脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖与内毒素血症小鼠肺泡巨噬细胞结合的影响

目的 研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽P12对脂多糖(LPS)与小鼠肺泡巨噬细胞(AMs)结合的抑制作用,探讨LBP抑制肽体内阻断内毒素信号传导通路的机制.方法 40只小鼠随机分为5组:对照组、内毒素血症组、低剂量P12组、中剂量P12组和高剂量P12组,每组8只.腹腔内注射LPS复制内毒素血症模型,尾静脉注射P12,流式细胞检测分析(FACS)异硫氰酸荧光素标记的LPS(FITC-LPS)与AMs的结合,以平均荧光强度(MFI)表示;ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 内毒素血症组小鼠AMs MFI明显高于对照组(45.31%比4.61%,P＜0.05);低剂量P12组、中剂量P12组和高剂量P12组的MFI分别为40.08%、30.76%和24.45%,低于内毒素血症组(低剂量组P＞0.05,中剂量P12组和高剂量组P均＜0.05).内毒素血症组小鼠血清中TNF-α的含量显著高于对照组[(180.17±39.14)pg/mL比(24.88±5.82)pg/mL,P＜0.01];低剂量P12组、中剂量P12组和高剂量P12组血清中TNF-α的含量分别为(112.69±19.78)pg/mL、(86.34±9.25)pg/mL和(70.48±8.48)pg/mL,均明显低于内毒素血症组(P均＜0.05).结论 LBP抑制肽P12抑制了LPS与内毒素血症小鼠AMs的结合,显著降低了LPS诱导的TNF-α的产生.     

脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的人单核巨噬细胞株表达CD14的影响

目的研究脂多糖结合蛋白(LBP)抑制肽对内毒素(LPS)诱导的人单核巨噬细胞株U937细胞表达CD14的影响。方法佛波脂(PMA)诱导U937成熟后分为5组:正常对照组、LPS组(100ng/mLLPS 100ng/mLrhLBP)、低剂量抑制肽组、中剂量抑制肽组及高剂量抑制肽组,后3组分别给予10、100和1000ng/mL抑制肽。用RTPCR和蛋白定量方法(Westernblot)测定CD14mRNA和蛋白的表达,ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量。结果LBP抑制肽显著抑制LPS刺激后U937细胞CD14的mRNA与蛋白表达,同时也抑制了TNFα的分泌,较LPS组有显著差异。结论LBP抑制肽通过抑制由CD14介导的LPS信号跨膜转导和TNFα的分泌,对LPS所致疾病如脓毒血症、急性肺损伤可能有潜在的治疗作用。     

脂多糖结合蛋白和可溶性CD14对小鼠体内脂多糖结合作用的研究

目的 研究血清中脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP),可溶性CD14(soluble CD14,sCD14)对小鼠体内脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)结合作用的影响.方法 ICR小鼠分组,共5组,分别注射蛋白终浓度均为100ng/ml的LPS与LBP、LPS与sCD14的混合液作为实验组,以及分别单独注射LPS、LBP、sCD14液作为对照组,30min后检测小鼠血清LPS浓度.结果 第2组LBP组和第4组sCD14组的LPS检测浓度明显低于第1组、第3组和第5组的结果(P＜0.01),第3组LPS与LBP混合组的LPS浓度明显高于第1组LPS组结果(P＜0.01).第5组LPS和sCD14混合组的LPS浓度高于第1组LPS组结果(P＜0.05),第3组LPS和LBP混合组的LPS浓度明显高于第5组LPS和sCD14混合组(P＜0.01).结论 100ng/ml外源性LBP比sCD14能更好地结合小鼠体内LPS,减轻了LPS对机体的损害.     

槐定碱预防小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏CD14、TLR4表达的影响

目的 研究预防性给予槐定碱对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及对CD14、TLR4表达的调节.方法 观察槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性处理的小鼠,在给予内毒素后2、6、12、24h时各组小鼠一般状况、肉眼及光镜下肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,RT-PCR与Western Blot分别检测肝组织CD14及TLR4的mRNA与蛋白表达,放免法检测血清TNF-α含量的变化.结果 槐定碱三个剂量预防性给予,各个时间点结果均表明改善了内毒素血症模型小鼠的一般状况,减轻了肝组织病理改变;槐定碱三个剂量组的ALT值均低于同时间点的LPS模型组(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组与同时间点LPS模型组比较,均下调肝组织CD14、TLR4 mRNA和蛋白的表达(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组血清TNF-α水平均较同时间点LPS模型组降低(P<0.01或P<0.05),并在24h时均降至正常对照组水平.结论 槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性给予,可抑制内毒素血症小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPs识别受体CD14、TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关.     

三条脂多糖结合蛋白/CD14结合位点模拟肽体外抗内毒素活性的比较研究

目的 比较三条LBP/CD14结合位点模拟肽体外抑制内毒素性炎症反应的生物学活性.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测模拟肽与CD1l4的亲和力及与脂多糖结合蛋白(LBP)的竞争性抑制活性.将佛波脂(PMA)诱导成熟的U937细胞与内毒索共培养,并予以模拟肽干预,采用RT-PCR检测模拟肽对U937细胞TNF-α基因表达的影响.将大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)与荧光标记内毒素(FITC-LPS)共培养,并予以模拟肽干预,采用荧光显微镜观测模拟肽对内毒素(LPS)与AMs结合的影响.结果 1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP,10 μg/mL)与CD14的亲和力显著高于2号和3号模拟肽(20.3±4.1比11.8±2.4和13.7±3.3,P＜0.01或P＜0.05),1号模拟肽(10 μg/mL)对LBP的竞争性抑制活性也显著高于2号和3号模拟肽[(57.2±11.2)%比(39.4±9.7)%和(37.9±8.3)%,P均＜0.01].三条模拟肽(10μg/mL)均可从基因水平显著抑制LPS诱导U937细胞产生TNF-α(P＜0.01或P＜0.05),1号模拟肽的抑制作用显著强于2号和3号模拟肽(0.239±0.053比0.406±0.112和0.493±0.121,P＜0.01).1号模拟肽能显著抑制LPS与AMs结合(2 157±514比2 763±453,P＜0.01).结论 1号模拟肽(FHRWPTWPLPSP)有较高的CD14亲和力及LBP竞争性抑制活性,具有潜在的抗内毒素性炎症反应的作用.     

乳铁蛋白对脂多糖激活的U937细胞TLR4信号通路相关膜分子表达的影响

目的:研究重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rh LF)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活的U937细胞Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)信号通路相关膜分子TLR4、CD14、MD2表达的影响。方法:经佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导成熟的U937细胞随机分为6组:对照组、LPS组(给予100 ng/ml LPS)、LPS+50μg/ml rh LF组、LPS+100μg/ml rh LF组、LPS+200μg/ml rh LF组、LPS+500μg/ml rh LF组,采用RT-PCR和Western blot检测各组细胞TLR4、CD14、MD2 m RNA和蛋白的表达,ELISA检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量。结果:LPS组U937细胞TLR4、CD14、MD2 m RNA和蛋白的表达均明显高于对照组(P<0.05),LPS+50μg/ml rh LF组三者m RNA和蛋白的表达与LPS组差异不明显(P>0.05),LPS+100μg/ml rh LF组、LPS+200μg/ml rh LF组、LPS+500μg/ml rh LF组均明显降低了LPS诱导的TLR4、CD14、MD2 m RNA和蛋白的表达(P<0.05);LPS组TNF-α的含量明显高于对照组(P<0.05),LPS+50μg/ml rh LF组、LPS+100μg/ml rh LF组、LPS+200μg/ml rh LF组、LPS+500μg/ml rh LF组均明显降低了LPS诱导的TNF-α的产生(P<0.05)。结论:rh LF通过抑制TLR4介导的LPS跨膜信号转导和炎症因子TNF-α的分泌,对LPS所致的脓毒血症具有潜在的治疗作用。     

炎症诱导性早产小鼠胎盘淋巴细胞表型分析

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在炎症诱导性早产中的作用.方法 预先阻断TLR4或不阻断TLR4的条件下,腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠炎症诱导性早产模型,计算早产率和死胎率.采用流式细胞术检测胎盘CD45+CD86+、CD45+CD49b+和CD49b+CD69+细胞的百分率.结果 LPS组的早产率和死胎率均明显高于对照组,抗TLR4组的早产率和死胎率均显著低于LPS组.预先阻断TLR4明显抑制LPS所致的胎盘CD45+CD86+、CD45+CD49b+和CD49b+CD69+细胞水平的升高.结论 TLR4在炎症诱导性早产中具有重要作用.     

慢性胰腺炎患者胰腺和血清中TLR4信号通路关键因子的检测及其意义

目的:检测慢性胰腺炎(CP)患者胰腺和血清中Toll样受体4(TLR4)信号通路关键应答基因的表达,阐明TLR4信号通路在CP发生发展过程中的意义.方法:收集24例CP和6例胰腺正常的良性病变患者的手术胰腺组织标本,分别进行TLR4 mRNA原位杂交和髓样分化蛋白88 (MyD-88)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫组织化学染色,利用电脑分析系统测量各个指标的积分光密度(IA)值.采集84例CP患者及30例正常成人的空腹静脉血,ELISA法检测血清可溶性TLR4 (sTLR4)、TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素12(IL-12)的水平,分光光度法检测血浆内毒素脂多糖(LPS)的水平.分析血浆LPS水平与各细胞因子的相关性.结果:与正常对照组比较,CP组患者胰腺组织TLR4 mRNA、MyD88、TNF-a表达水平均显著增加(P＜0.01),分别是正常对照的4.2、6.1及10.2倍;末梢血LPS、sTLR4、TNF-a、IL-6和IL-12水平与正常对照组比较均升高(P＜0.05或P＜0.01);Bivariate相关分析,伴有内毒素血症的CP患者血浆LPS水平与血清TNF-α、IL-6、IL-12水平呈正相关关系(r=0.859,P＜0.01; r=0.688,P＜0.01; r=0.539,P＜0.05).结论:LPS-TLR4信号通路及应答基因产物在CP患者胰腺及外周血中均上调,其在CP急性发作期和炎症进展过程中发挥重要作用.     

低剂量氢化可的松治疗感染性休克时对外周血T淋巴细胞凋亡的影响及机制

目的:探讨低剂量氢化可的松治疗感染性休克时对外周血T淋巴细胞凋亡的影响及机制?方法:前瞻性的将南京市第一医院ICU自2006年1月~2009年1月收治的57例感染性休克患者按照随机对照的原则分为低剂量氢化可的松治疗组和对照组,同时选择20例健康志愿者和18例脓毒血症患者?采取外周血,用Annexin V法和流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群的凋亡情况,用酶增敏免疫测定(EASIA)法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)?白细胞介素-1β(IL-1β)?白细胞介素-10(IL-10)的浓度,观察低剂量氢化可的松对上述各项指标的影响?结果:在初始状态下,外周血CD4+ T淋巴细胞亚群的凋亡在健康对照组?脓毒血症组及感染性休克组分别为(4.41±1.45)%,(7.87±3.82)%及(11.01±4.52)%,感染性休克患者的外周血CD4+ T淋巴细胞亚群的凋亡多于脓毒血症患者(P < 0.05),脓毒血症患者多于健康对照组(P < 0.05);而初始状态下健康对照组?脓毒血症组及感染性休克组患者外周血T淋巴细胞CD8+亚群的凋亡,3组比较差异无统计学意义(P > 0.05)?48 h后休克对照组和治疗组CD4+亚群的凋亡分别为(19.39±6.63)%和(22.61±5.64)%,治疗组明显多于对照组(P < 0.05);而48 h后CD8+亚群的凋亡为在休克对照组和治疗组之间比较无统计学意义(P > 0.05)?在基础状态下TNF-α的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为(16.44±9.55)pg/mL,(29.58±13.6)pg/mL及(47.99±25.63)pg/mL,感染性休克组高于脓毒血症组(P < 0.05),脓毒血症组高于健康对照组(P < 0.05),持续72 h;起病48 h后感染性休克对照组和治疗组的TNF-α浓度分别为(73.47±25.39)pg/mL和(59.66±16.37)pg/mL,治疗组明显低于对照组(P < 0.05);IL-1β在健康对照组?脓毒血症组及感染性休克组中分别为(13.12±5.07)pg/mL,(25.21±14.7)pg/mL及(22.94±22.01)pg/mL,感染性休克组和脓毒血症组的浓度均高于健康对照组(P < 0.05),但是感染性休克组和脓毒血症组的浓度差异无统计学意义(P > 0.05),发病48 h后感染性休克对照组和治疗组的IL-1β的浓度比较没有差异(P > 0.05)?基础状态下IL-10的浓度在健康对照组,脓毒血症组及感染性休克组中分别为(6.38±7.5)pg/mL,(9.67±4.88)pg/mL及(15.01±5.36)pg/mL,感染性休克组中的IL-10的浓度高于脓毒血症组(P < 0.05),脓毒血症组高于健康对照组(P < 0.05),持续72 h;发病48 h后,休克对照组的IL-10的浓度为(30.18±16.62)pg/mL,治疗组为(40.62±24.23)pg/mL,治疗组的浓度要高于对照组(P < 0.05)?结论:采用低剂量氢化可的松治疗感染性休克时,可以使CD4+淋巴细胞凋亡明显增多,同时会使IL-10升高,IL-10升高可能是氢化可的松治疗感染性休克时诱导外周血CD4+T淋巴细胞凋亡增多的原因之一?     

miR-363-5p靶向TRIM14对化疗药物诱导的乳腺癌细胞系凋亡的影响

目的探究抑制IL-17A的表达对脓毒血症小鼠急性肾脏损伤的影响。 方法24只小鼠按照随机数字表法均分为对照组、模型组和抑制剂组。模型组和抑制剂组小鼠腹腔注射高剂量LPS(10 mg/kg)建立脓毒血症急性肾损伤模型,抑制剂组给与IL-17A抑制剂SGC-CBP30(30 mg/kg)。检测血清肌酐、尿素氮和炎症因子水平,分析肾功能的变化,通过HE染色和过碘酸雪夫染色分析肾脏病理变化,分析肾脏炎症因子水平和细胞凋亡蛋白的变化。 结果IL-17A抑制剂处理能够显著下调脓毒血症小鼠血清肌酐、尿素氮和炎症因子IL-6和TNF-α水平(P＜0.05);抑制IL-17A的表达能够显著改善脓毒血症小鼠肾脏的损伤,下调肾脏炎症因子和细胞凋亡蛋白的表达。 结论抑制IL-17A的表达能够改善脓毒血症小鼠急性肾损伤。