一种新高频通气方法对实验性急性呼吸窘迫综合征的疗效观察

在高频喷射通气（ＨＦＪＶ）治疗犬实验性急性呼吸窘迫综合征（ＡＲＤＳ）时，采用连续ＨＦＪＶ基础上间歇叠加深吸气（ＨＦＪＶ＋ＤＩ）的新通气方法，以期为ＡＲＤＳ的治疗寻找一种新途径。用油酸复制犬ＡＲＤＳ模型，并随机分为３组。ＨＦＪＶ＋ＤＩ组（ｎ＝１０）：在连续ＨＦＪＶ基础上每隔１０分钟加入１次深吸气；常规机械通气组（ＣＭＶ，ｎ＝１０），给予０．７８５ｋＰａ（１ｋＰａ＝１０．２０ｃｍＨ２Ｏ）呼气末正压（ＰＥＥＰ）治疗；对照组（ｎ＝１０），未予通气治疗。每隔１小时测定１次氧合及血流动力学指标，共观察５小时。注射油酸后，动脉氧分压（ＰａＯ２）由１２．４００ｋＰａ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ）降至６．５６０ｋＰａ（Ｐ＜０．０１），动脉二氧化碳分压（Ｐａ－ＣＯ２）未见明显变化。通气治疗后，ＣＭＶ和ＨＦＪＶ＋ＤＩ均使ＰａＯ２明显升高，ＰａＣＯ２无明显变化（Ｐ＞０．０５），ＨＦＪＶ＋ＤＩ的氧释放指数（ＤＯ２Ｉ）明显高于ＣＭＶ组（Ｐ＞０．０５），心脏指数（ＣＩ）在ＣＭＶ组及ＨＦＪＶ＋ＤＩ组均明显减低（Ｐ＜０．０５）。提示：ＨＦＪＶ＋ＤＩ时ＰａＯ２的提高大于ＣＩ下降所致的不利影响，在改善组织缺氧方面明显优于ＣＭＶ时加用ＰＥＥＰ     

慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的表达。方法用密度梯度离心法分离COPD患者和健康人外周血单个核细胞后,提取总RNA并逆转录为cDNA,用实时定量PCR检测TLR3、TLR7、TLR8及TLR9mRNA的拷贝数。结果COPD患者外周血单个核细胞的TLR3和TLR9mRNA表达较正常健康人明显增高(P<0.05),而TLR7和TLR8mRNA的表达在COPD患者和正常健康人之间却无显著差异(P>0.05)。在COPD患者中,急性期和稳定期患者的TLR3、TLR7、TLR8和TLR9无显著差异(P>0.05)。结论TLR3和TLR9的升高可能是COPD患者对病毒敏感性增高的一个重要机制。     

噬菌体展示短肽模拟脂多糖结合蛋白抗炎功能位点的研究

目的应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(lipopolysaceharide binding protein,LBP)具有抗炎作用的肽序列.方法以LPS为目标分子,对噬菌体十二肽库进行亲合筛选,4轮筛选后,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性,对可与LBP竞争性结合LPS的噬菌体克隆行细胞因子生成抑制实验和LPS内化抑制实验,对获得的阳性克隆进行DNA序列测定,推导外源肽氨基酸序列,并与LBP序列比较,确定LBP的抗炎功能位点.结果随机挑取的100个噬菌体克隆中16个可与LBP竞争性结合LPS,其中7个噬菌体克隆对LBP的增敏LPS刺激PBMC分泌TNF-α功能无作用,对这7个克隆进行LPS内化抑制实验,其中3个克隆可以抑制LBP增强LPS内化作用.测序发现这3个阳性克隆融合多肽的序列均为FHTRWNYWPYLH,与IBP一级结构氨基酸序列同源性低.结论该12肽序列可以模拟LBP的抗炎功能位点.     

对脂多糖结合蛋白致炎的多肽序列分析

目的应用噬菌体随机12肽库探讨脂多糖结合蛋白(LBP)致炎作用的多肽序列.方法以LPS为目标分子,对噬菌体12肽库进行亲合筛选,4轮筛选后,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性,将得到的16个可与LBP竞争性结合LPS的噬菌体克隆进行生物学功能检测,对获得的9个阳性克隆进行测序,并与LBP序列比较.结果9个阳性克隆展示多肽的核心序列为WKXRKXFXKXXG,与LBP的91～102位氨基酸序列有较高同源性.结论LBP的91～102位氨基酸可能为其致炎作用部位.     

肺损伤机制研究：脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株核转录因子κB活性的影响

目的：探讨肺损伤机制和脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein，LBP)抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株U937细胞核转录因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)活性的影响，研究LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤的作用。方法：佛波脂诱导U937成熟后分为5组。即正常对照组；脂多糖组(10μg／L脂多糖+100μg／L重组人LBP)；低剂量抑制肽组；中剂量抑制肽组；高剂量抑制肽组(后3组分别给予10，100和1000μg／L抑制肽)。用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Western blot)测定U937细胞NFKB的活性；ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF—α)水平。结果：脂多糖刺激后NFκB P65进入核内，抑制肽组核易位明显减少。低、中、高剂量抑制肽组P65核浆灰度比分别为0．59&;#177;0．06，1．02&;#177;0．12和1．08&;#177;0．10，明显低于脂多糖组(1．34&;#177;0．12)(t=4．756，P&;lt;0．01；t=2．235，2．308，P&;lt;0．05)。低、中、高剂量抑制肽组TNF—α水平分别为(93．66&;#177;2．30)，(75．78&;#177;6．55)和(71．50&;#177;7．75)pg／L，明显低于脂多糖组[(128．67&;#177;39．67)pg／L](t=2．216，P&;lt;0．05；t=2．423，2．389，P&;lt;0．01)。结论：LBP抑制肽抑制了U937细胞NFκB的活性和TNF—α的释放；LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤可能具有潜在的预防作用。     

LBP对LPS激活巨噬细胞内p38信号通路的影响 

目的:探讨脂多糖结合蛋白(LBP)对脂多糖(LPS)激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路的调节作用。方法:经硫酸铵盐析、Bio-Rex70阳离子交换层析和MonoQ阴离子交换层析, 从大鼠急性期血清中分离纯化LBP。分别用0.01mg/L和1mg/L的LPS刺激肺泡巨噬细胞, 并加入不同浓度LBP(0mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L、1mg/L和10mg/L), 观察肺泡巨噬细胞中p38蛋白激酶的磷酸化程度。结果:纯化的大鼠LBP在SDS-PAGE的60kD处呈现单一条带, 并可增强LPS与单核细胞的结合。当LPS浓度为0.01mg/L时, 1mg/L以下的LBP可明显增敏LPS对肺泡巨噬细胞内p38信号通路的激活, 并且这种增敏作用随LBP浓度的增加而增强。但LBP为10mg/L时, LBP对LPS的增敏作用反而有所减弱;当LPS为1mg/L时, LBP对LPS激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路无调节作用。结论:LBP对低浓度LPS(0.01mg/L)激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路有明显的调节作用;而高浓度LPS(1mg/L)不需LBP的增敏作用, 可能通过LBP非依赖途径直接激活p38信号通路。     

组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用

目的: 观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体(TLR)表达的影响. 方法: 体外培养人肺上皮细胞株A549,用RT-PCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR1～TLR10 mRNA的变化,并用流式细胞术进一步确定组胺对TLR3表达的调节作用. 结果: A549细胞有TLR1～TLR10 mRNA的组成型表达,组胺对TLR3 mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性,并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用. 结论: 组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达,提示当呼吸道存在变态反应性病变时,增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性.     

PBL与能力培养

以问题为基础的学习（Problem Based Learning，PBL）与传统教学方法的一个主要区别是PBL在学习知识的同时强调各种能力的培养和运用。如学生的自学能力、思维能力、人际交流能力等。从PBL与能力培养之间的内在联系，探讨符合我国实际情况的PBL教学模式，从而更好地进行PBL教学，培养出高素质的医学人才。     

TLR1-TLR4在人嗜碱性粒细胞中的表达

目的分别在基因和蛋白水平上观察Toll样受体(Tolllikereceptor,TLR)家族成员中的TLR1、TLR2、TLR3和TLR4在人嗜碱性粒细胞系KU812中的表达。方法取1×106细胞,从细胞中提取总RNA后,用RT-PCR检测细胞中mRNA的表达;用抗人TLR1-TLR4单克隆抗体和小鼠同型抗体行免疫荧光染色后,在流式细胞仪上检测TLR1-TLR4蛋白的表达。结果人嗜碱性粒细胞有TLR1-14mRNA的组成型表达。在流式细胞仪检测中,用抗人TLR1-TLR4单克隆抗体染色的细胞,其荧光强度均明显高于同型对照。结论嗜碱性粒细胞中有TLR-TLR4的组成型表达,提示嗜碱性粒细胞可作为一种免疫细胞对病原微生物进行识别。