神经酰胺对人膀胱癌细胞凋亡诱导作用及其机制

目的 探讨神经酰胺（cer）对人膀胱癌细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法 不同浓度C2-神经酰胺（C2-cer）作用于膀胱癌T24细胞，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率，吖啶橙（AO）荧光染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，并对半胱天冬酶（Caspase）-3活性、bcl-2蛋白含量和细胞色素C在细胞内的分布变化进行检测。结果 T24细胞存活率与C2-cer浓度呈负相关（r=-0．973，P＜0．01）。对照组和5、10、20、40μmol／L的C2-cer处理组凋亡率分别为2．95％、9．18％、14．23％、29．12％、48．46％，C2-cer处理组凋亡率显著高于对照组（P＜0．01）。Caspase-3活性随C2-cer浓度增加而增加，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。在C2-cer作用下，T24细胞内bcl-2蛋白含量下降，细胞色素C向细胞质释放。结论 降低bcl-2蛋白表达水平，从而促进线粒体细胞色素C释放和Caspase-3激活可能是C2-cer诱导膀胱癌细胞凋亡的重要机制。     

核转录因子NF-κB及黏蛋白MUC1参与膀胱癌耐药机理的研究

目的探讨核转录因子NF-κB及上皮特异性黏蛋白MUC1基因及蛋白参与膀胱癌细胞耐药形成的机理。方法免疫组织化学SP法检测NF-κB p65和MUC1蛋白在BIU-87、T-24及耐药株BIU-87／A细胞中的表达。原位杂交技术检测NF-κB p65的mRNA在3种细胞质中的表达。流式细胞仪检测3种细胞在阿霉素、长春新碱、顺铂3种化疗药物作用48h后的凋亡率。结果NF—κB p65蛋白在BIU-87、T-24细胞质中均有阳性表达，细胞核几乎无表达，在BIU-87／A耐药株的胞质、胞核中均有阳性表达。3组细胞平均吸光度值差异无统计学意义（P〉0．05）。MUC1在BIU-87、T-24细胞膜、胞质中均有弱阳性表达，在BIU-87／A的胞膜、胞质中均有强阳性表达，两者平均吸光度值差异有统计学意义（P〈0．01）。3种细胞中NF-κB p65 mRNA表达均在胞质，核无表达，且3组细胞平均吸光度值差异无统计学意义（P〉0．05）。3种细胞自发凋亡率分别为1．15％、1，40％、0．90％，3种化疗药物作用48h后，BIU-87细胞凋亡率分别为45．69％、47．70％、44．50％，T-24细胞凋亡率分别为43．79％、46．17％、44．50％，用药前后差异有统计学意义（P〈0．01）。两种细胞之间及3种化疗药之间差异无统计学意义（P〉0．05）。BIU-87／A在阿霉素、长春新碱作用48h后的凋亡率分别为19．88％、21．41％，用药前后差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NF-κB是膀胱癌细胞BIU-87／A耐药形成的中心环节，BIU-87／A耐药形成中NF-κB过度活化导致MUC1高表达可能是另一途径。     

吡柔比星与丝裂霉素C对膀胱癌T24细胞株抑制作用的实验研究

目的探讨吡柔比星（THP）与丝裂霉素C（MMC）对膀胱癌T24细胞株的抑制作用。方法将膀胱癌T24细胞株分为4组,分别给予THP、MMC、THP＋MMC和MMC＋THP。用MTT法测定T24细胞的增殖抑制率,用TuNEL法检测T24细胞的凋亡情况。结果THP、MMC、THP＋MMC和MMC＋THP四组的增殖抑制率（％）分别为54．3±6．4,48．9±7．2,62．3±5．9,69．1±6．2;凋亡指数（％）分别为6．2±2．5,4．4±2．7,6．7±3．0,7．4±3．2。联合用药组对T24细胞的抑制作用优于单药THP和MMC对肿瘤细胞的抑制作用（P〈0．05）。在联合用药组中,MMC＋THP组对T24细胞的抑制作用优于THP＋MMC组对肿瘤细胞的抑制作用（P〈O．05）。结论THP和MMC均可抑制膀胱癌T24细胞株的增殖并诱导凋亡,两药序贯联合用于膀胱灌注化疗可能具有合理性。     

粉防己碱对膀胱癌BIU-87/ADM细胞株的耐药逆转作用及其机制

目的 探讨粉防己碱(TET)对膀胱癌耐药株BIU-87/ADM多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法 应用CCK法观察不同浓度TET( 1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L)对BIU-87和BIU-87/ADM细胞生长的抑制作用,并测定1 mg/L TET逆转多药耐药的活性;Annexin-V与PI双染法流式细胞术分析1 mg/L TET对细胞凋亡的影响;免疫荧光法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测1 mg/L TET对P-gp蛋白和MDR1表达水平的影响;细胞免疫化学法和RT-PCR法检测1 mg/L TET对BIU-87/ADM细胞Caspase-3和Survivin表达水平的影响。结果 1.0 mg/L无毒剂量下的TET显著增加阿霉素(ADM)对耐药株BIU-87/ADM的细胞毒性作用(P＜0.01),逆转指数(RF)为5.33,而对敏感株BIU-87无明显作用(P＞0.05),RF为1.33;1.0 mg/L TET和1.5 mg/LADM共同作用48 h,能使BIU-87/ADM细胞凋亡率增加至(40.86±4.35)％,与单独应用ADM的(12.42 ±3.24)％比较差异有统计学意义(P＜0.01)。而BIU-87细胞凋亡率为(61.23 ±5.46)％,与单独应用ADM的(57.79±4.73)％比较差异无统计学意义(P＞0.05)。TET能明显抑制mdr1mRNA和P-gp蛋白在BIU-87/ADM的表达;与单用ADM比较,TET和ADM联用能使BIU-87/ADM细胞株中Caspase-3的表达水平明显升高(P＜0.01),Survivin的表达水平显著降低(P＜0.01)。结论 粉防己碱能逆转BIU-87/ADM细胞的多药耐药性,这一作用可能与粉防己碱抑制P-gp的表达和增强化疗药诱导细胞凋亡有关。     

PCNA反义寡脱氧核苷酸对BIU-87细胞体外增殖活性的影响

目的为探讨基因治疗膀脱癌的新途径,使用增殖细胞核抗原（PCNA）反义寡聚核苷酸（ASODN）作用于膀优癌细胞系BIU-87。方法应用细胞生长曲线和MTT比色法检测细胞增殖活性,并采用免疫组织化学方法（SABC法）检测PCNA蛋白的表达。结果ASOND（30urn）处理组细胞与对照组比较生长曲线差异有显著性,增殖显著受抑（P＜0．05）,PCNA蛋白表达完全抑制。而SODN组则无此作用（P＞0．05）。结论PCNA反义寡聚核苷酸可以显著抑制BIU-87细胞体外增殖活性,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现。     

BAK基因过表达对膀胱癌细胞的诱导凋亡作用及其分子机制

目的：探讨BAK基因过表达对膀胱癌的诱导凋亡效应及机制。方法：脂质体介导BAK基因转染膀胱癌EJ细胞1－7d后，逆转录聚合酶链反应检测BAK基因表达，细胞计数法检测癌细胞生长活性，DNA Ladder法、吖啶橙－溴化乙锭荧光染色法及原位末端转移酶标记技术检测癌细胞凋亡，免疫组织化学法检测癌细胞Caspase-3、Bcl-2,p53表达。结果：转染1－7d后，癌细胞BAK基因表达显著增强（P＜0．01），体外生长抑制20．66％－35．58％（P＜0．01），部分癌细胞呈现凋亡形态学变化，凋亡率为18．0％－20．6％（P＜0．01），癌细胞Caspase-3表达增强6．6倍（P＜0．01）Bcl．2和P53表达差异无显著性（P＞0．05）。结论：BAK基因表达能显著诱导膀胱癌细胞凋亡，其中Caspase-3激活是其作用机制之一。     

siRNA端粒酶催化亚单位诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的研究

目的：研究siRNA（small interference RNA）对人膀胱癌BIU-87细胞凋亡和端粒酶催化亚单位（hTERT）基因表达的影响。方法：设计并体外转录合成针对hTERT基因的3个特异性siRNA,通过脂质体将siRNA转入BIU-87细胞,分别采用MTT和DNA原位末端标记（TUNEL）法检测siRNA对BIU-87细胞生长抑制率（IR％）和凋亡指数（A100）的影响,半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western Blotting检测siRNA对hTERT mRNA及其蛋白表达的影响。结果：转染后的siRNA 1～3组的B1U-87细胞的IR（34．62％、62．19％、57．43％）和AI（30．62％、54．26％、51．50％）均分别显著高于正常对照组（3．46％和5．03％）（均P〈0．05）,hTERT mRNA及其蛋白表达水平均显著低于对照组;其中siRNA2～3对BIU-87细胞的IR、AI和hTERT表达的抑制作用均显著高于siRNA1。结论：体外转录合成的siRNA可抑制BIU-87细胞hTERT的表达,诱导BIU-87细胞凋亡,从而抑制BIU-87细胞生长,为siRNA介导的膀胱肿瘤基因沉默提供实验依据。     

卡介苗与细胞因子或化疗药物联合应用对膀胱癌细胞株BIU-87抑制作用

目的 探讨卡介苗（BCG）与细胞因子或化疗药物联合应用对人膀胱癌细胞株BIU-87的抑制作用。方法 在离体条件下，采用MTT染色法，研究BCG与肿瘤坏死因子、白细胞介素案I、干扰素等细胞因子及丝裂霉素C、阿霉素、噻替派和羟基喜树碱等化疗药物联合应用对膀胱癌细胞株BIU-87的抑制怍用。结果 细胞因子或化疗药物与BCG联合应用能明显增加BCG对BIU-87细胞的毒性作用（P＜0.05）。结论 BCG与细胞因子或化疗药物联合应用对膀胱癌细胞株BIU-87有协同细胞毒作用。     

Bcl 2和Caspase 3调控他莫昔芬诱导的ER阴性乳腺癌细胞凋亡

目的研究Bcl-2和Caspase-3在他莫昔芬（TAM）诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡中的调控作用。方法在体外培养条件下，用浓度为10μmol／L的TAM作用于雌激素受体（ER）阴性的MDA-MB-231人乳腺癌细胞株12，24，36，48，60h；流式细胞仪检测细胞凋亡率及Bcl-2和Bax的蛋白表达，荧光分光光度仪检测Caspase-3活性，以及加入Caspase-3活性抑制剂Ac—DEVD—CHO后凋亡百分率的变化。结果TAM作用ER阴性乳腺癌细胞后，Bcl-2表达下调，Caspase-3活性增强，细胞凋亡率增加．且有时间依赖性，细胞凋亡在48h达高峰。Bcl-2表达水平与Caspase-3活性变化成负相关（r=-0．921，P〈0．05），但Bax蛋白在药物处理前后无明显变化。加入Ac—DEVD—CHO后，能阻断Caspase-3活化而抑制TAM诱导细胞凋亡。结论TAM通过下调Bcl-2表达而经线粒体途径诱导ER阴性乳腺癌细胞凋亡，Caspase-3的激活在此过程中发挥重要作用。     

3-甲基腺嘌呤促进吡柔比星诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡及机制

目的 探讨3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬抑制剂联合吡柔比星(THP)对膀胱癌BIU-87细胞杀伤作用及机制.方法 膀胱癌BIU-87细胞分为对照组、3-MA(10 mmol/L)组、THP(5 mg/L)组、3-MA(10 mmol/L)+ THP(5 mg/L)组.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测各组细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ、Beclin-1以及凋亡蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和Caspase-9的表达.结果 药物作用24h后,各组细胞增殖率分别为(86.64±3.09)％、(63.70±5.62)％、(58.43±3.89)％、(37.55±4.17)％,其中3-MA+THP组细胞增殖下降最明显(P ＜0.05);3-MA与THP联合应用后,自噬蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表达明显减弱,而凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达在各组中最强(P＜0.05).结论 3-MA抑制膀胱癌BIU-87细胞对化疗药物保护性自噬反应,增加膀胱癌细胞对THP细胞毒杀伤作用的敏感性.     

绞股蓝皂苷对C2C12细胞成肌分化的影响

目的 研究发现，绞股蓝皂苷不仅具有抗炎、抗衰老等多重作用，而且还能促进成骨细胞增殖分化，保护其氧化应激损伤；本研究拟探讨绞股蓝皂苷对C2C12细胞成肌分化的影响。方法 完全培养基培养C2C12细胞，细胞增殖贴壁后用含有不同浓度绞股蓝皂苷的分化培养基诱导细胞分化，每个浓度均设置3个复孔；第5天观察细胞分化的形态、计算细胞的分化活力，Western blot检测相关成肌标志物MYF5和MyoD1的表达，免疫荧光检测MyoD1的表达，Image J软件计算肌管融合指数。结果 诱导C2C12细胞分化的第5天可见细胞分化为典型的肌管形态，10 mg/L和5 mg/L的绞股蓝皂苷浓度干预下的MYF5和MyoD1的表达较为显著，且肌管融合指数更高，相较于对照组差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论 绞股蓝皂苷可促进C2C12细胞的成肌分化，以10 mg/L和5 mg/L的浓度较好。     

日本慢性肝炎治疗指南中有关丙型肝炎的建议

为了补充、修订2004年版的慢性肝炎治疗标准化指南,进行了针对乙型及丙型肝炎病毒感染者治疗标准化临床研究的实况调查,该调查由日本国家公务员共济组合联合会虎门医院熊田博光副院长主持,有山口大学等13家单位参加.其综述研究报告书发表于2006年3月,现将调查报告中有关慢性丙型肝炎部分摘译以飨国内相关专业人士.     

Effect of hemodialysis on protein C levels

The immunological functions of antithrombin III and protein C were studied in 8 patients before, during and after hemodialysis. After dialysis a significant decrease in protein C and antithrombin III levels was seen. The changes observed in both proteins after hemodialysis should be considered as a component in the genesis of the hypercoagulation state in these patients.     

C6、C7椎弓根置钉的应用解剖学研究

目的:通过对C6、C7椎弓根的解剖学测量,设计一种以“峡部”为参考的C6、C7椎弓根置钉的方法.方法:15具经福尔马林浸泡的成人颈椎标本,不分性别、年龄,排除畸形及破坏.取C6、C7共30个椎体.先测量椎弓根宽度(PW)、椎弓根高度(PH).将C6、C7侧块中的一部分定义为“峡部”,即过上关节突下缘最低点、下关节突上缘最高点的水平线与过上关节突内外侧缘的垂线所围成区域.过上关节突内外侧缘之间划两条垂线,将“峡部”分为3等份,中份为“峡部”的后侧面,外份为“峡部”的后外侧面.取过横突根部中点的水平线与过“峡部”中外1/3垂线的交点为螺钉的进钉点.选择3.5mm直径及合适长度的螺钉,直视下沿椎弓根中轴线方向置入,使螺钉中轴线与椎弓根中轴线重合,螺钉前端穿出椎体或上终板.沿椎弓根中轴线的水平面锯开标本,可看到螺钉处在椎弓根中轴线上.螺钉在水平面上与“峡部”的后外侧面形成的角为横向角(E角);螺钉在矢状面上与“峡部”后侧面形成的角为纵向角(F角).测量椎弓根钉道全长(FSC).对数据进行t检验及类聚分析.结果:各指标同一节段左右侧数据比较无统计学差异(P＞0.05),故将同节段左右侧数据合并后进行统计分析.C6的PW为6.12±0.78mm,PH为7.48±0.81mm;C7的PW为6.85±0.73mm,PH为8.03 ±0.38mm;PW与PH均为C6＜C7(P＜0.05),同一节段PW＜PH(P＜0.05).利用聚类分析中的Hierarchical cluster过程对数据进行聚类分析,结果显示E角趋向于两类,即E1和E2.C6的E1角、E2角、F角及FSC与C7比较均无统计学差异(P＞0.05),将同一指标C6与C7数据合并统计结果为FSC 30.83±0.91mm,E1角89.61°±1.24°,E2角59.71°±1.10°,F角75.86°±112°.结论:在C6、C7以过横突根部中点的水平线与过“峡部”中外1/3垂线的交点为螺钉的进钉点,沿椎弓根中轴线方向,在水平面上按照E角、在矢状面上按照F角进钉,行椎弓根置钉具有可行性.     

Electrophysiologic study of influence on C7 innervated muscles after transection of different C7 fascicles

An experimental study was conducted to observe the electrophysiologic changes in C7 innervated muscles following transection of different fascicles of C7 nerve root in the brachial plexus with already transected C5 and C6. Twenty-four Sprague-Dawley rats were randomized into groups A, B, and C. C5 and C6 transection, C5, C6, and partial C7 (anteriolateral fascicles of the anterior division) transection, and C5, C6, and C7 transection were done in group A, B, and C, respectively. One month postoperatively, compound muscle action potentials of the latissimus dorsi, triceps, and extensor digitorum communis were recorded. Decreased amplitude and a prolonged latent period were seen in all three muscles of group C. No obvious changes, however, were found in groups A and B. This suggests that when the upper trunk of the brachial plexus is injured, partial transection of C7 does not obviously impair C7 innervated muscle function. Selective ipsilateral C7 transfer is safe for the treatment of upper-trunk avulsion.