成人胰岛细胞移植治疗1型糖尿病

目的 探讨新型成人胰岛细胞分离、纯化技术分离的成人胰岛细胞移植治疗1型糖尿病的安全性与有效性.方法 采用全氟化碳液(PFC)和UW液双层冷藏胰腺,Liberase酶消化,COBE 2991型专用胰岛细胞分离机分离及连续密度梯度纯化,获取高纯度与高活性的胰岛细胞.通过上腹部小切口,胃右静脉或脐静脉插管,将经短期培养的胰岛细胞经门静脉移植到11例1型糖尿病患者肝脏内.采用达利珠单抗或阿来佐单抗进行诱导,西罗莫司和他克莫司联用的方案预防排斥反应,术后观察胰岛素使用情况,监测血糖、G-肽与糖化血红蛋白水平以及肝功能、肾功能.结果 45个胰腺中,42个成功分离出胰岛细胞,其数量平均为28.5×104胰岛当量(IEQ)/个,纯度为95.7%,活率为93.2%,胰岛素释放试验刺激指数为2.43.11例1型糖尿病患者共行胰岛细胞移植20次,其中移植1次4例,2次5例,3次2例,每次移植胰岛细胞数平均为11 200 IEQ/kg.术后随访6个月至4年,6例完全撤除胰岛素,2例胰岛素用量较术前减少80%,3例减少50%.术后血糖稳定维持在正常水平,C-肽均超过0.166 nmol/L,糖化血红蛋白基本正常,肝、肾功能正常,未发生与胰岛细胞输注相关的并发症.结论 新型成人胰岛细胞分离、纯化方法可靠,采用该技术分离、纯化的成人胰岛细胞移植治疗1型糖尿病临床效果较好.     

成人胰岛细胞的分离纯化及初步的临床应用

目的分离及纯化成人胰岛,以用于同种胰岛细胞移植。方法利用胶原酶灌注消化以及Ficoll分离液分层纯化的方法获得成人胰岛细胞,并应用于2例临床糖尿病患者。结果经双硫腙染色鉴定,分离纯化后的胰岛细胞活性达到80%~90%;且经胰岛素释放试验表明,实验中收获的胰岛具有良好的胰岛素分泌功能。经临床试验,1例糖尿病患者在输入此胰岛后,已脱离胰岛素治疗;另1例患者已停止服用降糖药。结论用胶原酶灌注消化及Ficoll分离液分层纯化的方法获得成人胰岛细胞是可行的。     

胰岛制备的研究进展

移植物功能不足是阻碍胰岛移植成功的关键因素.完善成人胰岛的分离、纯化和保存技术可有效地提高胰岛的活性.本文就此领域的有关研究进展作一简要综述.     

胰岛制备的研究进展

移植物功能不足是阻碍胰岛移植成功的关键因素.完善成人胰岛的分离、纯化和保存技术可有效地提高胰岛的活性.本文就此领域的有关研究进展作一简要综述.     

肾移植联合成人胰岛细胞移植治疗糖尿病肾病七例报告

目的 建立新型成人胰岛细胞分离纯化方法和无激素免疫抑制方案.观察.肾移植联合胰岛细胞移植治疗1型糖尿病肾病的安全性与有效性.方法 全氟化碳液与威斯康星大学器官保存液双层冷藏胰腺,Liberase酶消化,COBE 2991型专用胰岛细胞分离机分离及连续密度梯度纯化,获取高纯度与高活性的胰岛细胞.常规方法行尸体肾移植,次El采用外科方法将短期培养的胰岛细胞经门静脉移植到肝脏内,采用无激素免疫抑制治疗.术后定期监测血糖与胰岛素用量、C肽与糖化血红蛋白水平以及肝肾功能.结果 23个胰腺均成功分离胰岛细胞,平均数量30万胰岛当量(IEQ)、纯度92%、活率95%、刺激指数3.16,病原学结果均阴性.7例1型糖尿病肾病患者共行胰岛细胞移植12次(移植1次3例、2次3例、3次1例).每次移植胰岛数量平均为11 820 IEQ/kg.采用阿来佐单抗诱导、西罗莫司和小剂量他克莫司、无激素免疫抑制治疗.随访1.5～3.0年,4例完全撤除胰岛素,3例胰岛素用量较术前减少＞70%.术后血糖稳定维持在正常水平,C肽均＞0.166nmol/L,糖化血红蛋白正常,肝肾功能正常.结论 新型成人胰岛细胞分离纯化方法可靠,胰岛细胞联合肾移植治疗1型糖尿病肾病安全、有效.     

实验大鼠胰岛分离移植技术方法的比较分析

目的 探索高效的大鼠胰岛分离移植技术方法.方法 应用Wistai-Furth大鼠,于体内或体外胶原酶经胰管灌注膨化胰腺,联合不同密度Ficoll液或Histopaque液纯化胰岛细胞,评估胰岛的数量、纯度、胰岛当量以及肾被膜下胰岛移植的有效性.结果 体外经胰管灌注膨化胰腺结合Histopaque液纯化提取胰岛的数量、纯度和胰岛当量值均显著高于体内灌注组各数值(P＜0.01),其提取时间无显著差别.1000个胰岛细胞移植进入左肾被膜下,有效的逆转了糖尿病大鼠高血糖,其远期糖耐受结果优于500和800个胰岛细胞移植组.结论 体外灌注膨化消化胰腺结合Histopaque液纯化胰岛的分离方法是一种满意的分离技术.1000个胰岛细胞是保证肾被膜下胰岛移植成功的最低有效数量.     

成人胰腺干细胞分离及转分化为胰岛的研究

目的 通过对成人胰腺干细胞分离和转分化为胰岛过程的研究以便更进一步了解及改进胰腺干细胞分离、培养、鉴定方法。方法 成人胰腺组织以胶原酶消化，密度梯度离心法获得纯化的胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛。导管上皮细胞在体外共培养27d，观察细胞形态学变化及干细胞特异性转录基因PDX—1，CK—19蛋白等的表达。结果 上述方法可获得大量胰腺导管上皮细胞。体外培养第1天即可见PDX—1，CK—19阳性细胞，胰腺导管上皮细胞迅速分裂增殖并转变为有分化能力的干细胞继而转分化为三维结构的胰岛细胞。培养27d后，平均每克胰腺组织可生成760个胰岛。结论 用改进的方法可获得大量成人胰腺导管上皮细胞，并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛，可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新途径。     

胰岛细胞及肾联合移植治疗胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒 …

目的 观察成人胰岛细胞及肾联合移植治疗胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒症的临床效果。方法 对４例胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒症的患者施行成人胰岛细胞及肾联合移植。肾移植为常规术式,在移植肾开放血液循环后,将分离、纯化、培养好的胰岛细胞注入门静脉中,移植后监测患者的空腹血糖、基础Ｃ－酞、糖化血红蛋白及肾功能的变化,并与其术前各项指标比较。结果 ４例患者术后在观察期内胰岛素的用量均较术前减少超过２５％,且持续     

同种胰岛移植新进展

同种胰岛移植新进展山东省医学科学院基础医学研究所（２５０００１）刘雪梅理论、实验研究和初步临床试用证明，胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病较理想的方法．现将同种胰岛移植新进展综述如下．１成人胰岛分离和鉴定成人和大动物胰岛分离的各种方法均源自Ｒｉｃｏｒｄｉ自动机...     

成人胰岛大容量分离技术的改进及胰岛功能检测

目的 通过对人胰岛分离技术的改进以获得大量高活力胰岛并检测其功能,为利用同种异体胰岛移植治疗1型和部分2型糖尿病提供理论依据和技术基础。方法 采用改良的自动分离技术连续分离28例人胰岛,然后用连续性密度样度离心法纯化胰岛。胰岛收获量以国际标准的胰岛当量(islet equivalent,IEQ)表示。胰岛功能的测定分别为体外测定胰岛的胰岛素／DNA比率;静止葡萄糖刺激试验(SGS)及将胰岛移植至糖尿病裸小鼠的体内胰岛功能鉴定并随后进行腹腔糖耐量试验,连续测定移植鼠血糖水平及其体内C肽浓度。结果 28例成人胰腺分离的胰岛收获量为5000～1030000IEQ／胰腺,平均为291635IEQ／胰腺,前13例平均每个胰腺收获49123IEQ,平均每克组织收获846IEQ。平均纯度为87％,随着技术的改进后15例的分离结果则分别为：平均每个胰腺501813IEQ,平均每克组织7003IEQ,平均纯度89％。体外胰岛素刺激试验结果表明分离纯化后的人胰岛有正常功能,将12次分离得到的胰岛分别移植至34只糖尿病裸鼠肾包膜下,其中29只糖尿病裸鼠于12h内血糖恢复正常且糖耐量试验接近正常鼠,血中C肽水平亦接近正常鼠。结论 采用改进的人胰岛分离方法,可以获得大量高活力的具有正常功能的胰岛,为同种异体胰岛移植用于临床奠定了必要的实验基础。     

正常成人胰岛移植治疗糖尿病的实验研究

目的探讨正常成人胰岛移植治疗糖尿病的作用。方法 2012年1月至2013年1月健康成人胰腺供体共13例。获取胰腺后经胶原酶消化并进行胰岛提取纯化,将纯化后的胰岛移植到糖尿病裸鼠肾包膜下为实验组,生理盐水代替胰岛移植为对照组,各13只。术后通过检测糖尿病裸鼠的血糖变化和组织学检查来判定胰岛移植后的存活情况和纠正血糖的效果。结果成人胰腺消化后胰岛产量为纯化前（3608±403）IEQ/g,纯化后（2820±318）IEQ/g,纯度为85%。实验组84.6%（11/13）糖尿病裸鼠在移植术后第1天,血糖降至正常,对照组血糖无明显变化。两组糖尿病裸鼠存活时间：实验组存活时间35～57d,中位存活时间46d。对照组存活时间5～12d,中位存活时间7d。两组比较差异具有统计学意义,Log-rank（Mantel-Cox）值为8.74,P值为0.0012。结论成人胰腺消化后,可得到高纯度活力正常的胰岛,并能纠正糖尿病裸鼠的高血糖。正常成人胰岛移植可能成为临床糖尿病患者的一种有效治疗方法。     

不同器官保存液对成人胰岛分离、纯化及功能的影响

目的探讨不同器官保存液保存胰腺对胰岛分离、纯化及功能的影响。方法以成人胰腺为研究对象,分别以高渗枸橼酸钾溶液(HCA液)与威斯康新大学器官保存液(UW液)灌洗、保存胰腺,进行胰岛分离及纯化,比较两组分离、纯化后收获的胰岛数及胰岛当量数(IEQ),并在体外评价其功能。结果两组在胰腺重量、热缺血时间、冷缺血时间没有明显差异的情况下,胰腺分离、纯化后所获得的胰岛数及胰岛当量数的差异无显著性(P>0.05),纯化后的胰岛细胞在体外低糖与高糖刺激下,其胰岛素的分泌量及C肽的释放量的差异也无显著性(P>0.05);两个组胰岛细胞的活率均在85%以上。结论在胰岛移植中,可以使用HCA液作为胰腺保存液。     

大量人胰岛分离技术的改进及相应胰岛功能的检测

目的 通过对人胰岛分离技术的改进以获得大量高活力胰岛并检测其功能。方法采用经典及改良技术分离、纯化28例人胰岛。胰岛收获量以胰岛当量(IEQ)表示。胰岛功能测定分别为体外测定胰岛素/DNA比率、静止葡萄糖刺激试验(SGS)及将胰岛移植至糖尿病裸小鼠的体内功能鉴定并行糖耐量试验,连续测血糖水平及其体内C肽浓度。结果 前13例采用经典方法,平均每个胰腺收获49123 IEQs,平均846 IEQs/g胰腺组织,平均纯度为87％。改进技术后15例的分离结果则分别为:501813 IEQs/胰腺,7003 IEQ/g胰腺组织及纯度89％。体外胰岛素刺激试验结果表明分离纯化后的人胰岛有正常功能,将12次分离得到的胰岛分别移植至34只糖尿病裸鼠肾包膜下,其中29只糖尿病裸鼠于12h内血糖恢复正常且糖耐量试验接近正常鼠,血中C肽水平亦接近正常。结论 采用改进的人胰岛分离方法,可以获得大量高活力的具有正常功能的胰岛,为同种异体胰岛移植用于临床奠定了必要的基础。     

临床胰岛移植研究进展（文献综述）

近年来临床胰岛移植取得了长足的进步，但器官获取和胰岛分离方法缺陷、移植后早期胰岛丧失及移植排斥和自身免疫仍是影响临床移植成功的重要因素。本文就临床胰岛移植的现状和在上述方面的进展作一综述。     

胰岛移植研究新进展

本文叙述了胰岛移植中的最近进展，诸如供胰的选择，获取及保存，胰岛的分离及纯化、胰岛的培养和冻存，移植的部位和数量，以及有关问题作了介绍。     

胰岛移植进展

近年来 ,随着胰岛分离、纯化技术的不断改进以及新型免疫抑制剂的问世和应用 ,临床同种胰岛移植已取得令人瞩目的进展[1 2 ] ,有可能在今后数年内得以广泛开展。本文对这些方面的进展作一综述。一、国际胰岛移植登记处的报告据国际胰岛移植登记处 (ITR)最近公布的结果 ,截止到2 0 0 0年 12月 31日 ,全球共有 5 1个研究中心开展了 4 93例成人胰岛移植 ,术后不依赖胰岛素的持续时间超过 12、2 4、36和 4 8个月的例数分别为 4 0、2 2、11和 6例。自体胰岛移植后停用胰岛素最长者已达 13年 ;Ⅰ型糖尿病 (IDDM )患者同种异体胰岛移植后停用胰…     

临床胰岛移植研究进展(文献综述)

近年来临床胰岛移植取得了长足的进步 ,但器官获取和胰岛分离方法缺陷、移植后早期胰岛丧失及移植排斥和自身免疫仍是影响临床移植成功的重要因素。本文就临床胰岛移植的现状和在上述方面的进展作一综述     

机械分离成人尸体胰腺提高胰岛数量和质量

目的通过机械分离胰腺的方法,提高成人胰岛数量和质量。方法切取8个成人尸体胰腺,并保存于4℃UW液中。首先经主胰管插管灌注复合胶原酶溶液,使胰腺膨胀,然后将胰腺剪切成5~8块,放入Ricordi室中,于37℃下机械震荡消化。收集的胰岛溶于100mlUW液中,放置30min。先将Ficoll液泵入COBE2991细胞分离仪中,然后泵入UW/胰岛制剂,最后加入M199液冲洗。收集纯化的胰岛,计算胰岛当量(IEQ)和纯度,检测胰岛的活性。结果热缺血时间为0~1min,冷缺血时间0.5~4h。纯化前收集的胰岛数量平均为(376.7±50.2)×103IEQ,纯化后为(378.6±56.7)×103IEQ;胰岛收获率平均为(86.8±9.4)%,镶嵌的胰岛平均占(11.0±2.7)%;收获的胰岛纯度平均为(88.3±5.1)%;经AO-PI染色后检测胰岛的活度为(91.3±7.8)%。胰岛素分泌指数平均为5.87±0.81。结论通过机械分离胰腺的方法,可以获得更多的胰岛数量和更高的胰岛活性,适合用于临床移植。     

家兔胰岛分离纯化方法的改进

目的介绍一种新的家兔胰岛分离纯化方法并进行纯化后胰岛的外观、活性和胰岛细胞团表面结构等质量分析。方法雄性日本大耳白,采用2 mg/m L胶原酶V逆行胰管灌注和消化,并用Hanks液洗涤,用Histopaque-1119、Histopaque-1077密度梯度离心进行胰岛纯化,DTZ、FD-PI染色鉴定胰岛纯度和活性,扫描电镜观察纯化后胰岛表面结构。结果家兔胰管开口于小肠,纯化得到家兔胰岛外形圆整,纯度90%,活性(87.4±5.9)%,纯化前胰岛当量为(1 874.8±464.5)IEQ,纯化后胰岛当量为(1 254.8±235.8)IEQ;扫描电镜结果显示胰岛细胞团表面有被膜,但部分胰岛被膜被消化。结论采用此方法可快速得到纯度高、活性好且结构完整的家兔胰岛,为进一步进行家兔胰岛体外质量及体内移植研究奠定了基础。     

胰岛细胞及肾联合移植治疗胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒症四例

目的　观察成人胰岛细胞及肾联合移植治疗胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒症的临床效果。方法　对 4例胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒症的患者施行成人胰岛细胞及肾联合移植。肾移植为常规术式 ,在移植肾开放血液循环后 ,将分离、纯化、培养好的胰岛细胞注入门静脉中。移植后监测患者的空腹血糖、基础C 酞、糖化血红蛋白及肾功能的变化 ,并与其术前各项指标比较。结果　 4例患者术后在观察期间内胰岛素的用量均较术前减少超过 2 5 % ,且持续 3个月以上 ;空腹血糖基本保持在正常水平 ,基础C 酞也基本维持在正常水平 ,糖化血红蛋白于术后降至正常水平 ;4例患者的移植肾功能良好 ,3例患者已恢复正常工作。结论　成人尸体胰岛细胞及肾联合移植治疗胰岛素依赖型糖尿病合并尿毒症的临床效果较好 ,具有操作简单、安全等优点