甘油标准物质的研制

目的 研制浓度适宜、便于保存和使用的甘油水溶液标准物质.方法 参照一级标准物质技术规范(JJG 1006-1994)及有关技术文件,制备适当浓度的甘油水溶液,HPLC法进行均匀性和稳定性检验,滴定法测定该溶液的甘油含量.结果 (1)甘油溶液均匀性检验:3次测量结果的x-±s分别为1.297 5±0.014 3、1.302 0±0.008 9、1.313 7±0.007 8,经方差分析,差异无统计学意义(F=11.462,P=0.166),说明甘油溶液分装均匀.(2)4℃保存至少稳定4年,定值为0.103 6 g/g,不确定度为0.000 4 g/g.结论 研制的甘油标准物质符合国家一级标准技术要求.已于2006年5月被国家质量监督检验检疫总局批准为国家一级标准物质(GBW 09149).     

肝脏表达的Niemann-Pick C1-Like 1调节小鼠的胆汁胆固醇浓度

目的:探讨人(NPC1L1)在小鼠肝脏的过表达对胆汁胆固醇重吸收的影响。方法:通过杂交NPC1L1基因敲除小鼠(L1-KO)与肝脏过表达人的NPC1L1的转基因小鼠(L1-Tg),获得无小鼠自身NPC1L1基因表达、在肝脏过表达或不表达人NPC1L1基因的小鼠(L1-Tgliv+和L1-Tgliv-)。给予L1-Tgliv+小鼠(实验组)及L1-Tgliv-小鼠(对照组)含0.2%胆固醇的饮食并测定2组小鼠胆汁的脂质分泌、血浆的脂质水平和粪便核心固醇的分泌。结果:与L1-Tgliv-小鼠相比,L1-Tgliv+小鼠的胆汁胆固醇水平降低了90%,同时粪便核心固醇的分泌也降低了10%,而血浆总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯水平分别升高了38.6%、47.6%和36.6%。结论:小鼠肝脏NPC1L1的过表达可提高肝脏对胆汁中胆固醇的重吸收。     

PP4介导了炎症引发的肝胰岛素抵抗

我们首次探讨PP4在炎性因子TNF-α和IL-6诱导的胰岛素抵抗中的作用与调控机理。从新的视点为揭示胰岛素抵抗的发生机制奠定了基础,为2型糖尿病及其并发症的防治提供了新的     

1981～2001年北京市职业人群血清总胆固醇水平的变动

分析1981年至2001年20年间北京市部分职业人群血清总胆固醇水平的变化。在力求做到血脂测定标准化的基础上，回顾性分析20年来北京市部分机关和企事业单位工作人员47434人次总胆固醇水平的变化，按年度、性别、年龄分组统计，结果发现，总胆固醇水平从1981年至1988年间上升幅度较大，年龄调整均值男性上升0．73mmol／L(28m/dL)，女性上升0．62mmol／L(24mg/dL)。至1990年已达最高值，2001年低于1991年，男、女年龄调整均值分别回落0．21mmol/L(8mg/dL)及0．23mmol/L(9mg/dL)。男女总胆固醇水平随年龄上升，从青年至老年，男性上升约20％，而女性升高达35％，上升趋势基本一致。不同年龄组间上升幅度有明显的男女差异，青年期男性大于女性，中年以后女性上升幅度增大，从40～49岁至50～59岁组男性平均上升3％．而女性上升达14％．60岁以后上升很少。所以总胆固醇水平在50岁以前男性高于女性，50岁以后女性高于男性。以1985年、1991年和2001年为例，无论男女，年龄标化的高胆固醇检出率[总胆固醇≥5．17mmol／L(200mg/dL)、≥5．69mmol/L(220mg/dL)及≥6．02mmol／L(240mg/dL)]1991年比1985年明显增高，而2001年与1991年相差不多且有所回落。目前北京市职业人群的总胆固醇年龄调整均值男性4．86mmol/L(188mg/dL)，女性4．78mmol/L(185mg/dL)，年龄标化高胆固醇检出率≥5．7mmol／L者约20％，≥6．2mmol/L者约10％。结果提示，北京市职业人群血清总胆固醇水平及年龄标化的高胆固醇检出率在80年代升幅较大．90年代不再升高且有所回落。     

肝脏表达Niemann-Pick C1-Like 1调节肝X受体诱导的小鼠胆固醇分泌

目的:探讨小鼠肝脏过表达人NPC1L1对LXR诱导的小鼠胆固醇分泌的影响。方法:给予野生型小鼠(WT)和肝脏过表达人NPC1L1的转基因小鼠(L1Tg)胃饲LXR激动剂(T0901317)7 d后,抽提小鼠粪便总脂质并检测核心甾醇的含量,检测小鼠的血浆脂质水平,分析肝脏ABCG5和ABCG8的mRNA表达水平。结果:L1Tg小鼠与WT小鼠相比,除血浆游离胆固醇含量显著升高外,粪便核心甾醇含量及肝脏ABCG5和G8的mRNA水平差异无统计学意义;在胃饲T0901317 1 w后,WT小鼠的粪便核心甾醇含量由[(3.22±0.44)升高到(28.68±1.05)μmol.d-1.100 g-1],血浆总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯和磷脂的含量均显著升高,同时肝脏的ABCG5和G8的mRNA水平也分别上调了5倍和2倍;然而,L1Tg小鼠经T0901317处理后,与T0901317处理的WT小鼠相比,粪便核心甾醇的分泌减少了56%,血浆游离胆固醇含量升高了40%,肝脏的ABCG5和G8的mRNA水平分别降低了52.4%和40.6%。结论:肝脏特异表达人NPC1L1降低了LXR诱导的小鼠粪便核心甾醇的分泌,并升高了血浆游离胆固醇水平,可能与下调LXR诱导的肝脏ABCG5和G8 mRNA表述水平有一定关系。     

北京市部分人群血压、血糖、血脂异常的知晓率、治疗率和达标率的调查

近年来,许多与生活方式有关的心血管病危险因素如高血压、血脂异常、糖尿病、吸烟、少活动、肥胖等都在增加,但由于国人对其危害和预防的认识不够,服药和治疗效果均不满意[1,2].我们调查分析了2002年1～12月在我院体检者对血压、血糖、血脂异常的知晓率、治疗率和达标率,旨在为临床心血管病防治提供参考,报告如下.     

丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验

目的：观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化，以及丹参红花提取物的干预作用。 方法：实验于2005-11／2006—05在卫生部老年医学重点实验室完成。取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞，分为：①正常对照组。②无血清培养组：用无血清培养基培养24h。③低密度脂蛋白处理组：以含有800mg／L低密度脂蛋白的培养基培养16h。④丹参红花提取物预处理组：用丹参红花提取物（商品名丹红滴注液，由陕西步长集团提供浓缩液，国药准字号Z 20026866／Z 20026867）预处理24h后加入800mg／L低密度脂蛋白继续培养16h或在无血清培养基中培养24h。以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响；应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4mRNA水平；用流式细胞仪分析细胞凋亡率；并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量。 结果：①低密度脂蛋白处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍，1.2倍和4倍。②无血清培养组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1．4倍、1．6倍和3倍。③丹参红花提取物预处理组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0．4倍，0．5倍和0．2倍。④丹参红花提取物组NOX4 mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0．2倍、0．5倍和0．6倍。 结论：丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4 mRNA表达水平，从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡，对内皮细胞起到很好的保护作用。     

血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质的研制

目的 研制与临床标本基质相似的血清总胆固醇(TC)、总甘油(TTG)、游离甘油(FG)和甘油三酯(TG)标准物质.方法 按国家标准物质技术规范的要求,制备4种血脂浓度的健康人新鲜混合血清,用酶法测定TC检测均匀性,用HPLC法检测稳定性并定值,评估不确定度.结果 4种血清均匀性检验数据方差分析P值分别为0.339、0.212、0.275、0.196(均＞0.05),说明均匀性良好;稳定性研究结果显示4种血清TC和TG在-20℃保存至少可稳定4年;4种血清的标准值和不确定度TC分别为(5.110±0.064)mmol/L、(4.761±0.062)mmol/L、(3.941±0.050)mmol/L和(3.158±0.041)mmol/L;TTG分别为(2.212±0.043)mmol/L、(1.679±0.033)mmol/L、(1.275±0.027)mmol/L和(1.067±0.023)mmol/L;FG分别为(0.142±0.005)mmol/L、(0.149±0.004)mmol/L、(0.146±0.003)mmol/L和(0.122±0.003)mmol/L;TG分别为(2.069±0.043)mmol/L、(1.530±0.033)mmol/L、(1.129±0.027)mmol/L和(0.945±0.023)mmol/L.结论 研制的血清总胆固醇、总甘油、游离甘油和甘油三酯标准物质均匀性和稳定性良好,定值可靠,已被国家质量监督检验检疫总局发布为国家一级标准物质(GBW 09145、GBW 09146、GBW 09147、GBW 09148).     

丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验

目的:观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化,以及丹参红花提取物的干预作用。方法:实验于2005-11/2006-05在卫生部老年医学重点实验室完成。取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞,分为:①正常对照组。②无血清培养组:用无血清培养基培养24h。③低密度脂蛋白处理组:以含有800mg/L低密度脂蛋白的培养基培养16h。④丹参红花提取物预处理组:用丹参红花提取物(商品名丹红滴注液,由陕西步长集团提供浓缩液,国药准字号Z20026866/Z20026867)预处理24h后加入800mg/L低密度脂蛋白继续培养16h或在无血清培养基中培养24h。以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响;应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4mRNA水平;用流式细胞仪分析细胞凋亡率;并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量。结果:①低密度脂蛋白处理组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍,1.2倍和4倍。②无血清培养组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1.4倍、1.6倍和3倍。③丹参红花提取物预处理组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0.4倍,0.5倍和0.2倍。④丹参红花提取物组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0.2倍、0.5倍和0.6倍。结论:丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4mRNA表达水平,从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡,对内皮细胞起到很好的保护作用。     

吡格列酮改善胰岛素抵抗状态下氧化应激水平及分子机制探讨

目的：探讨吡格列酮（Pio）对胰岛素抵抗状态下的氧化应激水平的影响,并初步探讨Pio改善胰岛素抵抗作用的分子机制。方法：用TNF-α（4ng／mL）刺激人肝癌细胞HepG2,建立胰岛素抵抗细胞模型。MTT法观察细胞毒性作用;氧化酶法检测细胞培养液中的葡萄糖浓度;用DCFH-DA荧光探针标记,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）的水平;Western blotting检测氨基末端激酶（JNK）、磷酸化氨基末端激酶（p-JNK）和胰岛素受体底物1（IRS1）的表达。结果：TNF-α刺激HepG2后,导致葡萄糖摄取障碍,细胞培养液上清中葡萄糖浓度显著升高,细胞内ROS的水平显著升高,JNK被激活,IRS1的表达降低。Pio可显著降低ROS的水平,抑制JNK的磷酸化,促进IRS1的表达,改善胰岛素抵抗。结论：Pio通过降低氧化应激水平,抑制JNK信号通路,改善胰岛素抵抗状态。