甲氨蝶呤对类风湿关节炎环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞体外增殖的影响

目的观察甲氨蝶呤（MTX）对类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）患者环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞（Circum-citrul-linated peptide antigen special Tcell,CCP/AST）体外增殖水平的影响。方法体外分离、培养RA患者外周血淋巴细胞,分别设：空白组：不加任何干预药物;CCP组：仅加CCP干预（CCP终浓度为20 mg·L^-1）;甲氨喋呤（MTX）组：同时加CCP与MTX干预（CCP与MTX终浓度均为20 mg.L-1）;体外培养72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖（OD）水平。结果CCP可以显著诱导RA患者环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞（CCP/AST）体外增殖（P〈0.01）,在此基础上加入MTX后,CCP/AST增殖状态被显著抑制（P〈0.01）。结论MTX对RA患者CCP/AST的增殖水平有显著的抑制作用,推断MTX做为RA临床治疗的经典用药,抑制RA患者CCP/AST的活化、增殖,可能是其治疗RA的有效途径之一。     

血清葡萄糖-6-磷酸异构酶与类风湿关节炎的相关性研究

目的研究血清葡萄糖-6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)升高对类风湿关节炎(RA)的诊断价值及其之间相关性。方法以166例RA患者、110例非RA患者和194例健康正常人为研究对象,用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测各组GPI血清浓度,记录RA组患者的年龄、性别、ESR、CRP、DAS28、关节肿胀数、关节压痛数、RF、抗CCP抗体和双手X线片分级,并比较分析。结果 RA患者血清中GPI浓度[(0.52±1.01)μg/mL]显著高于其他风湿病组[(0.05±0.34)μg/mL(P<0.05)]及健康对照组[(0.10±0.38)μg/mL(P<0.05)]。GPI与关节肿胀数、关节压痛数、DAS28、ESR、抗CCP成正相关。结论 GPI在RA中有较高的特异性,其升高可能与RA的活动性相关。     

黄连多糖对AGEs诱导内皮细胞增殖及其受体表达的作用研究

考察黄连多糖对高级糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和AGEs受体(RAGE)表达的作用。采用水提,Sevag法去蛋白,醇沉法获得黄连多糖(CCP);80%汇聚的HUVECs分成6组,分别为空白对照组、BSA对照组(蛋白浓度200μg/mL)、AGEs组(蛋白浓度200μg/mL)、AGEs+CCP(25μg/mL)、AGEs+CCP(50μg/mL)和AGEs+CCP(100μg/mL),采用MTT法检测黄连多糖对AGEs诱导HUVECs增殖的影响;实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA表达;Western Blot分析RAGE蛋白表达情况。HUVECs经AGEs诱导48h后,其增殖率显著增殖。黄连多糖可以剂量依赖性的抑制AGEs诱导HUVECs早期增殖作用,定量PCR和Western Blot结果表明CCP可以在mRNA和蛋白水平抑制RAGE表达。黄连多糖可通过抑制RAGE表达,降低AGEs对内皮细胞的激活作用。     

脂多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度脂多糖(LPS)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法应用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,采用免疫细胞化学法鉴定其表面标志。将BMSCs分为对照组及不同浓度LPS干预组,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察其增殖情况。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs形态呈长梭形,呈集落样生长,免疫细胞化学鉴定,CD44阳性,CD34、CD45阴性。MTT检测结果显示,与对照组(0.190±0.037)相比,0.01、0.1及1μg/mlLPS干预组吸光度(A)值均增高,其中0.01μg/mlLPS干预组(0.253±0.030)增高明显,差异有统计学意义(P<0.05)。而10、100μg/mlLPS干预组A值则较对照组下降,其中10μg/mlLPS干预组(0.159±0.042)明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度LPS可以提高BMSCs的增殖能力,但随着LPS浓度的增大,BMSCs增殖能力反而下降。     

丹红注射液对感染性休克大鼠肺损伤的保护作用机制

目的观察丹红注射液(DHI)对感染性休克(SS)大鼠肺损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法2018年4月至2019年8月,48只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、模型组、DHI干预组和阳性对照组,12只/组。采用腹腔注射脂多糖构建内毒素性休克致肺损伤模型;造模成功后,DHI干预组经腹腔注射2 mL/kg DHI,阳性对照组经腹腔注射1 mL/kg地塞米松,模型组和对照组大鼠均予以等体积生理盐水。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理改变;测量肺组织湿干质量比(W/D);采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6含量水平;采用免疫组织化学法检测肺组织核因子-κB(NF-κB)及κB抑制因子α(IκB-α)蛋白表达。结果模型组大鼠肺组织W/D较对照组增加［(5.56±0.51)比(4.02±0.37)］,DHI干预组肺组织W/D较模型组降低［(4.72±0.44)比(5.56±0.51)］(P<0.05),DHI干预组与阳性对照组W/D［(4.72±0.44)比(4.45±0.46)］比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组TNF-α［(0.66±0.08)μg/g比(0.23±0.06)μg/g］,IL-6［(128.04±10.35)ng/g比(38.17±6.82)ng/g］含量较对照组升高(P<0.05),DHI干预组TNF-α［(0.41±0.06)μg/g比(0.66±0.08)ng/g］,IL-6［(66.38±6.20)ng/g比(128.04±10.35)ng/g］含量较模型组下调(P<0.05),阳性对照组肺组织TNF-α［(0.38±0.07)μg/g比(0.41±0.06)μg/g］,IL-6［(60.54±5.27)ng/g比(66.38±6.20)ng/g］含量与DHI干预组比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,模型组NF-κB(p65)及IκB-α呈强阳性免疫反应,与模型组比较,DHI干预组NF-κB(p65)及IκB-α阳性反应减弱,阳性细胞百分比下降(P<0.05),DHI干预组与阳性对照组NF-κB(p65)及IκB-α阳性细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05)。结论DHI可能通过抑制NF-κB活化,减少TNF-α、IL-6等促炎细胞因子表达,在SS大鼠肺损伤中发挥保护作用。     

肾气丸对缺血再灌注损伤小鼠肾细胞凋亡的作用及机制研究

目的探讨肾气丸在小鼠肾缺血再灌注( I/R)诱导的急性肾损伤中的作用及机制。方法研究时间为 2018年 4—7月。健康雄性 C57BL6小鼠 40只,利用随机数字表法分为 4组(每组 10只):①假手术组; ②肾缺血再灌注组(肾 I/R组); ③肾气丸低剂量组; ④肾气丸高剂量组。分组后肾气丸低剂量组每天给予 10.5 g/kg的肾气丸灌胃,肾气丸高剂量组每天给予 21.0 g/kg的肾气丸灌胃,持续 2周;假手术组和肾 I/R组每天给予等量生理盐水灌胃。 2周后构建肾 I/R损伤模型, 24 h处死小鼠并取材。检测血清肌酐( Scr)、尿素氮( BUN)及肾脏组织中丙二醛( MDA)含量和超氧化物歧化酶( SOD)的活性; HE染色及 TUNEL染色检测肾组织损伤及凋亡水平; PCR及免疫组化检测 B淋巴细胞瘤 ?2(Bcl?2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase?3)表达水平;蛋白质印迹法检测 PI3K和 AKT蛋白表达水平。结果 HE及 TUNEL染色表明,与肾 I/R组比较,肾气丸低剂量和高剂量组小鼠肾细胞组织损伤程度减轻,肾小管的上皮细胞肿胀、脱落及凝固坏死等病变损伤减轻,高剂量组较低剂量组损伤程度更轻,明肾气丸可抑制细胞损伤及凋亡。与假手术组中 Scr(135.65±11.21)μmol/L、BUN(8.37±1.80)mmol/L、MDA(3.75±0.33)mmol/L、说SOD(175.69±16.29)U/mL、Caspase?3(0.45±0.06)、 Bcl?2(1.96±0.18)、 PI3K(0.81±0.09)和 AKT(0.86±0.11)蛋白相对表达水平检测指标比较,肾 I/R组 Scr(413.47±36.68)μmol/L、BUN(67.45±8.40)mmol/L、MDA含量( 13.21±1.39)mmol/L、Caspase?3水平(1.76±0.19)均升高( P＜0.05),SOD活性( 79.36±7.04)U/mL、Bcl?2水平( 0.61±0.09)、 PI3K(0.09±0.01)和 AKT(0.11±0.01)蛋白相对表达水平明显下降( P＜0.05);与肾 I/R组比较,肾气丸低剂量组 Scr(308.32±17.36)μmol/L、BUN(43.32±4.82)mmol/L和 MDA(11.37±1.02)mmol/L、Caspase?3水平( 1.35±0.16)均降低( P＜0.05),而 SOD活性( 95.61±9.71)U/mL、Bcl?2(0.94±0.11)、 PI3K(0.23±0.02)和 AKT(0.27±0.03)蛋白相对表达水平明显升高( P＜0.05);肾气丸高剂量组 Scr(225.59±21.05)μmol/L、BUN(20.63±2.77)mmol/L和 MDA(5.57±1.04)mmol/L、Caspase?3水平( 0.89±0.11)均降低( P＜0.05),而 SOD活性( 145.72±14.68)U/ mL、Bcl?2(1.52±0.16)、 PI3K(0.45±0.05)和 AKT(0.53±0.06)蛋白相对表达水平也明显升高( P＜0.05);与肾气丸低剂量组比较,肾气丸组高剂量组 Scr、BUN和 MDA含量、 Caspase?3水平均降低( P＜0.05)SOD活性、 Bcl?2水平、 PI3K和 AKT蛋白表达均升高(P＜0.05)。结论肾气丸可通过激活 PI3K/AKT信号通路对小鼠 I/R诱导的急性肾损伤起保护作用。     

青蒿琥酯联合甲氨蝶呤对类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度的青蒿琥酯（ART）和甲氨蝶呤（MTX）对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞增殖和凋亡的影响。方法收集RA关节液标本25例,体外分离培养滑膜细胞,以生长良好的3～5代滑膜细胞进行试验,调整细胞浓度,分为对照组和不同质量浓度ART组、MTX组。用四甲基偶氮唑盐比色法测定不同质量浓度的MTX和ART单独或联合作用于滑膜细胞对滑膜细胞增殖的影响;用流式细胞术检测不同质量浓度的MTX和ART单独或联合作用于滑膜细胞对滑膜细胞凋亡的影响。结果ART对滑膜细胞的增殖具有显著的抑制作用。ART质量浓度在3.125～50μg/mL范围内均可抑制RA滑膜细胞生长,且抑制作用随质量浓度增大而增强,具有剂量依赖性;ART12.5μg/mL＋MTX20μg/mL组的抑制作用最强,与其他药物组比较,P〈0.05。各药物作用于滑膜细胞24h后,早期凋亡细胞率与对照组比较,有显著差异（P〈0.05）;ART质量浓度在3.125～25μg/mL范围内作用于滑膜细胞24h后,早期凋亡细胞率与未用ART处理的对照组比较,有显著差异（P〈0.05）,并呈剂量依赖性;当ART的质量浓度达到50μg/mL时,早期凋亡细胞率降低,坏死细胞率却升高（P〈0.05）;ART12.5μg/mL＋MTX5μg/mL组的早期凋亡细胞率较其他药物组显著升高（P〈0.05）,而坏死细胞率却较低（P〈0.05）。结论ART和MTX单独或联合作用均可显著抑制RA滑膜细胞的增殖,诱导其凋亡。     

舌下特异性免疫治疗对合并变应性鼻炎病儿原发性肾病综合征复发率的影响

目的探讨舌下特异性免疫治疗( SLIT)对合并变应性鼻炎( AR)病儿原发性肾病综合征( PNS)复发率的影响。方法将河南科技大学第一附属医院 2014年 1月至 2017年 1月收治的 194例合并 AR的 PNS病儿采用随机数字表法分为联合组和常规组,各 97例,常规组接受常规治疗,联合组在常规治疗的基础上加用 SLIT治疗,均治疗 12个月,比较两组临床疗效、 PNS复发率和治疗前后鼻症状总分表( TNSS)评分、免疫球蛋白 E(IgE)、免疫球蛋白 G(IgG)、 24h尿蛋白、生活质量及鼻腔灌洗液炎症因子和鼻分泌物嗜酸性粒细胞( EOS)计数的变化。结果治疗后,两组 TNSS评分均明显降低,联合组 TNSS评分低于常规组［(2.15±0.69)比( 7.94±2.55)分,(3.47±1.12)比( 8.06±2.61)分, P＜0.05］总有效率( 98.97%)高于常规组( 89.69%)(P＜0.05);两组 IgE［(131.18±42.99)比( 549.53±134.07)U/mL,(219.75±70.24)比(530.,25±129.32)U/mL］、 24h尿蛋白［( 0.85±0.27)比( 4.77± 1.54)g/24 h,(1.31±0.43)比( 4.56±1.43)g/24 h］均明显降低( P＜0.05)IgG［( 16.73±2.55)比( 14.52±1.24)g/L,(15.68±2.04)比(14.31±1.23)g/L］均明显升高( P＜0.05),联合组 IgE、IgG、24h尿蛋白变化,幅度大于常规组, PNS复发率( 9.29%)均低于常规组(28.87%)(P＜0.05);两组鼻腔灌洗液 IL?4［(47.75±15.41)比( 82.95±26.76)pg/mL,(62.07±19.63)比( 81.68±26.69)pg/mL］、 IL?17［( 28.34±9.07)比( 41.16±13.28)pg/mL,(34.87±11.24)比( 40.72±13.13)pg/mL］水平和鼻分泌物 EOS计数［( 23.75±7.46)比(64.97±20.33)×103cell/mL,(35.24±11.05)比( 63.81±19.94)×103cell/mL］均明显降低( P＜0.05)但联合组降低幅度大于常规组(P＜0.05);两组病儿 PedsQLTM4.0各维度评分均明显升高( P＜0.05),联合组升高幅度大于组( P＜0.05)。结论常规治常规,疗的基础上加用 SLIT治疗合并 AR的 PNS病儿疗效确切,能有效改善病儿鼻炎症状,降低 PNS复发率,提高病儿生活质量。     

黄芪多糖对兔脂肪来源的间充质干细胞体外增殖的影响

目的黄芪多糖(APS)对兔脂肪来源的间充质干细胞(ASCs)体外增殖的作用。方法提取兔ASCs进行培养,设实验组和对照组,实验组加入不同浓度APS注射液,对照组加常规培养液,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞的增殖率,比较两组之间的差异。结果 APS浓度为1.95～3.90μg/mL时,对ASCs的增殖无明显影响(P>0.05);而浓度为7.80～1 000μg/mL时,对ASCs的增殖有明显抑制作用(P<0.01);在一定浓度范围内(25～100μg/mL),浓度对细胞增殖的影响不大,而与培养的时间有关,随着作用时间的延长,对ASCs的抑制作用更加明显。结论低浓度APS对兔ASCs体外增殖无影响;高浓度APS对ASCs有明显的抑制作用。     

丙泊酚复合不同浓度七氟醚麻醉对老年术后认知障碍的影响

目的探讨丙泊酚复合七氟醚不同配伍麻醉对老年术后认知障碍的影响。方法选取平顶山市第一人民医院 2020年 1月至 2021年 6月收治的股骨颈骨折需行手术治疗的老年病人 135例,根据麻醉方法不同分为低浓度七氟醚组( n=67)和高浓度七氟醚组( n=68)。低浓度七氟醚组采用靶控输注丙泊酚血浆靶浓度 0.6 mg/L和吸入浓度为 1.2%的七氟醚进行麻醉维持;高浓度七氟醚组采用靶控输注丙泊酚血浆靶浓度 0.6 mg/L和吸入浓度为 1.7%的七氟醚进行麻醉维持。比较两组病人简易智力状态检查量表( MMSE)评分、载脂蛋白 J(ApoJ)、神经元特异性烯醇化酶( NSE)、神经生长因子( NGF)水平,氧化应激反应指标超氧化物歧化酶( SOD)、丙二醛和总抗氧化能力( T-AOC)水平和生命体征指标心率、平均动脉压( MAP)、血氧饱和度(SpO₂)以及不良反应发生率。结果术后 6、24、72 h高浓度七氟醚组 MMSE评分［( 25.61±2.16)分、(27.41±2.38)分、(28.02± 1.22)分］高于低浓度七氟醚组［( 23.47±2.23)分、(25.46±2.08)分、(27.13±2.15)分］(P<0.05);术后 1、3、7d时 ApoJ水平［( 145.36±14.27)mg/L、(139.57±12.78)mg/L、(130.39±12.62)mg/L］、 NSE水平［( 9.66±2.54)μg/L、(7.38±2.12)μg/L、(5.88±1.58) μg/L］高于低浓度七氟醚组［( 130.64±10.58)mg/L、(125.37±11.21)mg/L、(123.11±11.34)mg/L、(7.22±1.48)μg/L、(6.11±1.71)μg/ L、(4.22±1.24)μg/L］, NGF水平［( 290.46±37.38)μg/L、(315.11±39.16)μg/L、(358.39±43.44)μg/L］低于低浓度七氟醚组［( 327.23±40.25)μg/L、(345.44±40.66)μg/L、(395.23±38.48)μg/L］(P<0.05);高浓度七氟醚组术后 MAP(78.28±6.43)mmHg、心率( 85.36±6.42)次 /min、SpO₂(96.52±4.22)%水平均高于低浓度七氟醚组( 74.28±6.21)mmHg、(78.16±6.32)次 /min、(94.25±4.18)%(P<0.05);术后 1、6h高浓度七氟醚组丙二醛水平［( 5.87±0.54)mmol/mL、(2.65±0.32)mmol/mL］低于低浓度七氟醚组［( 7.14±0.46)mmol/mL、(4.09±0.47)mmol/mL］,而 SOD水平［( 87.22±13.59)U/mL、(66.69±10.58)U/mL］和 T-AOC水平［( 20.53±4.20)U/mL、(22.24±3.38)U/mL］高于低浓度七氟醚组［( 73.44±14.31)U/mL、(57.41±9.78)U/mL、(18.49±3.48)U/mL、(20.14±3.01)U/mL］(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论靶控输注 0.6 mg/L丙泊酚和吸入浓度为1.7%的七氟醚可有效促进老年病人认知功能的恢复,且不会增加不良反应。     

氨甲喋呤对映体对ECV304细胞抑制作用及其机制

目的探讨氨甲喋呤[(±)MTX]及其对映体[(+)MTX、(-)MTX]对ECV304细胞的生长抑制作用并探讨其机制。方法采用培养的ECV304细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶(PI)单染流式细胞术检测细胞周期。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用于ECV304细胞24、48、72h,均抑制细胞ECV304增殖,但抑制强度依次为(+)MTX>(±)MTX>(-)MTX,倒置显微镜观察不同浓度(±)MTX、(+)MTX和(-)MTX作用ECV304细胞不同时间后,出现细胞体积变小、核固缩等形态学改变。用10μmol·L-1的(+)MTX、(-)MTX和(±)MTX作用ECV304细胞48h后,PI单染流式细胞术检测ECV304细胞周期的影响,表明MTX消旋体及单一体干扰ECV304细胞DNA合成。结论(+)MTX和(-)MTX对ECV304细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,(+)MTX的抗ECV304细胞增殖作用明显强于(-)MTX。     

环瓜氨酸肽对类风湿关节炎外周血T淋巴细胞增殖的影响

目的观察环瓜氨酸多肽（CCP）对类风湿关节炎（RA）患者外周血T细胞的激活作用。方法用CCK-8法检测CCP对24例RA患者外周血T细胞增殖的影响,并与16名健康志愿者和24例系统性红斑狼疮（SLE）患者做对照。分9个组别观察,分别是RA空白对照组、RA植物血凝素（PHA）对照组、RA CCP组、健康空白对照组、健康PHA对照组、健康CCP组、SLE空白对照组、SLE PHA对照组及SLE CCP组。结果体外培养72 h后,RA PHA对照组、RA CCP组与RA空白对照组相比,淋巴细胞增殖水平（0.618±0.068、0.699±0.077）均较（0.494±0.057）有明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01,P〈0.01）;SLEPHA对照组、SLECCP组与SLE空白对照组相比,淋巴细胞增殖水平（0.496±0.079、0.451±0.073）均较（0.364±0.061）有明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01,P〈0.01）。RA CCP组增殖幅度（0.205±0.037）较SLE CCP组增殖幅度（0.087±0.018）明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论CCP可特异性刺激RA患者T细胞增殖,瓜氨酸化抗原是诱导RA发病并参与RA致病过程的重要抗原成分,进一步干预此过程将有助于更好的治疗RA。     

蛇床子素逆转人膀胱肿瘤T24／ADM细胞耐药作用及其机制

目的研究蛇床子素（osthole,OST）对T24／ADM细胞多药耐药的逆转及对P-gP表达、功能的影响。方法采用MTT法筛选OST对T24／ADM细胞无毒或低毒浓度,以筛选出的浓度作为耐药逆转的实验浓度。分别利用MTF法分别检测阿霉素（adriamycin,ADM）、氟尿嘧啶（fluorouracil,Fu）及顺铂（cisplatin,DDP）对细胞株T24和T24／ADM以及OST处理后的T24／ADM细胞的半数抑制浓度IC50。用流式细胞仪测定OST对T24／ADM细胞上P-gP表达的影响。结果浓度17Ixmol／LOST对T24／ADM无明显细胞毒性,T24／ADM对ADM、FU和DDP均有不同程度的。耐药,耐药倍数分别为18．86、5．09、3．28,使用17μmol／LOST处理后T24／ADM对上述ADM、Fu和DDP的敏感性均有不同程度的提高,ADM对耐药细胞株的IC蜘由（0．962±0．017）μxg／mL降至（0．364±0．031）μg／mL,逆转指数为2．64;FU对耐药细胞株的IC。由（0．723±0．003）μg／mL降至（0．463±0．021）μxg／mL,逆转指数为1．56;DDP对耐药细胞株的IC50由（0．664±0．007）μg／mL降至（0．587±0．016）μg／mL,逆转指数为1．13,使T24／ADM细胞内P-gP蛋白表达明显下降,下降了16．32％（P〈0．05）。结论蛇床子素在体外能部分逆转T24／ADM的耐药性,逆转机制可能是通过抑制P—gP蛋白表达实现的。     

氟西汀对大鼠肺动脉平滑肌细胞体外增殖的影响

目的观察氟西汀对大鼠肺动脉平滑肌细胞体外增殖的影响并探讨其可能的机制。方法采用肺动脉平滑肌细胞(PASMC)体外培养的方法,观察氟西汀对PASMC增殖及细胞周期的影响。实验细胞分为4组:①正常对照组(Control):培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM;②5-HT组:培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM,其中加入终浓度为5μg/mL的5-HT的培养液100μL;③Flu组:培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM,其中加入终浓度为10μg/mL的Flu的培养液100μL;④5-HT+Flu组:培养液含10%胎牛血清的高糖DMEM,其中加入培养液100μL(其中5-HT终浓度为5μg/mL,Flu终浓度为10μg/mL)。4组细胞均在常规条件下培养,分别于实验第24、48及72小时采用MTT法测定各组细胞的吸光度值(A490),并采用流式细胞周期分析方法测定各组细胞不同时间点细胞周期分布的特点。结果 PASMC离体干预实验结果表明,5-HT+Flu组细胞随着氟西汀浓度增高或时间延长,A490较对照组逐渐降低。细胞周期分析显示,氟西汀作用于PASMC 72 h后,细胞周期分布表现为S期细胞比例下降,G0/G1期细胞比例上升。结论氟西汀可有效拮抗5-HT刺激所致的PASMC增殖,且这一作用可能与氟西汀阻碍PASMC向DNA合成期转化有关。     

氨甲喋呤对映体药物对A549人肺腺癌细胞株增殖抑制作用及诱导凋亡作用

目的探讨氨甲喋呤对映体[（＋）MTX,（-）MTX]对A549细胞的增殖抑制作用及诱导凋亡作用。方法采用培养的A549细胞,应用MTT比色法分析其活性;用光学显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化;碘化丙啶（PI）单染流式细胞术检测细胞周期;DNA梯度电泳检测凋亡。结果在0.1～150μmol·L-1范围内,（＋）MTX和（-）MTX作用于A549细胞24,48,72h,均抑制细胞A549增值,但抑制强度为（＋）MTX〉（-）MTX,倒置显微镜和荧光显微镜观察不同浓度（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞不同时间后,出现细胞不同程度的形态学改变;用10μmol·L-1的（＋）MTX和（-）MTX作用A549细胞48h后,PI单染流式细胞术检测A549细胞周期的影响,表明氨甲喋呤对映体干扰A549细胞DNA合成;DNA梯度电泳检测结果发现MTX作用组有凋亡条带出现,其中（＋）MTX最为明显。结论 （＋）MTX和（-）MTX对A549细胞的抗增殖作用具有化学结构的立体选择性,（＋）MTX的抗A549细胞增殖作用明显强于（-）MTX。     

蛹虫草多糖抑制刀豆蛋白诱导的T细胞增殖

目的 探究蛹虫草多糖抑制免疫反应的细胞机制.方法 小鼠脾脏单细胞悬液接种于U型底的96孔细胞培养板,细胞接种密度为3×105/孔,采用0.8 μg/mL刀豆蛋白(concanavalin A,ConA)刺激3d,构建T细胞增殖模型.在培养体系中加入不同浓度的蛹虫草多糖(0.5 mg/mL和1 mg/mL),流式细胞学检测蛹虫草多糖对CD4+T细胞和CD8+T细胞的效应.结果 蛹虫草多糖可以抑制ConA诱导的CD4+T和CD8+T细胞增殖反应,与对照组相比,CD4+T细胞和CD8+T细胞增殖比例组间差异均具有统计学意义(P＜0.001),且呈现剂量—效应关系.结论 蛹虫草多糖可以抑制抗原诱导的T细胞增殖反应,这可能是蛹虫草多糖发挥免疫调节效应的细胞学基础.     

雷公藤多苷对rmMIF诱导大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL／OPG表达的影响

目的观察雷公藤多苷（tripterygiumglycoside,TG）对重组鼠巨噬细胞移动抑制因子（recombinantmousemacrophagemigrationinhibitoryfactor,rmMIF）诱导大鼠成纤维样滑膜细胞（fibroblast—likesynoviocytes,FLS）的增殖及其细胞核因子-KB受体活化因子配体（receptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKL）、骨保护素（osteo—protegerin,OPG）表达的干预作用。方法采用大鼠FLS细胞株RSC-364,常规方法复苏、培养、传代,实验用3～5代FLS。分为4组：空白对照组加入200μlDMEM培养液,另3组分别加入200肛1含rmMIF（200ng／m1）（MIF组）、rm—MIF（200ng／m1）＋TG（20μg／m1）（MIF＋TG组）、rmMIF（200ng／m1）＋MTX（0．5μg／m1）（MIF＋MTX组）的DMEM培养液。置37℃、5％CO2孵箱培养48h。MTT法检测FLS的增殖活性;免疫组化法检测滑膜细胞OPG／RANKL的表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测FLS上清液OPG、RANKL表达。结果MIF组增殖活性高于空白对照组,MIF＋TG组、MIF＋MTX组增殖活性低于空白对照组和MIF组（P〈0．01）。MIF＋TG组和MIF＋MTX组细胞OPG标记指数均高于空白对照组和MIF组,MIF＋TG组OPG标记指数高于MIF＋MTX组（P〈0．01,P〈0．05）。MIF组细胞RANKL标记指数高于空白对照组,MIF＋TG组、MIF＋MTX组RANKL标记指数均低于MIF组（P〈0．05,P〈0．01）。MIF组上清液RANKL浓度和RANKL／OPG值均高于空白对照组,MIF＋MTX组上清液RANKL浓度低于空白对照组（P〈0．05,P〈0．01）;MIF＋TG组和MIF＋MTX组上清液RANKL浓度和RANKL／OPG值均低于MIF组（P〈0．01）。结论rmMIF可促进体外培养大鼠FLS增殖,上调FLS的RANKL表达和RANKL／OPG值;TG抑制rmMIF诱导的大鼠FLS增殖、降低rmMIF诱导大鼠FLS分泌RANKL、下调FLS的RANKL表达和RANKL／OPG比值,可能是其治疗类风湿关节炎的骨免疫学机制之一。     

维生素B2在胃癌中的作用及机制研究

摘要：目的　探讨维生素B2（Vit B2）在胃癌中的表达及其生物学意义。方法　选择39例胃癌患者（胃癌组）和40例健康体检者（对照组）,检测2组血清Vit B2水平,分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。培养人胃癌MGC-803细胞,并取对数生长期细胞分别给予0、10、25、50、100 μmol/L Vit B2处理,检测细胞氧化磷酸化（葡萄糖、乳酸和琥珀酸脱氢酶）水平。实时荧光定量PCR（qPCR）检测己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）、丙酮酸激酶M2（PKM2）和葡萄糖转运体1（GLUT1）mRNA水平。CCK-8法检测胃癌MGC-803细胞的增殖活性。流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡情况。结果　胃癌患者血清Vit B2水平低于对照组［（207.85±39.71）μg/L vs. （246.07±45.43）μg/L］,且血清Vit B2水平与胃癌患者的TNM分期和分化程度有关;与0 μmol/L Vit B2组相比,25、50、100 μmol/L Vit B2组细胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量均降低,琥珀酸脱氢酶含量均升高,HKⅡ、PKM2和GLUT1 mRNA水平均降低（均P＜0.05）;且50 μmol/L Vit B2组变化最明显。对照组、Vit B2组、阿帕替尼组和联合用药组胃癌细胞增殖活性依次降低,细胞凋亡率依次升高,组间多重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论　胃癌患者血清Vit B2水平降低,Vit B2和阿帕替尼联合用药可提高其对胃癌的抗肿瘤效果。