聚乙二醇修饰天花粉蛋白的初步研究

目的:研究聚乙二醇(PEG)修饰天花粉蛋白(TCS)的条件、纯化方法、生物活性及致过敏反应程度。方法:用SDS-PAGE检测反应条件对产物成分的影响,利用离子交换和分子筛凝胶层析对修饰产物进行分离纯化,通过SDS-PAGE和HPLC检测聚乙二醇化天花粉蛋白(PEG-TCS)的纯度,小鼠引产实验测定PEG-TCS体内生物学活性,用TCS和PEG-TCS作为抗原对豚鼠进行致敏和攻击。结果:在PEG修饰TCS的反应中,PEG与TCS的投料(质量)比和pH值是影响修饰效率的主要因素,修饰反应一般在24～48h内达到平衡;纯化的PEG-TCS经SDS-PAGE检测纯度大于95%,HPLC显示单一峰;小鼠引产实验表明,经过PEG修饰后的TCS,引产活性加强;豚鼠过敏反应实验表明,PEG-TCS具有极低的全身性过敏反应。结论:PEG修饰TCS的最佳反应条件为:TCS与PEG投料比为1:6,pH6．0,反应时间为48h,催化剂氰基硼氢化钠浓度为40mmol·L~(-1);PEG-TCS纯度大于95%; PEG-TCS体内活性能较好的保留,且全身性过敏反应降低。     

聚乙二醇修饰水蛭素的分离纯化与活性分析

用活化的聚乙二醇(PEG)对水蛭素进行化学修饰，质谱分析表明，修饰产物是修饰度不同的分子质量相差5000u的水蛭素的混合物。用离子交换层析和凝胶过滤层析对反应产物进行分离纯化，离子交换层析难以达到完全分离；而采用凝胶过滤层析方法可较好地分离修饰度不同的各组份。生物学活性分析表明，不同的PEG修饰度对水蛭素的活性具有显著影响，连接1～2个PEG的水蛭素保持了原有活性，而连接3个PEG的水蛭素活性显著下降。     

基因壳聚糖纳米粒表面修饰和转染研究

目的:研究递送基因纳米粒表面修饰对体外基因转染的影响.方法:利用末端活化的聚乙二醇(PEG)制备PEG化基因壳聚糖纳米粒;通过两端活化的PEG将糖蛋白配基连接到纳米粒表面,完成肝靶向纳米粒的制备;用透射电镜观察表面修饰对纳米粒粒径大小、粒子形态的影响;使用蛋白质测定试剂盒测算纳米粒表面蛋白连接量;利用体外转染实验考察表面修饰对纳米粒转染活性的影响;用倒置荧光显微镜观察并用流式细胞仪测定转染结果.结果:纳米粒PEG化使转染效率大幅度升高,半乳糖基牛血清白蛋白(Galn-BSA)使体系的转染效率比PEG化纳米粒略有下降,但比不经修饰的纳米粒转染活性高.壳聚糖纳米粒的表面PEG化能提高纳米粒的体外稳定性,从而提高体外转染效率,并适合于进行冷冻干燥.结论:长循环壳聚糖基因递送纳米粒在基因治疗研究中可能会发挥重要作用.     

蛋白质和多肽类药物修饰用聚乙二醇衍生物

聚乙二醇(PEG)修饰技术已成为改善蛋白质和多肽类药物临床疗效的重要手段。药物的PEG修饰研究,特别在提高蛋白质、多肽类药物的稳定性、延长半衰期(t_(1/2))等方面,具有持续的魅力和非常广阔的前景。近年,国内外药物PEG修饰技术研究主要集中在:增强PEG和蛋白质连接基团的稳定性;PEG新型衍生物的开发等。     

聚乙二醇修饰对蛋白质类药物药代动力学的影响及相关的药动学研究方法

聚乙二醇（PEG）修饰在改善蛋白质类药物的理化性质的同时也会导致其体内药代动力学行为发生变化。而PEG修饰剂的分子大小、分子结构和修饰位点对蛋白质类药物的体内药代动力学行为和活性具有一定影响。根据有关文献报道,讨论这些影响因素,并介绍在对PEG修饰药物进行药代动力学研究时采用的新方法,如：群体药代动力学预测法及体内测定修饰物含量的电化学发光法和PEG特异性抗体法等。     

聚乙二醇修饰脂质体的ABC现象研究进展

通常聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰脂质体被认为几乎没有或仅有很低的免疫原性。最新的文献报道,重复注射PEG修饰脂质体发生了免疫反应。当向同一动物体内重复注射(间隔几天)PEG化脂质体时,二次注射的PEG化脂质体导致体内循环时间降低,于肝和脾的聚集量增加,这种现象称为加速血液清除(accelerated blood clearance,ABC)现象。该免疫反应使PEG化制剂的发展和临床应用面临严峻的挑战,可能造成药物或基因治疗效率的下降,甚至引起临床的毒副作用。本文综述了ABC现象的定义、验证ABC现象的方法和手段、ABC现象成因的研究进展及影响因素,并对其他PEG修饰载体是否也会发生ABC现象进行了探讨。     

基因壳聚糖纳米粒表面修饰和转染研究

目的：研究递送基因纳米粒表面修饰对体外基因转染的影响。方法：利用末端活化的聚乙二醇(PEG)制备PEG化基因壳聚糖纳米粒;通过两端活化的PEG将糖蛋白配基连接到纳米粒表面,完成肝靶向纳米粒的制备;用透射电镜观察表面修饰对纳米粒粒径大小、粒子形态的影响;使用蛋白质测定试剂盒测算纳米粒表面蛋白连接量;利用体外转染实验考察表面修饰对纳米粒转染活性的影响;用倒置荧光显微镜观察并用流式细胞仪测定转染结果。结果：纳米粒PEG化使转染效率大幅度升高,半乳糖基牛血清白蛋白(Galn—BSA)使体系的转染效率比PEG化纳米粒略有下降,但比不经修饰的纳米粒转染活性高。壳聚糖纳米粒的表面PEG化能提高纳米粒的体外稳定性,从而提高体外转染效率,并适合于进行冷冻干燥。结论：长循环壳聚糖基因递送纳米粒在基因治疗研究中可能会发挥重要作用。     

可断裂聚乙二醇和穿膜肽共修饰脂质体肿瘤靶向作用初步研究

目的探讨可断裂药用聚乙二醇(PEG)和穿膜肽(TAT)共修饰脂质体用于肿瘤靶向的效果及机制。方法使用薄膜分散-超声法制备可断裂PEG和TAT共修饰脂质体,并观察其对体外培养肝癌细胞株和正常肝细胞株的穿膜效果、细胞靶向性及对细胞活性的影响。结果由质谱鉴定结果可见,合成的共修饰脂质体杂质较少,相对分子质量约为3 622.4,纯度约为96.1%,图像表现为主峰峰面积较高;白色光、荧光及重叠后,观察组均可见胞内红色细胞大量分布,且集中于胞质内;不同质量浓度的共修饰脂质体对SMMC-7721细胞生物学活性与对照组比较,无明显差异。结论可断裂PEG和TAT共修饰脂质体的稳定性较高,制备工艺便捷,具备良好的药物承载性和安全性,且存在良好的细胞内外传递潜能,肿瘤靶向性极佳,具有巨大的临床应用前景,值得进一步研究。     

聚乙二醇化蛋白质阳离子树脂色谱行为的研究

以溶菌酶(LYS)作为模式蛋白,对聚乙二醇化蛋白质在不同阳离子交换填料中色谱行为进行了比较研究。考察了不同分子质量的聚乙二醇化溶菌酶(PEG-LYS)在4种阳离子树脂中的动态载样量的差异,同时比较了不同上样量对纯度和洗脱盐浓度的影响。研究结果显示PEG修饰能降低蛋白质和离子交换树脂的结合力,且随着PEG的分子质量的增加,PEG-LYS动态载样量降低。对相同分子质量的PEG-LYS,产物纯度以及PEG-LYS的洗脱盐浓度随着上样量的增加而降低,研究结果显示,PEG分子质量和上样量对纯化工艺的研究有重要意义。     

聚乙二醇化壳聚糖制备、评价及其应用的研究进展

聚乙二醇（PEG）化壳聚糖是一类新型功能性聚合物,较未修饰的壳聚糖而言,PEG化壳聚糖在水溶液和有机溶剂中的溶解性均明显提高,同时聚合物的细胞毒性降低,生物相容性得以改善。本文将对PEG化壳聚糖的化学合成、理化性质、生物学特性以及在生物医药领域的应用作一综述。     

新型胰高血糖素样肽-1类似物的合成及降糖活性

目的合成具有全新肽序的新型胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂非洲爪蟾GLP-1并对其(XenGLP-1)进行长效化修饰。方法先通过在其C端引入PSSGAPPPS序列以增加其降糖活性,再在XenGLP-1序列上引入半胱氨酸,进一步利用MAL-PEG2 000与其进行缀合。结果合成得到PEG2 000-ZF-1和PEG2 000-ZF-2 2个缀合肽,并对缀合肽进行长效化降糖活性研究。结论 2个PEG化缀合肽具有长效的降糖活性,具有很好的药物开发前景。     

聚乙二醇化脂质体引起的加速血液清除现象研究进展

目的:为聚乙二醇(PEG)化脂质体的研究和应用提供参考。方法:以"PEG""Accelerated blood clearance phenomenon""加速血液清除"等为关键词,组合查询1987-2013年在Pub Med、Elsevier Science Direct、维普数据库中相关文献,就PEG化脂质体引起的加速血液清除现象(ABC现象)的产生原因和影响因素进行归纳与总结。结果与结论:共查询到83条文献,其中有效文献37条。经分析文献发现,注射剂量、PEG的量和PEG链的长度、粒径和表面电荷、注射时间间隔以及不同动物模型、包裹药物等,均可导致不同程度的ABC现象,建议通过对PEG部分进行修饰、改变聚合物材料、包裹具有免疫抑制作用的药物以及改变注射方式等方法减弱或消除ABC现象。研究表明,对PEG的修饰和寻找PEG的替代品是比较有前途和希望的解决方案,可为日后开发一种没有免疫原性的PEG化脂质体提供一定的理论基础。     

聚乙二醇定点修饰蛋白质药物中巯基的研究进展

聚乙二醇(PEG)修饰是解决蛋白质药物溶解度低、稳定性差、半衰期短、具有免疫原性等问题的有效方法,通常在氨基上进行修饰,但在巯基上进行定点修饰更有利于获得结构明确、组成稳定的修饰产物。综述了聚乙二醇定点修饰蛋白质药物中巯基,包括在游离巯基、二硫键和引入的巯基上进行修饰的研究进展。     

蛋白质和多肽药物聚乙二醇化的问题与对策

20世纪 70年代Ｄａｖｉｓ等[1] 的开拓性工作 ,使得聚乙二醇化的蛋白质和多肽在生物医学和生物技术等诸多领域得到越来越广泛的应用。蛋白质或多肽药物被适当地聚乙二醇化后 ,其主要的生物学功能保持不变 ,并可获得下述有利性质[2 ,3 ] :(1)溶解度提高 ;(2 )免疫原性降低或消除 ;(3)被水解酶降解的可能性减小 ;(4)被肾脏清除的速率降低 ;(5 )药物体内分布和动力学行为改变 ;(6 )贮存稳定性提高。因此 ,蛋白质和多肽药物的聚乙二醇化一直是药学领域的研究热点。本文就聚乙二醇化过程中所遇到的一些共性问题及其解决办法进行综述。1　聚乙二醇…     

聚乙二醇缀合熊果酸衍生物的合成及体外抗癌活性

目的:合成具有一定水溶性的聚乙二醇(PEG)缀合熊果酸衍生物并考察其体外抗癌活性。方法:以熊果酸(ursolic acid,UA)作为母核,采用PEG、琥珀酸对其C28位进行接合修饰,合成一系列PEG缀合熊果酸衍生物并考察其水溶性和抗癌活性;采用流式细胞术探讨其抗癌机制。结果:所合成系列PEG缀合熊果酸衍生物的水溶性较熊果酸有明显改善,同时具有更显著的体外抗癌活性;化合物8c对5株受试肿瘤细胞的IC50(48 h)均小于10μmol.L-1,将AGS细胞阻滞于G2/M期并具有诱导凋亡作用(凋亡率高于70%)。结论:将熊果酸C28位进行PEG修饰是保持和提高其抗癌活性的有效途径之一。     

聚乙二醇对溶菌酶和粒细胞集落刺激因子的初步化学修饰

目的考察聚乙二醇 (PEG)修饰对溶菌酶和粒细胞集落刺激因子 (G CSF)活性的影响。方法以不同方法活化的PEG修饰溶菌酶 ,通过正交试验和单因素考察确定合适的修饰条件 ;溶菌酶活力测定采用溶壁小球菌法 ,抗原性测定采用试管沉淀法 ;G CSF活性测定以小鼠血浆中中性粒细胞数目增殖情况反映。结果当偶联上一个PEG分子时 ,溶菌酶的活性保留 13% ,抗原性显著减弱 ;G CSF经PEG修饰后对小鼠中性粒细胞数目的增加有显著促进作用 ,且作用时间明显延长。结论PEG修饰对G CSF血循环半衰期的延长有显著作用     

聚乙二醇修饰蛋白质类药物的研究现状及展望

随着基因工程技术的发展 ,蛋白质类药物的应用越来越受到人们的青睐。然而由于蛋白质类药物具有血浆半衰期较短、有一定的免疫原性等不足 ,在一定程度上限制了其临床应用。由于聚乙二醇 (PEG)具有与蛋白质相容的特性 ,用其对蛋白质类药物进行化学修饰已经成为医学和生物工程领域的热门课题 ,得到了广泛的研究和应用。PEG修饰的蛋白质类药物已经逐渐成为新一代高效、低毒的治疗药物。本文简要介绍了几种已获美国 FDA批准的 PEG修饰的蛋白质类药物     

聚乙二醇-脂质衍生物修饰对脂质体稳定性的影响

聚乙二醇-脂质(polyethylene glycol-lipid,PEG-lipid)衍生物具有增加脂质体的稳定性、延长其血液循环半衰期、提高其肿瘤靶向效率及增强药物疗效等优势。深入研究不同PEG-lipid衍生物修饰对脂质体的物理、化学和生物学稳定性的影响,有利于解决目前PEG化脂质体存在的问题,如静脉重复注射时引起的加速血液消除(accelerated blood clearance,ABC)现象,为开发新型靶向制剂奠定基础。本文主要综述了PEG与脂质之间的连接键如酰胺键、醚键、酯键和二硫键,脂质种类如常用的磷脂酰乙醇胺、胆固醇和二酰甘油,脂质的性质即脂肪链长度与饱和度,PEG的端基如甲氧基、羧基、氨基,PEG的相对分子质量和PEG-lipid的摩尔比对PEG化脂质体在体内外稳定性的影响。     

聚乙二醇修饰蛋白质类药物的研究现状及展望

随着基因工程技术的发展，蛋白质类药物的应用越来越受到人们的青睐。然而由于蛋白质类药物具有血浆半衰期较短、有一定的免疫原性等不足，在一定程度上限制了其临床应用。由于聚乙二醇(PEG)具有与蛋白质相容的特性，用其对蛋白质类药物进行化学修饰已经成为医学和生物工程领域的热门课题，得到了广泛的研究和应用。PEG修饰的蛋白质类药物已经逐渐成为新一代高效、低毒的治疗药物。本文简要介绍了几种已获美国FDA批准的PEG修饰的蛋白质类药物。     

人血清白蛋白的聚乙二醇修饰及其修饰产物的血管透过率和药代动力学研究

目的通过对人血清白蛋白(HSA)进行聚乙二醇(PEG)修饰合成PEG化HSA(PEG-HSA),以期减少HSA的血管透过率,延长其血管保留时间。方法采用氰尿酰氯活化的PEG修饰HSA,对PEG-HSA的二级结构、急性肺损伤模型中的肺毛细血管透过率和药代动力学性质进行研究。结果 PEG-HSA与HSA的二级结构基本一致,PEG修饰能显著降低急性肺损伤模型中HSA的肺毛细血管透过率,药代动力学研究显示PEG-HSA的半衰期延长为修饰前的2.2倍左右。结论在毛细血管渗透性增加的相关疾病治疗中,PEG-HSA有望成为一种更为优良的血容量扩充剂。