曲古霉素A对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及相关机制

【目的】探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichostatin A,TSA)对人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。【方法】应用不同浓度的TSA处理子宫内膜癌HEC-1B细胞72 h,Western blotting法检测细胞内组蛋白H4乙酰化水平及p21蛋白,荧光定量PCR方法检测p21基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】经TSA作用后,人子宫内膜癌HEC-1B细胞内组蛋白H4乙酰化水平增加,p21基因mRNA及蛋白表达增加;同时细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。【结论】TSA通过提高组蛋白乙酰化水平,增加p21基因表达,抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖和诱导细胞凋亡。     

小檗碱体外抗子宫内膜癌HEC-1A细胞的作用研究

目的研究小檗碱体外对非激素依赖型人子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移、周期、凋亡的影响。方法 MTT法检测小檗碱对人子宫内膜癌HEC-1A[中分化腺癌,雌激素受体(ER)弱阳性,孕激素受体(PR)阴性]细胞株的抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态变化;将实验组分成50、25、12.5 mg/L高、中、低剂量组。Transwell法测定细胞体外迁移能力,流式细胞仪观察细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI双染检测HEC-1A细胞凋亡。结果小檗碱可显著抑制HEC-1A细胞生长,在100、50、25、12.5、6.25 mg/L浓度范围内呈剂量依赖性(P0.05)。小檗碱能明显改变细胞形态,小檗碱作用于子宫内膜癌HEC-1A细胞后,倒置显微镜下可见部分细胞体积改变,细胞内出现空泡,结构破坏,裂解成碎片,贴壁细胞减少,并散在排列。抑制子宫内膜癌HEC-1A细胞体外迁移的能力,高剂量组效果更佳,迁移细胞数明显减少。小檗碱低剂量组可以将HEC-1A细胞阻滞于G0/G1期。小檗碱作用24 h能提高HEC-1A细胞总凋亡率、早期凋亡率及晚期凋亡率,早期凋亡率更明显。结论小檗碱能够抑制非激素依赖型子宫内膜癌HEC-1A细胞株的增殖、迁移,并且促进HEC-1A细胞凋亡,低剂量小檗碱能将细胞阻滞在G0/G1期。     

雷公藤甲素对离体子宫内膜癌细胞株增殖及凋亡信号通路PI3K/PKB的影响

目的:探讨雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B增殖和凋亡的影响,初步探讨其与凋亡信号通路磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB)的关系?方法:观察PI3K/PKB通路抑制剂(LY294002)对雷公藤甲素致子宫内膜癌细胞株HEC-1B凋亡的影响;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测雷公藤甲素对细胞增殖的减轻情况;Western blot观察HEC-1B的PKB磷酸化蛋白表达?结果:MTT实验显示PI3K/PKB通路抑制剂能明显减轻雷公藤甲素对HEC-1B细胞生长的抑制作用,呈浓度依赖性(P < 0.05);Western blot结果显示细胞株磷酸化蛋白的表达水平与雷公藤甲素作用浓度呈反比(P < 0.05)?结论:雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞株HEC-1B的增殖产生抑制作用,并能影响PI3K/PKB信号通路诱导细胞凋亡?     

KCC1基因在IGF-Ⅰ调控子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖中作用的研究

目的 探讨胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖能力的影响,以及KCC1基因在IGF-Ⅰ调控子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖中的作用.方法 应用IGF-Ⅰ处理子宫内膜癌HEC-1B细胞,RT-PCR检测HEC-1B细胞中KCC1基因的表达,MTT比色法和流式细胞术检测HEC-1B细胞增殖能力和细胞周期的改变.设计并合成KCC1基因特异性的siRNA,转染HEC-1B细胞,检测RNA干扰后HEC-1B细胞的增殖能力及细胞周期的变化.结果 IGF-Ⅰ能够明显增加HEC-1B细胞中KCC1基因的表达,而且能够促进细胞增殖分裂.KCC1基因特异性的siRNA能够明显抑制HEC-1B细胞中KCC1基因的表达(P<0.05).KCC1表达下调的HEC-1B细胞的增殖能力出现明显下降(P<0.05),细胞周期分析显示实验组细胞明显阻滞于G0/G1期(P<0.05).结论 IGF-Ⅰ能够促进子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖,KCC1基因参与了该调控过程,抑制KCC1基因的表达能够抑制子宫内膜癌细胞的增殖能力.     

二烯丙基二硫化物对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的研究二烯丙基二硫化物(DADS)对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制作用,采用AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测DADS对HEC-1-B细胞的凋亡诱导作用;Hoechst-33528染色,观察细胞凋亡形态。结果用100、200、400μmol/L DADS处理HEC-1-B细胞24、48 h,在100μmol/L剂量即可抑制细胞的增殖,随着剂量和时间的增加,DADS对细胞的抑制作用明显增强。DADS对HEC-1-B细胞的增殖抑制存在时间-剂量依赖关系。用200μmol/LDADS处理48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率达40.91%。Hoechst-33528染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变。结论 DADS对HEC-1-B细胞具有增殖抑制并诱导凋亡的作用,提示DADS对子宫内膜癌的治疗可能具有重要价值。     

Kayadiol对子宫内膜癌细胞株HEC-1的影响

目的探讨二萜类化合物kayadiol抑制子宫内膜癌细胞HEC-1增殖作用的机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测kayadiol对子宫内膜癌HEC-1细胞增殖的抑制作用;采用DNA断裂原位末端标记(TUNEL)法和Western blot法检测kayadiol诱导子宫内膜癌HEC-1细胞凋亡。结果 kayadiol对HEC-1细胞增殖显示较强的抑制活性,呈量效关系;其中以10μmol/L的kayadiol处理HEC-1细胞后,发现凋亡率变化与时间呈依赖关系,HEC-1细胞内的Bax和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达显著上调。结论 Kayadiol可通过诱导细胞凋亡抑制HEC-1细胞增殖。     

蛋白酶体抑制剂MG132对人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞增殖、凋亡和周期的影响

【摘要】 目的 了解蛋白酶体抑制剂三肽基乙醛（Z-Leu-Leu-Leu-cho, MG132）抗人子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞的活性,研究MG132治疗人子宫内膜癌的潜在应用价值。方法 用不同浓度的MG132(0,0.2,0.5,1.0 μmol/L)处理HEC-1B和Ishikawa细胞24 h、48 h,采用MTT法检测MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞增殖的影响;应用流式细胞术分别检测0.5 μmol/L MG132处理24 h后两种细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果 MG132能抑制HEC-1B和Ishikawa细胞增殖,在本研究浓度范围内MG132浓度增高对两种细胞的抑制作用增强（P<0.01）,48 h抑制作用强于24 h(P<0.01),Ishikawa细胞对MG132的敏感程度大于HEC-1B细胞。MG132处理HEC-1B和Ishikawa细胞后凋亡率均增加（P=0.000）,细胞周期分析显示HEC-1B细胞G2期细胞比例增加（P<0.05）,Ishikawa细胞G1和G2细胞比例增加（P<0.05）。结论 蛋白酶体抑制剂MG132对HEC-1B和Ishikawa细胞有增殖抑制、诱导凋亡和阻滞细胞周期的作用。MG132可能成为潜在的子宫内膜癌化疗药物。     

曲古菌素A对去乙酰化酶2在子宫内膜癌细胞株HEC-1B中表达的影响

目的研究曲古菌素A（TSA）对子宫内膜癌细胞株HEC-1B中去乙酰化酶2（HDAC2）和p53表达的影响,及TSA对HEC-1B增殖的抑制作用,探讨TSA诱导HEC-1B细胞增殖抑制的机制。方法用不同浓度的TSA（100、200、400nmol／L）分组培养HEC-1B细胞（0、24、48、72h）,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同浓度、不同时间的TSA作用后子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖率。应用Western Blot以及RT-PCR方法检测HDAC2和p53的表达水平,研究TSA对其表达的影响。结果TSA对HEC-IB细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈时间依赖性（P〈0．01）。HDAC2在该细胞中的表达随TSA的剂量和时间呈减弱趋势,而p53的表达呈升高趋势。结论TSA具有去乙酰化酶抑制剂作用,抑制HDAC2的表达并促进肿瘤抑制因子p53的活化与表达,能够抑制子宫内膜癌细胞的增殖。     

替勃龙及代谢产物对人子宫内膜癌细胞系生长的影响

目的研究替勃龙和它的3种代谢产物对人子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖的影响，探讨替勃龙对子宫内膜癌的安全性。方法MIT法检测不同浓度替勃龙和它的3种代谢产物加入HEC-1B后细胞生长率的变化，流式细胞仪检测4种药物对细胞周期的影响。结果10μm替勃龙和σ4替勃龙作用24，48，72小时使HEC-1B停滞于G0/1期，抑制HEC-1B细胞增殖。10μm的3α-OH-替勃龙或3β-OH-替勃龙作用24小时，细胞增殖受抑制，对细胞周期的影响不明显。结论10-10^-5μm的替勃龙对子宫内膜癌细胞是安全的。     

罗哌卡因诱导子宫内膜癌生长阻滞和氧化损伤

目的 研究罗哌卡因对子宫内膜癌生长阻滞和氧化损伤的影响。方法 选择子宫内膜癌HEC-1B和Ishikawa细胞进行研究。采用CCK8法检测HEC-1B和Ishikawa细胞活性,最终选择1 mM的罗哌卡因处理HEC-1B和Ishikawa 细胞。克隆形成试验,流式细胞术,Transwell试验和微管形成试验分别检测细胞增殖,凋亡,侵袭及微管形成结节数;采用Western Blot检测E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达量。试剂盒检测HEC-1B和Ishikawa细胞中ROS、8-OHdG、ATP和线粒体超氧化物的表达量。结果 罗哌卡因能抑制HEC-1B和Ishikawa细胞增殖,侵袭及微管形成,并促进细胞凋亡。同时罗哌卡因能抑制 Vimentin和VEGF蛋白的表达量,促进E-cadherin蛋白的表达量。另外,HEC-1B和Ishikawa细胞中ROS、8-OHdG 和线粒体超氧化物的表达水平显著增加,ATP的表达水平显著降低。结论 罗哌卡因抑制HEC1B和Ishikawa 细胞增殖,侵袭及微管形成,并促进细胞凋亡和氧化损伤。     

血管紧张素II受体1 抑制剂对雌激素作用下的子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

 目的探讨雌激素及血管紧张素域受体1（AT1-R）抑制剂saralasin 对HEC-1A细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方
法应用免疫细胞化学方法检测AT1-R、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）、细胞外信号调节
激酶（ERK）蛋白在HEC-1A 细胞中的表达;应用MTT 法、流式细胞技术检测雌激素作用于HEC-1A 细胞不同时间后细胞增殖、
细胞周期和凋亡的变化,以及saralasin对雌激素诱导下的HEC-1A 细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;Western blot 分析雌激素
作用后HEC-1A细胞中ERK、p-Akt 蛋白表达的变化,及saralasin 对雌激素诱导下的HEC-1A细胞中ERK、p-Akt 蛋白表达的影
响。结果AT1-R、PI3K、p-Akt、ERK蛋白在HEC-1A细胞中均有阳性表达;雌激素能够促进HEC-1A细胞增殖,使G0~G1期的
细胞比例下降,S 期的细胞比例升高,凋亡减少,ERK蛋白的表达上调;而saralasin 可明显地抑制雌激素诱导的HEC-1A细胞的
增殖,使细胞周期停滞在G0~G1期,S 期的细胞比例下降,凋亡增多,ERK蛋白的表达下调。结论雌激素可以通过AT1-R促进
HEC-1A 细胞增殖,AT1-R 抑制剂saralasin 可以抑制雌激素的促细胞增殖作用,并促使HEC-1A 细胞发生凋亡,其机制可能是通
过阻断丝裂原活化蛋白激酶信号传导通路引起ERK蛋白表达的下调,从而抑制细胞增殖,因此saralasin 可能有助于雌激素受
体低表达的子宫内膜癌的治疗。     

miR-34c对II型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的 ：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34c mimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81.16%。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P＜0.05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34cmimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81．16％。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P〈0．05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

miR-449b通过E2F3-p53途径抑制子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B的生长

目的 探讨miR-449b对子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B增殖和凋亡的影响及其作用的分子途径。 方法 脂质体lipofectamine 2000包被miR-449b并转染入HEC-1-B细胞,实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miR-449b的表达水平,CCK-8试验检测转染前后细胞活性,流式细胞仪来检测转染前后细胞凋亡情况。细胞克隆形成实验观察转染前后细胞克隆形成能力。Western blot方法检查转染前后细胞内E2F3蛋白和p53的表达情况。 结果 转染后实验组miR-449b表达量较NC组增加,细胞增殖能力和克隆能力减弱,而细胞凋亡增加(P<0.05)。miR-449b使E2F3表达下调,p53表达上调(P<0.05)。 结论 miR-449b通过E2F3-p53途径抑制HEC-1-B细胞增殖并促进凋亡,可能作为治疗子宫内膜腺癌的新分子靶标。     

Effect of artesunate on human endometrial carcinoma HEC-1B cells

Objective： To observe the effect of the artesunate （ART） on cellular proliferation in vitro, to search for the possible anti-tumor mechanism of ART on endometrial carcinoma at the molecular level and to provide the experimental and theoretical foundations for the clinical applications of ART. Methods： The cell proliferation was observed by microscope; MTT was used to examine the effects of ART on proliferation of HEC-1B cells, and flow cytometric analysis was used to detect cell cycle and apoptosis. The human endometrial carcinoma HEC-1B cells were conventionally cultured; ART was administered with a concentration of 40 μg/ml before the total RNA were extracted, mRNA expression of Survivin, Caspase-3, N-Cadherin, E-Cadherin, Fibronectinl and Cox-2 were detected using RT-PCR. Results： ART reduced proliferation in human endometrial carcinoma cell line HEC-1B in a dose- and time-dependent effect. The cells of G0/G1 stage were significantly increased （P〈0.05）, but the cells of G2/M stages were significantly decreased （P〈0.05）, so it has shown that the cell cycle was probably blocked in G0/G1 stage. After intervention with ART at 20 and 80 μg/ml for 48 h, cellular apoptosis rate respectively was （36.42±0.77）% and （11.77±0.58）%, and the difference was statistically significant compared with the control （[6.64±0.191%, P〈0.01）. The expression of Cox-2 mRNA in the ART group was lower than those of control group, yet the expression of Caspase-3 and E-Cadherin mRNA in the ART group was higher than those of control group. Conclusion： ART can inhibit HEC-1B cell growth and proliferation in a dose- and time-dependent manner. Furthermore, ART can induce apoptosis in a dose-dependent manner. ART is able to downregulate Cox-2 mRNA expression and to upregulate E-Cadherin and Caspase-3 mRNA expression. So we can conclude that ART could induce the endometrial carcinoma HEC-1B cell apoptosis and inhibit tumor cell proliferation.