斑点免疫印迹法快速测定地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物

目的测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity One软件作定量分析。结果现行中药材参环毛蚓与山东产地方品种:秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓、天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物的质量分数分别为125.23、118.34、81.05、72.13μg/g。结论秉氏环毛蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物与现行地龙炮制品参环毛蚓无显著差异,理论上可作为广地龙的替代品。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于地龙与类似中药材炮制品的品质评价。     

水蛭饮片次黄嘌呤含量测定

目的：比较水蛭炮制前后所含次黄嘌岭的含量。方法：以HPLC测定水蛭药材与炮制品中次黄嘌呤的含量。结果：制水蛭的次黄嘌呤含量高于生水蛭的次黄嘌呤含量。结论：滑石粉炒水蛭使水蛭药性峻烈的活性成分含量降低，而保留甚至增加其他活性成分，从而降低毒性，保持药效。     

斑点免疫印迹法快速测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量

目的:测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量,并建立斑点免疫印迹法在中药材药效成分含量的测定方法。方法:以兔抗溶茧酶多抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量作定性检测,杂交信号应用Quantity one软件作定量分析。结果:4品种家蚕蛾下颚的个体溶茧酶平均含量分别为6.41、8.09、7.62、1.88μg/头。结论:不同品种家蚕蛾间下颚溶茧酶含量差异显著。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于类似中药材药效物质的含量测定与品质评价。     

基于SDS-PAGE技术的不同水蛭炮制品中水溶性蛋白的差异性研究

目的考察不同水蛭炮制品中水溶性蛋白的差异性。方法制备水蛭样品;采用考马斯亮蓝法测定水溶性蛋白质含量;SDS-PAGE法比较各样品中的蛋白的种类和丰度差异性;以生物检定技术为基础,检查水蛭及其炮制品的抗凝血酶活性。结果所用水蛭及其炮制品的抗凝血酶活性有明显差异;SDS-PAGE结果表明水蛭及其炮制品的蛋白种类、含量皆有明显差异。结论不同炮制方法中,动物药水蛭水溶性蛋白的含量差异明显,传统的高温炮制方法使水蛭中蛋白质发生了降解,其高温炮制的科学内涵有待深入的研究。     

水蛭不同炮制品质量比较

水蛭系破血逐瘀类中药,《全国中药炮制规范》规定其以炮制品入药。本文对水蛭生品及其各种炮制品游离氨基酸、水溶物和醇溶物含量进行了分析,为评价其质量提供了依据。1 样品制备 水蛭购于安国药材市场,经鉴定为蚂蟥Whitmania pigra Whitman的干燥全体。     

复方水蛭注射液HPLC指纹图谱研究

目的：用高效液相色谱法测定复方水蛭注射液中次黄嘌呤的含量，并建立注射液指纹图谱，全面评价其内在质量。方法：采用Kromasil C₁₈(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相A-0.01 mol·L^-1 KH₂PO₄，B-50%甲醇，梯度洗脱的方式；流速0.8 mL·min^-1，检测波长254 nm；柱温为室温。结果：以次黄嘌呤为参照物,建立了复方水蛭注射液指纹图谱，标示出15个共有峰,共有峰相似度大于0.97。结论：该方法准确、重复性好，可作为控制复方水蛭注射液的质量依据。     

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

水蛭(蚂蝗)滑石粉烫制品抗凝血酶活性标准研究

目的:建立水蛭(蚂蝗)滑石粉烫制品抗凝血酶活性标准。方法:采用滴定法测定不同批次的水蛭滑石粉烫制品抗凝血酶活性。结果:水蛭滑石粉烫制品抗凝血酶活性线性关系良好,其中y=1.027,54x+0.013,3,R=0.997,8,稳定性和重复性RSD均小于2.5%,测定的12批水蛭滑石粉烫制品含量测定标准在2.28～4.68 U/μL。结论:该方法工艺简单、操作方便;凝血酶滴定法简单且准确,可用于滑石粉烫水蛭的质量控制。     

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品酒制品烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品酒制品净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。     

基于熵权法的灰色关联法-TOPSIS法对不同产地三七及其炮制品质量的评价研究

目的 利用熵权法结合灰色关联法-TOPSIS法建立三七Panax notoginseng质量评价模型,评价不同产地三七及其炮制品质量。方法 以水分、醇浸出物、皂苷含量、多糖得率、多糖总糖含量、糖蛋白含量及糖醛酸含量作为检测指标,以熵权法计算权重,结合灰色关联法与TOPSIS法对各项指标进行统计分析,建立三七质量评价模型,综合考察红河、文山和曲靖3个产地共15个批次的三七及其炮制品的质量。结果 检测结果表明不同产地不同批次的三七各指标水平大不相同;将三七炮制前后各项指标进行对比,发现蒸制后水分降低,浸出物含量增加,皂苷减少,多糖含量增加;15批三七及炮制品质量排序结果TOPSIS与灰色关联分析基本一致。结论 基于熵权法的灰色关联法-TOPSIS法建立的质量评价模型方便有效,可用于三七质量评价。     

四种不同品种水蛭生物活性的研究与比较

目的:应用3种酶活性抑制方法测定四种不同品种水蛭的生物活性,为评价水蛭药材质量提供科学依据。方法:分别采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶3种检测方法,测定了宽体金线蛭、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭样品的生物活性。结果:4种水蛭中,吸血水蛭具有更好的抗凝血酶活性;4种水蛭均具有较好的抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶生物活性。结论:3种酶活性抑制方法可作为水蛭类药材质量控制的依据。     

山茱萸水溶物对老年小鼠淋巴细胞功能的影响

目的:研究山茱萸水溶物对老年小鼠的免疫调节作用,探讨其延缓衰老的机理。方法:采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷(~3H-TdR)掺入法测定淋巴细胞的增殖;以 K562细胞为靶细胞测定自然杀伤细胞(NK)细胞活性;~3H-缬氨酸掺入法测定总蛋白合成;以依赖株细胞增殖反应测定法检测白细胞介素-2(IL-2)活性;用32P-IL-2 cDNA 探针,通过胞浆印迹杂交法测定 IL-2 mRNA 含量。结果:老年小鼠中,山茱萸水溶物给药组与对照组比较,淋巴细胞的增殖指数增加18.2%(P<0.01);NK 活性提高30.6%(P<0.01);总蛋白合成率增加13.9%(P<0.01);IL-2活性提高14.9≤(P<0.05);并可影响 IL-2 mRNA 的表达。结论:山茱萸水溶物显著提高老年小鼠淋巴细胞增殖能力、NK 活性、总蛋白合成、IL-2活性以及 IL-2 mRNA 表达水平。山茱萸水溶物能够部分恢复老年小鼠的免疫功能。     

中药水蛭提取及精制工艺的研究

目的:研究中药水蛭的提取及精制工艺,为水蛭提取物入制剂工艺提供技术依据。方法:依正交试验法,逆流循环提取技术,以效价法检测抗凝血酶活性为指标,对水蛭提取工艺进行优化,并运用膜分离技术对提取液进行精制。结果:最佳工艺为以12倍量0.9%氯化钠溶液提取5 h,循环3次最好,选择相对分子质量为30×103和0.5×103的膜即可达到精制的目的。结论:该提取、精制工艺稳定、合理、可行。     

栀子不同饮片环烯醚萜苷类成分比较研究

目的:对栀子不同饮片环烯醚萜苷类成分进行比较研究。方法:HPLC同时测定2个主要成分(京尼平龙胆二糖苷,京尼平苷)含量,色谱条件为Kromasil C₁₈柱,流动相乙腈-0.3%甲酸水(12∶88),检测波长238 nm,流速1.0 mL.min^-1,柱温35℃。结果:2个成分在测定范围内线性关系较好(r>0.999 4),平均回收率分别为101.8%,99.1%。栀子不同饮片中2种环烯醚萜苷类成分含量有差异。结论:所建立的方法准确、可靠,栀子不同饮片的含量变化呈现一定的规律性。     

远志炮制前后5种寡糖酯类成分的变化规律

目的:比较远志不同炮制品中5种寡糖酯类成分的含量,探讨远志炮制前后寡糖酯类成分的变化规律。方法:采用HPLC同时测定远志不同炮制品中西伯利亚远志糖A5,西伯利亚远志糖A6,球腺糖A,tenuifoliside B及3,6'-二芥子酰基蔗糖的含量,流动相乙腈(A)-0.1%甲酸溶液(B)梯度洗脱(0~5 min,10%~12%A;5~20 min,12%~25%A;20~25 min,25%A),检测波长330 nm。结果:远志根皮中5种寡糖酯类成分含量均明显高于木心。远志根皮中5个成分质量分数分别为0.173%,0.155%,0.071%,0.120%,0.648%,木心中5个成分质量分数分别为0.090%,0.053%,0.029%,0.018%,0.205%。蜜远志中西伯利亚远志糖A6和球腺糖A含量高于生品,而其他3种成分的含量则较生品降低。制远志中西伯利亚远志糖A5,西伯利亚远志糖A6,3,6'-二芥子酰基蔗糖和tenuifoliside B含量较生品显著降低,而球腺糖A含量则较生品升高。结论:远志木心与远志根皮中5种寡糖酯类成分含量相差较大,炮制对远志中寡糖酯类成分的含量具有一定影响,经甘草汁煮制后西伯利亚远志糖A5,西伯利亚远志糖A6,3,6'-二芥子酰基蔗糖及tenuifoliside B均产生了质变。     

猪胆汁炮制对黄连中生物碱类成分溶出的影响

目的:比较黄连、胆黄连及其水煎液中生物碱类成分的含量,研究猪胆汁炮制对黄连中生物碱类成分溶出效果的影响,探讨胆黄连寒性增强的炮制机制。方法:采用紫外分光光度法(UV)测定黄连、胆黄连及其水煎液中总生物碱含量,检测波长345 nm。采用高效液相色谱法(HPLC)测定黄连、胆黄连及其水煎液中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的含量,流动相乙腈(A)-磷酸三乙胺水溶液(B)梯度洗脱(0~15 min,25%~30%A;15~20 min,30%~55%A),流速1.0 m L·min~(-1),检测波长345 nm。结果:黄连水煎液、胆黄连水煎液中总生物碱的转移率分别为71.17%和78.50%;黄连水煎液中盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的转移率分别为73.93%,51.59%,56.16%;胆黄连水煎液中三者的转移率分别为80.42%,64.21%,64.79%。结论:黄连经猪胆汁炮制后能够增加黄连中生物碱类成分在水煎液中的溶出,可达到寒性增强的炮制目的。     

白花丹炮制工艺考察

目的:优化白花丹炮制工艺,为该药材的临床安全应用提供参考。方法:以白花丹醌、香草酸含量的综合评分为指标,通过正交试验考察炮制时间、白酒用量、乙醇体积分数对白花丹炮制工艺的影响。采用HPLC测定白花丹醌及香草酸含量,流动相甲醇-0.15%磷酸梯度洗脱,检测波长260 nm。结果:最佳酒炙炮制工艺为白酒用量0.2 m L·g-1,炮制时间45 min,乙醇体积分数12%。白花丹醌、香草酸质量分数分别为0.013 0%,0.019 3%。结论:优选的工艺条件稳定可行、方法简便,可用于白花丹的质量控制与酒炙品制备。     

水蛭分子鉴定方法的研究进展

水蛭基原复杂、市场混乱、传统方法难以有效鉴别,临床用药的安全性无法保障。分子鉴定方法根据生物间的分子特征差异进行鉴定,不受自然环境、生长发育阶段等外部因素影响,具有快速、准确、客观的特点。目前应用于水蛭的分子鉴定方法有:基于核酸的RAPD技术、SSR技术、DNA条形码技术和基于蛋白质的SDS-PAGE技术、同工酶分析技术,本文在简述水蛭不同分子鉴定方法研究进展的基础上,对水蛭不同分子鉴定方法的技术和应用特点进行比较,最后对DNA宏条形码技术、Target-sequencing技术、电化学传感检测技术在水蛭混合物,特别是中成药中水蛭成分的鉴定进行展望,旨在为水蛭鉴定方法的深入研究提供参考和借鉴。     

大黄虫丸抗动脉血栓的正交实验研究

目的:采用正交设计筛选大黄虫丸抗动脉血栓形成的主要成分,精制大黄虫丸。方法:将单味药材按照正交设计表(L16215)依次配伍,分为16组并制成相应药液,予SD大鼠灌胃,模型组、正常对照组给予等体积生理盐水灌胃。灌胃1 w后分离大鼠颈动脉,按三氯化铁诱导大鼠颈总动脉血栓模型方法造模,造模后取血,检测血小板、血栓素B2(throm boxaneB2,TXB2)和6酮前列腺素F1α(6-keto-prostaglandin F1α,6-keto-PGF1α),取血后剪取大鼠造模处动脉烘干称量质量后动脉放入10%福尔马林溶液中固定,HE染色,观察血管组织形态学改变。结果:病理切片显示各实验组均有血栓形成,但血栓形成严重程度不一,出现软化、溶解、吸收,内膜损伤。正交分析结果显示:1、对血栓干质量有影响的是:大黄、土鳖虫、水蛭、桃仁、干漆,其中除干漆P0.05外,其他均P0.01。2、对血浆6-keto-PGF1α水平有影响的是:桃仁、干漆、土鳖虫、虻虫、蛴螬、水蛭、大黄,其中除大黄P0.05外,其他均P0.01。3、对血浆TXB2水平有影响的是:土鳖虫、桃仁、干漆、大黄、水蛭,其中除水蛭P0.05外,其他均P0.01。4、对血小板计数有影响的是:桃仁、干漆、大黄、土鳖虫、虻虫、水蛭,其中除虻虫、水蛭P0.05外,其他均P0.01。结论:大黄虫丸抗动脉血栓作用与大黄、土鳖虫、水蛭、桃仁、干漆、虻虫6味药材关系最为密切。     

炮制方法对决明子中蒽醌类成分含量的影响

目的：探讨决明子的炮制方法对其蒽醌类化学成分含量的影响。方法：取决明子生品和炮制品,采用高效液相色谱法测定总蒽醌类成分含量。结果：决明子生制品的蒽醌类含量低于炒制品。结论：炮制方法对决明子蒽醌类的含量有一定影响。