蛋白转移鉴定法及其在钙蛋白研究中的应用

本文综合了蛋白转移鉴定法的应用范围、操作要点和发展情况。并结合作者的工作经验介绍了本法在钙蛋白研究中的应用。     

钙媒蛋白拮抗剂

众所周知,Ca~(2+)是重要的细胞内信使,它调节着许多细胞反应和活动。Ca~(2+)所产生的效应中有许多是通过多种钙调蛋白(Calcium mo-dulated protein)介导的。1970年,张等首先报道一种能激活环核苷酸磷酸二酯酶的蛋白激活剂。此后发表了许多关于这一蛋白质的提纯、来源和性质的报道,并冠予不同的名称,如:激活剂蛋白(Activator     

钙调素拮抗剂对非酶体系中羟自由基水平影响的研究

研究了钙调素拮抗剂(Calmodulin Antagonist,简写CaM A)与抗坏血酸体系产生的羟自由基(~.OH)的相互作用。结果显示,小檗胺(E_0)及其衍生物(E_5、E_6)、蝙蝠葛碱(D_1)及氯丙嗪(CPZ)在高浓度时均有清除~.OH的作用;除E_0和CPZ外,其它药物在低浓度均可促进~.OH的生成。研究表明,研究钙调素(CaM)与自由基的相互关系时,在合理的浓度范围内使用CaM A作为研究手段是可行的。     

四种小檗胺衍生物与红细胞膜Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase的相互作用

四种小檗胺衍生物对人红细胞膜Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase的基础活性无影响,但对钙调素(CaM)和胰蛋白酶限制性酶解这两种形式所活化的Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase都有不同程度的抑制作用,且有平行的抑制强度。初步探讨了这类化合物影响Ca~(2 )-Mg~(2 )-ATPase活力的可能机制。     

磷脂酶A2的活力测定与临床初步应用

磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２，ＰＬＡ２）是能催化和水解膜磷脂的磷脂酶中的一种，几乎存在于所有的细胞中，在血清、胰液、精浆、唾液、滑膜液中都可测得。酶蛋白由１２５个氨基酸的单一多肽链组成，分子量１２０００～１５０００，等电点是９．２，最适...     

层析法分离纯化溶菌酶概况

<正> 目前层析法分离纯化溶菌酶已成为最有效和较实用的工业化方法,本文拟就离子交换、凝胶过滤和亲和层析三个方面的概况作一介绍。一、离子交换法: 离子交换法是分离纯化溶菌酶最常用的方法。 1.国产724树脂提取溶菌酶: 溶菌酶为一碱性蛋白(等电点pH10.7-11.3),在等电点以下的广泛pH范围内,分子带正电荷,据此借静电引力吸附于弱酸性阳离子     

二氢嘧啶酶的分离纯化与性质研究

二氢嘧啶酶产生菌Pseudomonasputida 980 1经过超声波粉碎及分级盐析 ,DEAE 纤维素和羟基磷灰石柱层析 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤得到纯化 2 49倍的酶液。SDS PAGE显示为单带 ,单体分子量为 380 0 0 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤测得分子量为 15 6 0 0 0。二氢嘧啶酶对苯海因的km 为 2 .39× 10 -2 mol/L ,其最适 pH和最适温度分别是 8.5～ 8.7和 34℃～ 35℃。 1mmol/L的EDTA和 β 巯基乙醇对酶活力有强烈的抑制作用。     

一种新的融合表达载体的构建

利用Ｌ－ａｎｓＢ基因片段构建了融合表达载体ｐＥＣ,其中Ｌ－ａｎｓＢ基因中编码唯一酸水解位点的序列已通过定点突变消除,并在它的３’端引入了新的酸水解位点编码序列和方便外源基因插入的克隆位点ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ,外源基因可从克隆位点ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ处插入ｐＥＣ中,表达的融合蛋白用酸水解法加工后仅被切割成一大一小两个片段,不会导致产物混杂,ｈＧＲＦ对它进行验 结果显示ｈＧＲＦ基因不仅能按正确的读     

人源血管内皮生长因子突变体的克隆、分离纯化及活性研究

目的：为获得大量人源血管内皮生长因子突变体（hVEGF121’）的重组蛋白，本文研究了其发酵条件，分离纯化方法．并初步考察了其生物活性。方法：应用PCR介导的定点突变方法，将hVEGF121中对其活性影响较小的1-8位和115～12l位两个肽段替换成破伤风毒素（TT）的两个强表位肽段618-627位和831-837位，构建高效表达的pET28a／hVEGF121’重组质粒，考察诱导条件对目的蛋白表达量的影响；所得包含体经过DEAE-Cellulose离子交换柱纯化；初步比较了VEGF121和突变体VEGF121’的免疫和杭肿瘤效果。结果：最佳表达条件为：乳糖诱导时间6h，诱导浓度2mmol／L；离子交换纯化后可得到电泳纯的突变体hVEGF121’；初步的动物免疫发现突变体VEGF121’和VEGF121有相近的免疫滴度，但前者杭肿瘤效果更显著。结论：经发酵纯化后得到重组人源血管内皮生长因子突变体（hVEGF121’）的纯品，并初步展现良好的抗肿瘤效果.     

麦冬多糖对家蚕、果蝇寿命和对衰老小鼠单胺氧化酶及血清溶血素的影响

目的:观察麦冬多糖对多种衰老动物模型的抗衰老作用及作用机制.方法:分别采用家蚕、果蝇及D-半乳糖所致衰老小鼠作为研究对象,观察不同剂量的麦冬多糖对家蚕、果蝇寿命的影响以及对D-半乳糖所致衰老小鼠脑内过氧化水平、单胺氧化酶活性及血清溶血素的影响.结果:麦冬多糖能够剂量依赖性地延长家蚕及果蝇的寿命,降低D-半乳糖所致衰老小鼠脑内单胺氧化酶(MAO-B)活力,增加血清溶血素,提高衰老小鼠的体液免疫功能.结论:麦冬多糖具有延缓衰老的作用,该作用与增强机体免疫系统功能有关.