水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

水蛭滑石粉烫制工艺的优化及其质量分析

目的优化水蛭滑石粉烫制工艺,并分析其质量。方法以烫制温度、烫制时间、滑石粉用量为影响因素,粉碎率、醇溶性浸出物、抗凝血酶活性为评价指标,星点设计-效应面法优化烫制工艺。采用2015年版《中国药典》方法测定水分、总氮、醇溶性浸出物、抗凝血酶活性,氨基酸自动分析仪测定16种氨基酸含有量。结果最佳条件为每100 kg水蛭加入30 kg滑石粉,烫制温度195℃,12 r/min翻炒3.5 min,粉碎率、醇溶性浸出物、抗凝血酶活性的总评"归一值"(OD)为0.633。炮制后,水分、总氮、醇溶性浸出物、抗凝血酶活性、氨基酸总量分别为6.9%、10.9%、21.0%、10.4 U、51.7%。结论该方法稳定可行,预测性良好,可用于滑石粉烫制水蛭。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

水蛭炮制的初步药理研究

比较了水蛭生品、传统烫制品及新法制品的抗凝血、抗血栓作用,并考察了其安全性。     

抗凝血酶滴定法优化水蛭煮散提取工艺

目的:优选水蛭煮散的提取工艺。方法:利用抗凝血酶滴定法测定水蛭中抗凝血酶活性物质含量。以粉碎度为指标,筛选粉碎设备,考察水分对水蛭煮散粉体的影响;以浸膏得率和抗凝血酶活性物质转移率为评价指标,通过单因素试验考察粉碎度、浸泡时间、加水量、煎煮次数、煎煮温度及时间对提取工艺的影响,并与传统饮片进行比较。结果:水蛭煮散的最佳提取工艺为取水蛭最粗粉,加20倍量水浸泡10 min,于100℃煎煮提取3次,每次20 min;抗凝血酶活性物质转移率达93.31%,高于传统饮片的52.44%。结论:优选的提取工艺稳定可行,水蛭煮散具有效率高、时间短、能耗低、环保等优点,为水蛭煮散的工业化生产和新药开发提供参考。     

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品酒制品烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品酒制品净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。     

四种不同品种水蛭生物活性的研究与比较

目的:应用3种酶活性抑制方法测定四种不同品种水蛭的生物活性,为评价水蛭药材质量提供科学依据。方法:分别采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶3种检测方法,测定了宽体金线蛭、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭样品的生物活性。结果:4种水蛭中,吸血水蛭具有更好的抗凝血酶活性;4种水蛭均具有较好的抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶生物活性。结论:3种酶活性抑制方法可作为水蛭类药材质量控制的依据。     

水蛭不同炮制品抗凝血活性的比较

目的:应用抗凝血活性指标筛选水蛭炮制工艺。方法:按生物检定法测定各种炮制品水提取物的抗凝血时间,比较不同炮制方法对水蛭抗凝血活性的影响。结果:净制法和低温冷冻粉碎炮制法均能较好地保持水蛭抗凝血活性,而其它炮制方法炮制的水蛭抗凝血活性不强。结论:净制法炮制水蛭,能较好地保持抗凝血活性,且制作简便,是一种较好的炮制方法。     

水蛭炮制工艺改革的实验研究

水蛭是中医用于治疗消症瘕，破积聚，化痞，消坚祛瘀血，通经的虫类中药。目前在临床中已突破传统的应用范围，广泛应用于治疗心脑血管等疾病。但临床应用需炮制，而现今炮制是滑石粉烫制，滑石粉烫制的方法不利于保证水蛭的药效质量，为保证和发挥、发掘水蛭在临床中的药效作用，本文对现行的滑石粉烫制进行了改革     

水蛭炮制工艺改革的实验研究

水蛭因其具有特殊的腥臭味和不易粉碎的特性，历代多炒炙入药，现在多用滑石粉烫制。笔者参考有关实验研究资料认为，有必要对滑石粉烫制的方法进行改革，兹总结如下。一．滑石粉烫制法《中华人民共和国药典》一部（９５版）和徐楚江主编《中药炮制学》的水蛭炮制项下的滑...     

基于SDS-PAGE技术的不同水蛭炮制品中水溶性蛋白的差异性研究

目的考察不同水蛭炮制品中水溶性蛋白的差异性。方法制备水蛭样品;采用考马斯亮蓝法测定水溶性蛋白质含量;SDS-PAGE法比较各样品中的蛋白的种类和丰度差异性;以生物检定技术为基础,检查水蛭及其炮制品的抗凝血酶活性。结果所用水蛭及其炮制品的抗凝血酶活性有明显差异;SDS-PAGE结果表明水蛭及其炮制品的蛋白种类、含量皆有明显差异。结论不同炮制方法中,动物药水蛭水溶性蛋白的含量差异明显,传统的高温炮制方法使水蛭中蛋白质发生了降解,其高温炮制的科学内涵有待深入的研究。     

蛭血通肠溶胶囊活性测定

目的:研究测定蛭血通肠溶胶囊活性的方法。方法:采用凝血酶滴定法测定蛭血通肠溶胶囊中水蛭提取物的抗凝血活性。结果:水蛭提取物效价测定线性范围为40U/mL~120U/mL,蛭血通肠溶胶囊活性均值为382U/g;重复性试验RSD为0.85%(n=6);滴定精密度试验RSD值为0.69%(n=6);平均回收率为101.0%,RSD为1.63%(n=6);阴性样品无干扰。结论:该方法可用于蛭血通肠溶胶囊的含量测定,准确、可靠,可有效进行该制剂的质量控制。     

3种水蛭炮制品调脂作用比较

3种水蛭炮制品调脂作用比较武继彪,刘红兵,吕文海,卢兖伟,王琦(山东省中医药研究所济南250014)近年来,中药水蛭在临床的应用范围渐趋扩大,用于脑血管病变、高脂血症、冠心病心绞痛、呼吸系统疾病等￣[1]。水蛭经滑石粉烫炮制后应用,已有2000余年的历史,为传统炮制方法,现为药典法定之方法。近代有些学者则主张用水蛭生粉装胶囊应用￣[2,3]]。我们综合多种文献提出新的炮制工艺。为比较新工艺炮制品、传统工艺炮制品、生品这3种?...     

抗凝血酶活性物质的提取工艺研究

目的:优化中药水蛭中抗凝血酶活性物质的提取工艺,为中药水蛭中抗凝血酶物质的提取提供科学依据。方法:以测得的水蛭素含量和蛋白质含量计算出水蛭素的比活力作为评价指标,采用正交实验设计法确定最佳的提取工艺。结果:实验确定的最佳提取工艺为:在温度为70℃下提取3次,每次30m in。结论:实验优化了中药水蛭中抗凝血酶物质的提取工艺,为传统中药水蛭中抗凝血酶活性物质的提取提供了依据。     

基于蛋白免疫印迹的水蛭抗凝活性成分研究

目的：建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法：本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western blot检测凝血酶-活性多肽复合体。结果：研究发现两种水蛭Native-PAGE-WB均检测到凝血酶-活性多肽复合体,且SDS-PAGE-WB检测到复合体变性后产生凝血酶条带。结论：建立的Native-PAGE-WB法可有效检出水蛭活性多肽和凝血酶相互作用产物,且发现同水蛭素类似,宽体金线蛭活性抗凝多肽与凝血酶在体外也能形成稳定的蛋白复合体。     

水蛭饮片

正炮制:水蛭洗净,切段,干燥。烫水蛭取净水蛭段,照烫法(附录ⅡD)用滑石粉烫至微鼓起。性味:咸、苦,平;有小毒。归经:归肝经。功能:破血通经,逐瘀消癥。主治:用于血瘀经闭,癥瘕痞块,中风偏瘫,跌扑损伤。用法与用量:1~3g。注意:孕妇禁用。     

水蛭古今炮制研究初探

对水蛭的炮制方法进行了历史沿革探讨,并对其现代炮制研究进行了概述。水蛭历代炮制方法分净制、切制、加辅料和不加辅料制几大类,约十余种,而今仅沿用了净制、切制和滑石粉烫炒制几种炮制方法。现代仅就其生品和炒制品从化学成分含量与药理作用比较进行了初步的研究探讨,为其炮制工艺改进和临床用药提供了一定的科学依据,但对历代沿用的多种炮制方法未能进行全面的科学探讨。据此提出,对水蛭的炮制研究,应用现代科学技术,结合临床用药理论,找出突破点,多学科深入地进行研究探讨,更好地提高水蛭的炮制品质量,为临床提供更加安全可靠有效的水蛭制品     

基于SPME-GC-MS分析探讨炮制对6种动物药挥发性成分的影响

目的:通过SPME-GC-MS分析探讨炮制对6种动物药挥发性成分的影响。方法:顶空固相微萃取法萃取鸡内金、水蛭、穿山甲、玳瑁、鱼鳔胶、阿胶6种中药生品及炮制品饮片中的挥发性组分,利用GC-MS法鉴定并比较各样品炮制前后化学成分,应用峰面积归一化法计算各成分的相对含量。结果:鸡内金、砂烫鸡内金、水蛭、滑石粉炒水蛭、穿山甲、砂烫穿山甲、玳瑁、滑石粉炒玳瑁、鱼鳔胶、滑石粉炒鱼鳔胶、阿胶、蛤粉炒阿胶的挥发性成分中分别鉴定出25、27、40、29、25、27、32、29、33、28、39、28种化合物。6种动物药炮制前后挥发性成分含量差异明显,炮制过程中棕榈酸的含量降低,同时部分生成α-葎草烯等新化合物。结论:6种动物药在炮制过程中,挥发性成分变化明显,该结果可为动物药的炮制研究提供参考。     

水蛭饮片次黄嘌呤含量测定

目的：比较水蛭炮制前后所含次黄嘌岭的含量。方法：以HPLC测定水蛭药材与炮制品中次黄嘌呤的含量。结果：制水蛭的次黄嘌呤含量高于生水蛭的次黄嘌呤含量。结论：滑石粉炒水蛭使水蛭药性峻烈的活性成分含量降低，而保留甚至增加其他活性成分，从而降低毒性，保持药效。     

水蛭炮制方法的改进

水蛭为活血化瘀药,临床上应用广泛。《中国药典》及各地方标准一般都规定用滑石粉烫法炮制。即将滑石粉置锅内武火炒至滑利时,投入水蛭段,炒至微鼓起时,取出放凉,但用此法炮制的水蛭腥气较浓,入煎剂后产生不快气味,难以服用。而且贮存稍久易吸潮回软,变质。笔者用改进后方法炮制:取水蛭段,加黄酒拌匀,闷透,用文火炒至酒吸尽,取出,放入烘箱或烘房内80℃烘至微鼓起,质酥脆时取出,放凉,密封保存。此法优点:①水蛭用酒炮制后,腥气减....