EdU 与BrdU 在检测细胞增殖中的特点及应用进展

细胞增殖是细胞在周期调控因子的作用下,通过DNA复制、RNA转录和蛋白质合成等一系列复杂反应而进行的分裂过程,是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础［1］。细胞增殖检测广泛应用于分子生物学、免疫学、肿瘤生物学、药理学等研究领域,是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要方法［2］。目前,常用的方法包括胸腺嘧啶核苷渗入法、MTT检测法、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法等。但最直接精确的就是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物检测新合成的 DNA ,即5‐乙炔基‐2′脱氧尿嘧啶核苷（5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine ,EdU ）和5‐溴‐2′‐脱氧尿嘧啶核苷（5‐bromo‐2′‐deoxyuridine ,BrdU）标记［3］。     

三七皂苷R1保护四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的作用

背景：前期研究发现,三七总皂苷对小鼠免疫性肝损伤具有一定的保护作用。 目的：探究三七皂苷R1对四氯化碳诱导的肝纤维化模型大鼠的治疗作用。 方法：用四氯化碳诱导SD雄性大鼠制备肝纤维化模型,给药组按照60 mg/kg的剂量给予30 g/L三七皂苷R1溶液, 1次/d,连续4周和6周。对照组及模型组给予同体积的生理盐水,采用苏木精-伊红染色及Masson染色观察肝脏组织结构和纤维化程度分期;反转录-定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测法检测Ⅰ型胶原、α-平滑肌激动蛋白和转化生长因子β1表达水平。实验方案经昆明医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为approval No. KMMU2018018)。 结果与结论：①肝组织病理学显示,与模型组相比,三七皂苷R1能显著减轻纤维增生程度;②与模型组相比,三七皂苷R1组Ⅰ型胶原、α-平滑肌激动蛋白和转化生长因子β1表达水平显著降低(P < 0.05),三七皂苷R1给药4周与6周组比较差异无显著性意义;③结果提示,三七皂苷R1对四氯化碳诱导的肝纤维化模型大鼠具有一定的治疗作用。 ORCID: 0000-0002-0755-1476(吴朕) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

大鼠神经管畸形发育过程中Survivin的表达变化及意义

目的研究Survivin在SD大鼠神经管畸形发育中的表达变化及意义。方法建立过量维甲酸致SD大鼠神经管畸形发育模型,应用逆转录-聚合酶链式反应和蛋白印迹技术检测Survivin基因、蛋白的表达和变化。结果 1.在所检测的四个时间点均有Survivin表达;2.与对照组相比较,致畸组Survivin蛋白和基因均有显著升高(P<0.05)。结论 Survivin可能在过量维甲酸所致大鼠神经管畸形发育中起细胞保护的作用。     

巢蛋白在不同发育阶段人胚胎脊髓中的表达变化

目的:研究人胚胎脊髓生长发育过程中巢蛋白(nestin)的变化趋势。方法:采用免疫组织化学方法对不同发育时期(3周～8个月)的人胚胎脊髓中巢蛋白(nestin)的表达及变化进行了研究。结果:Nestin阳性细胞在神经上皮贯穿整个发育过程,5周基板、翼板形成后即可见到阳性物,而边缘层6周出现。中央管、基板、翼板、边缘层内nestin阳性细胞达高峰的时间分别是6周、7周、8周、9周,而表达明显减少的时间分别是8周、9周、10周、11周。随着脊髓的发育成熟,灰、白质内nestin阳性产物逐渐减少,而中央管的阳性细胞数至3月后较为稳定。结论:在脊髓不同部位神经干细胞出现时间和达到高峰的时间均不同,提示在脊髓的不同部位神经干细胞增殖、分化并不同步。     

坐骨神经切断对猫脊髓前角蛋白组表达的影响

用蛋白组学方法探讨猫双侧坐骨神经切断后脊髓前角蛋白组表达变化,找出差异蛋白。用二维凝胶电泳法获得脊髓前角蛋白组的考马斯亮蓝染色图谱,PDQuest软件对蛋白点进行定量分析。结果显示:在凝胶图谱中平均检测到382个蛋白点。损伤组与正常组比较后检测到11个明显差异蛋白。经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和串联质谱技术鉴定差异蛋白。其名称分别为:蛋白二硫键异构酶、磷酸苷油酸变位酶1、热休克蛋白70、ATP合成酶α链、丙酮酸脱氢酶β亚基、载脂蛋白A前体、肌球蛋白调节轻链异构体b/2、三磷酸苷油醛脱氢酶等。本实验鉴定了外周神经损伤后与脊髓前角变化相关的蛋白分子,为了解运动神经元轴突损伤所致的胞体蛋白组变化奠定了基础。     

关于PBL教学法与医学课程教学改革的思考

PBL (problem based learning)是以问题为基础的学习,该教学法以"问题"为核心,通过提出问题、建立假设、收集资料、论证假设、总结等过程,提高了医学生全面思考问题和处理问题的能力[1].     

灯盏花素干预体外培养大鼠脑皮质神经元的存活与生长

背景：神经生长因子在维持中枢神经系统神经细胞的存活、分化,促进其生长、发育,维持其功能方面具有不可替代的作用。 目的：观察灯盏花素对SD大鼠大脑皮质体外培养神经元生长的影响,并初步探讨其机制。 方法：取新生SD大鼠胚胎,取其大脑皮质后,对神经元进行原代培养,随机分为3组,其中灯盏花素组加入10 g/L灯盏花素,对照组加入等量生理盐水,正常组不作任何处理,各组又分为24 h、48 h亚组。对24孔板中各组细胞各时间点采集图像,之后采用RT-PCR技术检测神经生长因子、酪氨酸激酶A mRNA的表达变化。对96孔板中各组细胞不同时间点采用MTT检测神经元生长活力。 结果与结论：正常组和对照组在各时间点细胞数、胞体面积、突起长度及细胞活力无明显差异（P〉0.05）,但正常组及对照组均有随时间点延长,3个指标均上调（P0.05）,灯盏花素组各时间点较正常组和对照组上调（P〈0.05）。提示灯盏花素促进SD大鼠脑源性神经元的存活、生长,其机制可能是通过上调神经生长因子及其受体TrkA的表达发挥作用。     

神经营养素—4在成年猴脑中的分布特征及其与成体中枢神经系统的功能关系

背景：神经营养素—4(NT—4，Neurotrophin -4)在神经系统的发育和成体中均起重要作用，不仅对某些特定亚群神经元的存活、增殖、分化及轴突可塑性有一定的调节作用，而且对某些神经元的生存也是必需的。但这些资料大多来源于体外实验，其在体内的作用尚不十分清楚，NT—4在体内的分布也少见报道，在高等灵长类猴脑的研究尚未见报道。目的：为探讨NT—4在成年灵长类动物猴脑的分布及为进一步研究NT—4与成体中枢神经系统的功能关系提供了有用的形态学依据。设计：用PBS代替一抗的实验对照。地点和材料：实验在昆明医学院神经科学研究所实验室完成。动物来自中科院昆明动物研究所的成年雄性恒河猴(体质量平均6kg)7只。方法：采用氯氨酮肌肉注射麻醉，Zamboin’s液心脏灌注固定，取脑组织各部位行冷冻切片，厚25μm。免疫组织化学SP法，抗体为兔抗NT—4多克隆抗体。主要观察指标：光镜下于猴脑的不同部位观察NT—4—IR阳性物(呈棕色串珠状、丝状或颗粒状)。对照实验用0．05mol／L PBS代替一抗行免疫组化染色。结果：NT—4—IR(Neurotrophin -4 immunoreactive)分布于大脑皮层Ⅲ～Ⅴ层的部分神经元胞体及突起以及自质内少量的神经胶质细胞；小脑皮质及自质内的部分神经元；海马CA1、CA2、CA3区的部分神经元；此外豆状核、尾状核、脑桥核、前庭神经核、薄束核、契束核、副神经核等可见散在阳性反应细胞及交织成网的纤维。结论：NT—4—IR广泛地分布于猴脑的多种组织和细胞，提示其功能可能涉及不同类型的神经元及可能的非神经元。     

神经营养素-4在成年猴脑中的分布特征及其与成体中枢神经系统的功能关系

背景神经营养素-4(NT-4,Neurotrophin -4)在神经系统的发育和成体中均起重要作用,不仅对某些特定亚群神经元的存活、增殖、分化及轴突可塑性有一定的调节作用,而且对某些神经元的生存也是必需的.但这些资料大多来源于体外实验,其在体内的作用尚不十分清楚,NT-4在体内的分布也少见报道,在高等灵长类猴脑的研究尚未见报道.目的为探讨NT-4在成年灵长类动物猴脑的分布及为进一步研究NT-4与成体中枢神经系统的功能关系提供了有用的形态学依据.设计用PBS代替一抗的实验对照.地点和材料实验在昆明医学院神经科学研究所实验室完成.动物来自中科院昆明动物研究所的成年雄性恒河猴(体质量平均6 kg)7只.方法采用氯氨酮肌肉注射麻醉,Zamboin's液心脏灌注固定,取脑组织各部位行冷冻切片,厚25μm.免疫组织化学SP法,抗体为兔抗NT-4多克隆抗体.主要观察指标光镜下于猴脑的不同部位观察NT-4-IR阳性物(呈棕色串珠状、丝状或颗粒状).对照实验用0.05 mol/L PBS代替一抗行免疫组化染色.结果NT-4-IR(Neurotrophin -4 immunoreactive)分布于大脑皮层Ⅲ～V层的部分神经元胞体及突起以及白质内少量的神经胶质细胞;小脑皮质及白质内的部分神经元;海马CA1、CA2、CA3区的部分神经元;此外豆状核、尾状核、脑桥核、前庭神经核、薄束核、契束核、副神经核等可见散在阳性反应细胞及交织成网的纤维.结论NT-4-IR广泛地分布于猴脑的多种组织和细胞,提示其功能可能涉及不同类型的神经元及可能的非神经元.