收缩张力（3.75±1.14） g/g, P<0.01；而用CPA或TG后，再给予低氧刺激，肺动脉环呈收缩状态(P>0.05)，而在细胞外液含钙及低氧下CPA及TG引起肺动脉环进一步收缩(P<0.05)。结论:急性低氧可以引起内质网释放Ca2+，至少来自理阿诺碱受体敏感钙库的Ca2+释放参与了低氧肺血管收缩的发病机制；这可能是PASMCs自身具有的，既不依赖细胞外Ca2+内流，也不依赖血管内皮。     

单纯疱疹病毒1型对体外培养鸡胚端脑神经元活性的影响

目的：观察单纯疱疹病毒1型（HSV－1）感染对体外原代培养鸡胚端脑神经元活性的影响。方法：在Vero细胞（非洲绿猴肾细胞）上接种HSV－1，并利用空斑实验测定病毒滴度；以10^6PFU／ml病毒吸附感染原代培养鸡胚端脑神经元，用倒置显微镜、透射电镜、MTT细胞活性分析、DNA琼脂糖凝胶电泳，观察HSV－1感染对细胞活性的影响。结果：HSV－1感染神经元24，48，72h与同时正常细胞比较，活性分别下降25％，56％，97％。形态学及DNA电泳显示神经元主要以坏死的形式死亡。结论：HSV－1感染导致神经元活性下降。     

Depolarization-induced increases in intracellular free calcium detected in single cultured neuronal cells

Microspectrofluorometry was used to examine intracellular free calcium changes in single NG108-15 neurons loaded with the Ca2+ sensitive probe, quin2. The changes in intracellular free Ca2+ were induced either by depolarizing cells with high K+ or veratridine or by the addition of ionomycin. Ca2+-free medium and various inorganic and organic calcium-channel blocking agents blocked changes in intracellular free Ca2+ levels, indicating that Ca2+ entry is most likely through voltage-sensitive calcium channels.