神经营养素—4在成年猴脑中的分布特征及其与成体中枢神经系统的功能关系

背景：神经营养素—4(NT—4，Neurotrophin -4)在神经系统的发育和成体中均起重要作用，不仅对某些特定亚群神经元的存活、增殖、分化及轴突可塑性有一定的调节作用，而且对某些神经元的生存也是必需的。但这些资料大多来源于体外实验，其在体内的作用尚不十分清楚，NT—4在体内的分布也少见报道，在高等灵长类猴脑的研究尚未见报道。目的：为探讨NT—4在成年灵长类动物猴脑的分布及为进一步研究NT—4与成体中枢神经系统的功能关系提供了有用的形态学依据。设计：用PBS代替一抗的实验对照。地点和材料：实验在昆明医学院神经科学研究所实验室完成。动物来自中科院昆明动物研究所的成年雄性恒河猴(体质量平均6kg)7只。方法：采用氯氨酮肌肉注射麻醉，Zamboin’s液心脏灌注固定，取脑组织各部位行冷冻切片，厚25μm。免疫组织化学SP法，抗体为兔抗NT—4多克隆抗体。主要观察指标：光镜下于猴脑的不同部位观察NT—4—IR阳性物(呈棕色串珠状、丝状或颗粒状)。对照实验用0．05mol／L PBS代替一抗行免疫组化染色。结果：NT—4—IR(Neurotrophin -4 immunoreactive)分布于大脑皮层Ⅲ～Ⅴ层的部分神经元胞体及突起以及自质内少量的神经胶质细胞；小脑皮质及自质内的部分神经元；海马CA1、CA2、CA3区的部分神经元；此外豆状核、尾状核、脑桥核、前庭神经核、薄束核、契束核、副神经核等可见散在阳性反应细胞及交织成网的纤维。结论：NT—4—IR广泛地分布于猴脑的多种组织和细胞，提示其功能可能涉及不同类型的神经元及可能的非神经元。     

KA1表达再分布对神经元兴奋毒性的影响

背景：特异的兴奋性神经递质受体过度活化时便发生细胞的兴奋性中毒,有关NMDA受体和AMPA受体活化致细胞兴奋性中毒死亡通路较为明确,但关于红藻氨酸（Kainate,KA）受体的功能到目前为止仍未明了。目的：探究小鼠海马内注射KA之后KA1受体的再分布状况对中枢神经元兴奋性中毒的影响。方法：成年雄性C57BL6小鼠海马内注射KA或PBS,2h后进行Bederson体征评分、全脑切片免疫组化分析和死亡神经元检测。结果与结论：海马内注射KA2h后,Bederson体征评分表明中枢神经功能出现明显损伤;KA1受体表达的变化主要出现在海马CA1和CA3区,在CA1区的表达上调明显,并开始出现神经元死亡,4~6h后可见大量神经元死亡。结果表明KA促使KA1受体亚单位在海马神经元CA区重新分布,增加神经元对兴奋性氨基酸毒性的敏感性,导致神经细胞死亡,中枢神经功能缺失。     

KA1表达再分布对神经元兴奋毒性的影响

背景:特异的兴奋性神经递质受体过度活化时便发生细胞的兴奋性中毒,有关NMDA受体和AMPA受体活化致细胞兴奋性中毒死亡通路较为明确,但关于红藻氨酸(Kainate,KA)受体的功能到目前为止仍未明了。目的:探究小鼠海马内注射KA之后KA1受体的再分布状况对中枢神经元兴奋性中毒的影响。方法:成年雄性C57BL6小鼠海马内注射KA或PBS,2h后进行Bederson体征评分、全脑切片免疫组化分析和死亡神经元检测。结果与结论:海马内注射KA2h后,Bederson体征评分表明中枢神经功能出现明显损伤;KA1受体表达的变化主要出现在海马CA1和CA3区,在CA1区的表达上调明显,并开始出现神经元死亡,4~6h后可见大量神经元死亡。结果表明KA促使KA1受体亚单位在海马神经元CA区重新分布,增加神经元对兴奋性氨基酸毒性的敏感性,导致神经细胞死亡,中枢神经功能缺失。     

大鼠脊髓半切伤后运动功能的可修复性

目的观察大鼠脊髓半切后运动功能恢复腹角神经元神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)变化,探讨其损伤恢复机制。方法运用免疫组化ABC方法监测不同时段脊髓半切伤后腹角神经元NT-3的表达。结果对照组可见NT-3反应阳性细胞分布于胶质的大神经元和小神经元,胞质、胞核均染色,胶质细胞阳性,24h后,神经元NT-3免疫反应为～,阳性细胞数为5.00±0.07,7d后神经元NT-3免疫反应为,阳性细胞数为7.90±0.27,均较正常显著增加(P<0.01,F=5.27)。结论NT-3不仅参与正常腹角神经元生理过程,而且在脊髓修复中起重要作用。     

癫痫发作1h后延髓内脏带区域内反应神经元与星形胶质细胞功能单位的分布特征:激光共聚焦显微镜研究

背景传统观点认为癫痫是大脑不同区域内神经元出现异常兴奋引起的复杂神经行为紊乱现象.而对星形胶质细胞在癫痫发病中的作用目前研究较少.目的研究戊四氮诱导大鼠癫痫发作后延髓内脏带内神经元和星形胶质细胞的反应.设计随机对照的实验研究.地点和材料实验在南方医科大学珠江医院神经外科实验室和解放军第四军医大学全军神经科学研究所完成.成年健康SD大鼠14只,体质量180～220 g,清洁级,由解放军第四军医大学实验动物中心提供.干预用抗Fos蛋白、抗酪氨酸羟化酶和抗胶质原纤维酸性蛋白的三重免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜技术,显示癫痫发作1 h后延髓内脏带内反应性神经元与星形胶质细胞的分布.主要观察指标对延髓内脏带内Fos,胶质原纤维酸性蛋白和抗酪氨酸羟化酶阳性细胞的分布及胶质原纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞与神经元的关系进行观察.结果延髓内脏带内的Fos阳性神经元和胶质原纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞明显增多,三重免疫组化方法显示反应性神经元(Fos阳性)与反应性星形胶质细胞(胶质原纤维酸性蛋白阳性)关系密切,发现3种不同标记的"神经元-星形胶质细胞复合体"即抗酪氨酸羟化酶+/Fos+/胶质原纤维酸性蛋白+三标记复合体、抗酪氨酸羟化酶+/胶质原纤维酸性蛋白+/Fos-和Fos+/胶质原纤维酸性蛋白+/抗酪氨酸羟化酶-二标记复合体.结论延髓内脏带内的神经元和星形胶质细胞在癫痫发作时反应强烈,可能以神经元-星形胶质细胞复合体作为功能单位参与癫痫发病的调节.     

大鼠坐骨神经慢性压迫损伤后脊髓感觉神经元发生非凋亡性细胞程序性死亡

目的:观察大鼠坐骨神经慢性压迫损伤后脊髓背角感觉神经元是否发生非凋亡性细胞程序性死亡(paraptosis).方法:成年雄性SD大鼠20只,随机分为正常组,手术组.手术组建立慢性压迫性损伤(CCI)模型,又分为术后3d、7d、14d组.实验动物以4%多聚甲醛PBS液灌注内固定,取与坐骨神经相应的腰4～腰6节段脊髓,于2.5%戊二醛中固定,透射电镜观察左侧脊髓背角浅层神经元超微结构并摄片.结果:电镜下,术后3d组腰4～腰6节段脊髓左侧背角浅层神经元形态学典型变化为:细胞肿胀,胞膜完整,胞浆内大量空泡,核结构基本正常,符合paraptosis形式程序性细胞死亡表现;7d和14d组神经元形态变化:细胞皱缩、密度增大,核带增多及染色质浓聚贴附于核膜,符合凋亡表现.结论:坐骨神经损伤3d腰4～腰6节段脊髓背角浅层神经元发生了paraptosis形式程序性细胞死亡.     

N-甲基-D-天冬氨酸2A/B受体亚型在大鼠丘脑前核和扣带后回的表达

目的:观察N-甲基-D-天冬氨酸2A/B受体亚型是否在丘脑前核和扣带后回表达,为其在基因分子基础上确定参与学习记忆信号转导的细胞膜受体机制提供形态学依据。方法:实验于2006-04/09在大连医科大学解剖学教研室神经生物学研究室完成。选取体质量250～300g的Wistar大鼠10只腹腔麻醉,冲洗后灌注固定,取脑后震动连续冠状切片,每隔3张选1张行免疫组织化学染色,实验切片滴加兔抗N-甲基-D-天冬氨酸2A/B,空白对照切片采用磷酸盐缓冲液代替兔抗N-甲基-D-天冬氨酸2A/B,观察N-甲基-D-天冬氨酸2A/B受体抗体阳性神经元的区域分布和特点。结果:①丘脑前背侧核和前腹侧核N-甲基-D-天冬氨酸2A/B受体抗体阳性神经元密集均匀分布。②扣带后回皮质区域N-甲基-D-天冬氨酸2A/B受体抗体阳性神经元在不同大脑皮质分布有差异,在分子层染色最弱,外颗粒层密集分布且染色增强,外锥体细胞层、内颗粒层、节细胞层和多形细胞层较外颗粒层松散,染色细胞减少。③空白对照切片为阴性,未见N-甲基-D-天冬氨酸2A/B表达阳性神经元胞体。结论:N-甲基-D-天冬氨酸2A/B受体亚型在丘脑前核和扣带后回表达并广泛分布。     

大鼠脊髓半切伤后运动功能的可修复性

目的 观察大鼠脊髓半切后运动功能恢复腹角神经元神经营养因子-3(neurotrophin-3，NT-3)变化，探讨其损伤恢复机制。方法 运用免疫组化ABC方法监测不同时段脊髓半切伤后腹角神经元NT-3的表达。结果 对照组可见NT-3反应阳性细胞分布于胶质的大神经元和小神经元，胞质、胞核均染色，胶质细胞阳性，24h后，神经元NT-3免疫反应为++-+++，阳性细胞数为5．00&;#177;0．07，7d后神经元NT-3免疫反应为+++，阳性细胞数为7．90&;#177;0．27，均较正常显著增加(P&;lt;0．0l，F=5．27)。结论 NT-3不仅参与正常腹角神经元生理过程，而且在脊髓修复中起重要作用。     

大鼠前庭神经核群向动眼神经核的投射特征

目的：观察大鼠前庭神经核群向动眼神经核的投射纤维特征.方法：实验于1997年在青岛大学医学院解剖教研室实验室进行.选择6～8周龄SD大鼠20只,将辣根过氧化物酶注射到大鼠的动眼神经核,其中5只注射0.01μL其余15只注射0.05μL.经过48 h的逆行轴突运输后用组织化学的方法在脑干中显示被标记的神经元.按实际注射结果将20只大鼠分为6组：①辣根过氧化酶注射到动眼神经核的外侧,没有累及动眼神经核及内侧纵束.②注射到动眼神经核的外部累及内侧纵束和动眼神经核的少部分.③注射部分靠近中线影响双侧动眼神经核.④注射部位在动眼神经核的背侧,没有影响动眼神经核的腹侧.⑤以动眼神经核为中心辣根过氧化物酶的吸收区在它的边界以外.⑥注射部位在动眼神经核胞体部分的中心,推测有效吸收区完全在动眼神经核胞体部分边界内.观察各组及不同剂量的实验动物的标记细胞分布和神经纤维走行.结果：20只大鼠进入结果分析.前庭神经上核、内侧核、下核、外侧核及Y核、膝上核和膝旁核都有标记细胞.上核在前庭神经核的最吻端,主要在同侧标记,多数为中小型细胞;内侧核、下核双侧标记,但以对侧标记为主,两核吻侧形成一体,内侧核标记细胞密集,由中小型神经元组成,下核标记细胞稍大,比较分散;外侧核双侧有少量标记标记细胞;膝上核、膝旁核在注射对侧有明显的标记细胞,并同展神经核核间神经元相连续,环绕面膝形成庞大的神经纤维束进入对侧内侧纵束,在展神经核尾侧200 μm仍可以看到前庭神经核群发出的交叉纤维.结论：大鼠前庭神经核发出纤维投向动眼神经核,前庭神经内侧核、部分前庭神经下核主要投射向动眼神经核内直肌亚核,推测这部分纤维和双眼协同运动有关.     

乌司他丁对心肺复苏后Wistar鼠大脑皮层炎症反应的影响

目的 评价乌司他丁(UTI)对心肺复苏(CPR)后大鼠大脑皮层炎症因子TNF-α和IL-6表达及神经元细胞凋亡的影响.方法 36只成年雄性Wistar大鼠采用交流电致颤的方式诱发室颤(VF),持续7 min后进行CPR,建立VF/CPR模型.自主循环恢复(ROSC)后立即给予乌司他丁100 000 U/kg或等体积的PBS静脉注射.VF前和ROSC后2、4、8h采血检测血浆TNF-α、IL-6水平,并取大脑皮层进行定量PCR和Western blot检测TNF-α、IL-6 mRNA表达和蛋白表达,检测核因子NF-κB p65的核浆转位情况.ROSC后72 h行皮层NISSL和TUNEL染色计数顶叶皮层存活神经元细胞数和凋亡神经元细胞数.结果 ROSC后UTI组2、4、8h血浆TNF-α质量浓度分别为(17.7±1.4)、(21.9±2.1)和(17.1±0.6),低于PBS组(t2h=1.42,t4h =2.93,t8 h =4.22,各组P＜0.05).UTI组2、4、8h血浆IL-6质量浓度(ng/mL)分别为(208.9±14.1)、(281.5 ±25.9)和(251.8±15.3),显著低于PBS组(t2h=3.87,t4h=2.45,t8h=3.74,各组P＜0.05).ROSC后UTI组2、4、8h大脑皮层TNF-α、IL-6 mRNA表达和蛋白表达量均显著低于PBS组.PBS组ROSC后2、4、8h大脑皮层NF-κB p65的核/浆转换率为(1.08±0.08)、(1.02±0.05)和(0.97 ±0.02),高于UTI组.ROSC后72 h UTI组大脑皮层存活神经元细胞数为(22±3)个/400×400像素,多于PBS组的(19±2)个/400×400像素(Z=2.887,P=0.02);凋亡细胞数UTI组为(10±2)个/400×400像素,低于PBS组的(13±3)个/400×400像素(Z =3.751 P=0.01).结论 UTI降低ROSC后Wistar大鼠全身炎症反应,减少大脑皮层NF-κB通路的激活,减少致炎因子TNF-α和IL-6的表达,从而减少神经元细胞凋亡,促进细胞存活.     

胱天蛋白酶3在啮齿类动物和猕猴脑中的表达:种系和年龄相关研究

背景:有研究显示,凋亡相关蛋白酶—胱天蛋白酶3被认为是动物和人脑中细胞凋亡过程中的关键酶,正常人或阿尔茨海默病患者的脑中有该酶的表达,这与对成年啮齿动物脑研究的结果之间存在着矛盾。目的:揭示胱天蛋白酶3在啮齿类动物和猕猴脑中的表达有无差异,分析该酶在猕猴脑中的表达水平有无年龄差异,以及不同猕猴脑区间有无差别。设计:单变量均数的平行比较。单位:解放军总医院肝胆外科研究所,香港中文大学解剖学系。材料:实验于2003-08/2005-02在解放军总医院肝胆外科研究所及香港中文大学解剖学系进行的,所用的2,12,24和48周龄(每周龄组n=5)SD大鼠、ICR小鼠和快速衰老小鼠(senescence-acceleratedmice,SAM),雌雄不限,由香港中文大学实验动物服务中心提供;健康雌性4岁和20岁猕猴各4只,均购自解放军总医院医学实验动物中心(SCXK-(京)2003-002)。以上动物均在无任何实验干预的标准条件下养殖。方法:①所有脑组织标本均从猕猴和啮齿动物中新鲜切取,制成匀浆后通过免疫印迹法检测啮齿类动物和猕猴脑组织中胱天蛋白酶3蛋白的表达;②用同样的方法比较两个年龄组猕猴的大脑皮质、海马和小脑中该蛋白的表达量,并通过免疫组织化学法显示胱天蛋白酶3在猕猴3个脑区中的细胞分布状态。主要观察指标:①胱天蛋白酶3在啮齿类动物和猕猴脑中的免疫印迹检测;②胱天蛋白酶3在猕猴3个脑区中的细胞分布状态。结果:①免疫印迹检测结果:胱天蛋白酶3在3种2周龄的鼠脑中表达模式相同,在其它年长鼠脑中未检测到该酶;胱天蛋白酶3在成年和老年猕猴脑中均有持续表达,表达量低于2周龄鼠。胱天蛋白酶3在猴脑中以酶原(Mr32000)的形式存在,未发现该酶在猕猴脑中的表达量有年龄和脑区差异。②免疫组织化学法显示结果:猕猴大脑皮质胱天蛋白酶3的免疫反应性很低,海马的CA1、CA3和CA4区可见低至中度阳性染色的锥体细胞,小脑皮质的少数浦肯野氏细胞呈强阳性染色。老年猕猴除运动皮质第V层偶见呈强阳性染色的大锥体细胞外,其余与成年猴无明显差别。结论:啮齿类动物成年后,脑中胱天蛋白酶3的表达迅速下降至测不出,而该酶在成年及老年猕猴脑中仍维持在一定水平,其表达量和阳性细胞的分布状态无明显的年龄差异。     

Gene transfer to the rhesus monkey brain using SV40-derived vectors is durable and safe

Gene transfer to central nervous system (CNS) has been approached using various vectors. Recombinant SV40-derived vectors (rSV40s) transduce human neurons and microglia effectively in vitro and in rodent brains in vivo, so we tested rSV40s gene transfer to rhesus monkey CNS in vivo, to characterize the distribution, duration and safety of such gene delivery. We used rSV40s carrying HIV-1 RevM10 with a carboxyl-terminal AU1 epitope tag as a marker, and others with the antioxidant enzymes, Cu/Zn superoxide dismutase and glutathione peroxidase. Vectors were injected stereotaxically into the caudate nucleus. Transgene expression was studied at 1 and 6 months by immunostaining serial brain sections. After intraparenchymal administration, numerous transgene-expressing cells were seen, with a longitudinal extent of 20?mm. In neurons and, more rarely, microglial cells, transgene expression remained strong throughout the 6-month study period. Astrocytes and oligodendroglia were not transduced. No evidence of inflammation or tissue damage was observed. SV40-derived vectors may thus be useful for long-term gene expression in the monkey brain and, potentially, in the human brain.     

Rhesus monkey trace amine-associated receptor 1 signaling: enhancement by monoamine transporters and attenuation by the D2 autoreceptor in vitro

Trace amine-associated receptor 1 (TAAR1) is a G protein-coupled receptor that directly responds to endogenous monoamines as well as amphetamine-related psychostimulants, including methamphetamine. In the present study, we demonstrate TAAR1 mRNA and protein expression in rhesus monkey brain regions associated with monoaminergic systems, variable cellular distribution of TAAR1 in rhesus monkey brain, and TAAR1 coexpression with the dopamine transporter (DAT) in a subset of dopamine neurons in both rhesus monkey and mouse substantia nigra. On this basis, we evaluated rhesus monkey TAAR1 activation by different compounds and its functional relation with monoamine transporters and the dopamine D2 receptor (D2) short isoform (D2s) autoreceptor in vitro using a cAMP response element-luciferase assay. TAAR1 activation by monoamines and amphetamine-related compounds was greatly enhanced by coexpression of dopamine, norepinephrine, or serotonin transporters, and the activation enhancement was blocked by monoamine transporter inhibitors. This enhancement did not occur in control experiments in which the dopamine D1 receptor (D1) was substituted for TAAR1. Furthermore, activation of TAAR1 by dopamine was completely inhibited by D2s when coexpressed with TAAR1, and this inhibition was blocked by the D2 antagonist raclopride. Last, dopamine activation of TAAR1 could induce c-FOS-luciferase expression but only in the presence of DAT, whereas dopamine activation of D1 resulted in equivalent c-FOS expression in the presence or absence of DAT. Together, these data reveal a broad agonist spectrum for TAAR1, a functional relation of TAAR1 with monoamine transporters and D2s, and a mechanism by which D2 receptor drugs can influence brain monoaminergic function and have efficacy through affecting TAAR1 signaling.     

大鼠杏仁皮质核内γ-氨基丁酸与一氧化氮共存神经元分布及对痛觉信息传递的调控

背景大鼠杏仁复合体分布有较多的还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元,γ-氨基丁酸也是广泛地存在于哺乳动物中枢神经系统的一种重要的抑制性神经递质,γ-氨基丁酸与一氧化氮合酶是否在大鼠杏仁复合体内共存目前尚不清楚.目的采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学和免疫组化双重染色相结合的方法,观察杏仁皮质核内是否存在γ-氨基丁酸与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶共存的神经元.设计以实验动物为研究对象,验证性对照研究.单位两所大学的解剖教研室.材料实验于2004-05/06在浙江大学医学院解剖教研室完成.选择SD大鼠6只,雌雄不拘,体质量250～300 g.干预制备大鼠脑组织冠状连续冰冻切片,取4套切片分别用作尼氏染色、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学和γ-氨基丁酸免疫组化双重染色以及检查抗体特异性的对照实验.计数杏仁皮质核核团内γ-氨基丁酸标记神经元数目、还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元数目以及还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶/y-氨基丁酸双标神经元的数目,计算出双标阳性神经元数占单标阳性神经元数的百分比.内氏染色用作核团定位.主要观察指标还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶和γ-氨基丁酸双标和单标神经元分布情况.结果显示γ-氨基丁酸阳性神经元多散在分布于杏仁皮质后内侧核、杏仁皮质后外侧核,以小型为主,中型较少,还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶阳性神经元多散在分布于杏仁皮质后内侧核、杏仁皮质后外侧核,杏仁皮质前核以中、小型神经元为主,双标神经元(γ-氨基丁酸/还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶均阳性)多散在分布于杏仁皮质后外侧核,以中、小型神经元为主.还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶和γ-氨基丁酸双标神经元与单标神经元的比例分别24.5%(γ-氨基丁酸),46.7%(还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶).结论大鼠杏仁皮质核内有γ-氨基丁酸与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶共存的神经元,提示一氧化氮对杏仁皮质核内的γ-氨基丁酸能神经元可能有调控作用.     

大鼠小脑皮质内神经肽Y能神经元的形态与分布小脑的运动学习、记忆及整合功能

背景神经肽Y能神经元分布于大脑皮质、尾壳核、边缘系统、丘脑、脑干等多个部位,与运动的学习、记忆及高级整合功能有关;小脑具有通过学习而重新组合的能力,研究大鼠小脑皮质内神经肽Y阳性神经元的形态与分布,可对小脑皮质运动学习的形态学基础有所了解.目的研究大鼠小脑皮质内神经肽Y免疫阳性神经元的形态与分布,探讨神经肽Y能神经元与小脑运动学习、记忆的关系.设计以动物为研究对象,单一样本研究.单位新乡医学院解剖学教研室、病理生理教研室和形态中心.材料实验于2001-07/12在新乡医学院形态中心进行.清洁级SD大鼠10只,雌雄不限,体质量100～200g.方法腹腔麻醉后,升主动脉灌注固定,开颅取小脑,人相同固定液中后固定48 h,常规石蜡包埋;沿小脑矢状面作连续切片.神经肽Y免疫组化染色,阳性对照采用大鼠大脑切片;阴性对照用正常小牛血清替代第一抗体,0.01 mol/L磷酸盐缓冲液替代第二抗体.光镜下观察,显微照相.主要观察指标观察大鼠小脑皮质内神经肽Y能神经元的形态与分布.结果大鼠小脑内神经肽Y免疫阳性神经元分布在皮质的Purkinje细胞层,胞体呈梨形或烧瓶状,细胞核清晰不染色,轴突伸向颗粒层,树突呈网状伸向分子层,突起未见染色.分子层和颗粒层未见阳性细胞,但可见神经纤维的存在.结论小脑Purkinje细胞层内神经肽Y阳性神经元可能与运动学习、记忆、内脏活动及高级整合功能有关.     

FGF-2,NT-3对海马表皮生长因子反应性神经干细胞分化为神经元的诱导作用

目的:比较碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)和神经营养素3(NT-3)对海马表皮生长因子(EGF)反应性神经干细胞(NSC)分化为神经元的诱导作用。方法:在含EGF的培养体系中分离培养NSC,免疫荧光染色检测NSC特征性标志nestin的表达,Brdu掺入实验检测细胞增殖状态。将NSCs接种在6孔培养板中,分成4组:FGF-2组、NT-3组、FGF-2+NT-3组和对照组。培养10d时,用免疫细胞化学染色和荧光标记技术检测其神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,并计算阳性染色细胞的百分率。结果:FGF-2和NT-3均可诱导EGF反应性NSC分化为神经元,FGF-2优于NT-3。对照组神经元细胞分化率低,仅为3.70%。联合应用FGF-2和NT-3,可使神经元分化率增加约10倍。结论:FGF-2与NT-3联合作用能更好地促进海马EGF反应性NSC分化为神经元细胞。     

全脑缺血再灌注大鼠不同时相海马CA1区Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白的表达

目的：通过系统观察大鼠全脑缺血－再灌注后不同时相海马CA1区神经元Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白表达的改变,探讨该区神经元短暂脑缺血后产生选择性敏感的机制。方法：通过四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血－再灌注模型,利用免疫组织化学方法观察再灌注后1、3、5日海马CA1区神经元Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白表达的情况;并同时与海马CA1区神经元的病理形态学改变进行对比。结果：全脑缺血－再灌注后1日,海马CA1区Bcl-2和Bcl-xL蛋白呈阴性表达,Bax蛋白呈弱阳性表达;海马CA1区神经元未见明显形态学改变。全脑缺血－再灌注后3日,海马CA1区Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达仍为阴性,而Bax蛋白则呈明显阳性表达;海马CA1区可见部分神经元死亡;全脑缺血－再灌注后5日,海马CA1区Bcl-2、Bcl-xL及Bax蛋白则呈阴性表达;海马CA1区神经元大部分死亡。结论：全脑缺血－再灌注后海马CA1区神经元Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达的抑制可能是其对短暂脑缺血产生选择性敏感的机制之一。     

神经营养素3在面神经的转运状况及对神经细胞的作用研究

背景神经营养素3(Neurotrophin-3,NT-3)是脊椎动物神经系统发育所需要的神经营养因子,促进神经嵴源感觉和交感神经的生存和自然生长.但其效应的发挥需其摄入后经轴突转运至神经元胞体,最终影响细胞的基因表达,产生一系列反应而实现.这种转运在面神经中如何进行,有何特点,尚不十分清楚.目的利用放射性核素示踪技术研究NT-3在面神经的转运情况,为探讨面神经再生微环境及NT-3对神经细胞的作用提供理论和实验依据.设计完全随机设计对照实验研究.地点和材料本研究的地点在四川大学华西医院核医学实验室.材料为神经营养素3.材料为体质量1.8～2.8 kg的23只成年健康新西兰兔.干预将新西兰兔一侧面神经干横切断后置入硅胶再生室,再将131I-NT-3或125I-NT-3或131I-人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)(10μ/只,约7.4 MBq)注入再生室,取注入131I-NT-3或131I-HSA的兔分别在注药后不同时刻行头部冠状位平面显像,取注入125I-NT-3兔的面神经干、脑干和对侧面神经干测定其转运率.另取置入再生室的兔同时在再生室注入1 mg NT-3或5.4 mg HSA和7.4 MBq131I-NT-3后,不同时刻行头部冠状位平面显像.主要观察指标NT-3在面神经的转运率及状况.结果注药后4 h就有4.05%的125I-NT-3转运到面神经干中,12 h为最高峰(27.04%);8 h有9.85%转运至脑干,24 h转运至脑干的量达41.18%,但131I-HSA在面神经中无转运,且131I-NT-3在面神经的转运受NT-3的明显抑制.结论NT-3在面神经中存在受体介导逆行转运.     

黄体酮对大鼠脑创伤后神经干细胞增殖的影响

背景:脑创伤一定程度上可刺激神经干细胞增殖,而黄体酮可改善脑创伤后学习记忆功能,黄体酮可能通过刺激神经干细胞增殖,促进脑创伤后神经功能的恢复。目的:观察黄体酮对弥漫性脑创伤后神经干细胞增殖的影响。设计:随机对照动物实验。单位:新乡医学院。材料:成年健康雄性SD大鼠48只,四五个月龄,体质量280～330g。方法:实验于2004-09/2005-02在新乡医学院完成。采用Marmarou弥漫性脑创伤模型。48只大鼠随机分为4组,每组12只:①假手术组,仅切开头皮后缝合。②脑创伤组,建立脑创伤动物模型。③二甲基亚砜组,脑创伤后1h及以后每天腹腔注射与黄体酮组等容量的二甲基亚砜。④黄体酮组,脑创伤后1h及以后每天腹腔注射黄体酮4mg/kg。于假手术或脑创伤手术后3,6d处死动物,苏木精-伊红染色观察大脑皮质神经元形态学变化,免疫组织化学染色检测海马和齿状回巢蛋白表达情况。主要观察指标:神经元组织形态学观察;海马和齿状回巢蛋白表达检测。结果:①假手术组大鼠皮质无神经元损伤,脑创伤3d组和6d组大鼠皮质显示明显的神经元损伤,有神经元缺失,黄体酮3d组和6d组所显示的神经元损伤均明显轻于脑创伤组。②假手术组齿状回巢蛋白呈低水平或少量表达,海马CA4区偶见巢蛋白表达。脑创伤组海马CA4区和齿状回巢蛋白表达则明显增多(P<0.05),黄体酮组大鼠海马CA4区和齿状回巢蛋白的表达与脑创伤组比较明显增多(P<0.05)。③脑创伤组和二甲基亚砜组在神经元损伤和巢蛋白表达方面无明显差别(P>0.05)。结论:黄体酮减轻脑创伤作用可能与其促进神经干细胞增殖有关。     

An MRI based average macaque monkey stereotaxic atlas and space (MNI monkey space)

In studies of the human brain, a standard stereotaxic space such as the Montreal Neurological Institute (MNI space) is widely used to provide a common reference for the three-dimensional localization of functional activation foci and anatomical structures, enabling the comparison of results obtained across different studies. Here we present a standard macaque monkey brain MRI template that offers a common stereotaxic reference frame to localize anatomical and functional information in an organized and reliable way for comparison across individual monkeys and studies. We have used MRI volumes from a group of 25 normal adult macaque monkeys (18 cynomolgus and 7 rhesus) to create a common standard macaque monkey brain as well as atlases for each of these species separately. In addition, the digital macaque monkey volume was subjected to 3D volumetric analysis and comparison of brain structures between the individual brains and the average atlas. Furthermore, we provide a means of transforming any macaque MRI volume into MNI monkey space coordinates in 3D using simple web based tools. Coordinates in MNI monkey space can also be transformed into the coordinate system of a detailed neuroanatomical paper atlas (Paxinos et al., 2008), enabling researchers to identify and delineate cortical and subcortical structures in their individual macaque monkey brains.