激素依赖型哮喘患者临床和糖皮质激素受体特征

目的 探讨激素依赖（SD）型哮喘临床特征和单个核细胞（PBMC）糖皮质激素受体（GR）的水平。方法 26例激素依赖型哮喘,口服泼尼松20mg/d,7天,依据肺功能的变化,分为激素敏感（SS）型哮喘11例和激素抵抗（SR）型哮喘15例,比较两型临床、肺功能和PBMC的GR水平。结果 SS型和SR型哮喘在病史、肺功能和血嗜酸粒细胞方面差异无显性,SR型哮喘患PBMC的GR水平明显低于SS型哮喘患（P＜0．002）。结论 激素依赖型哮喘包括SS型和SR型哮喘,SR型哮喘GR水平异常低下是其特征。     

水蛭素促尿激酶纤溶作用研究

目的研究水蛭素对尿激酶诱导的纤溶作用的影响,并分析可能的机制。方法采用尿激酶为纤溶激酶,复钙柠檬酸钠抗凝血浆为纤溶酶原来源的体外溶栓模型,通过测定纤溶产物D-D imm er生成量,微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,比较水蛭素与肝素对纤溶的影响。运用土豆羧肽酶抑制剂(CPI)对TAFIa的专一性抑制作用,分析水蛭素与肝素对TAFI活化的影响。结果水蛭素组D-D imm er较肝素组高(P<0.01),水蛭素加CPI组较水蛭素组更高(P<0.01);微孔板分光光度法跟踪纤溶过程,肝素组有明显的纤溶停止和血栓再形成倾向,水蛭素组则可观察到明显的溶栓现象,水蛭素加CPI组效果最好。结论对尿激酶诱导的纤溶,水蛭素比肝素有更好的间接促纤溶作用,其原因主要是水蛭素能有效抑制再次血凝的发生,减少了尿激酶和纤溶酶原的短暂性耗竭。在这一过程中,水蛭素不能彻底抑制TAFI活化,表明对TAFI活化的抑制可能不是水蛭素促尿激酶纤溶作用的主要原因。     

实时荧光定量RT-PCR检测内皮细胞t-PA mRNA方法的建立

目的建立实时RT-PCR检测人微血管内皮细胞组织型纤溶酶原激活物(t-PA)mRNA的表达。方法提取人微血管内皮细胞总RNA,经RT-PCR获得靶基因(t-PA)及管家基因(β-actin)的PCR产物。纯化后,作为标准品梯度稀释,采用SYBR G reen I定量PCR检测,建立标准曲线。方法学考核参数为特异性、线性范围、精密度和重复性。分析全反式维甲酸对内皮细胞表达t-PA mRNA的干预效果。结果定量方法特异性好,检测的灵敏度达103拷贝,线性范围为103~1010拷贝,循环阈值与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系(r2>0.990),批内变异≤3.10%,批间变异≤4.93%。1.25~20.00μmol.L-1的全反式维甲酸能明显上调内皮细胞t-PA mRNA的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论实时荧光定量RT-PCR的方法可对t-PA mRNA的表达进行准确定量,有助于溶栓药物药理学研究和新药筛选。     

人GCSF-白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达

制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白.从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp).重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 bp),序列测定正确,中间未加入任何连接肽.插入表达载体pPIC9K中a交配因子的开放阅读框内,构建分泌型表达重组质粒pPIC9K-HSA-GCSF.电击转化毕赤酵母菌KM71,G418筛选得到高拷贝转化子.甲醇诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量约为84 k,Western blot分析融合蛋白为G-CSF与HSA的杂合分子,NFS-60细胞/MTT比色法测定融合蛋白具有G-CSF的生物学活性.结果:构建了可分泌表达HSA-GCSF融合蛋白的毕赤酵母工程菌,为进一步对其进行药学研究奠定了基础.     

王不留行提取物抑制血管生成的药效学研究

目的 探讨王不留行提取物对肿瘤新生血管生成的抑制作用。方法 采用鸡胚尿囊膜血管生成模型分析王不留行提取物对新生血管生成的影响,用免疫组化染色法检测荷瘤小鼠C51结肠癌细胞中CD31表达的变化。观察王不留行提取物对小鼠 Lewis 肺癌转移模型的影响。结果 王不留行提取物具有明显抑制鸡胚尿囊膜血管新生成的作用,能够 明显降低荷瘤小鼠C51结肠癌细胞中的CD31表达,显著抑制 Lewis 肺癌肿瘤细胞的生长、转移,稳定病灶。结论 王不留行提取物具有明显抑制肿瘤新生血管生成的作用,提示其有可能成为新的血管生成抑制剂。     

去势骨质疏松症大鼠模型防治效果的参数比较

目的：评价防治骨质疏松症大鼠模型药物疗效的各项指标,方法：采用卵巢切除术建立骨质疏松症预防和治疗大鼠模型,分别灌喂阿仑膦酸内和埃本膦酸钠,持续处理6个月,以骨密度,骨生化标志物,骨矿含量,骨生物力学和骨组织形态学方面的参数为指标,评价它们的价值,结果：两组大鼠模型用药后,各部位的骨密度明显升高,评价药物疗效时,敏感度,特异度,准确度最高的是全身骨密度和骨小梁面积,用药大鼠的股骨最大弯曲载荷,骨挠度,股同干重,灰重,骨钙含量虽有不同程度的增高,血清骨钙素有一定程度的下降,但与对照组相比基本均无统计学意义。结论,全身骨密度是评价防治骨质松症药物疗效的最佳指标,骨切片计算骨小梁面积也是评价防治骨质疏松症药物疗效的敏感指标。     

羟喜树碱结合肽的结合作用分析

目的:对羟喜树碱结合肽进行结合作用分析,为进一步研究阐明羟喜树碱的抗癌机制、耐药机制以及毒理机制提供帮助.方法:使用生物信息学软件对羟喜树碱结合肽序列进行比对分析,寻找羟喜树碱结合肤同源保守性模式,对羟喜树碱结合肽进行结合作用分析.结果:羟喜树碱结合肽原始序列的保守性模式为xxxxxLxPxxxx.其中L、P皆为疏水脂肪族氨基酸.依据氨基酸可以分为疏水脂肪族氨基酸、疏水芳香族氨基酸、极性带电氨基酸和极性不带电氨基酸的原则,分别以G、F、R、N四个符号来代表四大类氨基酸,对羟喜树碱结合肽原始序列进行了简并转换,羟喜树碱结合肽简并序列的保守性模式为xGxxGGGNxGGx.结论:预测羟喜树碱结合肽可能通过形成疏水口袋区与羟喜树碱发生相互作用,而疏水口袋中的易形成氢键的极性不带电氨基酸则可能与羟喜树碱形成氢键,进一步稳定加强其相互作用.     

王不留行提取物抑制血管生成的药效学研究

目的 探讨王不留行提取物对肿瘤新生血管生成的抑制作用.方法 采用鸡胚尿囊膜血管生成模型分析王不留行提取物对新生血管生成的影响,用免疫组化染色法检测荷瘤小鼠C51结肠癌细胞中CD31表达的变化.观察王不留行提取物对小鼠Lewis肺癌转移模型的影响.结果 王不留行提取物具有明显抑制鸡胚尿囊膜血管新生成的作用,能够明显降低荷瘤小鼠C51结肠癌细胞中的CD31表达,显著抑制Lewis肺癌肿瘤细胞的生长、转移,稳定病灶.结论 王不留行提取物具有明显抑制肿瘤新生血管生成的作用,提示其有可能成为新的血管生成抑制剂.     

酶联免疫吸附法检测罂粟碱研究(Ⅱ)抗体制备和酶标抗原合成

利用前文制备的罂粟碱－牛血清白蛋白（Pap-BSA)偶联物作为免疫抗原，免疫新西兰大白兔，获得效价为1：32的特异性抗罂粟碱免疫球蛋白（抗体）。同时，合成了罂粟碱－辣根过氧化物酶（Pap-HRP)结合物（酶标抗原），抗体和酶标抗原特性的鉴定结果令人满意。     

去势雌性大鼠骨质疏松症的药物干预疗效的评价

目的：评价阿仑膦酸钠、埃本膦酸钠和泰舒对去势雌性大鼠骨质疏松症的治疗效果。方法：手术切除雌性大鼠卵巢制成骨质疏松模型，随机分为4组，即阿仑膦酸钠组、埃本膦酸钠组、泰舒组和对照组，分别给予相应干预药物持续处理6个月。治疗模型给药前、给药后2个月和6个月，分别测定全身骨密度。治疗结束后，进行股骨干重、灰重、骨矿含量、骨生物力学 和骨组织形态计量学测定。结果：阿仑膦酸盐和埃本膦 钠组治疗后6个月后全身骨密度有明显升高，分别增高6．49％和7％；而泰舒组仅上升1．7％，对照组几无变化。埃本膦酸盐治疗后大鼠全身、腰椎骨密度及股骨干重、灰重、最大抗弯曲载荷和骨小梁面积均较其他组高。结论；埃本膦酸钠是比阿仑膦酸钠更有效的一种骨质疏松症治疗药物。