硫酸铵梯度法制备苹果酸舒尼替尼脂质体

目的:采用跨膜硫酸铵梯度法制备苹果酸舒尼替尼脂质体并对制备工艺进行考察。方法:采用混合离子交换树脂建立跨膜硫酸铵[ammonium sulfate,(NH4)2SO4]梯度制备苹果酸舒尼替尼脂质体;阳离子交换树脂分离-可见分光光度法测定苹果酸舒尼替尼脂质体的包封率,激光散射粒径分析仪测定苹果酸舒尼替尼脂质体的粒径。结果:苹果酸舒尼替尼脂质体包封率大于96%,平均粒径为107.5 nm。结论:以(NH4)2SO4梯度法制备的苹果酸舒尼替尼脂质体包封率较高,方法简便易行。     

苹果酸舒尼替尼脂质体药物含量及包封率的测定

目的:建立苹果酸舒尼替尼脂质体含量及包封率的测定方法。方法:采用可见分光光度法测定苹果酸舒尼替尼的含量。阳离子交换树脂法分离游离药物,分光光度法测定脂质体中苹果酸舒尼替尼的包封率。结果:苹果酸舒尼替尼在430 nm处有最大吸收,4.0～15.0μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9998,n=7);苹果酸舒尼替尼脂质体的平均包封率为91.89%。结论:所用方法简便、准确,可用于苹果酸舒尼替尼脂质体的含量及包封率测定。     

RNA干扰对乳腺癌细胞株MCF-7/Adr多药耐药性的逆转

目的研究小分子干扰RNA对乳腺癌耐药细胞株MCF7/Adr多药耐药性的逆转作用。方法设计针对mdrl基因的SiRNA,转染进MCF-7/Adr细胞;用荧光定量PCR检测mdrlmRNA的表达,流式细胞仪分析Pgp表达,MTT法检测阿霉素对MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果该SiRNA能使耐药细胞株MCF-7/Adr的mdrlmRNA和Pgp表达水平分别显著下调(P<0.01),并使阿霉素对MCF7/Adr的IC50显著降低(P<0.01)。结论RNA干扰可逆转乳腺癌MCF7/Adr细胞株的多药耐药性。     

尼美舒利对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的耐药逆转作用

目的：研究尼美舒利对人乳腺癌敏感细胞株MCF-7／S及多药耐药细胞株MCF-7／ADM的影响，初步探讨其逆转人乳腺癌耐药的机制。方法：用MTT比色法测定细胞生长抑制率、流式细胞仪检测细胞内Rh123浓度和P-170、GST-π表达水平变化。结果：尼关舒利对MCS-7／S和MCF-7／ADM细胞的生长抑制呈明显时间剂量依赖关系。但尼关舒利对MCF-7／ADM细胞效应强度明显弱于MCF-7／S细胞。尼美舒利能提高MCF-7／ADM细胞内Rh123荧光强度，下调P-170和GST-π的水平（P〈0．05）。结论：尼美舒利对人乳腺癌MCF-7／ADM的耐药有一定逆转作用，作用机制可能与P-170和GST-π的水平下调有关。     

阿霉素和紫杉醇诱发的人乳腺癌耐药细胞株的比较研究

目的通过比较研究乳腺癌耐药细胞株的细胞生物学特性,探讨不同化疗药物诱发的多药耐药细胞模型的共性。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞,采用阿霉素(Adriamycin,Adr)及紫杉醇(Taxol,Tax)低浓度持续加量诱导法建立了多药耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7Adr及MCF-7Tax。SRB法测定细胞生长曲线、半数致死浓度(IC50)、耐药指数(RF)和耐药谱;显微镜观察细胞形态,FCM分析细胞动力学周期,免疫组化检测细胞表型变化;Hoechst33342染色分析侧群细胞(side population,sp)比例。结果MCF-7Adr及MCF-7Tax细胞较MCF-7亲本细胞对相应药物的IC50提高500倍,撤药培养100 d后RF仍维持在150倍以上,并对多种化疗药物产生交叉耐药性;耐药细胞分化程度低于同步传代的亲本细胞,细胞倍增时间与亲本细胞接近,但S期细胞明显增加,G1期细胞减少,且随着撤药时间的延长,耐药细胞的增殖速度加快;耐药细胞P-gP、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有明显增加,ER阳性表达丢失;耐药细胞中SP细胞比例明显增高。结论MCF-7Adr和MCF-7Tax具有多药耐药细胞的基本生物学共性,两者均可作为研究MDR机制的耐药细胞模型。     

麦胚凝集素修饰的长春瑞滨阳离子脂质体的处方优选及细胞毒性试验

目的:制备麦胚凝集素(WGA)修饰的长春瑞滨(VRB)阳离子脂质体(WGA-VRB阳离子脂质体),优化处方并进行细胞毒性试验。方法:以磷脂、胆固醇为辅料,以3β-[N-(N′-N′-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰基]胆固醇盐酸盐(DC-Chol)为阳离子材料,以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)为长循环链,采用薄膜分散法及硫酸铵梯度法制备WGA-VRB阳离子脂质体。以包封率为指标,采用星点设计-响应面法优化处方中DC-Chol、胆固醇和VRB用量。测定所制VRB脂质体和WGA-VRB阳离子脂质体中VRB含量,比较二者和空白阳离子脂质体作用于人乳腺癌细胞MCF-7和人非小细胞肺癌细胞A549后对细胞存活率的影响。结果:5 m L WGA-VRB阳离子脂质体的最优处方为磷脂22 mg、胆固醇12 mg、DC-Chol 8 mg、VRB 0.5 mg,其包封率为(92.24±1.21)%(n=3),与预测值的相对误差为5.3%。VRB脂质体和WGA-VRB阳离子脂质体中VRB含量分别为(96.01±3.26)、(93.39±1.59)μg/m L(n=3);与空白阳离子脂质体和VRB脂质体比较,WGA-VRB阳离子脂质体可明显降低MCF-7、A549细胞的存活率(P<0.05)。结论:成功制得WGA-VRB阳离子脂质体,其对MCF-7、A549细胞存活的抑制作用强于VRB脂质体。     

夏枯草粗提物抑制乳腺癌细胞增殖和逆转耐药作用与机制初探研究

目的：探讨夏枯草水提醇沉粗提物溶液（PVC）对乳腺癌敏感细胞（MCF-7／S）和耐药细胞（MCF-7／R）增殖及耐药性的影响。方法：单味中药夏枯草经水煎醇沉法制成夏枯草粗提物溶液，定容至每毫升含生药夏枯草1．0克。乳腺癌细胞阿霉素敏感株MCF-7／S和阿霉素耐药株MCF-7／R分别用RMPI-1640和低糖DMEM培养基培养。MTT法检测PVC对MCF-7／S细胞和MCF-7／R细胞增殖的影响以及非细胞毒性剂量PVC对耐药株MCF-7／R细胞阿霉素敏感性的影响。Western Blot检测不同浓度PVC对凋亡相关基因p53和乳腺癌耐药蛋白（BCRP）表达水平的影响。     

不同表面活性剂对伊文思蓝脂质体体内外性质的影响

目的　寻找与二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 聚乙二醇 (DSPE PEG)功能相似的表面活性剂 ,以增加脂质体的稳定性 ,改善其体内分布 ,提高靶向性。方法　制备伊文思蓝 (EB)脂质体 ,考察胆固醇与磷脂的比例对伊文思蓝脂质体包封率的影响 ;比较用DSPE PEG、吐温 80 (Tween 80 )和苄泽 3 5 (Brij 3 5 )修饰后的EB脂质体的包封率和在大鼠体内组织分布状况的变化。结果　EB脂质体的包封率最高为 2 5 3 0 %。用DSPE PEG、Tween 80和Brij 3 5修饰后使EB脂质体的包封率略有下降 ,但差别不显著 ;体内分布实验结果显示 :修饰后的脂质体在肝、脾和肾中EB的浓度均有不同程度的降低 ,脑中EB的浓度有所提高 ,而且以Tween 80修饰组最显著。结论　DSPE PEG、Tween 80和Brij 3 5对EB脂质体的包封率影响较小。Brij 3 5对EB脂质体的作用与DSPE PEG相似 ,能提高脂质体逃避网状内皮系统吞噬的能力 ;Tween 80主要能增加EB脂质体在大鼠脑组织中的分布 ,为脑靶向脂质体的研究提供了有益信息     

槐耳颗粒逆转人乳腺癌细胞MCF-7耐药的初步机制

目的研究槐耳颗粒逆转乳腺癌细胞株MCF-7耐药的初步机制。方法使用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定敏感／耐药乳腺癌细胞MCF-7-S／A对单药阿霉素（ADM）和槐耳颗粒的药物毒性,耐药倍数和槐耳颗粒对MCF-7／A的耐药逆转倍数,分别采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应和免疫组化SP法测定多药耐药基因mdr1、多药耐药相关蛋白基因MRP的mRNA和其相应的表达产物P-gp、MRP蛋白,在MCF-7／S及非细胞毒性剂量的槐耳颗粒处理前后MCF-7／A上的表达。结果非细胞毒性剂量（0．01mg／ml）的槐耳颗粒能显著降低ADM对MCF-7／A的IC50（5．06μm）,与逆转前MCF-7／A的IC50（25．8μm）,相比差异有统计学意义（P〈0．01）,其逆转倍数为5．1倍;0．01mg／ml的槐耳颗粒使MCF-7／A细胞的耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平均下调,与未加槐耳颗粒处理的对照组MCF-7／A相比有显著性差异（P〈0．01）。结论非细胞毒性剂量槐耳颗粒具有逆转MCF-7／A细胞耐药性的作用,逆转机制和其耐药基因mdr1、MDR-1的mRNA以及相应的P-gp、MRP蛋白的表达水平下调相关,暗示槐耳颗粒是一种有潜力的耐药逆转剂。     

雷替曲塞联合长春瑞滨治疗紫杉类耐药的老年复发转移乳腺癌的临床观察

目的　探讨雷替曲塞联合长春瑞滨治疗紫杉类耐药的老年复发转移乳腺癌的近期疗效和安全性。方法　采用雷替曲塞联合长春瑞滨方案治疗21 例经紫杉类药物治疗失败的老年复发转移乳腺癌患者,具体方法：雷替曲塞3 mg/m2静脉滴注,第1 天;长春瑞滨25 mg/m2,静脉滴注,第1,8 天。21 天为1 个周期,完成2 个周期后进行疗效评价,每周期化疗后评价不良反应。结果　21 例患者均可评价疗效。其中,PR 8 例（38.1％）,SD 7 例（33.3％）,PD 6 例（28.6％）,RR 38.1%,DCR 71.1％。主要不良反应为食欲减退、恶心呕吐、疲乏、中性粒细胞减少、血小板减少、转氨酶升高和脱发。中性粒细胞减少、脱发多为Ⅲ - Ⅳ级,食欲减退、恶心呕吐、血小板减少、疲乏和转氨酶升高多为Ⅰ - Ⅱ级。结论　雷替曲塞联合长春瑞滨治疗紫杉类耐药的老年晚期乳腺癌疾病控制率高,毒副反应可耐受。     

Efficacy and mechanism of antiresistant vinorelbine liposomes in treating resistant breast cancer cells

Among the comprehensive treatment strategies of breast cancer, chemotherapy plays a crucial role in eliminating cancer cells. However, multidrug resistance is one of the major obstacles to successful treatment. The objectives of this study were to construct an antiresistant vinorelbine liposomes and to demonstrate the efficacy and mechanism for treating resistant breast cancer cells. The study was performed using breast cancer MCF-7/adr cells. The antiresistant vinorelbine liposomes were modified with tamoxifen and dequalinium. The average particle size of antiresistant vinorelbine liposomes were approximately 100 nm, and they showed a robust overall anticancer efficacy by direct killing and by apoptosis induction. The mechanisms were associated with increased cellular uptake, decreased ABCB1 and ABCC10 transporters, and targeting to mitochondria. The apoptosis signaling pathways were ralated to activiated caspases (8, 9, 3), induced release of cytochrome c from mitochondria, activated Bax, inhibited Mcl-1, and generation of ROS. The new antiresistant vinorelbine liposomes could be a useful formulation deserving further development, and the present study provides a potential strategy for circumventing drug resistance in breast cancer.     

葡萄糖修饰的不同PEG作为桥联脂质体的体外特性研究

目的 制备用葡萄糖修饰以不同聚合度的PEG作为桥联的脂质体,并考察其体外特性.方法 以香豆素6为荧光探针,用薄膜分散法制备葡萄糖修饰的以PFG400、PEG800、PEG2000作为桥联的载香豆素6脂质体,用激发光散射粒度测定仪测定其粒径;用凝胶柱层析法测定其包封率;在含10%胎牛血清的磷酸盐缓冲液（PBS）中考察其稳定性;以大鼠脑毛细血管内皮细胞（BCECs）为受试细胞,对载香豆素6的不同类型脂质体进行细胞摄取的定量分析.结果 葡萄糖修饰的以PEG400、PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体的粒径分别为（81.5±6.3）、（100.0±5.0）、（104.9±8.7）nm,多分散系数（PDI）分别为（0.252±0.016）、（0.265±0.032）、（0.289±0.013）;其包封率均〉80%;在含10%胎牛血清的PBS中具有较好的稳定性;葡萄糖修饰的以PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体在BCECs中的细胞摄取率均高于普通脂质体.结论 本研究成功制备了葡萄糖修饰的以PEG400、PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体,研究初步显示以PEG800、PEG2000为桥联的脂质体有一定脑靶向潜力.     

他莫昔芬介导脂质体细胞内化的机制研究

文献报道他莫昔芬能够增强载药脂质体的细胞摄取,其具体机制仍有待研究,有研究者推测此现象是由他莫昔芬抑制P-糖蛋白对药物的外排作用而造成的。本研究为进一步阐明该作用的机理,制备了PEG修饰、共包载他莫昔芬的P-糖蛋白底物阿霉素脂质体及非底物香豆素-6脂质体,研究了不同P-糖蛋白表达水平的细胞对载药脂质体的摄取情况,及包载他莫昔芬后脂质体与脂膜的相互作用。结果表明,共包载他莫昔芬能显著提高所选三种细胞对阿霉素脂质体的摄取,且摄取增加水平与P-糖蛋白表达水平相关。同时,共包载他莫昔芬能显著增加非P-糖蛋白底物香豆素-6脂质体的摄取,对阿霉素脂质体在P-糖蛋白表达阴性的Hela细胞中的摄取也有显著促进作用。表面等离子共振技术证明他莫昔芬脂质体与模型生物膜的亲和力强于不载药的空白脂质体,等温滴定量热技术证明游离他莫昔芬与模型生物膜有明显亲和作用。综上,他莫昔芬能够增强脂质体和生物膜的亲和力,通过抑制P-糖蛋白对药物的外排、提高脂质体和细胞膜的结合两方面的共同作用提高细胞对脂质体的摄取。     

肿瘤转移靶向肽修饰的阿霉素脂质体对高转移性乳腺癌细胞的靶向特异性研究

肿瘤转移日渐成为肿瘤治疗的重要靶标。本研究采用肿瘤转移靶向肽（TMT）与脂质材料（PEG-DSPE）偶联获得靶向化合物（TMT-PEG-DSPE）,用以构建靶向阿霉素脂质体（TMT-LS-DOX）。结果表明,TMT-LS-DOX呈现出良好的药剂学性质。选用高转移性乳腺癌细胞（MDA-MB-435S和MDA-MB-231）对该转移特异性递送系统进行评价,采用非转移性乳腺癌细胞（MCF-7）作为对照。游离TMT多肽浓度达100μg/mL时仍未显示出细胞毒性。与MCF-7相比,MDA-MB-435S及MDA-MB-231细胞对TMT-LS-DOX摄取增加,并经受体竞争性实验证明该促进作用由TMT介导。因此,TMT修饰的纳米载体可能成为增加化疗药物对高转移性乳腺癌特异性的一种新策略。     

双配体修饰的阿霉素脂质体靶向于脑胶质瘤的体外研究

目的筛选和优化转铁蛋白、叶酸共同修饰的阿霉素脂质体的处方及制备工艺,以期得到具有良好的脑胶质瘤靶向治疗作用的给药系统。方法采用薄膜分散和硫酸铵梯度法制备阿霉素脂质体。将叶酸连接至二硬脂酸磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000-NH2)得到DSPE-PEG2000-Folic,考察不同磷脂种类、药脂比、水化介质和载药时间,对脂质体粒径、包封率和稳定性的影响,确定脂质体的处方工艺。以大鼠的脑毛细血管内皮细胞(bEnd3)和星形胶质细胞组成体外血脑屏障(blood-brain barrier,BBB),并结合大鼠胶质瘤C6细胞,构建体外模拟胶质瘤靶向治疗的复合BBB模型。考察阿霉素脂质体在bEnd3细胞中的摄取机制和透过BBB的转运速率及对C6细胞的毒性。结果确定了DSPC作为主要磷脂组分,并以120 mmol.L 1的硫酸铵作为水化介质,药脂比为1∶1 5,载药时间选择60 min,成功制备了高包封率和稳定性的双配体脂质体。其在bEnd3细胞中摄取远大于普通脂质体(P<0.05),摄取过程受网格蛋白和小窝内陷介导的细胞内吞作用,并受转铁蛋白和叶酸的影响;同时其在BBB模型中的药物透过速率、及其进一步透过BBB后对下层C6细胞的毒性,均显著高于其他脂质体组。结论转铁蛋白和叶酸共同修饰的阿霉素脂质体具有较好的体外脑胶质瘤靶向治疗作用。     

吉西他滨及长春瑞滨联合顺铂对晚期耐药乳腺癌的治疗观察

目的：观察吉西他滨及长春瑞滨分别联合顺铂的化疗方案治疗对蒽环类和紫杉类耐药的复发转移性晚期乳腺癌的疗效及不良反应。方法：将56例乳腺癌患者随机分为A、B两组各28例,A组应用吉西他滨1000mg/m2进行静脉滴注30min,第1、8天;顺铂25mg/m2静脉滴注,第1～3天。B组应用长春瑞滨25mg/m2静脉滴注,第1、8天;顺铂用法同A组。每21天为1个周期,至少化疗2个周期后评价疗效。结果：A组总有效率为57.1%,B组总有效率为53.6%,两组疗效差异无统计学意义。结论：吉西他滨及长春瑞滨联合顺铂方案治疗对蒽环类和紫杉类耐药的晚期乳腺癌疗效较好,不良反应可以耐受。     

Efficacy and mechanism of a compound epirubicin plus quinine injection for the treatment of drug-resistant breast cancer

A single drug chemotherapy fails to eliminate residual cancer cells due to the existence of the multidrug resistance (MDR). In the present study, we aimed to develop a compound epirubicin plus quinine injection, to characterize the efficacy in treatment of the drug-resistant breast cancer, and to reveal the involved mechanisms. The HPLC-UV methods were developed for quantifications, and the evaluations were performed on the drug-resistant human breast cancer MCF-7/adr cells using a high content screening system. Results demonstrated that the compound epirubicin plus quinine injection was able to effectively block the drug efflux, exhibiting an evidently overall efficacy in treatment of the resistant breast cancer cells by direct killing effect and by apoptosis-inducing effect. In the formulation, quinine played multiple roles in blocking drug efflux and in inducing the apoptosis of the resistant breast cancer cells. The apoptosis signaling pathways were associated with a cascade of reactions by activating Caspase family and by inhibiting Bcl-2 family. In conclusion, the present study preliminarily revealed the efficacy and mechanism of the compound epirubicin plus quinine formulation in treatment of the drug-resistant breast cancer, and offered a potential strategy to overcome drug resistance in cancer treatments.     

葫芦素B纳米脂质载体对结肠癌和乳腺癌细胞抑制及凋亡作用的研究

目的：研究葫芦素B纳米脂质载体（CuB-NLC）对结肠癌Lovo细胞,乳腺癌MCF-7细胞的体外细胞毒性。方法：结肠癌Lovo细胞,乳腺癌MCF-7细胞常规复苏、培养及传代,取处于对数生长期的细胞用于实验。采用CCK-8法检测质量浓度为0、0.0625、0.25、1.00、4.00、16.0 mg/L的CuB-NLC对结肠癌Lovo细胞,乳腺癌MCF-7细胞的毒性,流式细胞仪检测结肠癌Lovo细胞,乳腺癌MCF-7细胞的细胞周期进程及Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率。结果：与葫芦素B （CuB）相比CuB-NLC对结肠癌Lovo细胞,乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用明显增强（P＜0.05）,且这种抑制作用随药物浓度增加而增强。CuB组及CuB-NLC组作用于结肠癌Lovo细胞、乳腺癌MCF-7细胞48 h后,与NLC空白组及DMSO对照组相比较,CuB及CuB-NLC均能够引起结肠癌Lovo细胞、乳腺癌MCF-7细胞G2/M期阻滞,同时伴有G0/G1期细胞减少, CuB-NLC组的作用更加明显,有统计学差异（P＜0.05）。Annexin V/PI双染法检测结果表明,CuB-NLC能显著诱导结肠癌Lovo细胞,乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论：葫芦素B纳米脂质载体能够抑制结肠癌Lovo细胞,乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡。