荷叶碱对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达与胆固醇流出的影响及机制

目的观察荷叶碱(NF)对巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响及机制。方法体外培养人源性THP-1单核细胞,使用佛波酯(160 nmol/L)对其进行诱导,促进其分化为巨噬细胞,并在50 mg/L氧化低密度脂蛋白处理下,使其荷脂形成泡沫细胞,进行常规体外培养细胞。高效液相色谱检测泡沫细胞内脂质成分,液体闪烁计数仪检测泡沫细胞胆固醇流出的水平;实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1表达情况。PPARγ抑制剂GW9662和LXRα抑制剂GGPP分别处理泡沫细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测荷叶碱对泡沫细胞PPARγ、LXRα和ABCA1表达的影响。结果荷叶碱显著减少泡沫细胞内的脂质成分,增加ABCA1表达与胆固醇流出水平。PPARγ抑制剂GW9662处理细胞后,显著降低了PPARγ、LXRα和ABCA1的表达。泡沫细胞在LXRα抑制剂GGPP处理下,也明显降低了LXRα和ABCA1表达。结论荷叶碱通过PPARγ/LXRα途径上调巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达,促进胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。     

丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响

目的　观察丹红注射液对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积的影响,并探讨其机制。方法　160　nmol/L　PMA孵育THP-1巨噬细胞24　h后,细胞分为三组：对照组、ox-LDL组（100　mg/L）和丹红组（100　mg/L　ox-LDL+30　mL/L丹红注射液）。高效液相色谱分析法检测细胞内胆固醇水平,采用液体闪烁计数法观察细胞内胆固醇的流出,Western　blot检测细胞ATP结合盒转运体A1（ABCA1）和肝X受体α（LXRα）的蛋白表达,定量　PCR　检测细胞ABCA1和LXRα的mRNA　表达。结果　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,显著降低细胞总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量,增加载脂蛋白AⅠ（ApoAⅠ）介导的胆固醇流出,促进THP-1巨噬细胞ABCA1和LXRα的表达。结论　丹红注射液抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积,可能与其促进LXRα-ABCA1途径介导的胆固醇流出有关。     

白细胞介素4对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达和胆固醇流出的影响

目的探讨白细胞介素4(IL-4)对人类单核细胞株THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达及细胞内胆固醇流出的影响及机制。方法 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞加入不同浓度的IL-4,处理不同时间,以及加入肝X受体α(LXRα)激动剂T0901317处理后,采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞ABCA1及LXRαmRNA和蛋白质的表达,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,使用液体闪烁计法检测细胞内胆固醇流出,采用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的量。结果 IL-4能呈浓度和时间依赖性地降低THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达(P0.05),并减少细胞内胆固醇流出。加入T0901317后能使IL-4对ABCA1的抑制作用减弱(P0.05)。结论 IL-4能抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达及胆固醇的流出。LXRα激活能逆转IL-4对ABCA1的抑制作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α、γ配体对泡沫细胞胆固醇流出及相关基因表达影响的实验研究

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）α、γ配体对泡沫细胞内胆固醇酯、OX-LDL和三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）、小凹蛋白-1（caveolin-1）表达的影响。方法 用TBARS法检测细胞内MDA。用油红O染色法检测泡沫细胞的形成。用荧光分光光度法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量。ELISA法检测泡沫细胞内OX-LDL。用RT-PCR和Western blot检测ABCA1、caveolin-1 mRNA与蛋白的表达。结果 单核细胞经佛波醇酯和OX-LDL孵育后,有大量泡沫细胞形成,细胞内积聚的总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯及脂质过氧化产物、OX．LDL均明显增多（P〈0．05）,而ABCA1、caveolin-1蛋白、mRNA水平明显减少（P〈0．05）,PPARα、γ配体干预组显著缓解上述变化,细胞内胆固醇酯显著减少,ABCA1、caveolin-1 mRNA和蛋白表达明显增加（P〈0．05）。结论PPARα、γ配体可能通过增强ABCA1、caveolin-1的表达和降低细胞内胆固醇聚积发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

激动β_3肾上腺素能受体上调载脂蛋白A-Ⅰ促进泡沫细胞胆固醇流出的研究

目的 通过激动或抑制HepG2细胞的β3肾上腺素能受体(β3-AR),探讨β3-AR调节胆固醇逆转运过程的可能机制。方法 将培养的HepG2细胞随机分为对照组、β3-AR激动剂组(激动剂组)和β3-AR拮抗剂组(拮抗剂组),ELISA法检测上清液载脂蛋白(apo)A-Ⅰ、apoA-Ⅱ及β3-AR水平;测定细胞内胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯水平,3 H标记的胆固醇测定胆固醇流出率,实时定量PCR和蛋白印迹法分别检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和肝X受体α亚型(LXRα)的表达。结果 与对照组比较,激动剂组apoA-Ⅰ、游离胆固醇、胆固醇流出率显著增加,胆固醇、胆固醇酯显著降低,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著增加;拮抗剂组胆固醇、胆固醇酯显著升高,apoA-Ⅰ、胆固醇流出率显著减少,ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低。与激动剂组比较,拮抗剂组ABCA1和LXRαmRNA及ABCA1和LXRα蛋白显著降低(0.49±0.10 vs1.24±0.02,0.85±0.05 vs 1.32±0.05,0.38±0.01 vs 1.45±0.20,0.08±0.01 vs 0.76±0.02,P0.01)。结论激动HepG2细胞的β3-AR,可上调apoA-Ⅰ表达,促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白的表达。     

血管生成素1通过LXRα途径调节THP-1源性泡沫细胞ABCA1、ABCG1表达及胆固醇流出

目的观察血管生成素1(Ang-1)通过LXRα调节THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1表达和胆固醇流出。方法 160 nmol/L佛波酯诱导人THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,使其荷脂形成泡沫细胞,常规体外培养细胞;实验分为对照组和Ang-1处理组;液体闪烁计数仪检测细胞胆固醇流出水平,高效液相色谱检测细胞内脂质成分,实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1、ABCG1表达;LXRα激动剂T0901317或抑制剂GGPP分别处理THP-1源性泡沫细胞。结果Ang-1显著抑制THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出,下调ABCA1、ABCG1表达;LXRα激活剂拮抗Ang-1对ABCA1、ABCG1表达及胆固醇流出的抑制作用。结论 Ang-1可能通过抑制LXRα表达,降低ABCA1和ABCG1表达水平,减少THP-1源性泡沫细胞内胆固醇流出。     

STZ大鼠心肌胆固醇转出相关基因mRNA表达的变化

目的 研究糖尿病大鼠心肌胆固醇转出相关基因表达的变化.方法 用STZ选择性破坏大鼠胰岛β细胞,建立实验性糖尿病大鼠模型,动态观察分析糖尿病不同病程中大鼠心肌胆固醇转出相关基因过氧化物酶体增殖物活化受体α(PPARα),肝X受体α(LXRα),ATP结合盒转动体A1(ABCA1) mRNA表达以及胆固醇含量的变化.结果 糖尿病12～17 w时大鼠心肌PPARα激活,LXRα、ABCA1 mRNA表达增加,但心肌胆固醇含量没有变化.结论 STZ诱导的糖尿病大鼠心肌随着PPARα的激活,LXRα、ABCA1 mRNA表达增加,PPARα、LXRα共同参与了胆固醇代谢.     

别嘌呤醇抑制巨噬细胞脂质蓄积的作用机制

目的采用氧化型低密度脂白(ox-LDL)构建小鼠巨噬细胞泡沫化模型,探讨别嘌呤醇对泡沫化进程中脂质蓄积的影响及其机制。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7,用ox-LDL或Dil-ox-LDL孵育细胞构建泡沫化模型。用不同浓度别嘌呤醇处理细胞,MTT法筛选出合适的实验浓度。将合适浓度的别嘌呤醇作用于细胞,在共聚焦荧光显微镜下观察Dil-ox-LDL孵育后RAW264.7细胞内脂质蓄积情况;酶学终点法定量检测细胞内总胆固醇的变化;半定量﹑荧光定量RT-PCR法和蛋白免疫印迹法分别检测细胞中LXRα和ABCA1 mRNA和蛋白的表达水平。结果与ox-LDL诱导的泡沫化模型组相比,别嘌呤醇组脂质蓄积显著下降,总胆固醇含量明显下调。别嘌呤醇在mRNA和蛋白水平上引起LXRα和ABCA1的高表达。结论别嘌呤醇具有抑制ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞泡沫化进程的作用,并通过上调LXRα-ABCA1途径来调节细胞内胆固醇的含量。     

阿托伐他汀钙和非诺贝特酸对2型糖尿病患者泡沫细胞胆固醇外流的影响

目的了解巨噬细胞对胆固醇处理能力的改变在糖尿病泡沫细胞形成中的作用,以及调脂药物治疗对细胞内胆固醇(IC)外流的影响。方法选择2型糖尿病合并动脉粥样硬化(AS)患者8例(Ⅰ组)、非糖尿病AS患者8例(Ⅱ组)和非糖尿病非AS患者6例(Ⅲ组)。外周血单核细胞经乙酰化低密度脂蛋白(LDL)诱导成泡沫细胞。采用免疫细胞化学和细胞酶联免疫吸附法测定阿托伐他汀钙和非诺贝特酸处理后泡沫细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)α和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达。高效液相色谱法测定药物处理前后IC和胆固醇酯(CE)转运率。结果Ⅰ组患者巨噬细胞对乙酰化LDL有很强的吞噬能力。乙酰化LDL显著抑制细胞PPARα和ABCA1的表达。非诺贝特酸明显上调细胞PPARα和ABCA1的表达,并在Ⅰ组显著促进IC外流。两药均可抑制巨噬细胞对脂质的吞噬和脂质引起的细胞损伤,并加速泡沫细胞IC和CE的外流。结论糖尿病巨噬细胞对胆固醇处理能力的改变与细胞内脂质沉积相关,调脂药物对细胞损伤具有保护作用,并促进IC外流。     

棕榈酸对EA.hy926细胞胆固醇代谢相关基因表达的影响及机制

目的研究棕榈酸(PA)对内皮细胞株EA.hy926胆固醇代谢的影响,检测胆固醇流出、胆固醇胞内转化、脂蛋白摄入以及信号通路相关基因表达的变化。方法体外培养内皮细胞株EA.hy926,分为白蛋白(ALB)对照组和PA处理组。采用实时荧光定量PCR法检测ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ABCG1、27-羟化酶、清道夫受体A1(SR-A1)、SR-B1、CD36、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、肝X受体α(LXRα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达变化。结果和ALB对照组相比,10、20、30μmol/L PA处理组ABCG1 mRNA水平显著下降(P0.01),20、30μmol/L PA处理组CD36、LOX-1 mRNA水平显著升高(P0.05)。与ALB对照组相比,10、20、30μmol/L PA处理组LXRαmRNA水平显著下降(P0.001、P0.05、P0.001),10μmol/L PA处理组PPARγmRNA水平显著下降(P0.05)。而10、20、30μmol/L PA处理EA.hy926细胞未显著影响ABCA1、SR-A1、SR-B1、27-羟化酶的表达。结论 PA能够改变内皮细胞EA.hy926细胞胆固醇流出和脂蛋白摄入相关基因的表达,其机制与LXRα和PPARγ信号途径有关。     

孤儿核受体Nur77抑制小鼠巨噬细胞脂质沉积

目的 探讨孤儿核受体Nur77对巨噬细胞脂质沉积的影响及其机制.方法 建市稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)和GFP-Nur77质粒cDNA的小鼠巨噬细胞RAW264.7单克隆细胞系,40 μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24 h后,用油红O染色定性观察细胞内脂质沉积,液相色谱-质谱联用法定量检测细胞内胆固醇酯,用荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测CD36和腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA水平的变化,用流式细胞仪检测CD36蛋白表达,Western blot方法检测ABCA1蛋白表达.结果 Nur77能够显著减少ox-LDL诱导引起的巨噬细胞内脂质沉积.ox-LDL诱导前,GFP-RAW264.7组和GFP-Nur77-RAW264.7组细胞内总胆固醇含量分别为(38.66±0.13)μg/mg蛋白和(36.25±0.48)μg/mg蛋白,细胞内胆固醇酯含量为(18.85±0.03)μg/mg蛋白和(17.79±0.86)μg/mg蛋白.ox-LDL诱导24h后,GFP-RAW264.7组和GFP-Nur77-RAW264.7组细胞内总胆固醇含量分别为(68.98±1.68)μg/mg蛋白和(50.94±1.63)μg/mg蛋白,细胞内胆同醇酯含量为(35.92±2.28)μg/mg蛋白和(24.81±2.92)μg/mg蛋白.同时伴随CD36的mRNA及蛋白表达下降和ABCAI的mRNA及蛋白表达上调.结论 孤儿核受体Nur77通过减少脂质摄取和增加脂质排出而减轻巨噬细胞内脂质沉积,这可能是其抗动脉粥样硬化的重要机制之一.     

葛花提取物通过激活PPARγ上调ABCA1的表达而抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的]探寻葛花提取物(PFE)对巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。 [方法]通过MTT法筛选PFE对THP-1源性泡沫细胞的作用浓度,采用油红O染色和胆固醇检测试剂盒检测细胞内脂质蓄积情况,采用胆固醇流出试剂盒检测细胞的胆固醇流出水平,使用RT-qPCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达。 [结果]PFE显著降低THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积。PFE不影响CD36、清道夫受体AⅠ(SR-AⅠ)、固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)及3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)的mRNA表达,但能上调ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05),促进巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出(P＜0.01)。PFE可以激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的活性(P＜0.01)及上调其mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05)。与PFE对照组相比,加入GW9662处理后PPARγ和ABCA1的蛋白表达水平均下降(P＜0.01),胆固醇流出水平降低(P＜0.01)。 [结论]PFE可显著改善THP-1源性泡沫细胞内的脂质蓄积,通过PPARγ上调ABCA1表达及其介导的胆固醇流出抑制泡沫细胞形成。     

罗格列酮联合依折麦布对脂化后血管平滑肌细胞胆固醇逆转运的影响及可能机制的研究

目的探究罗格列酮联合依折麦布对脂化血管平滑肌细胞(SMC)胆固醇含量的影响及可能机制。方法将原代大鼠胸主动脉SMC分空白对照组、泡沫细胞组、依折麦布3.0、10.0、30.0μmol/L组、罗格列酮组(25.0μmol/L)、联合组(罗格列酮25.0μmol/L+依折麦布30.0μmol/L)。采用酶荧光法检测各组细胞内总胆固醇(TC)及游离胆固醇(FC)的含量,并计算胆固醇酯(CE)值。RT-PCR检测肝X受体α(LXRα)和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)mRNA表达,Western blot检测LXRα和ABCA1蛋白表达量。结果泡沫细胞组较空白对照组LXRα和ABCA1mRNA(0.2980±0.0247 vs 1.0010±0.0554,0.3022±0.0266 vs 1.0009±0.0526)以及蛋白表达均减少(P0.05),TC、FC和CE含量显著增加(P0.05);与泡沫细胞组比较,依折麦布组3.0、10.0、30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白表达均增加,依折麦布组则呈现浓度依赖性;依折麦布组30.0μmol/L、罗格列酮组和联合组TC、FC和CE含量减少(P0.05);且联合组LXRα和ABCA1mRNA及蛋白增加更为明显(P0.05)。结论罗格列酮与依折麦布联合,显著减少细胞内胆固醇含量,增加SMC内的胆固醇逆转运效率,其机制可能与LXRα-ABCA1通路有关。     

孤儿核受体Nur77通过转录激活功能调控巨噬细胞脂质沉积

目的:探讨孤儿核受体Nur77调控巨噬细胞脂质沉积与其转录激活功能的关系。方法:建立稳定表达GFP、GFP-Nur77、GFP-Nur77/ΔDBD和GFP-Nur77/ΔTAD c DNA的小鼠巨噬细胞RAW264.7单克隆细胞系,40μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24 h后,油红"O"染色定性观察细胞内脂质沉积,液相色谱-质谱联用法(LC-MS)定量检测细胞内胆固醇酯,荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测CD36和ABCA1 mRNA水平的变化,流式细胞仪检测CD36蛋白表达,Western blot方法检测ABCA1蛋白表达。结果:与对照GFP-RAW264.7相比,高表达Nur77能够显著减少ox-LDL诱导引起的巨噬细胞内脂质沉积,同时降低CD36的mRNA及蛋白表达,上调ABCA1的mRNA及蛋白表达。但GFP-Nur77/ΔDBD RAW264.7和GFP-Nur77/ΔTAD RAW264.7细胞内胆固醇都明显升高,并伴随CD36的mRNA及蛋白表达的降低和ABCA1的mRNA及蛋白表达的升高。结论:孤儿核受体Nur77通过减少脂质摄取和增加脂质排出而减轻巨噬细胞内脂质沉积,这一作用与Nur77 DNA结合能力以及转录活性有关。     

睾酮抑制大鼠血管平滑肌细胞泡沫化及机制研究

目的研究睾酮对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)转化为泡沫细胞的抑制作用,并探讨其可能机制。方法培养大鼠VSMC,分为对照组、ox-LDL组、低(1nmol/L)、中(10nmol/L)、高(100nmol/L)浓度睾酮组。另外,设置睾酮组(100nmol/L)、氟他胺组(1μmol/L)、睾酮与氟他胺合用组,并与ox-LDL共培养建立泡沫细胞模型。利用油红O染色及酶荧光法检测不同浓度睾酮及氟他胺预处理对VSMC内脂质含量的影响,免疫印迹法检测各组细胞内线粒体融合素2(Mfn2)、清道夫受体CD36和ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)的表达变化。结果与ox-LDL组比较,不同浓度睾酮组VSMC脂质蓄积减少,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均降低(P<0.05),Mfn2和ABCA1表达增加(P<0.05),CD36表达降低(P<0.05)。与睾酮组比较,睾酮与氟他胺合用组VSMC脂质蓄积增加,总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的含量均增加(P<0.05),Mfn2和ABCA1表达降低(P<0.05),CD36表达增加(P<0.05)。结论睾酮以雄激素受体依赖的方式,抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫化过程,其作用与睾酮上调Mfn2表达进而调节CD36和ABCA1表达有关。     

激活PPARα对海马神经元胆固醇外流的影响

目的 探讨激活过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptors α,PPARα)对海马神经元胆固醇外流的影响及可能机制.方法 在大鼠海马神经元培养液中加入0.1 mmol/L氯贝丁酯,用RT-PCR方法 观察肝X受体(liver X receptor,LXR)及其靶基因ATP结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)mRNA表达,用胆固醇氧化酶-比色法检测细胞胆固醇排出量的变化.结果 氯贝丁酯降低海马神经元LXR和ABCA1 mRNA表达(P＜0.05),降低胆固醇排出量(P＜0.05).结论 激活PPARα可能通过抑制LXR-ABCA1途径减少海马神经元胆固醇外流.     

亲环素A对THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达及胆固醇流出的影响及机制

目的观察亲环素A(CypA)对THP-1源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响及机制。方法 160 nmol/L佛波酯诱导人THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,与50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,使其荷脂形成泡沫细胞,常规体外培养细胞;实验分为对照组和Cyp A处理组;液体闪烁计数仪检测细胞胆固醇流出水平,高效液相色谱检测细胞内脂质成分,实时荧光定量PCR和Western blot检测ABCA1表达,Western blot检测核因子κB(NF-κB)核转位水平;NF-κB抑制剂小白菊内酯抑制NF-κB活化;脂质体2000转染CD147 siRNA至THP-1源性泡沫细胞。结果 CypA显著抑制THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出,促进NF-κB核转位,下调ABCA1表达;NF-κB抑制剂小白菊内酯拮抗CypA对ABCA1表达及胆固醇流出的抑制作用;用siRNA干扰CD147后,显著抑制Cyp A诱导的NF-κB核转位,上调ABCA1表达,促进胆固醇流出。结论 CypA可能通过CD147激活NF-κB,下调ABCA1表达,抑制THP-1源性泡沫细胞胆固醇流出。     

热休克蛋白65对Jurkat细胞增殖和胆固醇流出的影响

目的探讨动脉粥样硬化中的重要炎性物质—热休克蛋白65(HSP65)诱导活化的Jurkat细胞发生增殖、免疫活化反应时胆固醇流出率的改变,并揭示其可能的分子机制。方法 Jurkat细胞经刀豆蛋白A(Con A)活化48 h后,与不同浓度HSP65孵育24 h,CCK-8检测细胞增殖能力,ELISA测定上清液中炎症因子干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素10(IL-10)含量,液闪计数仪检测Jurkat细胞胆固醇流出率;RT-PCR检测胆固醇相关转运蛋白,包括ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和G1(ABCG1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)、过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)的表达。结果 5 mg/L Con A与Jurkat细胞孵育48 h后可显著促进细胞增殖,HSP65呈剂量依赖性促进Con A诱导的Jurkat细胞增殖(P0.001)。以0.5、1 mg/L HSP65分别处理Jurkat细胞后,Jurkat细胞胆固醇流出率和IL-10含量均呈浓度依赖性下降,IFN-γ含量则逐渐升高(P0.01),细胞ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的mRNA表达水平呈剂量依赖性降低(P0.01)。结论在0.5~1 mg/L浓度范围内,HSP65不仅可促进T细胞增殖、加剧细胞免疫反应,还可引起胆固醇流出率降低,其机制可能与下调胆固醇转运相关蛋白ABCA1、ABCG1、SR-BⅠ、PPARγ、LXRα的基因表达相关。     

内脂素对人单核细胞株源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1的调控

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号转导通路在内脂素调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达中的作用,探讨内脂素诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度和不同作用时间的内脂素进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组细胞PPARγ及ABCA1mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内TC和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,内脂素干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(P<0.05),PPARγ及ABCA1mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);相关分析显示,内脂素呈浓度和时间依赖性下调PPARγ及ABCA1mRNA和蛋白的表达。结论:内脂素可能通过PPARγ信号转导通路下调ABCA1表达,减少细胞内FC流出,使细胞内CE合成增加,从而诱导泡沫细胞形成。这可能为内脂素致动脉粥样硬化发病机制的研究提供了一个新的理论依据。     

G蛋白偶联受体120激动剂促进巨噬细胞胆固醇流出的研究

目的:探讨G蛋白偶联受体120(GPR120)在巨噬细胞胆固醇流出中的作用及机制。方法:培养Raw264.7巨噬细胞,以50-200μmol/L的GPR120激动剂GW9508处理Raw264.7细胞18h。NBD-胆固醇负载法检测细胞胆固醇的流出率;MTS方法检测细胞的存活率;定量PCR和Western blot方法检测胆固醇流出相关转运体ABCA1、ABCG1和SR-B1的mRNA及蛋白表达水平;定量PCR检测核受体LXRα、LXRβ和PPARα、PPARγ的mRNA水平。结果:与对照组相比,100、150和200μmol/L的GW9508均提高Raw264.7细胞NBD-胆固醇流出率,分别提高了8%、10%和18%;ABCA1的蛋白水平分别上调了1.4倍、1.8倍和4.8倍, ABCG1的蛋白水平分别上调了1.3倍、3.2倍和5.1倍,但是不影响SR-B1的蛋白水平;而且,100和200μmol/L的GW9508分别上调ABCA1的mRNA水平3.6倍和6.8倍,上调ABCG1的mRNA水平1.6倍和3.3倍;同时,LXRα的mRNA水平也分别上调了0.6倍和1.25倍,且差异有统计学意义;但是不影响SR-B1及LXRβ、PPARα和PPARγ的mRNA水平。另外,50-200μmol/L的GW9508均不影响Raw264.7细胞的存活率。结论:GPR120通过LXRα上调ABCA1和ABCG1的表达而促进Raw264.7巨噬细胞的胆固醇流出。