慢性心力衰竭时心肌细胞凋亡

心力衰竭时心功能进行性恶化,其机制尚未阐明。用冠脉内微栓造成羊慢性心力衰竭(CHF)模型,起搏诱导兔CHF模型及慢性输注去甲肾上腺素雪豹模型,研究了CHF时心肌细胞凋亡。CHF早期羊心肌细胞凋亡的超微结构特征为核染色质聚集成团,并向核膜方向移动,而肌质网和细胞器完整。凋亡的心肌细胞数量明显增加。起搏诱导兔CHF时,血浆去甲肾上腺素水平增高,心肌细胞凋亡发生。慢性输注去甲肾上腺素时,心肌细胞凋亡增加,伴凋亡蛋白BAX表达增加。结果提示,CHF时心肌细胞凋亡发生,去甲肾上腺素诱导心肌细胞凋亡。心功能的进行性恶化与之有关。进一步阐明心肌细胞凋亡的信号通路,将为CHF的预防和治疗提供新的途径。     

内皮素-1促进去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨内皮素（ET－1）在去甲肾上腺素（NE）诱导的心肌细胞凋亡中的作用。方法 采用无血清培养新生大鼠心肌细胞模型，以免疫组化鉴定心肌细胞；以Hoechst33258与PI双重荧光染色观察ET－1与NE单独或联合作用时心肌细胞凋亡率的变化。结果 ①实验培养的新生大鼠心肌细胞的纯度达90％；②NE呈剂量依赖性诱导心肌细胞凋亡；ET－1对心肌细胞凋亡率无明显影响；ET-1NE联合作用可显著增加心肌细胞的凋亡率。结论 内皮素－1可能促进去甲肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡。     

晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响

目的探讨晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞细胞周期及凋亡的影响。方法体外培养3~5 d的乳鼠心肌细胞,用含1%或10%胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24 h,应用流式细胞仪和原位末端标记技术观察不同浓度AGEs(50、100 μg/ml)对心肌细胞刺激12、24、48 h后细胞周期分布、凋亡率及凋亡小体/凋亡细胞核分布的影响。结果AGEs对心肌细胞细胞周期分布无明显影响;在正常培养液培养时,心肌细胞的凋亡随着培养时间延长而增加,24、48 h与12 h相比,凋亡小体/凋亡细胞核分别增加了0.55、1.23倍;AGEs可以明显增加心肌细胞的凋亡程度,并随着刺激时间、刺激浓度的增加而增加,50、100 μg/ml AGEs组与对照组相比,凋亡小体/凋亡细胞核12、24、48 h分别增加了0.74和1.21、1.15和1.78、0.83和1.19 倍。结论AGEs对心肌细胞细胞周期分布无影响,但可以通过增加心肌细胞凋亡率对心肌细胞造成损伤。     

晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞细胞周期及凋亡的影响。方法：体外培养3－5d的乳鼠心肌细胞，用含1％和10％胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24h，应用流式细胞仪和在位末端标记技术观察不同浓度AGEs(50、100μg/ml）对心肌细胞刺激12、24、48h后细胞周期分布、凋亡率及凋亡小体／凋亡细胞核分布的影响。结果：AGEs对心肌细胞细胞周期分布无明显影响；在正常培养液培养时，心肌细胞的凋亡随着培养时间延长而增加，24、48h与12h相比，凋亡小体／凋亡细胞核分别增加了0．55、1．23倍、AGEs可以明显增加心肌细胞的凋亡程度，并随着刺激时间、刺激浓度的增加而增加，50、100μg/ml AGEs组与对照组相比，凋亡小体／凋亡细胞核12、24、48h分别增加了0．74和1．21、1．15和1．78、0．83和1．19倍。结论：AGEs对心肌细胞细胞周期分布无影响，但可以通过增加心肌细胞凋亡率对心肌细胞造成损伤。     

丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响

观察丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响,并探索其机理。采用体外培养的wistar乳鼠心肌细胞缺糖缺氧6h,用心肌酶检测其代射及流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果显示缺糖缺氧组心肌细胞凋亡数及酶指数显著高于正常对照组,大、小剂量丹参液组心肌细胞凋亡及酶数量明显下降,与缺糖缺氧组比较有显著性差异。说明丹参对缺糖缺氧心肌细胞凋亡有明显的抑制作用。     

细胞凋亡与心肌缺血再灌注损伤

本文就近年来 ,缺血再灌注时的心肌细胞凋亡现象、心肌细胞凋亡的机制及心肌细胞保护的研究等 ,综述如下。1　心肌细胞凋亡现象对急性缺血和缺血再灌注时的心肌细胞凋亡曾有过争论 ,Ｇｏｔｔｌｉｅｂ等[1 ] 于 1 994年采用电镜结合ＤＮＡ凝胶电泳方法 ,率先报道了缺血再灌注时的心肌细胞凋亡现象 ,发现细胞凋亡可以作为心肌细胞缺血再灌注损伤的特征 ,并区别于缺血性损伤 ,单纯缺血心肌无细胞凋亡。同年Ｔａｎａｋａ等[2 ] 报道 ,在乳鼠心肌细胞培养时 ,以 95 %Ｎ2 、5 %ＣＯ2 造成缺血条件 ,在 1 2ｈ内就观察到心肌细胞凋亡 ,证实细胞凋亡…     

STZ糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及葡萄糖、血管紧张素Ⅱ、瘦素对心肌细胞凋亡影响的观察

目的　观察链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠心肌细胞凋亡情况及葡萄糖、血管紧张素Ⅱ、瘦素对正常SD大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法　主动脉插管逆行灌流分离培养STZ糖尿病大鼠和正常SD大鼠心肌细胞,通过Annexin V FITC +PI双染法,采用流式细胞术,检测细胞凋亡情况,并运用细胞免疫荧光染色法检测心肌细胞膜瘦素受体的表达。结果　(1)STZ糖尿病大鼠心肌细胞凋亡较对照组明显增高(P <0 .0 1) ;(2 )在体外培养条件下,血管紧张素Ⅱ、瘦素使心肌细胞凋亡明显增加,且与浓度相关,差异均有显著性(P <0 .0 1) ,在葡萄糖5 .6、2 5mmol/L的培养环境中,心肌细胞凋亡变化不明显(P >0 .0 5 ) ;(3)细胞免疫荧光染色检测瘦素受体表达,在荧光显微镜下可见到心肌细胞膜呈现绿色荧光。结论　STZ糖尿病大鼠的心肌细胞凋亡增高;在体外培养条件下,血管紧张素Ⅱ、瘦素可促进SD大鼠心肌细胞凋亡,且与浓度相关,增加培养环境中的葡萄糖浓度,对SD大鼠心肌细胞的凋亡无明显影响,而瘦素可能通过与心肌细胞膜上瘦素受体结合而发挥作用。     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大与凋亡干预的研究

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA（TSN）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞，采用相差显微镜测量细胞大小，测定心肌细胞^3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标；用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，用Westamblot法检测心肌细胞凋亡蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达。结果TSN能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞增大、心肌细胞^3H-亮氨酸掺入率的显著增加（P〈0.01）、心肌细胞凋亡率的增加（P〈0．05）、心肌细胞促凋亡蛋白P53和Bax表达的明显增高（P〈0.01），其效果与AngⅡ受体阻滞剂缬沙坦（Valsartan）相似。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，这可能与其同时抑制了心肌细胞的凋亡有关。     

血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡及牛磺酸的作用

目的 观察外源性血管紧张家Ⅱ(AngⅡ)对心肌细胞凋亡的诱导作用，并探讨牛磺酸对其可能的作用和影响。方法 利用培养的乳鼠心肌细胞，随机分成不同AngⅡ浓度(10^—9—10^—5M)诱导的细胞凋亡组和不同浓度牛磺酸(10、20、40mmol/L)作用组，观察培养24h后的各组心肌细胞存活率，光镜和电镜观察凋亡细胞形态结构变化．TUNEL法检测凋亡，流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 10^—9M的AngⅡ可诱导心肌细胞发生凋亡，心肌细胞呈现特征性的凋亡形态结构变化；TUNEL检测观察到凋亡细胞核呈黄褐色改变；流式细胞仪PI染色呈现典型的亚二倍体峰。牛磺酸可以明显的降低血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡率(P＜0．05)。结论 一定浓度的AngⅡ可以引起体外培养的乳鼠心肌细胞发生调亡，且牛磺酸可对这种凋亡产生保护作用。     

丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 :观察丹参对乳鼠心肌细胞凋亡的影响 ,并探索其作用机制。方法 :体外培养的 Wistar乳鼠心肌细胞缺糖缺氧 6 h后 ,采用心肌酶检测其代谢及流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果 :缺糖缺氧组心肌细胞凋亡数量及酶指数显著高于正常对照组 ,大、小剂量丹参液组心肌细胞凋亡及酶指数明显下降 ,与缺糖缺氧组比较有显著性差异。结论 :丹参对缺糖缺氧心肌细胞凋亡有明显的抑制作用     

粉防己碱对新生大鼠心肌细胞低氧/复氧损伤中细胞凋亡的影响

目的 :研究粉防己碱对培养心肌细胞模拟缺血 /再灌过程中心肌细胞凋亡的影响 .方法 :采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养 ,建立模拟心肌缺血 /再灌注模型 ,实验分 3组 :①正常对照组 ;②模拟缺血 /再灌注组 :细胞缺氧 12 0min ,复氧 2 4 0min ;③ 30 μmol·L-1粉防己碱 +缺血 /再灌注组 .计算台盼蓝摄取率 ,测定乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,以流式细胞仪 (FCM)和透射电镜观察细胞凋亡 .结果 :在正常对照组 ,FCM未发现凋亡峰 ,电镜未发现凋亡细胞 ,而缺血 12 0min/再灌注 2 4 0min组FCM的凋亡率为 15 1% ,电镜可见到典型的凋亡细胞 ,台盼蓝摄取率和LDH活性显著增加 (P <0 0 1) .粉防己碱组则细胞大部分存活 ,凋亡率明显降低 (平均 3 2 % ) .结论 :细胞凋亡参与了心肌缺血 /再灌注损伤 ,粉防己碱可减少缺血 /再灌注损伤中的心肌细胞凋亡     

纳洛酮对缺氧诱导大鼠神经元损伤的抑制作用及其机制

目的探讨纳洛酮对缺氧诱导大鼠神经元损伤的作用及其可能的机制。方法体外培养大鼠神经元，将其分为正常对照组、缺氧诱导组、缺氧诱导＋纳洛酮干预组。应用流式细胞术测定大鼠神经元损伤；应用荧光探针2，7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸（DCFDA）检测细胞内活性氧的变化；应用比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）的活性；应用Westernblot检测NF—KB的活化。结果（1）纳洛酮抑制缺氧诱导的大鼠神经元凋亡，缺氧组大鼠神经元细胞凋亡明显增加，为对照组的3．54倍，纳洛酮干预组为对照组的1．35倍（均P〈0．05）。（2）纳洛酮抑制缺氧诱导的活性氧生成，缺氧诱导大鼠神经元活性氧生成，为对照组的2．66倍，纳洛酮干预组为对照组的1．24倍（均P〈0．05）。（3）纳洛酮抑制缺氧诱导的NF—KB活化（P〈0．05）。（4）抗氧化剂NAC抑制缺氧诱导的NF—KB活化，抑制率达49％（P〈0．05）。结论纳洛酮抑制缺氧诱导的活性氧生成，进而抑制NF—KB活化，从而抑制缺氧诱导的大鼠神经元凋亡。     

Rho激酶在乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤细胞凋亡中的作用

摘要：目的观察Rho激酶在培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤细胞凋亡中的作用，及Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔（fasudil,F）对缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法原代培养出生1～2d的SD乳鼠心肌细胞，并行肌钙蛋白抗体免疫荧光染色鉴定，建立缺血再灌注损伤（I/R）模型。实验分3组：① 正常对照组；② I/R组;③ I/R+F组：建立I/R模型前20min 加入法舒地尔，使其终浓度分别为10μmol/L（F1组）、30μmol/L（F2组）、50μmol/L（F3组）。Western blot分别检测缺血2h,再灌注3h肌球蛋白磷酸酶目标亚单位1（myosin phosphatase target subunit 1，MYPT1）磷酸化水平，作为Rho激酶功能活化的标志。应用流式细胞仪Annexin-V/PI双色法检测再灌注3、6h时点心肌细胞的凋亡率。结果再灌注3h后MYPT1的磷酸化水平明显增加，I/R组为正常对照组的 5.7倍(P＜0.01)，F1、F2、F3组法舒地尔干预后较I/R组分别减少24.6%、40.1%、60.1%（P＜0.05）；法舒地尔组再灌注3、6h心肌细胞的凋亡率较I/R组同时间点显著下降，随给药浓度的增加，细胞凋亡率呈下降趋势。结论Rho激酶在缺血再灌注心肌细胞中有促凋亡作用，法舒地尔可减少缺血再灌注心肌细胞凋亡的发生，从而发挥良好的心肌保护作用。     

体外瞬时转染野生型PTEN过表达对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：研究野生型FTEN基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用。方法：应用携带野生型FTEN的真核表达载体pEGFP-C1-FTEN,以脂质体介导的方法体外瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,利用流式细胞术检测抗凋亡蛋白bcl-2的表达,通过相差显微镜、细胞生长曲线、MTT、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法,观察FTEN基因过表达对MCF-7细胞生物学特性的影响。结果：荧光显微镜观察、免疫细胞化学和RT-PCR检测证实,转柒后MCF-7细胞中PTEN呈高水平表达;相差显微镜观察到MCF-7／FTEN细胞出现典型的凋亡形态学改变;细胞生长曲线低平;流式细胞检测显示,G-期细胞比例比空载体组增加14.79％,并出现凋亡峰;DNA琼脂糖凝胶电泳可见梯状条带;同时还检测到转染PTEN后细胞bcl-2表达下降。结论：外源性FTEN基因过表达可显著抑制MCF-7细胞的周期进程并诱导细胞凋亡。     

衔接蛋白p66shc在雌激素抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨衔接蛋白p66shc在血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡中的作用及雌激素的干预影响。方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,将心肌细胞分为5组:正常对照组、10-11 mol/L AngⅡ组、10－9 mol/L AngⅡ组、10－7 mol/L AngⅡ组、10－7 mol/L AngⅡ+雌二醇组;经药物干预后应用MTT法测定细胞存活率、流式细胞仪测定活性氧含量和细胞凋亡率、荧光酶标仪检测线粒体膜电位水平、Western blot检测p66shc和磷酸化(p-p66shc)蛋白的表达水平。结果 随着AngⅡ浓度的升高,心肌细胞存活率和线粒体膜电位水平逐渐下降,而细胞内活性氧含量和凋亡率逐渐升高 （P<0.05）;且雌激素预处理可减轻AngⅡ对心肌细胞的损伤 （P<0.05）。AngⅡ可使心肌细胞内p-p66shc和线粒体内的p66shc的表达呈剂量依赖性升高 （P<0.05）,雌激素预处理可减弱AngⅡ对细胞内p-p66shc和线粒体内p66shc表达水平的影响 （P<0.05）。结论 p66shc参与了AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡反应,且雌激素可通过下调线粒体内p66shc的表达而减轻AngⅡ对心肌细胞的损伤。     

高糖对乳鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨高糖对乳鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,以20mmol/L终浓度的葡萄糖干预48h后,激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术检测心肌细胞凋亡;荧光定量PCR检测高糖对凋亡相关基因P53、Pax3、Bmp4、Slug、Msx1表达的影响。结果:激光共聚焦显微镜观察可见高糖组心肌细胞凋亡明显增加;TUNEL检测心肌细胞凋亡指数,高糖组为(19.67±3.45)%,明显高于对照组(1.12±0.24)%(P<0.05);流式细胞术显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05);荧光定量PCR表明高糖能上调P53、Msx1基因的表达,下调Pax3、Bmp4、Slug基因的表达。结论:高糖可能通过影响凋亡相关基因P53、Pax3、Bmp4、Slug、Msx1的表达而诱导心肌细胞凋亡。     

柿叶黄酮对缺氧复氧以及晚期糖基化终产物诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响

OBJECTIVE: To investigate the effects of flavone extracted from the leaves of Diospyros kaki on the apoptosis of rat cardiac myocytes induced by hypoxia-reoxygenation and advanced glycation end products in vitro. METHODS: The cardiac myocytes were isolated from neonatal SD rats and cultured in vitro for 72 h. Apoptosis of the cultured cells was induced by hypoxia-reoxygenation and advanced glycation end products (AGEs) respectively, and the effects of flavone extracted from the leaves of Diospyros kaki on the cell apoptosis was observed by measuring the apoptotic rates using flow cytometry. RESULTS: Apoptosis of neonatal rat cardiac myocytes was induced by hypoxia-reoxygenation in a time-dependent manner (6.05% +/-0.46% vs 12.45% +/-1.66%, P< 0.05), and flavone treatment of the cells significantly lowered the apoptotic rates. AGEs alone also induced apoptosis of neonatal rat cardiac myocytes (11.03+/-0.39 vs 6.25+/-0.48, P< 0.05), which was inhibited by flavone (8.40+/-0.47 vs 11.03+/-0.39, P < 0.05). CONCLUSION: Flavone extracted from the leaves of Diospyros kaki can inhibit the apoptosis of in vitro cultured neonatal rat cardiac myocytes induced by hypoxia-reoxygenation and advanced glycation end products.     

三氧化二砷诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）调亡的作用。方法：建立大鼠ＶＳＭＣｓ增生模型。用四甲基偶氮唑蓝还原反应（ＭＴＴ法）、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法观察Ａｓ２Ｏ３诱导ＶＳＭＣｓ凋亡的作用。结果：经Ａｓ２Ｏ３作用后ＶＳＭＣｓ出现典型的凋亡变化,透射电镜下可风细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。ＤＡ琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形电泳条带。汉式细胞术检     

蒺藜皂苷对NaCN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及机制

目的：探讨蒺藜皂苷（GSTT）对NaCN诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法：采用NaCN建立心肌细胞内缺氧模型,GSTT干预后流式细胞术检测凋亡百分率及线粒体膜电位,激光共聚焦显微系统检测细胞内钙水平,Western blotting检测Bcl-2/Bax的蛋白表达。 结果：NaCN诱导的心肌细胞凋亡百分率GSTT组［（3.31±0.24）%］与模型组［(16.65±0.18)%］比较明显降低（P<0.01）;心肌细胞膜电位(mV)GSTT组(158.29±0.40)高于缺氧模型组(121.71±0.80)(P<0.01),低于正常对照组(167.10±0.70)(P<0.01);细胞内钙水平(色密度)GSTT组(323.73±68.19)低于缺氧模型组(496.65±80.10),高于正常对照组(280.18±48.10)(P<0.01)。Bcl-2蛋白表达强度上调, Bax蛋白表达强度下调。 结论：GSTT对NaCN诱导心肌细胞凋亡具有抑制作用,该作用与其调节Bcl-2/Bax蛋白表达、稳定线粒体膜电位以及改善细胞内钙超载有关。     

肾上腺素和血管紧张素Ⅱ促心肌细胞肥大的协同作用

目的：探讨肾上腺素和血管紧张素Ⅱ在诱导心肌细胞肥大反应中的协同作用。方法：在培养新生大鼠心肌细胞上,通过测量心肌细胞表面积和[3H]－Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果：肾上腺素和血管紧张素Ⅱ均能明显增加心肌细胞表面积和[3H]－Leu的掺入量,两者合用比它们任一单独使用的效果更显著。结论：肾上腺素和血管紧张素Ⅱ在诱导心肌肥大作用中具有协同作用。